7/21/2019 Cromatografía de Exclusión

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Cromatografía de exclusión

• La cromatografía es una técnica quepermite la separación de moléculasdiferentes presentes en una misma

muestra.• El método está basado en la

circulación de una fase móvil (que

arrastra a la mezcla de compuestos aseparar! a través de una faseestacionaria.

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• La cromatografía de exclusiónmolecular (a menudo tambiénllamada "ltración en gel o de tamizmolecular es una de las técnicasmás sencillas de las empleadas en laseparación de proteínas # ácidos

nucleicos. ($%C&'$'LECL%)

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• *extranos con enlaces cruzados (sep+adex.

•  %garosa (sep+arose! ,io-gel %.

• oliacrilamida (,io-gel ,.

 /odos estos geles (fase estacionaria se+allan constituidos por gránulos (partículasde un material espon0oso +idratado! quecontiene poros con un tama1o de diámetrodeterminado.

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• Cuando se +ace pasar una mezcla demoléculas de distinto tama1o! a travésde una columna de "ltración en gel2

aquellas moléculas con un tama1o ma#orque el diámetro de los poros de laspartículas! sólo podrán moverse en sucamino! a través de la fase estacionaria!en el espacio que queda entre laspartículas2 # por lo tanto! no se veránretrasadas en su descenso.

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• En cambio aquellas moléculascapaces de penetrar en las partículasse verán retrasadas por la fase

estacionaria2 en ma#or medida!cuanto menor sea su tama1o. or lotanto! las moléculas elu#en en este

tipo de cromatografía por ordendecreciente de tama1o molecular.

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$ecanismo de la cromatografía deexclusión

Las mallas del gel permiten la entrada selectiva de laspartículas de menor masa molecular. *e a+í que las partículas

de ma#or peso molecular salgan primero.