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CURSO TALLER “TUBERCULOSIS: ENFERMEDAD DE MUCHOS, LUCHA DE
TODOS”
Actuales fronteras del diagnóstico de TB (el verdadero aporte de las
herramientas moleculares)
Juan Carlos Rozo A
Contenido
Contenido
• Diagnóstico de la TB (sensible/resistente)– Toma de muestras: esputo de calidad– Como interpretar el rendimiento del BK– Ventajas del cultivo– Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?
Contenido
• Diagnóstico de la TB (sensible/resistente)– Toma de muestras: esputo de calidad– Como interpretar el rendimiento del BK– Ventajas del cultivo– Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?
Toma de muestras: esputo de calidad
Antes de tomar la muestra
– Utilizar la palabra que lo identifica en cada lugar (gallo, pollo, gargajo, del fondo del pecho, etc)
Envase• Boca ancha• Capacidad entre 30 y 50 ml• Cierre hermético de rosca• Material plástico
transparente, resistente a roturas
Indicaciones al SR
• Enjuagar la boca con agua únicamente • Inspirar profundamente• Retener el aire• Expulsar la expectoración tratando de
arrastrar las secreciones• Recoger la muestra en el envase• Repetir la operación• Tapar y limpiar el exterior• Lavar las manos
• La muestra
Salival Mucopurulenta Hemoptoica MucosaAFB Microscopy training. Akiko Fujiki. RIT, UICTER, USAID. Chapter II. pag 47.
Contenido
• Diagnóstico de la TB (sensible/resistente)– Toma de muestras: esputo de calidad– Como interpretar el rendimiento del BK– Ventajas del cultivo– Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?
The Handbook: Laboratory diagnosis of tuberculosis by sputum microscopy. The handbook. Global edition. StopTB Partnership
Baciloscopia
Ventajas Desventajas
Sencilla
Bajo costo
Resultados rápidos
No requiere equipo especial
Ampliar cobertura
Número de muestras
1a.
80%
2a.
10%
3a.
5%
Ziehl-Neelsen Auramina O
The Handbook: Laboratory diagnosis of tuberculosis by sputum microscopy. The handbook. Global edition. StopTB Partnership
Cattamanchi, Huang, Worodria, et al. 2011. Integrated Strategies to Optimize Sputum Smear Microscopy A Prospective Observational Study. Am J Respir Crit Care Med Vol 183. pp 547–551.
Ziehl-Neelsen Auramina
Fluorescencia
Manel Marzouk, Asma Ferjani, Mohamed Dhaou, Moufida Haj Ali, Naila Hannachi, Jalel Boukadida . 2013. Comparison of LED and conventionalfluorescence microscopy for detection of acid-fast bacilli in an area with high tuberculosis incidence . Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, Volume 76, Issue 3, July, Pages 306-308
Sharon L. Reed, Girmachew Mamo, Elias Gossa, Michele Jasura, Muluwork Getahun, Eshetu Lemma, Christopher Mathews, J. Allen McCutchan. 2011. Improved tuberculosis smear detection in resource-limited settings: Combined bleach concentration and LED fluorescence microscopy. International Health, Volume 3, Issue 3, September , Pages 160-164
Concentración de la muestra
Farhana Runa, Mahmuda Yasmin, Mohammad Mozammel Hoq, Jahanara Begum, Abu Sadeque Mohammed Matiur Rahman, Chowdhury Rafiqul Ahsan. 2011. Molecular versus conventional methods: Clinical evaluation of different methods for the diagnosis of tuberculosis in Bangladesh. Journal of Microbiology, Immunology and Infection, Volume 44, Issue 2, April, Pages 101-105
Concentración de la muestra
Concentración de muestras paucibacilares
Ramachandran Vignesh, Chinnambedu R. Swathirajan, Suniti Solomon, Greer Waldrop, Sunil S. Solomon, Chandrasekaran Ezhilarasi, Pachamuthu Balakrishnan. 2013. Could concentrating single sputum improve the performance of smear microscopy in detecting TB among HIV patients?. Journal of Infection, Volume 66, Issue 4, April , Pages 388-390.
Karen R Steingart, Vivienne Ng, Megan Henry, Philip C Hopewell, Andrew Ramsay, Jane Cunningham, Richard Urbanczik, Mark D Perkins, Mohamed Abdel Aziz, Madhukar Pai. 2006. Sputum processing methods to improve the sensitivity of smear microscopy for tuberculosis: a systematic review. The Lancet Infectious Diseases, Volume 6, Issue 10, October , Pages 664-674
Métodos de concentración
Contenido
• Diagnóstico de la TB (sensible/resistente)– Toma de muestras: esputo de calidad– Como interpretar el rendimiento del BK– Ventajas del cultivo– Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?
Culti
voEn caso de que las dos baciloscopias
iniciales sean negativas, se deberá cultivar la segunda muestra de esputo
Todas las muestras de origen extrapulmonar
Para diagnóstico de TB infantil
Población de alto riesgo
Todo paciente que haya sido diagnosticado por cultivo
Circular externa 00058 de 2009
Medios de cultivo
Medio a base de huevo:
—Ogawa—Lowestein-Jensen (LJ)—ATS—Stonebrink—Coletsos
Medios- agar—Middlebrook
7H10/7H11—HSTB
Medios líquidos—Middlebrook 7H9/7H12—Sistemas
automatizados
Cultivo tradicional Cultivo Automatizado
PARIMANGO RODRIGUEZ, Diana, CHAVEZ CASTILLO, Milciades, LUJAN VELASQUEZ, Manuela et al. Comparación de los medios Ogawa y Löwenstein-Jensen en el aislamiento de Mycobacterium tuberculosis de pacientes con tuberculosis pulmonar. Hospital Regional Docente de Trujillo, Perú. Rev. Med. Vallejiana, 2007, vol.4, no.1, p.24-31. ISSN 1817-2075.
Comparación LJ-Ogawa
Alonso Soto, Juan Agapito, Carlos Acuña-Villaorduña, Lely Solari, Frine Samalvides, Eduardo Gotuzzo. 2009. Evaluation of the performance of two liquid-phase culture media for the diagnosis of pulmonary tuberculosis in a national hospital in Lima, Peru. International Journal of Infectious Diseases 13, 40—45.
Comparación Ogawa-MGIT
Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis. Normas y guía técnica. Parte II Cultivo. 2008. OPS. Pag 22
Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis. Normas y guía técnica. Parte II Cultivo. 2008. OPS. Pag 22
Procesamiento de la muestra para el cultivo
BKEspecificidad 98%Sensibilidad 60%Detección: 10.000 bacilos/c.c.
CultivoEspecificidad 99%Sensibilidad 90%Detección: 10 bacilos/c.c.
Cultivo con crecimiento
– Coloración para verificar (ZN / KY)– Tasa de crecimiento– Morfología– Detección de Niacina
– Reducción de Nitratos
– Actividad CatalasaTemperatura ambiente68°C
Identificación de micobacterias
Alternativas
Contenido
• Diagnóstico de la TB (sensible/resistente)– Toma de muestras: esputo de calidad– Como interpretar el rendimiento del BK– Ventajas del cultivo– Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?
Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?
Det
ecci
ón d
e re
sist
enci
a en
TB
Todos los casos sospechosos de ser resistentes a los fármacos anti TB
Muestras de los pacientes con diagnóstico de VIH
Contactos de un caso indice de TB resistente o multiresistente
Pacientes en tratamiento cuya baciloscopia de control de segundo mes
sea positiva
Pacientes de reingreso por abandono, recaída o fracaso Circular externa 00058 de
2009
Detección de resistencia en TB
Detección
Molecular Fenotípico
Detección
Molecular
GeneXpert GenoType MTBDRplus GenoType MTBDRsl
GeneXpert
Rifampicina
96%rpoB
Detección Molecular
GenoType MTBDRplus
Rifampicina
rpoB
Isoniacida
katGinhA
10-20 %ahpCkasAndhceoAmabAoxyRacpMfurA
Detección Molecular
Diagnóstico MolecularGenoType
MTBDRsl
Fluoroquinolonas
gyrA75-94%
gyrB
Aminoglucósidos y péptidos cíclicosEstreptomicina-Amikacina-Kanamicina-Capreomicina
rrsS 10-15% - KAN: 65-84%AMK: 92% - CAP: 86%
rpsL 56-60% StlyA 5% CAP
Etambutol
embB47-65%
embA embC
Deborah A. Williamson , Indira Basu, James Bower, Joshua T. Freeman, Gillian Henderson, Sally A. Roberts. 2012. ⁎ An evaluation of the Xpert MTB/RIF assay and detection of false-positive rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 74 (2012) 207–209
Riesgos del mal uso de GeneXpert
Bunsow E, et al., Evaluation of GeneXpert MTB/RIF for the detection of Mycobacterium tuberculosis and resistance to rifampin in clinical specimens, J Infect (2013), http://dx.doi.org/10.1016/j.jinf.2013.11.012
Fenotípico
Detección
Fenotípico
Directas Indirectas
PRUEBAS DE ÓXIDO - REDUCCIÓN
MICROSCOPIC OBSERVATION DRUG
SUSCEPTIBI-LITY (MODS)
Bactec MGIT
Método de proporciones
múltiples en agar
Detección
FenotípicoDiagnóstico
Diferencias entre los métodos fenotípicos
Susceptibility testing of Mycobacteria, Nocardia, and other aerobic Actinomicetes; approved standard – Second edition. M24-A2. Vol 31. No 5. CLSI.
Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO
Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO
Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO
Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO
Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO
Genotipificación
Epidemiología molecular
Complementando la epidemiología clásica
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