La acreditación en laboratorios agroalimentarios
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Fernando Lafont Déniz
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
La acreditación en laboratorios agroalimentarios
Acreditación de laboratorios (ISO/IEC 17025:2005)
Reconocimiento formal por parte de una entidad autorizada, de
la competencia técnica de un Laboratorio para la realización de una actividad determinada, perfectamente definida.
Anexo Técnico (Alcance de acreditación)
Documento donde aparecen definidas las actividades (en el caso de laboratorios de ensayo, los análisis) que están cubiertos por la acreditación concedida.
REQUISITOS DE GESTION (Apdo. 4)
Organización
Sistema de gestión
Control de documentos
Revisión de pedidos, ofertas y contratos
Subcontratación
Compras de servicios y suministros
Servicios al cliente
Quejas
La acreditación en laboratorios agroalimentarios
Control de trabajos no conformes
Mejora
Acciones correctivas
Acciones preventivas
Control de registros
Auditorias internas
Revisión por la dirección
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Generalidades
Personal
Instalaciones y condiciones ambientales
Métodos de ensayo y de calibración y validación de los métodos
Equipos
Trazabilidad de las medidas
Muestreo
Manipulación de los ítems de ensayo
Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayo
Informe de resultados
REQUISITOS TECNICOS (Apdo. 5)
La acreditación en laboratorios agroalimentarios
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
La acreditación en laboratorios agroalimentarios
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Personal (Apdo. 5.2)
COMPETENCIA TECNICA
Personal Métodos
Equipamiento
•Equipos alta complejidad: CG/MS, HPLC/MS, ICP/MS, IRMS, MS alta resolución…
•Métodos análisis complejos: dilución isotópica, adición standard, multirresiduos gran número de analitos (>200)…
PERSONAL ALTAMENTE CUALIFICADO
•Integraciones anómalas (analitos con varios picos, baja relación S/R,…)
•Identificaciones espectrales no adecuadas
•Desarrollo de métodos “defectuosos” (fragmentaciones iones en MS/MS, método cromatográfico…)
•Preparación de muestra y disoluciones no adecuadas (manipulación...)
Personal
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
METODOS DE ENSAYO Y VALIDACION (Apdo. 5.4)
La acreditación en laboratorios agroalimentarios
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Métodos Tipos
Características
Normalizados - Método Oficial (BOE…)
- Método normalizado (AENOR…)
- Método publicado por organizaciones de prestigio (AOAC, COI, EPA…)
Internos
- Método desarrollado por el LE - Procedimiento normalizado modificado
poca o nula revisión documental
poca validación*
Revisión documental
Validación
Métodos Internos
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Guia SANCO (Pesticidas)
Decisión CE/657/2002
(Veterinarios)
Reglamento
CE 401/2006 (Micotoxinas)
Reglamento CE/1882/2006
(Nitratos)
Reglamento CE 1883/2006
(PCBs y Dioxinas)
etc…
Guías funcionamiento métodos
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Características Generales Métodos Análisis Cromatográficos
Extracción
Preparación de Muestra
MS
MS
Clean-up
ECD, NPD, FID, FPPD, TCD…
UV, DAD, FLD, IR, ELSD…
Técnicas Cromatográficas
CG
HPLC HPLC
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Manipulación de muestra
Métodos de muestreo
Manipulación objetos ensayo
Reglamento CE 401/2006. Métodos
muestreo micotoxinas en alimentos
Directiva CE 63/2002. Métodos
muestreo pesticidas en alimentos
Etc…
Reglamento CE 396/2005. Partes a analizar
pesticidas en alimentos y piensos.
Reglamento CE 1883/2006. Dioxinas y
PCBs en alimentos
Etc…
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Manipulación de muestra
Identificación mediante una referencia única
Muestra mínima
Preparación de la misma previo al análisis (homogeneización, trituración,
liofilización, refrigeración, adición agentes estabilizantes…)
•Tiempo máximo de conservación previo al análisis y posterior al mismo
(especialmente analitos poco estables ó volátiles).
MUESTRA REPRESENTATIVA
Matriz (composicional, degradación)
Analitos (degradación, pérdida)
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Analitos standard
Patrones puros/disoluciones certificadas:
Pureza (certificada)
Definir condiciones de almacenamiento adecuadas
(temperatura, exposición a la luz, recipiente…)
Caducidad
Disoluciones patrones:
•Uso disolvente adecuado (precipitación, volatilidad, reactividad…)
•Corrección pureza
•Identificación adecuada
•Condiciones de almacenamiento
•Comparación disoluciones nuevas con antiguas (<10%)
•Empleo disoluciones diferente “procedencia”
•Caducidad
Peso mínimo (10 mg aprox.)
Equipos calibrados
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Métodos de extracción
Bibliografía
Pesticidas: acetato etilo, método Luke, QuEChERS (ENE-EN 15662:2009)…
Micotoxinas (agua/acetonitrilo,…)
Pesticidas, PAHs en aguas (SPE, ELL…)
Inyección directa (pesticidas aguas…)
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Inyección directa
Análisis de matrices líquidas por inyección directa (aguas) o tras dilución (vinos, aguas
residuales…)
•Pesticidas en aguas por HPLC/MS
•Acrilamida en agua por HPLC/MS Rapidez, sencillez, menor costo
•Ocratoxina y aminas biógenas en vinos
Herbicidas (triazinas, fenoxiácidos..) agua consumo
Inyección 25 mL, HPLC/MS(MRM)
0.10 mg/L acrilamida
Acrilamida en agua consumo
Inyección 25 mL, HPLC/MS(Trap)
Dimetoato
Fluroxipir
Simazina
Diuron
Fosmet
Linuron
Terbutilazina
Tebuconazol
Diflufenican
Oxifluorfen
0.025 mg/L
Ocratoxina A en vino
Inyección 10 mL, HPLC/MS(MRM)
402/167
0.25 mg/L OTA
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Inyección directa
Aminas biógenas en vino (dilución 1/100 en fase móvil)
0.2 mg/L aminas
(0.002 mg/L)
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Efecto matriz
QuEChERs con PSA
QuEChERs sin PSA
Acetato etilo
Luke
Luke/GPC
Matriz lechuga fortificada con 125 pesticidas por CG/MS (0.02 mg/kg)
•Acetato etilo: 94%
•Luke: 96%
•QuEChERS: 98%
•Luke/GPC: 100%
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
3 seg (15 puntos) o
o o
o o
o
o o o
o o o o
o
o
o o o o o o o o
o
o
o
o
o o o o
o
o o
o
o
o o o o o o o o o o
Velocidad de adquisición
A B
Definición pico cromatográfico ≥ 10 puntos
3 seg (8 puntos)
0.2 seg/scan 0.4 seg/scan
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Velocidad de adquisición iones en MS
Multirresiduos fitohormonas en vegetales por HPLC/MS:
auxinas, giberellinas y citoquininas
RSD Areas (n=5) = 9.5%
RSD Areas (n=5) = 2.1%
Ac Giberéllico
Velocidad de adquisición
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Velocidad de Adquisición iones en MS
XIC of +MRM (297 pairs): 226.2/170.0 amu from Sample 1 (MRMs 100) of Data MRM pesticides_02.wiff (Turbo Spray) Max. 1.1e6 cps.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23Time, min
0.00
5.00e4
1.00e5
1.50e5
2.00e5
2.50e5
3.00e5
3.50e5
4.00e5
4.50e5
5.00e5
5.50e5
6.00e5
6.50e5
7.00e5
7.50e5
8.00e5
8.50e5
9.00e5
9.50e5
1.00e6
1.05e6
Inte
ns
ity
, c
ps
11.79Cuantificación de 200 pesticidas en naranja
usando 5 mseg “dwell time” por transición MRM
Equipos actuales MS:
Elevadas velocidades de adquisición
de iones (<5 mseg/transición MRM)
Eliminación segmentos adquisición
Métodos de adquisición de iones
inteligentes…
Métodos más rápidos
Mayor número analitos
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Relación S/R
0.002 ppm 0.005 ppm 0.01 ppm
0.05 ppm 0.10 ppm 0.25 ppm
•Selección de señales cromatográficas que garanticen una adecuada relación S/R al
Límite de Cuantificación (LC)
Prometrina en lechuga por LC/MS
Concentración RSD (n=5) S/R
0.002 33.5 3
0.005 16.0 7
0.01 8.5 18
0.05 5.6 >100
0.10 5.0 >500
0.25 3.1 >1000
) Ruido
Señal
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Relación S/R
ut
SE
ÑA
L (
S)
RUIDO (R)
S/R = 3 LD = 3 S
LOQ = 5 S
S: desviación standard blanco
S/R > 5
S/R =2
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Métodos de detección
Métodos de confirmación residuos veterinarios
(Decisión CE 657/2002)
El método debe garantizar los siguientes aspectos (validación):
Sensibilidad suficiente
Selectividad adecuada
Métodos válidos (reglamentados)
Residuos veterinarios
Dioxinas/PCBs (HRMS), resolución≥10000
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Métodos de detección
Relación tipos iones MS y puntos de
identificación en residuos veterinarios Ejemplos de cálculo puntos identificación
con diferentes técnicas
Sustancias Grupo A (prohibidas) ≥4 puntos
Sustancias Grupo B ≥3 puntos
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Métodos de detección
• Espectrometría de Masas (requisitos de identificación dependen de la forma de adquisición/especificaciones técnicas de los equipos).
• Detectores universales/selectivos de Cromatografía: a menudo se requiere confirmación con la misma técnica (columna diferente), o con otro detector.
Requisitos de identificación por MS para pesticidas (Guía SANCO/2009)
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Identificación MS
Intensidad
relativa
EI/CG/MS CI/CG/MS,
CG/MSn,
LC/MS, LC/MSn
>50% ±10% ±20%
20-50% ±15% ±25%
10-20% ±20% ±30%
<10% ±50% ±50%
Tolerancias Ion Ratios •Trabajar con Ion Ratios, preferentemente
•Tolerancias máximas establecidas (idénticas para
pesticidas y residuos veterinarios)
•Iones de mayor masa ≈ más selectivos
•Iones isotópicos (clusters Cl y Br)
¡¡¡ MUY IMPORTANTE CRITERIO ANALISTA !!!
Br
Cl
Br3 Br2
Cl2
Cl3
Cl2Br
ClBr
Cl3Br
ClBr3 ClBr2
Cl3Br3
Cl2Br2 Cl2Br3
Cl3Br2
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Identificación/cuantificación cromatográfica
Meta
mid
ofo
s p
or H
PL
C/M
S
ACN
Fase móvil
Establecer criterios tR: ≤0.5% CG y ≤2.5% HPLC
tR ≥ 2t0 (frente cromatográfico ≈ interferencias)
Forma de picos adecuada: compuestos muy polares
en HPLC (eluyen al inicio) y CG (forman colas por adsorción
sobre grupos silanoles, baja volatilidad…)
Area cromatográfica (preferentemente)
S/R señal cuantificación ≥ 6/10
S/R iones cualificación (MS) ≥ 3
Preferentemente, intensidad iones >10% del ión más
intenso (cuantificación)
Meto
milo
po
r HP
LC
/MS
ACN
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Iones cualificación
Micotoxinas en alimento infantil por LC/MS
(fortificación 0.1 mg/kg)
Deoxinilvalenol 1 Aflatoxina B1 2
Aflatoxina B2 1 Aflatoxina G1 2
Aflatoxina G2 2 Ocratoxina A 1 Ocratoxina A 2
Zearalenona 1 Zearalenona 2
Aflatoxina B1 1
Aflatoxina G2 1
Aflatoxina G1 1 Aflatoxina B2 2
Deoxinilvalenol 2
Micotoxina Concentración
(mg/Kg) RT (min)
Ion Ratio/
Teórico
Ratio OK
Deoxinilvalenol 1 79.4 1.00
Deoxinilvalenol 2 81.2 1.00 1.03 (0.92)
Aflatoxina B1 1 0.11 4.82
Aflatoxina B1 2 0.12 4.82 0.78 (0.74)
Aflatoxina B2 1 0.10 4.74
Aflatoxina B2 2 0.09 4.74 1.00 (1.12)
Aflatoxina G1 1 0.10 4.62
Aflatoxina G1 2 0.10 4.62 1.06 (0.98)
Aflatoxina G2 1 0.09 4.41
Aflatoxina G2 2 0.10 4.41 0.49 (0.56)
Ocratoxina A 1 0.21 5.82
Ocratoxina A 2 0.18 5.82 1.28 (1.46)
Zearalenona 1 5.0 5.80
Zearalenona 2 4.8 5.89 0.91 (0.93)
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Iones cualificación
Análisis de opiáceos (morfina, codeina, tebaina y derivados) en semilla adormidera para alimentación por HPLC/MS
Ion Ratio= 0.13 (0.10-0.20)
Ion Ratio= 0.20 (0.05-0.15)
m/z 165
m/z 214
Codeina
No Si
Identificación Morfina
Grasa: 25-50%
Fit<500
Codeina Fit<700
TEBAÍNA
MORFINA
CODEINA
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Identificación de analitos
42.50 43.00 43.50 44.00 44.50 45.00
Asignación adecuada de analitos
•Formados por más de un componente (cipermetrinas, deltametrina, fluvalinato, spinosad…)
•Espectros muy similares o idénticos (acrinatrina y l-cihalotrina, …)
Acrinatrin
l-Cihalotrina
Cipermetrinas
Fluvalinato
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Calibración de analitos
Recta de calibrado: Relación de la respuesta del detector con la concentración
Aceptable 1 punto (señal ±50%), 2 puntos (rango lineal detector , FRalto/FRbajo<120%, Calto/Cbajo<4)
Preferible ajuste lineal para ≥3 niveles (dilución de extracto)
Trabajar con al menos dos criterios de linealidad (r2, RSD residuales, coeficiente linealidad…)
Frecuencia: por tanda o control de calibración (<30% a LCL ó <20% por encima LCL)
LCL≤LOQ
Calibración en matriz: en aquéllos casos donde la
matriz afecte a la respuesta de analitos
Deoxinivalenol 25-1250 ppb
Aflatoxina B1 0.1- 5 ppb
Aflatoxina B2 0.1-5 ppb
Aflatoxina G1 0.1-5 ppb
Aflatoxina G2 0.1-5 ppb
Ocratoxina A 0.1-5 ppb
Zearalenona 2.5-125 ppb
Criterios linealidad:
Coef. Corr. >0.99
RSDr <20%
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Detección iones por Alta Resolución/MS
Detección masa exacta de iones: desviación mDa/ppm
Alta selectividad en confirmación
Cromatogramas iones masa exacta “muy limpios”
No es necesario realización MS/MS, otros iones confirmación…
Simplicidad de preparación métodos
Analizadores masas Alta Resolución:
MAGNETICOS
TOF
ORBITRAP
TRAMPAS LINEALES
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Detección iones por Alta Resolución/MS
Peso monoisotópico: es el masa del ión formado a partir de los elementos
monoisotópicos. Son las masas de los iones que obtenemos en MS
En la Tabla Periódica, lo que se proporciona es el peso atómico promedio del
elemento, tomando en cuenta las proporciones de sus isótopos en la naturaleza.
0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
299.0825 300.0856 301.0801 302.0828
m/z
Ab
un
dan
cia
re
lati
va
Compuesto C16H14ClN3O:
PM promedio = 299.7597
PM Monoisotópico = 299.0825
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Detección iones por Alta Resolución/MS
Cromatogramas HPLC/ESI (fullscan) extracto naranja
Fortificación 0.01 ppm (250 pesticidas)
Azinfos metil en naranja (0.01 ppm) m/z=318.013
Flufenoxurón en naranja (0.01 ppm). m/z=487.029
ESI -
ESI+
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
VALIDACION PROCEDIMIENTOS DE ENSAYO
Objetivos Demostrar robustez método: evaluación de la recuperación media y
reproducibilidad del método
Pequeños ajustes en método en el tiempo no afectan al funcionamiento
Demostrar su aplicabilidad a matrices de la misma categoría
Determinar los valores de aceptabilidad (por ejemplo, recuperación) en
análisis de rutina
Recopilar información para determinar la incertidumbre del método
Resultado Información suficiente que pruebe, para el alcance fijado (ANALITOS,
CONCENTRACIONES, MATRICES), que el método es:
ESPECIFICO, SENSIBLE, VERAZ y PRECISO = EXACTITUD
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Validación procedimientos de ensayo
¿Que procedimientos hay que validar?
Procedimientos no normalizados
Procedimientos normalizados utilizados fuera de su alcance previsto
Ampliaciones o modificaciones de métodos normalizados: en función de la
modificación realizada, el Laboratorio debe tener competencia suficiente para evaluar que
parámetros hay que revalidar.
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Validación procedimientos de ensayo
VERIFICACION DE PROCEDIMIENTOS NORMALIZADOS
COMPROBACIÓN que los parámetros de funcionamiento establecidos para
dicho procedimiento, pueden ser alcanzados por el Laboratorio utilizando
sus medios específicos: equipos, personal, ambientales…
PRECISION, VERACIDAD, LOQ, LINEALIDAD
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Validación procedimientos de ensayo
VALIDACION PROCEDIMIENTOS INTERNOS
El grado de validación y parámetros a evaluar dependen de cada método
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Validación procedimientos de ensayo
Error de medición: diferencia entre el resultado de una medición y el valor de referencia
Error aleatorio: componente del error de medición que, en mediciones repetidas, varía de forma impredecible
Error sistemático: componente del error de medición que, en mediciones repetidas, permanece constante o
varía de forma predecible
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Errores de medición
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Errores de medición
Requisito A
Requisito B
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Veracidad (sesgo)
Precisión
•Repetibilidad
•Reproducibilidad
•Precisión intermedia
Selectividad/especificidad
Intervalo/Rango de trabajo
Linealidad
Límite de detección
Límite de cuantificación
Incertidumbre
Robustez
Parámetros en la Validación
Capacidad de un método para
cuantificar exactamente un
analito en presencia de
interferencias
Capacidad de un método analítico
de producir resultados que sean
directamente o por medio de una
transformación matemática
definida, proporcionales a la
concentración de analito en la
muestra
Menor concentración de analito en
una muestra de ensayo que puede
ser confiablemente distinguida del
blanco). LD=3 Sblanco
Menor concentración de analito
en una muestra de ensayo que
puede ser determinada con un
aceptable nivel de incertidumbre.
LOQ=10 Sblanco
Grado de concordancia entre
resultados obtenidos en
mediciones repetidas de un mismo
objeto o de objetos similares, bajo
condiciones específicas
Intervalo de concentraciones de
analito en el cual puede
considerarse el método validado
Capacidad del método de
mantenerse sin cambios ante
pequeñas variaciones en los
parámetros del método. Medida
de su confiabilidad durante su
uso rutinario
Parámetro asociado con el
resultado de una medición, que
caracteriza la dispersión de los
valores que podrían se
razonablemente atribuidos al
mesurando.
Grado de concordancia entre el
promedio de un número de
resultados y el valor de referencia
¿Cómo se evalúa?
Análisis varias veces de un Material Referencia Certificado (MRC)
Matriz blanca fortificada dentro del rango del méttodo
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Veracidad
60
70
80
90
100
110
120
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25 27 29 31 33 35 37 39 41 43 45 47 49 51 53 55
Rec
uper
ació
n (%
)
Clorpirifos en aceite
Capacidad de un método para cuantificar exactamente un analito en presencia de
interferencias
Interferencias: especie química que causa errores sistemáticos en la determinación de un
analito:
Interferencias que den señales y/o respuestas que no se distingan de las del analito
Interferencias que afecten a la señal del analito (efecto matriz)
EVALUACION
Blanco de reactivos
Blanco de matriz
Adición de cantidades conocidas de analito sobre blanco de matriz
Estudio con potenciales interferencias
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Selectividad
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Validación de procedimientos de ensayo
Parámetro Que/Como Criterio
Linealidad Con rectas calibrado Residuales ≤20%
LOQ Nivel más bajo que cumplen los
criterios de exactitud y precisión ≤LMR
Especificidad Blancos y muestras de control ≤30% LOQ
Exactitud Recuperación media en muestras
adicionadas o materiales referencia 70-120%
Precisión
(RSDr)
Obtenida en cada nivel de
concentración ≤20%
Precisión
(RSDR)
Reproducibilidad intralaboratorio
(QC) ≤20%
Criterios de validación de pesticidas (Guía SANCO 2009)
Procedimiento de Validación. Procedimiento que recoge la estrategia a seguir para realizar las validaciones de matrices y analitos, y se definen los criterios (resultados a alcanzar)
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Criterios de Validación
Parámetro Que/Como Criterio
Linealidad Con rectas calibrado (al menos 5
niveles) Residuales ≤20%
Cca Límite de decisión
3 veces S/R 20 blancos
ISO 11843 (valor crítico
variable estado neto)
Ccb Capacidad de detección
3 veces S/R 20 blancos
ISO 11843 (valor
mínimo detectable
variable estado neto)
Especificidad Blancos y muestras de control ≤30% LOQ
Exactitud
Recuperación media en muestras
adicionadas o materiales referencia
Criterio depende concentración
-50% a +20%, ≤1 mg/kg
-30% a +10%, 1-10 mg/kg
-20% a +10%, ≥10 mg/kg
Precisión (RSDr) Obtenida en cada nivel de
concentración Horwitz CV = 2 (1– 0,5 log C)
Precisión (RSDR) Reproducibilidad intralaboratorio
(QC) Horwitz
Criterios de validación de residuos veterinarios (Decisión 657)
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
PLAGUICIDA N1 Recuperación Criterios (%)
Rec 1 (%)
Rec 2 (%)
Rec 3 (%)
Rec media (%)
Cumple Repetibilidad Criterios (%)
Repetibilidad (RSD%)
Cumple
a-ENDOSULFAN 0.01 70-120 101 86 93 93 si 20 8 si
a-HCH 0.01 70-120 85 90 99 91 si 20 11 si
ALDRIN 0.01 70-120 67 78 78 74 si 20 9 si
AZOXISTROBIN 0.01 70-120 90 87 90 89 si 20 1 si
b-ENDOSULFAN 0.01 70-120 94 99 101 98 si 20 4 si
b-HCH 0.01 70-120 90 99 102 97 si 20 6 si
BIFENTRIN 0.01 70-120 97 106 104 102 si 20 8 si
BROMOPROPILATO 0.01 70-120 84 89 86 86 si 20 3 si
BUPIRIMATO 0.01 70-120 105 96 95 99 si 20 5 si
CAPTAN 0.01 70-120 95 113 106 105 si 20 9 si
CIPERMETRINA 0.01 70-120 91 94 103 96 si 20 8 si
CLORFENVINFOS 0.01 70-120 90 98 94 94 si 20 4 si
CLORPROFAM 0.01 70-120 73 77 75 75 si 20 2 si
Concentración mg/Kg
Recuperación (%) Lechuga Tomate Limón Uva
Repetibilidad (CV %) Lechuga Tomate Limón Uva
Reproducibilidad (CV %) Lechuga Tomate Limón Uva
Incertidumbre relativa (%) Lechuga Tomate Limón Uva
≤ 0.01 79 - 109 77 - 106 74 - 110 71 – 106 1 - 11 1 - 11 2 - 13 2 – 11 1 - 19 4 - 16 2 - 16 3 – 18 6 - 37 12 - 34 9 - 39 14 – 38
0.01 – 0.1 75 - 112 73 - 113 72 - 106 73 – 107 1 - 14 0 - 13 1 - 15 0 - 8 1 - 17 1 - 21 1 - 19 2 – 18 6 - 34 8 - 33 8 - 37 9 – 34
≥ 0.1 77 - 104 72 - 99 72 - 96 73 - 98 0 - 8 0 - 6 1 - 10 1 - 6 1 - 15 2 - 19 2 - 20 2 - 17 7 - 35 8 - 31 10 - 34 8 - 37
Resultados de Validación
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Informe de validación
Documento interno que debe contener la siguiente información (trazabilidad):
Objetivo y alcance (matrices, concentraciones)
Instrumentación y materiales utilizados
Personal involucrado
Protocolo de validación
Resultados y conclusiones
Procedimiento de ensayo
Firma de responsables
Métodos de ensayo y validación
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Alcance de Acreditación
Ensayos para los que se define un alcance de acreditación cerrado (matriz/analito)
Ensayos con alcances de acreditación genéricos (requieren un nivel de competencia
técnica y de gestión añadidas):
Nota Técnica 19: Rige criterios de acreditación para categoría de ensayo genérica de
plaguicidas en alimentos
•Lista Pública de Ensayos (LPE)
•Definición de familias de matrices (generalmente de acuerdo a las establecidos
en Anexo 1 SANCO)
•Matrices validadas y matrices comprobadas (LOQ)
Nota Técnica 18: Rige categorías de ensayo más genéricas
•Lista Ensayos Bajo Acreditación (LEBA): engloba todas las familias de
productos y productos en concreto, así como familias de parámetros y
parámetros en concreto acreditados. Ejemplo:
•Categoría de Ensayo: Contaminantes orgánicos en alimentos:
-Parámetros: PAHs (…), PCBs (….), melamina, acrilamida
-Familias de productos: productos de la pesca (…), alimentos infantiles (…),
carnes (…), cereales (…), aceites y grasas (...).
Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayos
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD
ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS ENSAYOS
¿Cómo sabemos que hemos realizado un buen trabajo en el Lab?
Benzo(a)pireno en
pescado
Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayos
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD
Aseguramiento de la calidad: plan global de gestión que garantiza la
integridad de los resultados
“el sistema”
Materiales de referencia
Intercambio de muestras
Ejercicios de intercomparación
Muestras dobles
Muestras ciegas…
Control de calidad: Conjunto de ensayos analíticos que se realizan
para asegurar la calidad/validez de los resultados de cada análisis
“la herramienta”
Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayos
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Aseguramiento de la Calidad
No existe un criterio general/hoja de ruta que indique como llevar a cabo el
aseguramiento de la calidad
MRC
Fortifica-ciones
Muestra doble
Muestra ciega
INTERNO
Intercomparativos
Laboratorios
EXTERNO
Periódicos / en cada tanda Más esporádicos
Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayos
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Control de Calidad Interno
Actividades a realizar:
Calibración/verificación (según criterios y frecuencia establecida)
Control de blancos (contaminaciones): señal<1/3 LOQ
Ensayos de recuperación rutinarios (preferentemente LOQ) y/o MRC.
Se puede establecer un plan de rotación en el caso de ensayos con
múltiples analitos (pesticidas). Criterios: X ± 2RSD (60-140%)
Muestras dobles y ciegas (establecer criterios)
60
70
80
90
100
110
120
1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51
ACEITE OLIVA
60
70
80
90
100
110
120
1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51
Rec
up
era
ció
n (
%)
ACEITUNA
Terbutilazina por CG/MS
Informes de resultados
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Expresión resultados
La expresión de resultados debe hacerse de acuerdo a la reglamentación
En determinados casos, es obligatorio corregir el resultado con la recuperación ó
expresar ésta: residuos veterinarios, micotoxinas…
Utilizar las unidades y número de cifras significativas adecuadas.
En muestras realizadas por duplicado, establecer criterio para la expresión del mismo y
su aceptación.
Expresión de la Incertidumbre expandida (nivel de confianza del 95%) en los casos que lo
requiera.
La expresión de incertidumbre debe ser coherente con la de los resultados
Informes de resultados
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Expresión incertidumbre
Valor Sin evaluar U Evaluación U
Co
nc
en
tra
ció
n
INCERTIDUMBRE:
Parámetro asociado al resultado de una medida, que caracteriza la dispersión de los
valores atribuidos al mesurando
Resultado= Valor ± incertidumbre
EXPRESION DE UN RESULTADO ANALITICO
INFORME DE ENSAYO
Informes de resultados
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Expresión incertidumbre
Con una incertidumbre expandida del 50%, un resultados será violativo cuando X> 2LMR
0
0,4
0,8
1,2
1,6
1 2
mg
/kg
1.0 mg/kg
0.6 mg/kg
LMR=0.4 mg/kg
Resultados con incertidumbre del 50% (95%)
Resultado violativo
Resultado no violativo
Informes de resultados
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Definición de residuos
Fumonisinas: B1 + B2
Aflatoxinas totales: B1+B2+G1+G2
Dioxinas: EQT PCDD/F-OMS
Pesticidas: según definición de residuo
Informes de resultados
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios
Expresión resultados residuos suma
Cumplimiento de requisitos técnicos de acreditación en ensayos agroalimentarios