FARMACIA Y BIOQUÍMICA BIOQUÍMICA I

Q.F. FREDY MARTOS RODRÍGUEZ 1

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA AMILASA SALIBAL.

I. INTRODUCCIÓN

Los organismos vivos pueden obtener y gastar la energía más rápidamente debido a la presencia decatalizadores biológicos llamados enzimas. Como sucede con los catalizadores inorgánicos, las enzimasmodifican la velocidad de una reacción química sin afectar el equilibrio final y sólo se requierenpequeñas cantidades para efectuar la transformación de un gran número de moléculas de sustrato.

Sin embargo, a diferencia de la gran mayoría de catalizadores inorgánicos, las enzimas son bastantesespecíficas, ya que catalizan un número comparativamente pequeño de reacciones y, en algunos casos,pueden tener solo una reacción.

Las enzimas pueden ser descritas como catalizadores complejos de origen biológico que tienen un altogrado de especificidad y eficiencia. Esto permite que las reacciones químicas dentro de una célulaocurran rápidamente a través de vías bien definidas.

Sin estas proteínas especializadas, la vida tal como es no podría existir.

Para poder mostrar la actividad enzimática se debe tener presente fundamentalmente que la reaccióncatalítica de las enzimas es de carácter específico, es decir, cada reacción química debe sercatalizada por una determinada enzima.

El reactante o sustancia química que reacciona para dar un producto en un sistema se denominasustrato. Habría entonces tantos sistemas enzimáticos como sustratos reaccionantes existen en unorganismo vivo.

Debido a que sólo se necesitan muy bajas concentraciones de enzima para catalizar una reacción dada,sólo muy pocas enzimas pueden medirse directamente.

La determinación de la actividad catalítica de una enzima en un medio biológico involucra dos aspectos:uno cualitativo y otro cuantitativo.

En términos cualitativos se debe poner de manifiesto la presencia en el medio de la enzima en estudio.Hecho esto se debe proceder a determinar la cantidad en que se halla presente. Par lo primero serecurre a la reacción específica por ella catalizada. En cuanto a la actividad de enzima presente, asícomo en la mayoría de los casos es imposible determinar en términos absolutos ( por ejemplo,miligramos o microgramos de proteína enzimática), ya que por lo general se trata de medios quecontienen una mezcla compleja de diversas proteínas además de la proteína en estudio.

En general, la actividad de cualquier sistema enzimático puede ser demostrada de dos maneras:

1.  Verificando el sustrato no transformado (sustrato residual) después de un tiempodeterminado de incubación en condiciones específicas de pH y temperatura.

2.  Verificando los productos liberados después de un tiempo determinado de incubación encondiciones específicas de pH y temperatura.

 

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La finalidad del presente trabajo experimental es determinar la actividad enzimática, utilizando laenzima amilasa salival, que tiene la capacidad de producir degradación del almidón en maltosa (disacáridoreductor) y algo de glucosa, como ejemplo de un sistema enzimático.

II. OBJETIVOS

Demostrar la actividad catalítica de la amilasa salival, determinando:

-  La presencia de almidón no transformado (sustrato residual).-  Determinando la presencia de carbohidratos reductores (productos de la reacción).

III. MATERIALES Y REACTIVOS

- Solución de almidón PH 6,0 al 1% - Cloruro de sodio 0,1 M- Amilasa salival 1% - Ácido clorhídrico 0,05N- Solución yodada - Reactivo Folin Wu

IV. DIAGRAMA EXPERIMENTAL

1.  Armar el siguiente sistema:

ComponentesTubo (mL)

I IISolución de almidón 1% pH 6,0 5 5Solución de cloruro de sodio 0,1 M 1 1Agua destilada 4 3

- Mezclar los tubos y colocarlos al baño María a 37 °C por 5 minutos.- Agregar 1 mL de amilasa salival 1% al tubo II.- Volverlos a colocar al baño María a 37 °C durante 10 minutos.

2. 

Control de la actividad enzimática por el sustrato residual:-  Inmediatamente cumplidos los 10 minutos, transferir 0,5 mL a sus correspondientes tubos

del siguiente cuadro.

ComponentesTubo (mL)

I IIÁcido clorhídrico 0,05N 5,0 5,0De los tubos I y II 0,5 0,5Solución yodada 0,5 0,5

-  Mezclar los tubos.-  Observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color

resultante.

 

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3.  Control de la actividad enzimática por los productos formados (Folin Wu):

ComponentesTubo (mL)

I IIDe los tubos I y II 1,0 1,0Solución cúprica alcalina 1,0 1,0Hervir 8 minutosLuego enfriarSolución fosfomolíbdica 1,0 1,0Agua destilada 2,0 2,0

-  Mezclar los tubos.-  Observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color

resultante.

V. RESULTADOS