determinaciÓn de fosfatasa alcalina
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DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ALCALINA - Informe de Laboratorio #10 Bioquímica IIlunes, 20 de agosto de 2012
Informe de Laboratorio #10
DETERMINACIÓN DE FOSFATASA ALCALINA
MARCO TEÓRICO
Fosfatasa Alcalina
La Fosfatasa Alcalina (FA) es una enzima que se encuentra en casi todos los tejidos del cuerpo,
pero es mayor su presencia en el hígado, las vías biliares y los huesos.
La fosfatasa alcalina tiene un gran variedad de isoenzimas con leves diferencias en su estructura,
que sugieren diferentes orígenes por cada tejido (FA1 del hígado, FA2 del hueso). Estas
isoenzimas pueden ser cuantificadas por separado si es necesario.
Una de las mayores fuentes de fosfatasa alcalina es el hueso por ello en los niños y adolescentes
con crecimiento óseo esta enzima está normalmente elevada.
Se realiza en el contexto de otras pruebas hepáticas (GOT, GPT, Bilirrubina, GammaGT) y se
utiliza para evaluar problemas o alteraciones del hígado. Es muy sensible, sobre todo, en
problemas de obstrucción de las vías biliares. Es la enzima más sensible a los problemas
hepáticos producidos tumores metastásicos.
Suele asociarse a la elevación de la gamaGT, excepto que en los problemas óseos en solo se
eleva la fosfatasa alcalina.
FUNDAMENTO
Las fosfatasas alcalinas (FAL) catalizan la hidrólisis del 4-nitrofenilfosfato (4-NFF) formando 4-
nitrofenol y fosfato inorgánico, actuando el tampón alcalino como aceptor del grupo fosfato.
La reacción se controla cinéticamente a 405 nm a partir de la velocidad de formación del 4-
nitrofenol, proporcional a la actividad FAL presente en la muestra.
MATERIALES
• Pipeta automática, de ul
• Muestra (sangre)
• Tubo rojo, para suero sanguíneo
• Espectrofotómetro
• Tubos de ensayo
• Cubeta de 1cc
• Vacutainer, campana y aguja
• Algodón y alcochol
REACTIVOS
• R1. FAL tampón. Cloruro de magnesio
• R2. FAL sustrato. 4-NFF
PROCEDIMIENTO
1. Tomar la muestra de sangre en tubo rojo
2. Preparar el Reactivo de Trabajo mezclando: 4ml de R1 y 1 ml de R2
3. Preincubar el reactivo de trabajo, muestras y controles a la temperatura de reacción.
4. Ajustar a 0 el fotómetro con agua destilada.
5. Pipetear en una cubeta:
DesconocidoReactivo de trabajo 1ml
Muestra 20ul
6. Mezclar suavemente por inversión.
7. Insertar la cubeta en el compartimiento a 405nm y poner el cronómetro en marcha.
8. Incubar durante 1 minuto y anotar la absorbancia inicial.
9. Repetir las lecturas exactamente a los 1,2 y 3 minutos.
10. Calcular la diferencia entre absorbancias.
11. Calcular el promedio de los resultados para obtener el cambio promedio en absorbancia por
minuto (ΔA/min).
NORMALIDAD
25ºC
• Niños, hasta 480 U/L (8,0 µktal/L)
• Adultos, hasta 180 U/L (3,0 µktal/L)
30ºC
• Niños, hasta 590 U/L (9,8 µktal/L)
• Adultos, hasta 220 U/L (3,7 µktal/L)
37ºC
• Niños, hasta 800 U/L (13,3 µktal/L)
• Adultos, hasta 270 U/L (4,5 µktal/L)
RESULTADOS
Blanco 0.000
Muestra (Absorbancia Inicial, 1er min, 2do min y 3er min)
Factor 2764
Tiempo Muestra
Inicial 0,224nm
1er minuto 0,228nm
2do minuto 0,225nm
3er minuto 0,226nm
0,228nm - 0,224nm= 0,004
0,228nm - 0,225nm= 0,003
0,226nm - 0,226nm= 0,001
0,004 + 0,003 + 0,001 = 0,008 / 3 = 0,0026
0,0026 * 2764 = 7,3706 U/l
CONCLUSIÓN
Para la determinación utilizamos tubo tapa roja para obtener suero sanguíneo debido a que si
usamos el de tapa lila que contiene anticoagulante EDTA va a inhibir la actividad enzimática.
Lo que se realizó fue una determinación cinética debido a medimos la diferencia de reacción
enzimática de la muestra al inicio, 1er, 2do y 3er minuto. Además se la determinó a 405nm y no
tuvo color. Para el resultado se calculó la diferencia entre las absorbancias y se las dividió para 3,
para obtener el promedio de los minutos. Después se multiplicó para el factor que fue dado 2764.
BIBLIOGRAFÍA
• Fosfatasa Alcalina (s.f.). TuOtroMédico.com. Recuperado de:
http://www.tuotromedico.com/temas/fosfatasa_alcalina.htm
• ALKALINE PHOSPHATASE BR (s.f.). Linear Chemicals, S.L. Recuperado de:
http://www.linear.es/ficheros/archivos/8_1103005C.pdf