Medida de la BiomasaLa medida de la masa de los constituyentes de la clula bacteriana es utilizada frecuentemente como base para la medida de una actividad metablica, o de un constituyente metablico o qumico.Algunos de los mtodos para cuantificar la biomasa son obvios y confiables, pero pueden volverse complicados si se busca la exactitud.Peso hmedo:Se obtiene a partir de una muestra en suspensin que es pesada luego de la separacin de las clulas por filtracin o centrifugacin. Es una tcnica til para grandes volmenes de muestra.La principal desventaja es que el diluyente queda atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La cantidad de lquido retenida puede ser importante, por ejemplo, un pellet de clulas bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio intercelular que aporta entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la forma y deformacin celular. Para corregir el peso hmedo se determina la cantidad de lquido que queda retenida en el espacio intercelular luego de una centrifugacin, para ello se utilizan soluciones de polmeros no inicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el espacio intercelular pero no pueden atravesar las paredes bacterianas.Peso seco:El peso seco (contenido de slidos) de las clulas bacterianas que se encuentran en una suspensin se obtiene por el secado de un volumen en un horno a 105C hasta peso constante. Esta tcnica es til para grandes volmenes de muestra, debido a que diferencias del orden de los miligramos representan el peso de un gran nmero de bacterias.La desventaja de este mtodo es que componentes voltiles de la clula pueden perderse por el secado y puede existir alguna degradacin. Tambin la muestra seca puede recobrar humedad durante el pesado, principalmente si el ambiente tiene una humedad relativa alta.Determinacin de cidos nucleicos:Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. Se determina la cantidad existente de un determinado cido nucleico (generalmente DNA) y a partir de este dato se estima la masa de la poblacin.Determinacin de nitrgeno:Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. Existen distintas tcnicas para determinar la cantidad de nitrgeno que contiene una muestra con relacin al compuesto que se quiera determinar. Puede analizarse el nitrgeno no proteico mediante el NO2-, NO3-, NH4+, el nitrgeno proteico mediante absorcin en UV, Reaccin de Biuret, Reaccin de Lowry, o el nitrgeno total mediante la Digestin de Kjeldahl.ElMtodo Kjeldahles un proceso deanlisis qumicopara determinar el contenido ennitrgenode una sustancia qumica y se engloba en la categora de medios por digestin hmedaSe usa comnmente para estimar el contenido de protenas de los alimentos.El principal inconveniente de este mtodo consiste en la posible valoracin denitrgeno no protico(NNP), e incluso de sustancias txicas y sin ningn valor nutritivo como lo ocurrido enchina en 2008Otro mtodo para medir el contenido de nitrgeno esmtodo DumasEl Mtodo desarrollado por Kjeldahl consta detres etapas:1.Digestin: conversin del Nitrgeno (proveniente de las protenas, por ejemplo) en ion amonio mediante calentamiento (a una temperatura de 400 C aproximadamente) en bloque de digestin con adicin previa de cido sulfrico y catalizador (sulfato de cobre (II) ), que desencadenan la conversin del nitrgeno de la muestra en amonio.2.Destilacin: separacin por arrastre con vapor del amonaco y posterior solubilizacin en una solucin cida de concentracin conocida.En esta etapa se adiciona NaOH a la disolucin de amonio obtenida previamente, generndose NH3 y vapor de agua, que arrastra al mismo.La solubilizacin posterior en la solucin cida permite la conversin de NH3 a catin amonio, el cual se encuentra junto con el exceso de solucin cida aadido.El NH3 puede recogerse sobre dos medios: cido fuerte en exceso de concentracin conocida, o bien, cido brico en exceso medido.3.Valoracin: medicin de la cantidad de cido neutralizado por el amonaco disuelto, lo que indica la cantidad de Nitrgeno presente en la muestra inicial.Segn el medio de recogida en la destilacin, el amonio se valora de dos formas: Recogida sobre cido fuerte en exceso medido: se emplea una base y el indicador rojo metilo. Recogida sobre cido brico en exceso medido: se emplea un cido y el indicador rojo metilo.