determinación de anticuerpos de leptospira spp. en
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Universidad de La Salle Universidad de La Salle
Ciencia Unisalle Ciencia Unisalle
Medicina Veterinaria Facultad de Ciencias Agropecuarias
2008
Determinación de anticuerpos de Leptospira spp. en pequeños Determinación de anticuerpos de Leptospira spp. en pequeños
mamíferos no voladores, en un fragmento de bosque andino en la mamíferos no voladores, en un fragmento de bosque andino en la
montaña del zoológico Jaime Duque montaña del zoológico Jaime Duque
Laura Vanessa Rojas Arbelaez Universidad de La Salle, Bogotá
Viviana Rodríguez Ruiz Universidad de La Salle, Bogotá
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DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS DE Leptospira spp. EN PEQUEÑOS
MAMÍFEROS NO VOLADORES, EN UN FRAGMENTO DE BOSQUE ANDINO
EN LA MONTAÑA DEL ZOOLÓGICO JAIME DUQUE.
LAURA VANESSA ROJAS ARBELAEZ
VIVIANA RODRÍGUEZ RUIZ
UNIVERSIDAD DE LA SALLE
MEDICINA VETERINARIA, CUNDINAMARCA
BOGOTÁ
2008
DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS DE Leptospira spp. EN PEQUEÑOS
MAMÍFEROS NO VOLADORES, EN UN FRAGMENTO DE BOSQUE ANDINO
EN LA MONTAÑA DEL ZOOLÓGICO JAIME DUQUE.
LAURA VANESSA ROJAS ARBELAEZ
Cód. 14022515
VIVIANA RODRÍGUEZ RUIZ
Cód. 14012105
Trabajo de grado para optar al título de Médico Veterinario
Director
LEONARDO ARIAS BERNAL, M. V. Esp. Dipl.
Coodirector:
VICTORIA EUGENIA PEREIRA BENGOA, M. V. MsC.
UNIVERSIDAD DE LA SALLE
MEDICINA VETERINARIA, CUNDINAMARCA
BOGOTÁ
2008
CONTENIDO
pág.
RESUMEN...............................................................................................................9
ABSTRACT............................................................................................................10
1 INTRODUCCIÓN ............................................................................................11
2 MARCO TEÓRICO..........................................................................................14
2.1 ÚLTIMOS BROTES REPORTADOS ................................................................................... 14
2.2 MONITOREO DE FAUNA SILVESTRE ............................................................................... 17
2.3 LEPTOSPIROSIS ................................................................................................................. 19 2.3.1 MORFOLOGÍA Y TAXONOMÍA........................................................................................ 20 2.3.2 CLASIFICACIÓN............................................................................................................... 21 2.3.3 EPIDEMIOLOGÍA.............................................................................................................. 27 2.3.4 RESISTENCIA .................................................................................................................. 32 2.3.5 PATOGENIA ..................................................................................................................... 32 2.3.6 SIGNOS CLÍNICOS .......................................................................................................... 34 2.3.7 MECANISMOS INMUNITARIOS ...................................................................................... 35 2.3.8 LEPTOSPIROSIS EN CÁNIDOS...................................................................................... 37 2.3.9 LEPTOSPIROSIS EN MARSUPIALES............................................................................. 38 2.3.10 LEPTOSPIROSIS EN ROEDORES Y LAGOMORFOS ............................................... 39 2.3.11 LEPTOSPIROSIS EN FELINOS................................................................................... 39 2.3.12 ZOONOSIS ................................................................................................................... 39 2.3.13 TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO.................................................................................... 44 2.3.14 DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL .................................................................................... 49
2.4 Generalidades de las especies capturadas...................................................................... 49 2.4.1 Comadreja de cola larga (Mustela frenata)....................................................................... 49 2.4.2 Guatín o Ñeque (Dasyprocta fuliginosa) ........................................................................... 50 2.4.3 Zarigüeya (Didelphis albiventris)...................................................................................... 51 2.4.4 Rata doméstica (Rattus rattus) ......................................................................................... 53 2.4.5 Zorro cangrejero (Cerdocyon thous) ................................................................................. 54
3 MATERIALES Y MÉTODOS ...........................................................................55
3.1 MARCO GEOGRÁFICO....................................................................................................... 55
3.2 CRONOLOGÍA...................................................................................................................... 56
3.3 POBLACIÓN Y MUESTRA .................................................................................................. 57
3.4 MATERIALES....................................................................................................................... 58
3.5 METODOLOGÍA ................................................................................................................... 60 3.5.1 Preparación de transectos ................................................................................................ 62 3.5.2 Tipos de trampas .............................................................................................................. 64 3.5.3 Preparación de cebos ....................................................................................................... 66 3.5.4 Ubicación de trampas ....................................................................................................... 66 3.5.5 Inmovilización física y química.......................................................................................... 68 3.5.6 Examen clínico.................................................................................................................. 69 3.5.7 Obtención de muestras ..................................................................................................... 70 3.5.8 Técnicas de marcaje ......................................................................................................... 71 3.5.9 Procesamiento de muestras ............................................................................................. 73 3.5.10 Prueba de laboratorio.................................................................................................... 73
3.6 ANÁLISIS ESTADÍSTICO .................................................................................................... 78
4 RESULTADOS Y DISCUSIÓN........................................................................79
4.1 EFECTIVIDAD DE LAS TRAMPAS ..................................................................................... 80 4.1.1 Esfuerzo de captura (EC).................................................................................................. 81 4.1.2 Éxito de captura total (ECT).............................................................................................. 82 4.1.3 Éxito de captura por especie (ECSp)................................................................................ 84 4.1.4 Índice de recaptura (IR) .................................................................................................... 87
4.2 EFECTIVIDAD DE LOS CEBOS.......................................................................................... 88 4.2.1 Cebos no efectivos............................................................................................................ 92
4.3 HALLAZGOS AL EXAMEN CLÍNICO.................................................................................. 92 4.3.1 PIEL................................................................................................................................... 92 4.3.2 Otros hallazgos. ................................................................................................................ 94
4.4 RESULTADOS DE LABORATORIO.................................................................................... 96
4.5 Prevalencia serológica ....................................................................................................... 98
4.6 RESULTADOS POR SEROVAR........................................................................................ 100 4.6.1 Leptospira hardjo. ........................................................................................................... 100 4.6.2 Leptospira pomona ......................................................................................................... 100 4.6.3 Leptospira icterohaemorragiae ....................................................................................... 101 4.6.4 Leptospira bratislava ....................................................................................................... 101 4.6.5 Leptospira canicola ......................................................................................................... 102 4.6.6 Leptospira grippotyphosa................................................................................................ 102
4.7 RESULTADOS POR ESPECIE. ......................................................................................... 103 4.7.1 Mustela frenata (Comadreja) .......................................................................................... 103 4.7.2 Dasyprocta fuliginosa (Ñeque)........................................................................................ 103
4.7.3 Didelphis albiventris. (Zarigüeya).................................................................................... 104 4.7.4 Akodon bogotensis (Ratón campestre de Bogotá) ......................................................... 108 4.7.5 Rattus rattus (Rata doméstica) ....................................................................................... 109 4.7.6 Felis catus (Gato doméstico) .......................................................................................... 110
4.8 RELACIÓN MACHOS VS. HEMBRAS .............................................................................. 110
4.9 RELACIÓN ADULTOS VS. JUVENILES POSITIVOS ...................................................... 111
5 CONCLUSIONES..........................................................................................112
6 RECOMENDACIONES .................................................................................115
7 BIBLIOGRAFÍA .............................................................................................117
8 ANEXOS .......................................................................................................126
8.1 ANEXO A. Dosis de los fármacos anestésicos por especie......................................... 126
8.2 ANEXO B. HISTORIAS CLÍNICAS. .................................................................................. 127
8.3 ANEXO B. FORMATO DE CAPTURAS CON TRAMPAS. .............................................. 128
8.4 ANEXO C. FORMATOS DE RECAPTURAS. .................................................................... 129
LISTA DE FIGURAS
pág.
Figura 1. Morfología de la Leptospira.................................................................20 Figura 2. Transmisión de la leptospirosis...........................................................26 Figura 3. Reacciones de la prueba de aglutinación microscópica (MAT)...........47 Figura 4. Comadreja de cola larga.....................................................................49 Figura 5. Ñeque o guatín ..................................................................................50 Figura 6. Zarigüeya............................................................................................51 Figura 7. Rata doméstica ...................................................................................53 Figura 8. Zorro cangrejero .................................................................................54 Figura 9. Vista de la montaña donde se realizó el estudio.................................55 Figura 10. Mapa del municipio de tocancipa........................................................56 Figura 11. Plano montaña ZJD ............................................................................63 Figura 12. Trampa sherman.................................................................................65 Figura 13. Trampa tomahawk ..............................................................................65 Figura 14. Camuflaje de las trampas ...................................................................67 Figura 15. Senderos y madrigueras.....................................................................67 Figura 16. Inmovilización física............................................................................68 Figura 17. Posicionamiento del paciente. ............................................................69 Figura 18. Morfometría de zarigüeya. ..................................................................69 Figura 19. Posicionamiento de comadreja para obtención de muestras..............70 Figura 20. Obtención de la muestra sanguínea. ..................................................70 Figura 21. Aplicación del chip subcutáneo...........................................................72 Figura 22. Marcaje con violeta de genciana. .......................................................72 Figura 23. Liberación de zarigüeya en el sitio de captura....................................73 Figura 24. Dilución de los sueros en SSAF. ........................................................75 Figura 25. Cajas de pozuelos fondo en u. ...........................................................75 Figura 26. Dilución de los sueros con las cepas de leptospira ............................76 Figura 27. Ilustración de diluciones seriadas .......................................................77 Figura 28. Ilustración de las diluciones consecutivas para titular. .......................77 Figura 29. Cebos mordidos por roedores ............................................................89 Figura 30. Efectividad de los cebos .....................................................................91 Figura 31. Herida en nariz de zarigüeya..............................................................93
Figura 32. Lesión en piel de Didelphis albiventris ................................................93 Figura 33. Gestación temprana y avanzada de zarigüeyas .................................95 Figura 34. Otitis en individuo de la especie didelphis albiventris .........................96 Figura 35. Prevalencia serológica........................................................................99 Figura 36. Número de animales por serovar........................................................99 Figura 37. Resultados para L. hardjo.................................................................100 Figura 38. Resultados para L. pomona..............................................................100 Figura 39. Resultados para L. icterohaemorragiae ............................................101 Figura 40. Resultados para L. bratislava ...........................................................101 Figura 41. Resultados para L. canicola .............................................................102 Figura 42. Resultados para L. grippotyphosa ....................................................102 Figura 43. Resultados serológicos de zarigüeya #1 ..........................................106 Figura 44. Resultados serológicos de zarigüeya #. 7. .......................................106 Figura 45. Resultados serológicos de zarigüeya #8. .........................................107 Figura 46. Resultados serológicos de zarigüeya #14 ........................................108 Figura 47. Resultados serológicos de zarigüeya #15 ........................................108 Figura 48. Relación Machos vs. Hembras positivos. .........................................111 Figura 49. Relación Adultos vs. Juveniles positivos ..........................................111
LISTA DE TABLAS
pág.
Tabla 1. Clasificación de leptospira..................................................................22
Tabla 2. Serovares de Leptospira más importantes para los animales de
explotación zootécnica.......................................................................23
Tabla 3. Especies de hospedadores más importantes de 7 serovares de
leptospiras..........................................................................................24
Tabla 4. Especies capturadas..........................................................................80
Tabla 5. Interpretación de títulos serológicos...................................................98
RESUMEN.
La Leptospirosis es una enfermedad que afecta tanto a los animales como al
hombre; produce pérdidas económicas, y en el hombre causa desde signos
poco específicos de hemorragia hasta lesiones renales.
En éste estudio, se determinó la presencia de anticuerpos de los serovares L.
gryppotiphosa, L. icterohaemorrhagiae, L. pomona, L. bratislava, L. hardjo y L.
canicola, en individuos capturados por medio de trampas tipo Sherman y
Tomahawk durante 8 meses, abarcando un área de 107.800 mts2, utilizando la
metodología de transectos lineales fijos y el empleo de cebos alimenticios
como atrayentes para estas especies.
Los 23 individuos capturados de 7 especies diferentes, fueron muestreados
para la obtención del suero sanguíneo y llevar a cabo la prueba de laboratorio
por medio de la técnica de Microaglutinación en placa (MAT). De los 23
individuos capturados, se encontraron evidencias de la presencia de Leptospira
en 16 de ellos. En términos de prevalencia puntual, esto equivale a 69.56%
(16/23).
Todos los serovares mostraron positividad para la mayoría de la población
objetivo: para el serovar L. hardjo 2 fueron positivos, para L. pomona 4, para L.
icterohaemorragiae 12, para L. bratislava 3, para L.canicola 5 y para L.
grippotyphosa 1, encontrando una prevalencia serológica para el serovar L
icterohaemorragiae. (44.44 %)
ABSTRACT
Leptospirosis is a disease that affects both animals to humans; produces
economic losses, and the human produce inspecific signs of bleeding to kidney
damage.
This study investigated the presence of antibodies of serovars L. gryppotiphosa,
L. icterohaemorrhagiae L. pomona, L. bratislava, L. canicola and L. hardjo, in
wild animals captured through type Sherman and Tomahawk traps over 8
months, covering an area of 107,800 m2, using the methodology of lineal fixed
transects and the use of food as bait attractive to these species.
The 23 individuals caught of 7 different species were sampled for obtaining
serum and carry out laboratory testing using the technique of Microaglutination
Test (MAT). Of the 23 individuals captured, we found evidence of the presence
of Leptospira in 16 of them. In terms of punctual prevalence, this is equivalent to
69.56% (16/23).
All serovars showed positive for the majority of the target population: to serovar
L. hardjo 2 were positive, to L. pomona 4, to L. Icterohaemorragiae 12, to L.
bratislava 3, to L. canicola 5, and to L. grippotyphosa 1, finding a prevalence for
serological serovar L icterohaemorragiae. (44.44%)
1 INTRODUCCIÓN
La Leptospirosis es una enfermedad que afecta tanto a los animales como al
hombre; produce pérdidas económicas, y en el hombre causa desde signos
poco específicos de hemorragia hasta lesiones renales. Los animales
infectados eliminan la bacteria en forma intermitente y por periodos
prolongados a través de la orina, que al contaminar los alimentos y el agua los
convierte en fuente de infección.
El conocimiento de la enfermedad también permite advertir los daños que
produce a la salud pública y veterinaria cuando no se toman en cuenta las
recomendaciones para los diferentes grupos de trabajo y las medidas de
protección y seguridad.1
La finalidad de esta investigación es determinar la presencia o ausencia de
Leptospira spp. en los pequeños mamíferos presentes en un fragmento de
bosque alto andino en la montaña del Zoológico Jaime Duque.
En numerosas áreas del mundo los estudios en animales silvestres han
demostrado la presencia de Leptospira en varias especies de roedores,
edentados y carnívoros, actuando como fuente de infección. Lo anterior nos
lleva a preocuparnos por la salud de los individuos que puedan estar en
contacto con los animales silvestres, bien sea la población humana cercana a
1LEON, L. Epidemiología, prevención y control de la Leptospirosis en los animales domésticos. En: RODRIGUEZ VIVAS, R. Enfermedades de importancia económica en Producción Animal. México: Mc Graw Hill, 2005.
12
estos bosques o los mismos animales del Zoológico Jaime Duque que se
encuentran en cautiverio.
La transmisión de enfermedades de animales silvestres a los animales
domésticos se ha incrementado en los últimos años, debido a la
sobrepoblación humana y a la destrucción de hábitats, en donde las especies
silvestres se ven obligadas a desplazarse hacia zonas urbanas o cerca de
éstas. Por lo anterior, al entrar en contacto con especies cautivas, éstos
animales pueden ser contagiados con enfermedades de origen viral, bacteriano
o parasitario, y a su vez, seguir propagando la enfermedad, comprometiendo la
salud de la población, incluyendo la humana.
Por lo anterior es importante desarrollar medidas que logren minimizar la
ocurrencia de la transmisión y diseminación de estas enfermedades. Además
es necesario evaluar las medidas de prevención y control de las principales
enfermedades infecciosas de los animales silvestres.
Es necesario identificar la presencia de algunas patologías de los mamíferos
silvestres que puedan actuar como posibles fuentes de infección y difusión
hacia otros individuos. El diagnóstico oportuno de estas enfermedades permite
evitar su transmisión y así realizar un programa de prevención, vigilancia y
control. Una herramienta de gran utilidad para lograr una información completa
es la captura de los animales objetivo del estudio, para ser monitoreados y
determinar la existencia de dichas patologías.
El Zoológico Jaime Duque y la montaña donde se realizó el estudio, se
encuentran ubicados cerca de zonas habitadas por el hombre. Una gran
variedad de conjuntos residenciales, fincas y explotaciones de animales se
encuentran en la misma zona, compartiendo con algunas de éstas fuentes de
13
agua, lo cual es importante debido a la transmisión de enfermedades tanto a
los animales como al hombre. Lo anterior es realmente trascendente debido a
la presentación de enfermedades zoonóticas y el riesgo en el que se encuentra
dicha población.
En este estudio se logró determinar la presencia de anticuerpos de diferentes
serovares de Leptospira, los cuales fueron L. grippotyphosa, L.
icterohaemorrhagiae, L. pomona, L. bratislava, L. hardjo y L. canicola en
algunas especies de pequeños mamíferos presentes en un fragmento de
bosque alto andino en la montaña del Zoológico Jaime Duque, entre los cuales
se identificaron individuos de las especies Didelphis albiventris, Felis catus,
Akodon bogotensis, Rattus rattus, Mustela frenata, Dasyprocta fuliginosa y
Cerdocyon thous, siendo los dos últimos especies no propias de la región.
Los resultados fueron comparados con un estudio realizado en los animales de
la colección del Zoológico Jaime Duque, estimando la seroreactividad en el
total de la población muestreada.
Adicionalmente se calculó la efectividad de los cebos utilizados durante el
estudio, y los índices de esfuerzo de captura, éxito de captura total, éxito de
captura por especie e índice de recaptura.
14
2 MARCO TEÓRICO
2.1 ÚLTIMOS BROTES REPORTADOS
En septiembre del 2.000 se presentaron brotes epidémicos de Leptospirosis en
Canadá, Francia y Estados Unidos, asociados con el evento deportivo Eco -
Challenge, con 47 casos notificados, 5 de ellos confirmados en laboratorio. Los
síntomas incluían fiebre alta, escalofríos, cefalea y mialgias.2
En Junio del 2.004 el Ministerio de Salud de Kenya notificó un total de 141
casos sospechosos, incluidos 8 muertes de Leptospirosis en una escuela
secundaria en el distrito de Bungoma. La enfermedad fue confirmada en el
laboratorio por el Instituto de Investigaciones Médicas de Kenya (KEMRI).3
El 16 de Mayo del 2.007 en Cochabamba - Bolivia, se detectaron 30 casos de
Leptospirosis en personas afectadas por una inundación, como consecuencia
del fenómeno de “El Niño”. 4
En el Valle del Cauca se reportaron ocho casos de Leptospirosis, entre Agosto
y Septiembre de 2.007, asociados posiblemente al cambio de las redes de
2WORLD HEALTH ORGANIZATION. Acute febrile illness in the United States of America. Disponible en: http://www.who.int/csr/don/archive/disease/Leptospirosis/en/. Consultado: 8 Noviembre de 2007. 3Ibíd. 4DETECTAN EPIDEMIA de Leptospirosis en Beni. Disponible en: http://www.lostiempos.com/noticias/16-05-07/16_05_07_nac1.php Consultado: 5 Diciembre de 2007.
15
alcantarillado, por parte de la Empresa Aguas de Buga, provocando una
movilización de roedores. 5
En Nicaragua en el mes de Noviembre de 2.007 comenzó una epidemia de
Leptospirosis, que afectó a 9 de las 16 provincias del país, dejando al menos
nueve muertos y 1.545 enfermos.6 Los contagios afectaron fundamentalmente
a niños y personas menores de 30 años en siete de los 17 departamentos del
país.
La peste brotó el 20 de octubre en Somotillo, un municipio ubicado cerca de la
frontera con Honduras, en el departamento de Chinandega, que es atravesado
por dos ríos que se desbordaron con las últimas lluvias.
El brote de Leptospirosis se detectó en Nicaragua el 21 de octubre y la mayoría
de los casos se concentra en las provincias de Chinandega (fronteriza con
Honduras) y León, occidente del país, azotado por las lluvias en los últimos dos
meses.7
Los periodos de lluvias en Nicaragua, contribuyeron a que la enfermedad se
propagara en las provincias de Chinandega y León, en el occidente, y se
extendiera después a Estelí y Nueva Segovia, norte; Chontales, centro; Caribe
norte y Managua.8
5ALERTA POR ocho casos de Leptospirosis en Buga. Disponible en: Diario el país. http://www.elpais.com.co/historico/oct062007/REG/reg02.html Consultado: 8 Noviembre de 2007. 6Diario EL TIEMPO. Sección 2-2 SALUD. Miércoles 7 de Noviembre de 2007. 7CORDÓN SANITARIO entre Honduras y Nicaragua por Leptospirosis. Disponible en: http://www.elnuevodiario.com.ni/nacionales/1658. Consultado: 8 Noviembre de 2007 8CENTROAMÉRICA EN alerta por epidemia de Leptospirosis. Disponible en: http://proceso.hn/2007/11/03/Nacionales/Centroam.C.A/1988.html. Consultado: 8 Noviembre de 2007
16
Según el recuento, diez nicaragüenses fallecieron y 6.065 habrían contraído
Leptospirosis desde el pasado 21 de octubre, cuando se detectó la grave
enfermedad. Del total de casos sospechosos, 3.243 se reportaron en la
provincia occidental de León y 1.823 en la vecina Chinandega, especialmente
en municipios fronterizos a la frontera con Honduras donde inició la epidemia,
se indicó.9
En Noviembre de 2.007 República Dominicana declaró alerta sanitaria, al
extenderse un brote de Leptospirosis que causó la muerte a 29 personas y que
afectó cerca de otras 291 confirmadas en el laboratorio, para un total de 1.250
casos y 60 muertes durante el año. El auge de la Leptospirosis se produjo
luego del paso de la tormenta Noel, lo que provocó las numerosas muertes en
distintos puntos del país.10
En un estudio realizado en el Zoológico Jaime Duque, en un periodo de tiempo
de 4 meses (Febrero a Mayo de 2007) se obtuvieron muestras de 10 especies
de pequeños carnívoros en cautiverio para determinar la presencia de
serovares de Leptospira spp. Los animales involucrados en el estudio fueron
zorros, tigrillos, mapaches, un puma, kinkajus, un cusumbo , un pecarí, un oso
de anteojos y ratas domésticas.
Se procesaron 17 sueros sanguíneos para identificar la presencia de los
serovares L. icterohaemorrhagiae, L. grippotyphosa, L. canicola, L. ballum y L.
pomona en cada especie.
9CASOS DE Leptospirosis en Nicaragua superan los 6.000. Disponible en: http://www.aldia.co.cr/ad_ee/2007/noviembre/14/ultimahora1316577.html Consultado: 15 Noviembre de 2007 10LA LEPTOSPIROSIS comienza a alarmar a todo el país. Disponible en: http://www.diariolibre.com/app/search.aspx?s=Leptospirosis&m=1&page=4. Consultado: 19 de Noviembre de 2007
17
Los serovares mas prevalentes fueron L. grippotyphosa (5 animales de 17) y L.
Pomona (5 animales de 17) con un 29.4 % de prevalencia cada una; seguido
por L. canicola (3 animales de 17) y L. ballum (3 animales de 17) con un 17.6 %
cada una; y por ultimo L. icterohaemorrhagiae (2 animales de 17) con una
prevalencia del 11.7 %11
Este estudio demostró la presencia de anticuerpos para serovares de
Leptospira spp. en los animales de la exhibición, lo cual indica que aunque no
desarrollen la enfermedad, son susceptibles a un contagio de cualquier fuente.
2.2 MONITOREO DE FAUNA SILVESTRE
Uno de los primeros pasos en el estudio de los recursos biológicos es la
evaluación de la diversidad con respecto a la riqueza de especies en un tiempo
y lugar determinado. La importancia de la evaluación de la biodiversidad recae
principalmente en los estados posteriores de conocimiento que tienen como
base esta evaluación, como la planificación de trabajos de monitoreo y la
gestión de recursos naturales.12
Se estima que sólo cerca del 18 al 25% del bosque Andino original se conserva
en la actualidad en Colombia. En general, los bosques de montaña en
Colombia son ambientes amenazados, pues la mayor parte han sido talados y
los que quedan existen principalmente como fragmentos de diferentes tamaños
y grados de aislamiento.
11RODRIGUEZ RUIZ, V. Determinación de Leptospira en 10 especies de carnívoros en cautiverio en el Zoológico Jaime Duque. Bogotá, 2007.Trabajo de Práctica Ambulatoria. Universidad de La Salle. Facultad de Medicina Veterinaria. 12SÁNCHEZ, F., SÁNCHEZ, P. Y CADENA A. Inventario de mamíferos en un bosque de los Andes centrales de Colombia. En: Caldasia Vol. 26, No. 1. (2004).
18
El monitoreo de la distribución y abundancia es fundamental para
conservación, investigación y manejo de las poblaciones de animales
silvestres. Sin embrago, la estimación del tamaño de las poblaciones silvestres
puede ser problemática cuando, además de poseer poblaciones de bajas
densidades, las probabilidades de captura son reducidas y varían entre
individuos, lo cual es cierto para la mayoría de los vertebrados. En el caso de
los carnívoros, muchos métodos han sido usados para estimar la densidad,
pero todos ellos con éxito variable y hasta ahora no ha sido identificado un solo
método universalmente aplicable. La baja densidad y el comportamiento
esquivo de la mayoría de los carnívoros dificultan la estimación de su densidad
con precisión, con bajo sesgo y costos reducidos, y las dificultades se ven
incrementadas por las complicaciones relacionadas con patrones espaciales,
sociales y variaciones intraespecíficas.13
El éxito de captura se basa en el número de animales capturados por unidad
de tiempo y esfuerzo. El método de captura, marcado y recaptura, es un medio
para estimar el tamaño poblacional mediante datos sobre la cantidad de
animales capturados, recapturados o reavistados sin recurrir a asunciones
poco realistas.14
Es importante tener en cuenta el éxito de captura el cual dependerá de: la
experiencia y el conocimiento de las características biológicas del ejemplar,
portabilidad del equipo, accesibilidad al sitio de captura, época del año,
infraestructura y tiempo.15
13LUENGOS VIDAL, E. M. Estudio comparado de metodologías de captura y de estimación de las poblaciones de Zorro Pampeano, Pseudalopex gymnocercus. Argentina, 2003.Tesis magíster en Biología. Universidad Nacional del Sur. 14Ibíd. 15NARANJO PIÑERA, E. J. Captura y marcaje de fauna silvestre. Memorias de Séptimo Curso de manejo de flora y fauna en cautiverio para Latinoamérica. México: Mayo 9 al 13, 2005.
19
2.3 LEPTOSPIROSIS
La Leptospirosis es una enfermedad zoonótica reemergente con
comportamiento endémico, de presentación mundial, con alta prevalencia en el
trópico y países subdesarrollados.16
Afecta a los animales domésticos y salvajes, una vez que adquieren la
infección, se comportan como huéspedes de mantenimiento y excretan
Leptospiras por la orina, contaminando el medio ambiente y diseminando la
infección. Las ratas son la principal fuente de infección al humano.17 Los seres
humanos son huéspedes accidentales y pueden presentar desde una
enfermedad leve y autolimitada hasta una enfermedad mortal con insuficiencia
multiorgánica18.
Numerosos animales silvestres son portadores y vectores de Leptospiras,
siendo los roedores los principales reservorios para estos agentes infecciosos
que han evolucionado o coevolucionado con el huésped, adaptándose
perfectamente a algunas especies de la fauna silvestre que no sufren la
enfermedad ni mueren por la infección, por lo que pasan a ser reales e
importantes hospedadores de mantenimiento de este patógeno virulento,
prácticamente de por vida. En consecuencia, se transforman en fuente de
infección para la especie humana y también para animales domésticos, siendo
a veces la causa de la aparición de enfermedades emergentes o bien de
16RAMIRO, CORREA, S. H. Y CAMARGO PASSOS, E. Wild Animals and Public Health. En: FOWLER, M. E Y CUBAS, Z. S. Biology, Medicine, and Surgery of South America Wild Animals. Estados Unidos: Iowa State University Press, 2001. 17AIDOREVICH, L. A. Conozca la Leptospirosis: una zoonosis re-emergente. En: Revista Digital del Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias de Venezuela. No 3. (Septiembre-Diciembre 2003). 18OCHOA, J. E., SÁNCHEZ, A. Y RUIZ, I. Óp. Cit.
20
reemergentes, de ahí que sea muy importante el conocimiento geográfico de
los nichos ecológicos de los reservorios.19
2.3.1 MORFOLOGÍA Y TAXONOMÍA
La Leptospira (Lepto= fino, Spira= espiral20 ) se clasifica dentro de las
spirochaetas, orden Spirochaetales, familia Leptospiraceae y género
Leptospira. Las Spirochetas sobreviven en agua y en la mayoría de los suelos
con pH neutro.21
Figura 1. Morfología de la Leptospira.
Fuente: pathmicro.med.sc.edu
Este microorganismo es de forma helicoidal, aeróbico obligatorio, presenta en
uno o ambos extremos una curvatura en forma de gancho, tiene una gran
movilidad que le viene dada por un axostilo, el cual está formado por dos
filamentos axiales insertados en un disco o protuberancia al final del cuerpo
citoplasmático y cuyo extremo libre esta unido a la región media de la bacteria;
estas características se observan en microscopio electrónico. Tiene un
19ZAMORA, J. M. V. y RIEDEMANN T. M.; M. V. Animales silvestres como reservorios de Leptospirosis en Chile: Una revisión de los estudios efectuados en el país. En: Archivos de Medicina Veterinaria. Vol. 31, No.2 (1999) 20CESPEDES Z, M. Leptospirosis, enfermedad zoonótica reemergente. En: Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pública. Vol.22, No. 4. (2005) 21RAMIRO CORREA, S. H. Y CAMARGO PASSOS, E. Óp. Cit.
21
diámetro aproximado de 0,25µm y una longitud variable entre 6-25µm y puede
pasar por membranas de filtración de poro 0,22µm, esta característica hace
que la Leptospira sea observable únicamente en un microscopio de campo
oscuro o de contraste de fase, y además que no se pueda colorear con
anilinas.22
2.3.2 CLASIFICACIÓN
Las Leptospiras son bacterias que pueden ser patógenas o saprófitas. Las
saprófitas se encuentran en ambientes húmedos en la superficie del agua o en
suelos húmedos cercanos al agua. Las saprófitas halofílicas (afines a la sal) se
encuentran en el mar. 23
Las Leptospiras patógenas no se multiplican por fuera del organismo, lo que
hace indispensable el papel de un portador para la supervivencia del
microorganismo en el medio exterior.24
22CESPEDES Z, M. Op. Cit 23WORLD HEALTH ORGANIZATION. International Leptospirosis Society. Óp. Cit 24ACHA, P. y SZYFRES, B. Zoonosis y enfermedades transmisibles comunes al hombre y a los animales. Tercera edición. Washington: Organización Panamericana de la Salud. 2001. v.1.
22
Tabla 1. Clasificación de Leptospira ESPECIE SEROGRUPO SEROVAR
CEPA DE REFERENCIA
Leptospiras patógenas
L. interrogans
australis
australis
bataviae
canicola
hebdomadis
icterohaemorragiae
icterohaemorragiae
icterohaemorragiae
pomona
pyrogenes
sejroe
australis
bratislava
bataviae
canicola
hebdomadis
icterohaemorragiae
copenhageni
lai
pomona
pyrogenes
hardjo
ballico
jez bratislava
van tienen
hond utretch iv
hebdomadis
rga
m 20
lai
pomona
salinem
hardjoprajitno
L. alexanderi manhao manhao3ml60anhao3 l 60
L. fainei hurstbridge hurstbridge but 6
L. inadai lyme
L. kirschneri
autumnalis
cynopteri
grippotyphosa
pomona
bim
cynopteri
grippotyphosa
mozdok
1051
3522 c
moskva v
5621
L. meyeri semaranga semaranga velrad semaranga
173
L. borgpetersenii
ballum
ballum
javanica
sejroe
tarassovi
ballum
castellonis
javanica
sejroe
tarassovi
mus 127
castellon 3
velrad bat 46
m 84
perepicilin
L.weillii celledoni celledoni celledoni
L. noguchi autumnalis
panama
fortbragg
panama
fortbragg
cz 214k
L. santarosa bataviae
mini
brasiliensis
georgia
an 776
lt 117
Genomoespecies 1 ranarum pingchang 80-412
Genomoespecies 4 icterohaemorragiae hualin lt 11-33
Genomoespecies 5 semaranga saopaulo sao paulo
leptospiras saprofitas
Genomoespecies 3 holland holland waz holland (p438)
L. biflexa semaranga patoc patoc i
L. wolbachii codice codice cdc
Fuente: CESPEDES Z, M.
23
En los diversos serovares y dentro de un mismo serovar, se aprecian grandes
diferencias de virulencia para las distintas especies hospedadoras. Mediante
procesos de adaptación sólo determinados serovares tienen importancia
epizootiológica para las correspondientes especies animales domésticas. (Ver
tabla 2.)
Tabla 2. Serovares de Leptospira más importantes para los animales de explotación zootécnica.
Especie Animal Serovares mas importantes
Vaca
pomona
hardjo
grippotyphosa
Cerdo
pomona
tarassovi
canicola
Caballo grippotyphosa
pomona
Perro canicola
icterohaemorrhagiae
Pequeños rumiantes grippotyphosa
pomona
Fuente: BLAHA, T.
Dentro de los pequeños rumiantes, encontramos especies silvestres tales como
venados, que pueden compartir los mismos serovares con los animales
domésticos, asimismo dentro de los cánidos, se encuentran especies como
zorros, coyotes y chacales, entre otros que pueden presentar los mismos
serovares que afectan al perro.
La Leptospirosis es una enfermedad zoonótica causada por serovares de L.
interrogans antigénicamente distintos. L. canicola, icterohaemorrhagiae y
grippotyphosa son los serovares comúnmente asociados a la Leptospirosis en
perros. La actual vacunación de perros, contra Leptospira, protege contra la
enfermedad clínica causada por los distintos serovares canicola e
24
icterohaemorrhagiae. Desde la aplicación de esta bacterina bivalente
Leptospiral, se ha presentado un aparente cambio epizootiológico en la
Leptospirosis canina. La incidencia de la enfermedad es atribuida a que los
serovares canicola e icterohaemorrhagiae han disminuido, mientras que el
número de casos reportados de Leptospirosis canina asociada con evidencia
serológica, la infección es causada por otros serovares, particularmente
grippotyphosa, pomona y bratislava, ha aumentado.25
Además de presentarse en los animales domésticos, los reservorios de L.
interrogans son pequeños mamíferos de vida salvaje, sobretodo roedores, en
los cuales puede distinguirse entre hospedadores principales y secundarios.
(Ver tabla 3.)
Tabla 3. Especies de hospedadores más importantes de 7 serovares de Leptospiras.
Tipo Hospedadores Principales Hospedadores Secundarios
L. pomona Cerdo, Ratón de campo Vaca, Ratón de bosque, ratón de campo,
ratón casero, especies de cérvidos silvestres
L. tarassovi Cerdo
Zarigüeya y otras especies alemanas,
marsupiales, zorro rojo, mapache, zorrillo,
ratón de pata blanca, garza roja
L. grippotyphosa Ratón de Campo, Hámster, Ratón
de ciénaga
Vaca, cerdo, liebre, ratón de campo, ratón
de bosque, ratón rojo, ratón de Abedul
L. icterohaemorrhagiae Cerdo, rata Albina y rata emigrante,
rata y ratón caseros
L. canicola Perro, chacal Cerdo, rata emigrante
L. sejroe y L. saxkoebing Ratón de cuello amarillo
Cerdo, vaca, erizo, ratón casero, ratón de
tierra, ratón de campo, ratón enano, ratón de
bosque, armiño.
Fuente: BLAHA, T.
25BROWN, CATHY A. Y ROBERTS, WAYNE. Leptospira interrogans serovar grippotyphosa infection in dogs. En: Journal of the American Veterinary Medical Association. Vol. 209. No. 7. (Octubre 1, 1996).
25
Esencialmente pueden identificarse los cuatro grupos siguientes de procesos
epizoóticos:
Enfermedad de Weil que, procedente de ratas, afecta al hombre y a los
animales; está producida por la variedad L. icterohaemorrhagiae.
La fiebre del fango o las ciénagas, que procede de los más variados
mamíferos salvajes y afecta al hombre y animales de explotación
zootécnica.
Las infecciones que tienen su origen en determinadas especies de
animales domésticos y salvajes y que, tras adaptarse a ciertas especies
de explotación zootécnica, provocan estas afecciones epidémicas.
Las Leptospirosis por lo general peculiares de determinadas especies
animales y que están producidas por serovares adaptados a ciertas
especies de animales domésticos.26
El método más importante de transmisión es el contacto con orina de animales
con leptospiruria, especialmente cuando dichas orinas llegan a superficie de las
aguas y al suelo.27 Se cree que las Leptospiras penetran a través de las
mucosas de la nariz y de la boca, conjuntiva y superficies erosionadas de la
piel mientras se bebe o se nada en el agua.28 La inhalación de los aerosoles
26BLAHA, T. Epidemiología Especial Veterinaria. Primera Edición. España: Acribia, 1995. 27COLOMBIA. MINISTERIO DE SALUD. Manual de enfermedades zoonóticas. Bogotá, Dirección general de promoción de la salud y prevención de la enfermedad. 1999 28LANGSTON, C. E. y HEUTER, K. J., Leptospirosis a re-emerging zoonotic disease. En: The Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice. Vol.33. No. 4. (2003). Pp. 791-807
26
producidos por la micción sobre los suelos de cemento se ha indicado que
pueden también ser un medio de difusión.29
Figura 2. Transmisión de la Leptospirosis
Las Leptospiras permanecen en riñones de los hospedadores que actúan como
reservorios, y se eliminan principalmente con la orina de manera periódica o
continua. La transmisión se da a partir de animales con infección latente,
enfermos, y aquellos que superaron la enfermedad. Además de la orina pueden
actuar como fuentes primarias de contagio los loquios y las excretas de
animales infectados. En las épocas húmedas y cálidas del año (por encima de
18º C), las Leptospiras pueden conservar su vitalidad durante largo tiempo,
también en ambientes húmedos y embarrados; en ocasiones pueden inclusive
29 MERCHANT, P. Bacteriología y virología veterinarias. Tercera edición española. Zaragoza: Acribia. 1980.
27
multiplicarse. El contagio se produce por el coito, también al ingerir agua o
pienso contaminados, o a través de baños.30
Los animales silvestres, al encontrarse en libertad, pueden ser potenciales
fuentes de infección y transmisión de la Leptospira, ya que se dificulta
establecer medidas de control y prevención que eviten la contaminación del
medio y la posterior diseminación de la bacteria, lo anterior relacionado con la
humedad y fuentes de agua presentes en los diferentes hábitat en donde se
encuentran dichos animales.
2.3.3 EPIDEMIOLOGÍA
2.3.3.1 Factores de riesgo del animal
Serovariedades y susceptibilidad de especie La epidemiología de la
Leptospirosis se comprende más fácilmente al clasificar esta enfermedad en
dos categorías amplias: a.) Adaptada al huésped y b.) No adaptada.
Un animal infectado con una serovariedad del microorganismo adaptada al
huésped es un huésped de “mantenimiento” o “reservorio”. La exposición de los
animales susceptibles a las serovariedades no adaptadas al huésped producen
una enfermedad accidental o incidental. Cada serovariedad está adaptada a un
huésped de mantenimiento en particular, aunque pueden causar enfermedad
en cualquier especie de mamíferos.31
30BLAHA, T. O. Cit. 31RADOSTIS, O. M. Medicina Veterinaria. Tratado de las enfermedades del ganado bovino, ovino, porcino, caprino y equino. Volumen I. 9° edición. Mc Graw Hill. Madrid. 2002
28
Una serovariedad se comporta de forma diferente dentro de su especie de
mantenimiento que en otro huésped incidental o accidental. Un huésped de
mantenimiento se caracteriza por:
1. Una susceptibilidad alta a la infección.
2. Transmisión endémica en la especie del huésped.
3. Una patogenicidad relativamente baja para su huésped.
4. Tendencia a sufrir enfermedad crónica, en lugar de aguda, produciendo
pérdidas económicas insidiosas debido a las pérdidas reproductoras.
5. Persistencia de la serovariante en los riñones y a veces, en el aparato
genital.
6. Una respuesta de anticuerpos baja frente a la infección, que dificulta el
diagnóstico.
7. Eficacia baja de la vacunación para prevenir la infección.
Por el contrario un huésped incidental se caracteriza por:
1. Una susceptibilidad relativamente baja a la infección, pero una
patogenicidad alta para el huésped.
2. Tendencia a sufrir una enfermedad aguda, en lugar de crónica.
3. Transmisión esporádica en la especie del huésped y adquisición de la
infección de otra infección de otra especie, a menudo, en forma
epidémica.
4. Una fase renal corta.
5. Una respuesta de anticuerpos intensa frente a la infección, facilitando el
diagnostico.
29
6. Las vacunas son más eficaces para prevenir la infección.32
El hospedador de mantenimiento favorece la perpetuación del agente
infeccioso en una población sin la intervención de ningún hospedador
accidental. La transmisión de la enfermedad entre hospedadores de
mantenimiento se realiza independientemente de las condiciones ambientales.
Sin embargo, en el caso de la transmisión de un hospedador de mantenimiento
a un hospedador accidental o entre hospedadores accidentales se requieren
condiciones ambientales favorables para la supervivencia de Leptospira fuera
del hospedador.
Una o más especies de mamíferos silvestres o domésticos se comportan como
hospedadores de mantenimiento o fuente de infección de Leptospiras
patógenas; pudiendo ser un animal reservorio de varias enfermedades y
diferentes especies serlo de un mismo serovar, en determinado ecosistema.
Cuando la infección se produce en huésped adaptado a un serovar de
Leptospira, el animal solo sufre manifestaciones reproductivas y se convierte
en un huésped de mantenimiento o reservorio eliminándola a través de la orina.
La infección en un huésped accidental, no adaptado a un serovar de Leptospira
causa una manifestación aguda o enfermedad clínica.33
Los reservorios mantienen una relación de comensal (sin perjuicio ni beneficio)
con las bacterias y pueden o no manifestar muy levemente la enfermedad,
estos animales son capaces de transferir las Leptospiras a sus crías, a través
32RADOSTIS, O. M. O. Cit. 33ALFARO, C., ARANGUREN, Y., CLAVIJO, A. Epidemiología y diagnóstico de la Leptospirosis como fundamentos para el diseño de estrategias de control. EN: Revista Digital del Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias de Venezuela. Número 6 septiembre-diciembre. 2004
30
de la placenta, o en el período neonatal, favoreciendo la cadena de
transmisión. Los portadores mantienen las Leptospiras viables y con capacidad
de multiplicarse en sus riñones. Muchas especies de mamíferos tales como:
bovinos, suinos, caninos, insectívoros, marsupiales y roedores (ratas y
ratones), se pueden convertir de portadores infectados en reservorios de la
bacteria.
Los humanos y animales que no son reservorios, se denominan hospedadores
accidentales y generalmente desarrollan la enfermedad.34
Los reservorios de las Leptospiras son animales que mantienen una relación de
comensales con las bacterias y no sufren o sufren muy levemente la
enfermedad; transfieren las Leptospiras a sus crías en el útero o en el periodo
prenatal, favoreciendo la cadena de transmisión. Los portadores son aquellos
animales que mantienen las Leptospiras viables y con capacidad de
multiplicarse en sus riñones, excretándolas intermitentemente por la orina;
muchos de estos pueden tener serología negativa.35
Estudios en animales de vida libre en muchas partes del mundo han revelado
que las Leptospiras están ampliamente distribuidas en una gran cantidad de
animales, particularmente en roedores, insectívoros y carnívoros, los que
pueden actuar como portadores. Además, debe considerarse a otras especies
que albergan la espiroqueta, entre las cuales se pueden citar a osos, bisontes
de vida libre, nutrias, pequeños marsupiales, artiodáctilos, quirópteros, incluso
aves, batracios, lobos marinos y reptiles, pero no se puede olvidar que algunas
especies domésticas también son reservorios. Así, por ejemplo, la principal
asociación del serovar hardjo es con el ganado bovino; canicola con el perro;
34ALFARO, C., ARANGUREN, Y., CLAVIJO, A. Óp. Cit. 35Ibíd.
31
pomona con el cerdo (también tarassovi y bratislava), bovino y roedores;
icterohaemorrhagiae, copenhageni, bataviae, autumnalis, australis, javanica
con ratas y roedores. De tal modo que Rattus rattus porta más frecuentemente
a copenhageni o ballum, Rattus novergicus a copenhageni, Apodemus agrarius
al serovar lai. Por su parte, Microtus oeconomus hospeda a Leptospiras de los
serogrupos grippotyphosa y hebdomadis.36
2.3.3.2 Factores de riesgo del entorno y la gestión
La supervivencia del microorganismo en el ambiente depende principalmente
de variaciones en las condiciones del suelo y el agua en el área contaminada.
La humedad y el agua de la superficie son los factores más importantes que
rigen la persistencia de este microorganismo en el suelo; puede persistir hasta
183 días en un suelo saturado de agua, pero solo 30 minutos cuando el suelo
esta aireado. En el suelo, en condiciones medias, la supervivencia es
probablemente de al menos 42 días para L. pomona. Sobrevive en el agua
libre, superficial durante periodos largos de tiempo. El periodo de supervivencia
es superior en las aguas estancadas que corrientes.
La contaminación ambiental y la capacidad del microorganismo para sobrevivir
durante largo tiempo en condiciones favorables de humedad pueden provocar
una incidencia alta de esta enfermedad en pastos muy irrigados, en áreas con
pluviometría muy elevada y de clima templado, en campos con fuentes de agua
en forma de lagunas superficiales, fácilmente contaminadas y en zonas
pantanosas y en potreros o cebaderos enfangados. Debido a la importancia del
36ZAMORA, J., Y RIEDEMANN S. T. M. Óp. Cit.
32
agua como medio de propagación de la infección, es más probable que ocurran
nuevos casos en las estaciones húmedas y en zonas bajas, especialmente
cuando la contaminación y la susceptibilidad son altas.37
2.3.4 RESISTENCIA
La supervivencia de Leptospiras patógenas en el ambiente depende de varios
factores, como el pH, temperatura, y la presencia de compuestos inhibitorios.
Las Leptospiras en el agua permanecen viables durante varios meses con un
pH de 7,2 a 8,0 bajo las condiciones del laboratorio; la supervivencia en agua
de rio es más corta pero es prolongada a bajas temperaturas. En aguas
servidas domésticas disminuye el tiempo de supervivencia a pocas horas; en
tierra ácida (pH 6,2) sobreviven por 7 semanas, y en lodo de tierra por lo
menos tres semanas.38
2.3.5 PATOGENIA
La Leptospirosis se manifiesta como una enfermedad de distintas maneras. Las
Leptospiras invaden al huésped a través de las superficies de las mucosas o la
piel reblandecida. Tienen la capacidad de unirse a las células epiteliales y
adherirse a los constituyentes de la matriz extracelular a través de un proceso
activo que afecta a las proteínas de superficie. Las Leptospiras patógenas se
localizan extracelularmente entre las células del hígado y los riñones.
La liberación de linfoquiinas como el factor de necrosis tumoral (TNF-α) por los
monocitos, a través de la actividad endotóxica de las Leptospiras puede ser un
37RADOSTIS, O. M. O. Cit. 38CESPEDES Z, M. Óp. Cit.
33
mecanismo de virulencia importante. La inducción de la liberación de TNF-α
puede explicar el daño de las células endoteliales, que tiene como resultado la
hemorragia que se observa en la Leptospirosis grave. 39
La Leptospirosis puede ocurrir en forma aguda y grave debido a la septicemia,
con signos de endotoxemia como hemorragias, hepatitis, nefritis, meningitis, en
forma grave, moderadamente subaguda, con nefritis, hepatitis, agalactia y
meningitis, o en forma crónica, caracterizada por aborto, mortinatos y
esterilidad.
La forma de enfermedad que se presente depende principalmente de la
especie del huésped. Las variaciones entre los serotipos de L. interrogans en
cuanto a su patogenicidad afectan también a la naturaleza de los signos que
aparecen. Por ejemplo, en las infecciones por L. pomona, la hemólisis
intravascular y la nefritis intersticial son partes importantes de la enfermedad.
Sin embargo, L. hardjo no produce hemolisina y no causa nefritis intersticial
clínica, pero causa infección clínica en las hembras sexualmente maduras, en
lactación o preñadas.
En todos los animales, el período de incubación es de 3 a 7 días.40
39RADOSTIS, O. M. Óp. Cit. 40Ibid.
34
2.3.6 SIGNOS CLÍNICOS
La Leptospirosis puede presentar una gran variedad de manifestaciones
clínicas. Estas pueden variar de una enfermedad leve a una enfermedad seria
y en ocasiones fatal. También puede presentar signos de otras enfermedades
como Fiebre del dengue y otras enfermedades virales hemorrágicas. 41
2.3.6.1 Sistémicos
La Leptospirosis causa primariamente una vasculitis y endotelitis. En donde se
afectan los riñones, hígado, bazo, músculos, sistema nervioso central y ojos.
Los signos clínicos dependen particularmente del serovar y del huésped. La
mayoría de los estudios mas recientes reportan que el riñón es el órgano más
afectado en los animales con Leptospirosis. Los perros descritos en estos
estudios reportan que los signos referentes a enfermedad renal incluyen
azotemia, oliguria o isostenuria. Este hallazgo no sorprende debido a que la
Leptospira coloniza los riñones y se replica en el epitelio tubular renal. Otros
signos que se presentan comúnmente incluyen letargia, anorexia, debilidad,
vomito, dolor abdominal, dolor muscular, o diarrea. En perros con enfermedad
hepática se encuentra elevada la fosfatasa alcalina y la bilirrubina sérica. En
algunos se ha reportado leucocitosis, trombocitopenia y coagulación
intravascular diseminada. 42
Pueden presentarse signos oculares, ya que, como la Leptospirosis es una
enfermedad aguda caracterizada por la vasculitis, y presentar uveítis en
infecciones agudas.
41W.H.O. - INTERNATIONAL LEPTOSPIROSIS SOCIETY-. Op. Cit 42DZIEZYC, J. Canine systemic bacterial infections. En: Veterinary Clinics of North America: Small Animal Practice. Vol. 30. No. 5. Septiembre 2000.
35
Después de la invasión sistémica, ocasionalmente se pueden producir
mortinatos43, o abortos por la muerte fetal, con o sin degeneración placentaria.
El aborto ocurre normalmente varias semanas después de la septicemia debido
al tiempo necesario para producir los cambios en el feto, que normalmente
presenta autolisis después del parto.
Las Leptospiras están raramente presentes en los fetos abortados; sin
embargo, si el feto abortado ha sobrevivido a la infección el tiempo suficiente
para producir anticuerpos, estos pueden detectarse.
En infecciones por el serovar L. pomona son partes importantes de la
enfermedad la hemolisis intravascular diseminada y la nefritis intersticial. Sin
embargo, L. hardjo no produce hemolisina ni causa nefritis intersticial. Solo es
capaz de crecer en el útero grávido y en la glándula mamaria durante la
lactación de modo que produce septicemia y después mastitis, aborto, o
ambas.44
2.3.7 MECANISMOS INMUNITARIOS
Después de la infección, se inducen anticuerpos específicos que opsonizan las
Leptospiras, facilitando su eliminación de la mayor parte del organismo. Sin
embargo, las Leptospiras que alcanzan los túbulos renales proximales, el
aparato genital y las glándulas mamarias parece que están protegidas de los
anticuerpos circulantes. Además, y más importante, el nivel de anticuerpos
43BIRCHARD, S. J. Y SHERDING R. G. Manual clínico de procedimientos en pequeñas especies. Vol. 1, Segunda edición, Mc. Graw Hill, Madrid, España, 2002 44RADOSTIS, OTTO M. Óp. Cit.
36
séricos normalmente disminuye hasta niveles no detectables en los animales
que están infectados persistentemente.
La primera respuesta serológica en caso de infección por L. hardjo es la
producción de inmunoglobulina M (IgM). Estos anticuerpos aumentan
rápidamente pero normalmente descienden hasta concentraciones no
detectables a las 4 semanas de la infección. Al cabo de 1 a 2 semanas de la
infección se detectan los anticuerpos IgG y a los 3 meses, representan el 80%
de los anticuerpos detectados en la prueba de aglutinación microscópica
(MAT). El titulo máximo de MAT se alcanza entre los 11 y los 21 días después
de la infección, pero pueden variar desde 3.200 hasta una concentración no
detectable. 45
Los anticuerpos están dirigidos contra:
Antígenos comunes que son frecuentes tanto en las Leptospiras
patógenas como saprofitas;
Antígenos serovar específicos y serogrupo específicos.
Los pacientes con Leptospirosis pueden producir anticuerpos que reaccionan
con muchos serovares. Este fenómeno, llamado reacción cruzada, a menudo
es observado en la fase inicial de la enfermedad.
Después de la enfermedad aguda, los anticuerpos de la reacción cruzada
desaparecen gradualmente a medida que la respuesta inmune madura,
45RADOSTIS, O. M. Óp. Cit.
37
usualmente en el curso de semanas o meses, mientras que los anticuerpos
serogrupo y serovar específicos generalmente persisten por años.46
2.3.7.1 Protección inmunitaria47
Se cree que los anticuerpos serovar específicos son protectores y el paciente
se vuelve inmune a una reinfección con el mismo serovar, siempre y cuando la
concentración de los anticuerpos esté lo suficientemente elevada. Los
anticuerpos generados por una infección con un serovar en particular no
necesariamente protegen contra la infección con otros serovares.
2.3.8 LEPTOSPIROSIS EN CÁNIDOS
En cánidos se han reportado los siguientes serovares: L. ballum, L. australis, L.
grippotyphosa, L. icterohaemorrhagiae y L. pomona. La enfermedad está
caracterizada por una septicemia febril de aguda a crónica. La Leptospirosis se
encuentra distribuida alrededor del mundo, ha sido reportada en coyotes (Canis
latrans) y zorros grises y zorros rojos (Vulpes vulpes) e indudablemente es un
patógeno común de otros cánidos salvajes.
Los signos clínicos de Leptospirosis son anorexia, emesis, debilidad muscular,
anemia, hemoglobinuria, ictericia, aumento de la temperatura (por encima de
40º C), abortos, y muerte alrededor de diez días después de la exposición. La
mayoría de los sobrevivientes desarrollan estados autolimitantes; sin embargo,
algunos desarrollan estados crónicos. El conteo leucocitario puede superar a
46WORLD HEALTH ORGANIZATION - INTERNATIONAL LEPTOSPIROSIS SOCIETY. Op. Cit 47Ibid.
38
los 35.000, el Nitrógeno Ureico en Sangre (NUS) puede estar elevado. La
Leptospirosis usualmente es transmitida por contacto con orina infectada o por
el consumo de pequeños roedores infectados.
La Leptospirosis puede ser diagnosticada serológicamente. Las pruebas en
tubo o en lámina son consideradas buenas si se tienen adecuados niveles de
antígenos; sin embargo es mejor requerir pruebas de laboratorio ya que hay
100 Leptospiras antigénicamente diferentes.
Las lesiones post mortem de las Leptospirosis son: hemorragias petequiales en
superficies serosas, ictericia, enteritis hemorrágica y hemoglobinemia. Los
casos crónicos tienen diferentes grados de nefritis intersticial. 48
2.3.9 LEPTOSPIROSIS EN MARSUPIALES
En marsupiales se pueden presentar los siguientes serovares: L. pomona, L.
autumnalis, L. ballum, L. paidjan, L. atchofalaya, L. grippotyphosa, L. mini
georgia, L. icterohaemorrhagiae, L. hyos, L. atlantae, L. hebdomadia, L.
australis, L. canicola y L. butembo. La Leptospirosis ha sido reportada en
zarigüeyas de Virginia estas parecen ser importantes reservorios.
Los signos clínicos en las zarigüeyas incluyen elevada temperatura, ictericia y
hematuria. El diagnóstico de Leptospirosis es hecho por técnicas serológicas.49
48WALLACH, J. D. Y BOEVER, W. J., Diseases of exotic animals. W.B. Saunders Company. Philadelphia. 1983. 49Ibid
39
2.3.10 LEPTOSPIROSIS EN ROEDORES Y LAGOMORFOS
L. icterohaemorrhagiae, L. grippotyphosa, L. interrogans, L. ballum, L. australis,
L. canicola, L. orleans, L. zanoni, L. myocastors, y L. paidjan. La Leptospirosis
se ha reportado en conejos de cola de algodón y de pantano, en cobayos,
ratones, ratón de prado, ratón de cosecha, ratas y ratón de campo.
Los roedores y lagomorfos usualmente se recuperan espontáneamente pero
son portadores permanentes. El diagnóstico se hace mediante el hallazgo de
un organismo con características en espiral, en la orina o mediante serología.50
2.3.11 LEPTOSPIROSIS EN FELINOS
En felinos se ha reportado L. pomona, L. ballum, y L. grippotyphosa. Se ha
reportado muchas veces en linces.
Los signos clínicos en felinos son iguales que en cánidos. Se ha reportado
abortos en algunas especies salvajes y domésticas de felinos. 51
2.3.12 ZOONOSIS
La palabra “zoonosis” se deriva del griego (zoon, animal, noses, enfermedad) y
es usada para enfermedades que comparten los humanos y los animales, más
específico, las enfermedades infecciosas que se transmiten naturalmente entre
50WALLACH, J. D. Y BOEVER, W. J. Op. Cit. 51Ibid.
40
humanos y animales. Estas enfermedades pueden ser transmitidas por
diferentes rutas por eso se agrupan de la siguiente manera:
Enfermedades compartidas con un reservorio abiótico.
Zoonosis en donde los animales silvestres son los principales reservorios.
Zoonosis mantenidas en animales salvajes y domésticos.
Zoonosis en donde el hombre es el hospedero de mantenimiento.
Enfermedades compartidas entre animales salvajes y domésticos.52
Según el reporte Técnico Nº 169 de la OMS/FAO del comité de expertos en
zoonosis establece que las zoonosis son aquellas enfermedades infecciosas
naturalmente transmisibles entre los animales vertebrados y el hombre.53
En humanos la Leptospirosis, es considerada una enfermedad ocupacional
afectando a Médicos Veterinarios, cuidadores de animales, farmaceutas,
trabajadores de mataderos y otros profesionales. También ocurre en animales
domésticos y salvajes.54
Los pescadores son otro grupo de riesgo para contraer la enfermedad.
Recientemente se ha demostrado casos en pescadores contagiados,
presumiblemente por el contacto con orina de ratas.55
El número de casos humanos alrededor del mundo no es conocido
exactamente. Según los reportes disponibles, el rango de incidencia es
aproximadamente de 0.1–1 de 100 000 por año en climas templados a 10–100
52WOBESER, GARY A. Essentials of disease in Wild Animals. Primera Edición. Blackwell Publishing. U.S.A. 2006 53MALAGON LONDOÑO, G. Y GALÁN MORERA, R. Óp. Cit. 54RAMIRO CORREA, S. H. Y CAMARGO PASSOS, E. Óp. Cit 55CESPEDES Z, M. Óp. Cit
41
de 100 000 en el trópico. En los brotes y en los grupos con alta exposición, el
riesgo de incidencia puede llegar a 100 de 100000.56
Las formas de trasmisión directa e indirecta están influidas por factores
sociales y culturales en diferentes regiones geográficas, factores medio
ambientales como el clima y la estación de año, y otros como la ocupación del
individuo y el área de residencia.
La Leptospirosis en el hombre se puede presentar en dos formas: Forma
asintomática y forma sintomática.
2.3.12.1 Forma asintomática
La existencia de dos formas subclínicas se hace evidente cuando se realizan
encuestas seroepidemiológicas, donde el 16-40% de personas expuestas a la
fuente de infección presentan títulos serológicos de anticuerpos específicos
detectables; sin embargo, no recuerdan haber tenido manifestaciones clínicas
sugestivas de la enfermedad. 57
2.3.12.2 Forma sintomática
La Leptospirosis es típicamente una enfermedad bifásica, presentándose una
fase inicial o de leptospiremia con una duración de cuatro a siete días,
caracterizada por la presencia de las Leptospiras en sangre y una segunda
fase inmune o leptospiruria con una duración de 8 a 30 días donde se puede
56WORLD HEALTH ORGANIZATION. - INTERNATIONAL LEPTOSPIROSIS SOCIETY. Op. Cit 57CESPEDES Z, M. Op. Cit
42
detectar anticuerpos específicos en circulación. Ambas fases son comunes en
las dos formas clínicas de presentación: ictérica y anictérica.58
• Forma ictérica Denominada síndrome de Weil, es la forma más severa; se caracteriza por
ictericia, alteraciones de la función hepática y renal, desarrollo de hemorragias,
colapso vascular, alteraciones hemodinámicas, cardíacas, pulmonares y de la
conciencia con una tasa de letalidad que varían del 5 al 15%. Con la instalación
de la insuficiencia renal, puede desarrollarse delirio y convulsiones junto con la
aparición de manifestaciones hemorrágicas diversas y acentuación de la
ictericia. Hay hemorragias en forma de petequias, equimosis o hemorragias
pulmonares y gastrointestinales exteriorizadas por hematemesis, melena o
enterorragia. Puede haber esplenomegalia acompañada de una hepatomegalia
dolorosa. En la fase inmune, el paciente presenta regresión progresiva de los
síntomas y evoluciona hacia la mejoría entre 1 a 2 semanas.59
• Forma Anictérica
La enfermedad puede presentarse en forma discreta con: fiebre, cefalea,
mialgias o dolores musculares que involucran los músculos de las pantorrillas,
muslos, regiones paravertebrales y abdomen, resultando doloroso a la
palpación, pudiendo a veces simular un abdomen agudo quirúrgico. Puede
ocurrir anorexia, escalofríos, nauseas, vómito, tos, congestión ocular, artralgia,
fotofobia, hiperemia o hemorragia conjuntival. Hepatomegalia y esplenomegalia
ocurren con menor intensidad. Epistaxis, dolor torácico, tos seca con
58CESPEDES Z, M. Op. Cit 59AIDOREVICH, L. A. Op. Cit
43
expectoración hemóptica, con una duración de uno a varios días siendo
frecuentemente rotulada como "Síndrome gripal o virosis". En algunos casos
pasa desapercibida. 60
2.3.12.3 Medidas de control de leptospirosis en animales silvestres61
El control de focos naturales, es la más difícil tarea para el trabajador de la
salud y requiere conocimiento de zoología, biología y geografía, porque es la
única base para la planificación e implementación de medidas de control. El
principio fundamental y clave de la estrategia es la no intervención dentro de la
vida de las poblaciones naturales de estos animales.
Se pueden encontrar tres situaciones en el control de estos focos de zoonosis:
La primera situación se presenta cuando es necesario proteger individuos
o grupos organizados de individuos, aquí las medidas de prevención más
efectivas son: la inmunoprofilaxis, y el control de la calidad de aguas en
contacto con animales sospechosos de presentar la bacteria, que puede
ser consumida o utilizada por el hombre.
La segunda situación se presenta en zonas recreativas (ecoturismo,
turismo en parques naturales, zonas de reserva, zoológicos), en los
suburbios de grandes ciudades y asentamientos humanos ubicados sobre
el territorio de focos naturales de arboinfecciones.
60WALLACH, J. D. Y BOEVER, W. J. Op. Cit. 61MALAGON LONDOÑO, G. Y GALÁN MORERA, R. Óp. Cit
44
La tercera situación, y la más importante en nuestro caso, se presenta
cuando se requiere proteger trabajadores y animales presentes en el
zoológico de pseudofocos. El número de pseudofocos puede ser bastante
grande y los riesgos de infección de la población humana son altos. Las
medidas de protección son básicamente: máxima reducción de la
frecuencia e intensidad de contacto con los focos enzoóticos naturales,
controlar la salud de animales en áreas adyacentes a los asentamientos
humanos, control de roedores de los focos naturales, y aplicar vacunas en
los casos que sea posible.
2.3.13 TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICO
La Leptospirosis se considera como una enfermedad subdiagnosticada debido
a: (a) El diagnóstico es difícil de confirmar; (b) puede ser confundida con otras
enfermedades; (c) la enfermedad puede ser leve y no ser investigada en el
laboratorio.62
Los métodos de laboratorio que se emplean para diagnosticar la Leptospirosis
incluyen el cultivo o la detección de las Leptospiras en la sangre o los líquidos
corporales y la detección y la medición de los anticuerpos en la sangre y los
líquidos corporales como orina, líquido cefalorraquídeo y moco cervicovaginal.
Las muestras útiles y más frecuentemente obtenidas son:
62 WORLD HEALTH ORGANIZATION. - INTERNATIONAL LEPTOSPIROSIS SOCIETY. Op. Cit
45
1. Sangre con heparina para cultivo (los primeros 10 días) luego de los 10
días las Leptospiras desaparecen de la sangre y los anticuerpos son
detectables por serodiagnóstico.
2. Sangre coagulada o suero para serología. Generalmente se toma 2 veces
con días de diferencia según la fecha de inicio de la enfermedad y el
tiempo de seroconversión.
3. Orina para cultivo. Las Leptospiras mueren rápidamente en la orina. Esta
se emplea cuando se logra obtener una muestra limpia que va a ser
inoculada en un medio de cultivo apropiado en no más de dos horas.
4. Muestras postmortem. Es importante obtener muestras de tantos órganos
como sea posible, incluyendo cerebro, fluido cerebroespinal, humor
acuoso, pulmones, riñones, hígado, páncreas y corazón, así como sangre
cardiaca si es posible para serología. Las muestras deben ser obtenidas
lo más rápido posible luego de la muerte y ser inoculadas prontamente.
5. Fluido Cerebroespinal para cultivo.63
Un diagnóstico positivo de la Leptospirosis en animales individuales es a
menudo difícil debido a la variación en la naturaleza de esta enfermedad, la
rapidez con que el microorganismo muere en las muestras una vez que se
obtienen y su aparición transitoria en diversos tejidos. Durante la fase
septicémica, las Leptospiras están presentes solo en la sangre y puede haber
pruebas de laboratorio de anemia hemolítica aguda y aumento de la fragilidad
de los eritrocitos y, a menudo, hemoglobinuria. Sin embargo, la única medida
de diagnóstico positiva en esta fase de la enfermedad es el hemocultivo.
63 WORLD HEALTH ORGANIZATION-INTERNATIONAL LEPTOSPIROSIS SOCIETY. Op. Cit
46
2.3.13.1 Prueba de aglutinación microscópica (MAT)64
La MAT es el ensayo serológico más utilizado para diagnosticar la
Leptospirosis. En los animales que sobreviven a la infección, la Leptospirosis
aguda se puede diagnosticar fácilmente, demostrando una titulación de
anticuerpos en aumento en el suero de los animales enfermos o
convalecientes.
La MAT es especialmente útil para diagnosticar una enfermedad causada por
serovariedades incidentales, no adaptadas al huésped o una enfermedad
aguda causada por serovariedades adaptadas al huésped. Es menos útil para
diagnosticar una enfermedad crónica en los huéspedes de mantenimiento,
pues la respuesta de anticuerpos a la infección puede ser insignificante en las
infecciones crónicas o persistir después de las infecciones subclínicas.
Una titulación de MAT ≥ 100 se considera positiva, pero existen varias
consideraciones para evaluar esta respuesta. La MAT es una prueba específica
del serogrupo y hay que analizar las serovariedades representativas de todos
los serogrupos sospechosos. Esta prueba es un método detector más sensible
de los anticuerpos IgM que de los IgG. Tiene una sensibilidad baja en casos de
Leptospirosis crónica para detectar huéspedes de mantenimiento; y es
inadecuada para detectar la fase de portador en los huéspedes de
mantenimiento, porque los títulos ≥ 100 frente a las serovariedades adaptadas
al huésped tienen una sensibilidad baja, aunque una especificidad alta.
64RADOSTIS, O. M. Óp. Cit.
47
Figura 3. Reacciones de la prueba de aglutinación microscópica (MAT)
a. Lámina control; b. Lámina con 25% de aglutinación (zonas como copos
de algodón); c. Lámina con 50% de aglutinación; e. Lámina con 100% de
aglutinación y lisis; g. Lámina con 100% de lisis; h. Lámina negativa.
Fuente. CESPEDES Z, M.
2.3.13.2 Cultivo de orina 65
De todas la pruebas de laboratorio de diagnóstico de la Leptospirosis, el
examen de las muestras de orina para detectar el microorganismo, ofrece
probablemente la mejor oportunidad para demostrar la presencia de la
infección.
Después de la infección inicial, los animales eliminan un gran número de
Leptospiras por la orina durante varias semanas y después, existe una
disminución progresiva en el número de bacterias eliminadas, que puede estar
asociada con un aumento brusco de los niveles de anticuerpos de IgG y de IgA
frente a las Leptospiras en la orina.
65RADOSTIS, O. M. Óp. Cit.
48
2.3.13.3 ELISA66
El análisis de ELISA es muy común y de fácil disponibilidad. Este puede ser
realizado con kits comerciales o con antígenos “caseros”. Existe una gran
cantidad de antígenos genero-específicos generalmente usados para detectar
anticuerpos IgM, y en ocasiones IgG. La presencia de anticuerpos IgM puede
indicar una reciente infección, pero debe tenerse en cuenta que estos
anticuerpos IgM pueden ser detectables por años.
2.3.13.4 Microscopía de campo oscuro67
Las Leptospiras son observadas en fluidos o medios de cultivo de sangre u
orina usando un microscopio de campo oscuro.
2.3.13.5 Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
La PCR es un método de ampliación de segmentos específicos de ADN
Leptospiral. Por lo tanto, la presencia de Leptospiras se confirma detectando e
identificando segmentos específicos de ADN Leptospiral. Esta técnica puede
confirmar rápidamente el diagnóstico en fases tempranas de la enfermedad
cuando la bacteria aun está presente.
66WORLD HELATH ORGANIZATION-INTERNATIONAL LEPTOSPIROSIS SOCIETY. Op. Cit 67Ibid.
49
2.3.14 DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL
En las formas anictéricas debe establecerse con enfermedades febriles tales
como: influenza, dengue, hepatitis virales, neumonía, meningitis virales,
mononucleosis, brucelosis, borreliosis, toxoplasmosis. En la forma anictérica el
diagnóstico diferencial debe hacerse con: hepatitis virales, dengue
hemorrágico, malaria, fiebre tifoidea, fiebre amarilla, rickettsiosis, fiebre
hemorrágica venezolana e infecciones por hantavirus, pielonefritis e
intoxicaciones.68
2.4 Generalidades de las especies capturadas
2.4.1 Comadreja de cola larga (Mustela frenata)
Figura 4. Comadreja de cola larga
Fuente: animaldiversity.ummz.umich.edu
Animal diurno y nocturno, terrestre y solitario. Se alimenta principalmente de
pequeños mamíferos tales como conejos y roedores pero también consume
pájaros y reptiles. Esta comadreja ha sido llamada serpiente con patas, sus
patas cortas espalda y cuello largos, son de forma y tamaño apropiados para
persecuciones y corridas por los angostos túneles de las madrigueras de sus
68CESPEDES Z, M. Óp. Cit
50
presas. Es activa y nerviosa, y es raro lograr más de un breve vistazo de una.
Se guarece en madrigueras bajo las raíces o entre las rocas. Se adapta
fácilmente, y se encuentra en terrenos secos y abiertos, en tierras agrícolas, o
en bosques montanos de altura y ocasionalmente se encuentra por debajo de
los 1000 m.s.n.m en bosques húmedos de América Central.
Su distribución geográfica va desde América del Norte, Central y del Sur: desde
Canadá a Bolivia. Hasta los 4000 metros de altitud. Es una especie altamente
distribuida y localmente común69
2.4.2 Guatín o Ñeque (Dasyprocta fuliginosa)
Figura 5. Ñeque o Guatín
Fuente: www.apus.ru
Su comportamiento es diurno, terrestre y solitario; aunque en algunas
ocasiones se ve en parejas. El guatín o ñeque se alimenta principalmente de
semillas y frutas que caen en el suelo. También consume hongos, flores y
algunos insectos. Se oculta en cuevas construidas por otros animales y árboles
caídos.
69EMMONS, L. H. Óp. Cit.
51
En Colombia se encuentra en la región Pacífica, Centro y Norte desde los 1500
msnm.
Su hábitat son los bosques altos, de transición y bajos, pero se adapta
fácilmente a ambientes semiurbanos. Se encuentra en bosques húmedos
maduros y perturbados, bosques deciduos y montanos.
Esta categorizada como LR pm (de bajo riesgo y preocupación menor) según
los parámetros de la UICN, debido a la cacería a que es sometida por su carne
y destrucción de su hábitat.70
2.4.3 Zarigüeya (Didelphis albiventris)
Figura 6. Zarigüeya
Es una especie nocturna. Esta zarigüeya vive en un amplio rango de hábitats y
altitudes, se encuentra asociada a lugares boscosos densos y húmedos donde
hay bromelias, epífitas y lianas, en bosques primarios y secundarios, en
bosques de niebla, en bosques de galería y en páramos, cerca de nacimientos
70CORPORACION AUTONOMA REGIONAL DEL CENTRO DE ANTIOQUIA. Manual de identificación de fauna silvestre. Segunda Edición, Medellín, Colombia. 2002.
52
o a orillas de quebradas, en sabanas, pantanos, zonas agrícolas o
deforestadas. Se refugia en cavidades de rocas, oquedades de árboles, debajo
de arbustos secos y en madrigueras. Esta es una especie omnívora, consume
frutos, invertebrados y pequeños vertebrados.
En las hembras juveniles las mamas son pequeñas, planas y sin pigmentación,
mientras que en las hembras adultas, gestantes y paridas, las mamas están
permanentemente alargadas y a menudo pigmentadas. En los machos
juveniles y adultos, los testículos son grandes y colgantes (escrotales). El
pelaje de los juveniles es generalmente más lanoso, de color más grisáceo y
más opaco que el de los adultos.
Su periodo de gestación es corto, y tiene una duración entre 8 y 24 días. Todos
los marsupiales nacen en un estado de desarrollo embrionario incompleto y es
precisamente cuando comienza la organogénesis, durante la cual los
ventrículos del corazón aun permanecen conectados, los pulmones son
simples bolsas vascularizadas sin alveolos, y los ojos y oídos aun están
cerrados. 71
Es una especie muy común, y no se encuentra en peligro de extinción. Su
distribución geográfica va desde América del Sur: en los Andes y al Este de los
Andes en la periferia de bosques húmedos desde el oeste de Venezuela y
Colombia y las Guayanas por el Sur hasta Ecuador, Perú, Bolivia, Paraguay,
Uruguay y Norte de Argentina y Sureste de Brasil. Hasta los 4000 metros de
altitud. 72
71MUÑOZ, J., CUARTAS, C. Marsupiales, cenoléstidos e insectívoros de Colombia. Editorial Universidad de Antioquia, Medellín. 2003. 72EMMONS, L. H. Óp. Cit.
53
2.4.4 Rata doméstica (Rattus rattus)
Figura 7. Rata doméstica
La rata doméstica se encuentra generalmente en cualquier área que pueda
suplir su dieta principalmente vegetariana. Debido a su agilidad para trepar, es
común encontrarla en lugares altos, tales como edificios cercanos a zonas
forestales. Aun cuando puede ser encontrado cerca del agua, no es común
encontrarla en alcantarillas o áreas acuáticas.
Esta especie tiende a vivir en grandes grupos conformados por machos y
hembras. Sus hábitos son principalmente nocturnos. Dependiendo de hábitat,
los individuos pueden ser arbóreos o terrícolas.
Esta especie no se encuentra en ningún estado especial de la conservación.
Son extensos y abundantes, especialmente en las áreas donde viven los seres
humanos.
La rata doméstica se encuentra en todos los continentes. Aunque se cree que
es nativa de la India y posiblemente de otros países Indo-Malayos, se ha
introducido con la expansión humana a todos los continentes. Esta especie
54
prospera en regiones tropicales y ha sido desplazada en gran parte de regiones
más templadas por las Rattus noway y Rattus novergicus.73
2.4.5 Zorro cangrejero (Cerdocyon thous)
Figura 8. Zorro cangrejero
Animal nocturno y crepuscular, solitario y en parejas. Se alimenta de pequeños
vertebrados (roedores, ranas y reptiles), invertebrados incluyendo cangrejos e
insectos, y frutos. Un macho y una hembra ocupan juntos un territorio común
de por lo menos 45 a 100 hectáreas. Los miembros de la pareja a veces se
desplazan o viajan juntos, pero cada uno captura su propio alimento. Este zorro
habita en llanos sabanas, bosques secos, per también entra en bosques
húmedos siempre verdes.
Se encuentra en América del Sur: rodeando la cuenca amazónica en Colombia,
Venezuela, Guyanas, Brasil, Bolivia, Paraguay, Argentina y Uruguay. Hasta los
2000 msnm de altitud.
73 GILLESPIE, H. and MYERS, P. 2004. "Rattus rattus", Animal Diversity Web. Consultado el Septiembre 12, 2007 Consultado en: http://animaldiversity.ummz.umich.edu/site/accounts/information/Rattus_rattus.html.
55
3 MATERIALES Y MÉTODOS
3.1 MARCO GEOGRÁFICO
El estudio se realizó en un fragmento de bosque andino en la montaña del
Zoológico del Parque Jaime Duque ubicado en el municipio de Tocancipá.
Figura 9. Vista de la montaña donde se realizó el estudio.
El municipio se localiza al norte de Bogotá, a una distancia de 47 kilómetros.
Su ubicación geográfica está sobre los 4° 58´ latitud norte y los 73° 55´ longitud
oeste. A una altura sobre el nivel del mar de 2.606 metros. Presenta una
temperatura promedio de 14° C, con un clima moderadamente seco con
aguaceros intensos con dos períodos típicos de lluvias en el año: Uno más
lluvioso en el primer semestre de (marzo a junio) y otro en el segundo semestre
de (septiembre a noviembre) con un promedio anual de lluvias entre 500 mm a
1.000 mm. La montaña donde se realizará el estudio se clasifica como bosque
56
alto andino secundario, a 2606 metros sobre el nivel del mar, en terreno plano y
piso térmico frío.74
Figura 10. Mapa del municipio de Tocancipá
Fuente: www.cundinamarca.gov.co
3.2 CRONOLOGÍA
El estudio comprendió dos fases; la primera de pre-muestreo, en donde se
evaluó la efectividad de los cebos durante 4 meses (Agosto a Noviembre de
2007) sin metodología establecida, y la segunda fase se realizó teniendo en
cuenta la metodología propuesta en los meses de Diciembre a Marzo de 2008,
abarcando un total de 16 semanas.
Dado que los estados del tiempo y las condiciones climáticas, tienen un efecto
directo sobre todos los organismos vivos, y a la vez una influencia indirecta
debido a sus efectos, tanto sobre la disponibilidad de alimentos como sobre la
cobertura, debe ser contemplado un breve sumario sobre los factores
climáticos y de estados de tiempo.75 Por esta razón, para la segunda fase del
estudio se tuvo en cuenta el abarcar diferentes estaciones climáticas lo cual
está relacionado con la efectividad de las capturas.
74SENADO DE LA REPUBLICA. Municipios Colombianos. Pama editores. Colombia. 1989 75GYSEL, L., LYON, J. Análisis y evaluación del hábitat. En: Manual de técnicas de gestión de vida silvestre. WWF. Canadá, 1980.
57
3.3 POBLACIÓN Y MUESTRA
Este estudio está enfocado hacia los pequeños mamíferos presentes en la
montaña del Zoológico del Jaime Duque, sin embargo, no hay reportes
anteriores que indiquen o estimen el tamaño total de la población. Por esta
razón, la muestra objetivo del estudio se redujo al total de animales capturados.
La montaña del Zoológico Jaime Duque, donde se realizó el estudio, cuenta
con una variedad de pequeños mamíferos, entre los cuales se encuentran el
zorro plateado o zorro gris (Urocyon cinereoargenteus)76, la chucha, fara o
zarigüeya (Didelphis albiventris)77, comadrejas (Mustela frenata), rata
doméstica (Rattus rattus), ratones de monte, gato doméstico (Felis catus), entre
otros. Se encuentran también ñeques o guatines (Dasyprocta fuliginosa)78, sin
ser especies propias de la zona, debido a la liberación de estos por parte del
Zoológico Jaime Duque.
76RODRÍGUEZ, J. V. y HERNÁNDEZ, J. I. Mamíferos colombianos: sus nombres comunes e indígenas. Conservation Internacional, Washington. 1995. 77EMMONS, L. H. Mamíferos de los Bosques húmedos de América tropical, una guía de campo. Ed. F.A.N., Santa Cruz de la Sierra, Bolivia. 1999. 78Ibíd.
58
3.4 MATERIALES
Para la realización del estudio se utilizaron los siguientes elementos:
Elaboración de los transectos
Decámetro (20 mts.)
Machete
Lima
Guantes de carnaza
Cuerda de nylon
Cinta roja
Botas
Overol
Trampeo
Trampas tipo Sherman (# 7)
Trampas tipo Tomahawk (# 8)
Cebos alimenticios
o Carne de
caballo
o Banano
o Pan
o Plátano
o Yuca
o Zanahoria
o Naranja
o Mazorca
o Pimentón
o Piña
o Papaya
o Mango
o Guayaba
o Pata de gallina
o Mamoncillo
o Rodentina
o Arracacha
o Apio
o Uvas
o Menudo de res
o Mantequilla de
maní
o Torta de trigo
o Huevo cocido
o Queso
o Tomate
o Maíz
o Maní
o Concentrado
“Ruffo”
o Miel
o Avena
o Galleta de
carne “Grills”
o Codorniz
Cobertores de trampas
59
Inmovilización de los animales capturados
Lonas
Guantes de carnaza
Trapo negro
Pesa o Tara
Jeringas 1ml, 2ml
Ketamina (Ketamina 50®, Lab. Holliday Scott S.A.)
Xilacina (Rompun® 2%, Lab. Bayer)
Gasas
Alcohol
Guantes quirúrgicos
Guacales
Periódico
Recolección de muestras
Jeringas 1ml, 2ml, 5ml
Clorhexidina
Tubos sin anticoagulante
Centrifuga
Sonda urinaria
Viales de 1ml
Marcaje de animales
Chips subcutáneos marca AVID ref. ISO
Jeringa aplicadora de chips
60
Lector de chips marca AVID
Ketoprofeno (Anafen® 1%, Lab. Merial)
Violeta de genciana (Curagan®, Lab. Novartis)
Prueba de laboratorio
Congelador REVCO
Baño María
Tubos tapa rosca
Solución salina amortiguadora de fosfatos (SSAF). (pH=7.2; 0.01MOsm)
Pipetas paster
Gradilla
Cajas de pozuelos fondo en U
Micropipetas (10-100 µl, 100- 1000 µl)
Puntas para micropipetas
Cabina de flujo vertical
Láminas portaobjetos
Láminas cubreobjetos
Microscopio de campo oscuro
Cultivos
Autoclave
3.5 METODOLOGÍA
Para la realización del estudio, se utilizó una metodología basada en transectos
lineales fijos, ya que estos ofrecen un medio barato y de amplia aplicación para la
conducción de conteos incompletos de números absolutos de individuos de una
61
especie dada en un área de estudio en particular79, además permiten darle una
cobertura más homogénea al área delimitada.
Entendiéndose transecto como el sitio al cual se restringe la postura de las
trampas,80 estos fueron elaborados con el fin de dar una cobertura más
sistemática y organizada y disminuir el sesgo de los resultados.
Para el estudio se emplearon trampas de cajón tipo Sherman y Tomahawk ya que
garantizan la integridad de los individuos capturados, y permiten su liberación sin
ningún cambio físico ni comportamental. Además, este tipo de trampas, ha sido
empleado en diferentes estudios en pequeños mamíferos no voladores, con
resultados que demuestran su alta efectividad.81
Asimismo, se tuvieron en cuenta los hábitos alimenticios de las especies que
podíamos encontrar en la montaña, para la elección de cebos que resultaran
atrayentes altamente efectivos para la captura de estos individuos. La elección de
estos cebos se hizo basada en la dieta de algunas especies que se encuentran en
el zoológico y en un estudio preliminar que se realizó en esta misma área.82
Una vez, los individuos fueron capturados, se les realizó inmovilización física y
química para la posterior obtención de las muestras sanguíneas. Luego, estas
muestras fueron procesadas y llevadas al laboratorio de la Universidad de La Salle
79TRANSECTOS LINEALES para el monitoreo de poblaciones de vertebrados terrestres. Disponible en: www.redmeso.net/bdred/doctos_alu/Alum014.pdf. Consultado: Octubre 15 de 2007. 80AREVALO, E. Manual de campo para el monitoreo de mamíferos terrestres en áreas de conservación. Asociación conservacionista de Monteverde. 2001. 81SANCHEZ, F., SANCHEZ, P., CADENA, A. Op. Cit 82ROJAS, L. Comparación de la efectividad de diferentes cebos para la captura de pequeños mamíferos no voladores, en un fragmento de bosque andino en la montaña del Zoológico Jaime Duque. Trabajo de práctica ambulatoria, II ciclo 2007.
62
para la realización de la prueba de Microaglutinación (MAT), en donde se
obtuvieron los resultados finales de presencia o ausencia de Leptospira.
A continuación se describen cada una de las etapas que comprendió la
metodología:
3.5.1 Preparación de transectos
Para el diseño del transecto, se deben tener en cuenta tres aspectos
importantes83:
1. Largo del transecto.
2. Señalización del transecto.
3. Consideraciones del hábitat.
Para establecer los transectos es necesario determinar el área total del estudio,
esto se calculó formando un paralelograma a partir del plano de la zona a estudiar
teniendo en cuenta las siguientes dimensiones:
Donde: B = Base mayor (490 mts)
b = Base menor (280 mts)
h = Altura (280 mts)
83 TRANSECTOS LINEALES para el monitoreo de poblaciones de vertebrados terrestres. Disponible en: www.redmeso.net/bdred/doctos_alu/Alum014.pdf. Consultado: Octubre 15 de 2007.
63
Reemplazando,
Figura 11. Plano Montaña ZJD. Fuente: Los autores, modificado de:
INSTITUTO GEOGRÁFICO AGUSTIN CODAZZI
HOJA N° 228-I-A-2
64
El área fue dividida en 9 transectos de diferentes longitudes, así: los transectos 1 y
9 median 100 mts, los transectos 2 y 8 median 240 mts, y los transectos restantes
(3, 4, 5, 6 y 7) median 280 mts.
Cada transecto fue dividido en dos segmentos para obtener una mayor cobertura
con las trampas.
Para abrir los transectos del 1 al 3, fue necesario el uso de herramientas como
machetes, debido a la alta densidad de la vegetación en esta parte de la montaña;
para los otros transectos no fue necesaria la apertura de caminos ya que la
vegetación permitía mejor acceso para la ubicación de las trampas.
Cada transecto fue delimitado con una cuerda de color rojo y señalizado cada 49
mts para establecer la ubicación de cada trampa, teniendo en cuenta la longitud
del transecto y el número de trampas.
3.5.2 Tipos de trampas
Se utilizaron trampas de cajón, las cuales son cajas de forma rectangular
construidas en madera o de metal. Dentro de este tipo de trampas se emplearon
los modelos: Sherman y Tomahawk, descritas a continuación.
Sherman: De aluminio galvanizado, poseen un sistema de gatillo que permite su
cierre, el cual se activa en el momento en el que el animal entra en la trampa
atraído por un cebo. El tamaño de las trampas varía desde 5.0 cm. x 5.0 cm. x 10
cm., hasta 10 cm. x 10 cm. x 20 cm. y aun más. Se utilizan para capturar
pequeños mamíferos terrestres y arborícolas tales como cricetidos, múridos y
marsupiales (ratones, roedores) con una masa corporal de hasta 150 grs.
65
Figura 12. Trampa Sherman
Tomahawk: Son cajones alargados conformados por estructuras de alambre
galvanizado que dejan una malla de ojo variable. Su tamaño es diverso. Este tipo
de trampas están bañadas en una solución de camuflaje y equipadas con un asa
confiable para su transporte. Los sistemas de disparo o cierre de las puertas
también varían según el modelo y el fabricante. (En todos los casos el sistema de
cierre es por acción de los gatillos y cebos).
Figura 13. Trampa Tomahawk
Se pueden hacer modelos con varillas de hierro de diferentes calibres y malla
eslabonada. Con estos sistemas se capturan mapaches, armadillos, ñeques,
borugas, cusumbos y zorros,84 y en general individuos con una masa corporal que
va desde 150 grs. hasta 5 Kg85
84MINISTERIO DEL MEDIO AMBIENTE. Guía para la evaluación de poblaciones de fauna silvestre. Bogotá. 2000. 85SANCHEZ, F., SANCHEZ, P., CADENA, A. Op. Cit
66
3.5.3 Preparación de cebos El éxito en los trabajos de trampeo con el fin de capturar animales depende en
buen grado del uso y selección de los señuelos y cebos que ejerzan una atracción
efectiva. Son numerosos los usos de alimento de origen autóctono, de preparados
comerciales, de señuelos artificiales y de esencias que se elaboran con este fin.86
En un estudio realizado en la montaña del Zoológico Jaime Duque, se encontró
que la carne y el banano, eran atrayentes altamente efectivos para la captura de
individuos de la especie Didelphis albiventris en trampas tipo Tomahawk, y el
concentrado y el pan, resultaron ser más efectivos para la captura de roedores en
las trampas tipo Sherman.87
3.5.4 Ubicación de trampas
Las trampas fueron marcadas para su identificación, cebadas y posteriormente
ubicadas en terrenos firmes y seguros, a ras del suelo y en lugares sombríos con
alta vegetación, en senderos de animales encontrados a lo largo de cada
transecto teniendo en cuenta la cercanía a las señalizaciones establecidas. Estas
fueron alternadas entre Sherman y Tomahawk, y camufladas con vegetación y
cobertores de tela de color verde para mayor efectividad
86DAY, G., SCHEMNITZ, S., TABER, R. Captura y marcación de animales silvestres. En: Manual de técnicas de gestión de vida silvestre. WWF. Canadá, 1980. 87ROJAS, L. Op.Cit.
67
Figura 14. Camuflaje de las trampas
Figura 15. Senderos y madrigueras
La puesta de las trampas se realizó en las horas de la tarde, y fueron revisadas y
retiradas en las horas de la mañana del día siguiente, para reducir el tiempo de
estrés por captura.
Se elaboró un formato para registrar los siguientes datos: Fecha y hora de puesta,
fecha y hora de retirada, número de transecto, cebo utilizado, número de trampa,
estado del clima, tipo de estrato vegetativo, efectividad de la captura, individuo
capturado y observaciones. (Anexo C)
68
3.5.5 Inmovilización física y química
Una vez capturados en las trampas, los animales fueron restringidos físicamente
usando lonas de diferentes tamaños según la especie, y manejados con guantes
de carnaza como medida de bioseguridad, para la posterior administración de los
agentes anestésicos por vía intramuscular.
Figura 16. Inmovilización física
Se manejó un protocolo anestésico con Ketamina (Ketamina 50®, Holliday Lab) y
Xilacina (Rompun®, Bayer Lab) según la especie descritos en el Anexo .
Después de la aplicación del anestésico, se ubicó al animal en un lugar protegido,
y se cubrieron los ojos con una manta oscura para evitar reacciones, debido a la
fotofobia causada por los fármacos. Se realizó posicionamiento del animal, en
decúbito lateral, para facilitar la evacuación en casos de emesis. Una vez
posicionado el animal, se procede a la realización del examen clínico, obtención
de muestras, y marcaje.
69
Figura 17. Posicionamiento del paciente.
3.5.6 Examen clínico
En el examen clínico general se recopiló y registró toda la información mediante el
uso de un protocolo en el cual se almacena todos los hallazgos encontrados al
examen para conocer su estado de salud.
En la valoración del paciente se tuvo en cuenta la condición general, actitud,
presencia de heridas, entre otros, con la ayuda del formato de historia clínica.
Adicionalmente se realizó morfometría de algunos individuos para complementar
el examen clínico.
Figura 18. Morfometría de Zarigüeya.
70
3.5.7 Obtención de muestras
Los animales fueron posicionados en decúbito supino para la extracción de la
muestra sanguínea.
Figura 19. Posicionamiento de comadreja para obtención de muestras.
La sangre se obtuvo de la vena femoral, safena lateral, yugular, o intracardiaca
dependiendo de la especie, y fue recolectada en tubos sin EDTA para la obtención
del suero y tubos con EDTA para realizar exámenes complementarios opcionales,
como cuadro hemático, en algunos individuos. El tamaño de los tubos fue de 3 o 5
ml.
Figura 20. Obtención de la muestra sanguínea.
71
3.5.8 Técnicas de marcaje
La utilidad del marcaje se referencia en la dinámica poblacional, patrón de
movimientos, estimaciones de territorio, tamaño y densidad poblacional, y estudios
de comportamiento.
El tipo de marcaje empleado debe tener las siguientes características: Poco dolor
y estrés, sin efectos negativos en la supervivencia y el comportamiento, marcas
resistentes y durables, fácilmente reconocibles, fáciles de adquirir (fabricar) o
aplicar, y de bajo costo.88
Los marcadores están divididos en tres grandes categorías: Permanentes,
semipermanentes y temporales. Marcas y tatuajes son ejemplos de marcadores
permanentes. Etiquetas o aretes en las orejas son considerados como
semipermanente aunque pueden mantenerse en el animal por toda su vida. Cintas
y tinturas para el pelo son consideradas marcas temporales.89
Durante el estudio se utilizaron microchips subcutáneos marca AVID referencia
ISO. Los marcadores electrónicos permanentes (microchips y radiotransmisores)
son dispositivos que tienen un código numérico individual. Son pequeños y
resistentes, en general no afectan la integridad del animal.
Los chips tienen una vida media de 3 años aproximadamente y no se ven
alterados por factores climáticos. Para leer el microchip se cuenta con un lector
electrónico.90
88ARANDA, M. Huellas y otros rastros de los mamíferos grandes y medianos de México. Instituto de Ecología, A.C. Xalapa, Veracruz, México, 2000. 89DAY, G., SCHEMNITZ, S., TABER, R. Óp. Cit 90MINISTERIO DEL MEDIO AMBIENTE. Óp. Cit.
72
Figura 21. Aplicación del chip subcutáneo.
Como marcaje temporal visible se empleó violeta de genciana (Cloruro de
metilrosanilina), el cual es un colorante de anilina que se utiliza para teñir núcleos
celulares, además de tener propiedades bactericidas y bacteriostáticas y actividad
fungicida.
Figura 22. Marcaje con violeta de genciana.
Al terminar los procedimientos necesarios, los individuos fueron monitoreados
hasta su completa recuperación para su posterior liberación en el mismo sitio de
captura.
73
Figura 23. Liberación de zarigüeya en el sitio de captura.
3.5.9 Procesamiento de muestras
La sangre recolectada fue centrifugada a 3.500 rpm durante 15 minutos para la
obtención del suero sanguíneo. Los sueros fueron depositados en viales de1 ml y
se conservaron congelados a una temperatura de - 70°C.
3.5.10 Prueba de laboratorio
Se utilizó la técnica de Micro aglutinación (MAT) como prueba de referencia
recomendada por la OMS para la Leptospirosis. Los serovares investigados fueron
L. grippotyphosa, L. icterohaemorrhagiae, L. pomona, L. hardjo, L. canicola, y L.
bratislava.
La prueba se realizó en las instalaciones del laboratorio de Genética de la
Universidad de La Salle.
74
3.5.10.1 Preparación de los antígenos
Para la elaboración de la prueba es necesario preparar antígenos en diferentes
medios. De cada cepa se toma 1 ml de medio semisólido con crecimiento bueno y
se deposita en un medio líquido EMJH sin antibiótico. Éste se incuba a 30°C por 7
días.
Pasados los siete días se observan en un microscopio de campo oscuro para
evaluar su crecimiento. Si la cantidad de Leptospiras por campo 40x es mayor de
200 bacterias, con movimientos vigorosos y espiroquetas libres, se realiza un
repique en medio líquido EMJH sin antibiótico, y nuevamente se incuba durante 7
días hasta que alcancen el crecimiento adecuado.91
Esto se realiza con cada uno de los serovares para obtener el cultivo óptimo sin
residuos de agar, con espiroquetas móviles y sin aglutinación.
3.5.10.2 Técnica de Microaglutinación en placa (MAT)
La cantidad necesaria para la elaboración de la prueba es 100µl. de suero
sanguíneo. La prueba se realiza en una microplaca de fondo en U no estéril, el
suero se diluye en 2400 µl solución salina amortiguadora de fosfatos (SSAF) con
un pH de 7.2 y una osmolalidad de 0.01 mOsm a diluciones iniciales de 1:50 como
prueba de exploración para discriminar entre sueros negativos y positivos a la
presencia de anticuerpos.
91DELGADO, M. J. & VARGAS, O. M. Evaluación serológica de la inmunización de una comercial contra Leptospira spp. Mediante la técnica de micro aglutinación-lisis en hatos de la sabana de Bogotá. Universidad de La Salle. Tesis de grado. Medicina Veterinaria. 2006.
75
Figura 24. Dilución de los sueros en SSAF.
Figura 25. Cajas de pozuelos fondo en U.
Para conocer el título de anticuerpos se empieza a partir de la dilución 1:50. Al
volumen de suero diluído se agrega un volumen igual de antígeno, se agita con
cuidado y se incubó a una temperatura de 37° C durante 1 hora, y en otros casos
a 28° C por dos horas; por último cada dilución se examina al microscopio con
condensador de campo oscuro y objetivo 20x depositando 7 a 10 µl sobre un
portaobjeto limpio.
Posteriormente se realiza la lectura en donde, en la muestra positiva a la
aglutinación se observa la presencia de bacterias agrupadas, en una muestra
negativa las Leptospiras permanecen libres. La máxima dilución del suero es
aquella en la que se observa 50% de Leptospiras aglutinadas y el otro porcentaje
corresponde a bacterias libres en el medio, siempre en comparación con un
control negativo que contiene diluyente y cultivo de Leptospiras pero sin suero.92
92LEON, LARA L. Óp. Cit.
76
Figura 26. Dilución de los sueros con las cepas de Leptospira
3.5.10.3 Interpretación de la lectura
Negativo: Es igual al control y no presenta aglutinación. Positivo en 1:50: Presenta aglutinación a menos del 50% del campo. Positivo para titular: Presenta aglutinación en más del 50% del
campo.93
3.5.10.4 Titulación de los sueros
La titulación se realizó a los sueros que presentaron aglutinación en más del 50%
del campo en dilución 1:50 con alguno de los seis antígenos.
La titulación se realizó de la siguiente manera:
Se hicieron diluciones seriadas del suero a partir de la solución madre
(Dilución 1:50) en una caja de microtécnica de 96 pozuelos y en los seis
93DELGADO, M. J. & VARGAS, O. M. Óp. Cit
77
primeros pozuelos para cada uno de los sueros positivos a titular para cada
serovar.
Figura 27. Ilustración de diluciones seriadas
Posteriormente, se tomaron 50 µl de la solución madre y se depositaron en el
pozuelo #1 con una micropipeta graduada, y se homogenizó para obtener
una dilución del suero 1:100
Luego se tomaron 50 µl de la dilución 1:100 y se depositaron en el pozuelo
#2 para obtener una dilución 1:200, así sucesivamente hasta el pozuelo #6
obteniendo una dilución final de 1:3.200
Figura 28. Ilustración de las diluciones consecutivas para titular.
A continuación se agregó a los 6 pozuelos 50 µl del antígeno a titular.
78
Por cada antígeno a titular se hizo un control negativo en el que se
agregaron 50µl de SSAF y 50 µl del antígeno respectivo. Esto se realizo para
cada antígeno a titular.
Después se taparon las cajas de microtécnica para llevarlas a incubación
durante 1 hora 37° C por una hora.
Una vez incubadas se inició la lectura en el microscopio de campo oscuro. El
titulo se da en la dilución más alta donde presentó aglutinación de al menos
el 50%.
3.6 ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Para obtener los datos estadísticos se aplicó un modelo exploratorio descriptivo el
cual comprende la observación y registro de la enfermedad, así como de sus
posibles factores causales.94
Se tuvieron en cuenta variables como el número de muestras obtenidas; la
especie, ya que los diferentes serotipos de la Leptospira se presentan según el
huésped; el estado fisiológico del animal, como indicativo de la salud del
individuo; y el tipo de cebo, que puede resultar más atrayente para determinadas
especies.
Además se calculó el esfuerzo de captura, el éxito de captura y el índice de
recaptura.
94THRUSFIELD, M. Epidemiología Veterinaria. Ed. Acribia, Zaragoza-España. 1990
79
4 RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Durante el estudio se abarcó un área de 107.800 mts2 en donde las trampas se
ubicaron semanalmente durante 8 meses. De la especie Dasyprocta fuliginosa se
obtuvo una muestra gracias a la captura de un individuo que habitaba en la
montaña, el cual se encontró huyendo de los perros que habitan las fincas
vecinas, y fue capturado con una nasa. Además por medio de una trampa de
cajón en madera se realizó la captura de un individuo de la especie Mustela
frenata. En la primera fase de pre-muestreo se capturaron con las trampas
humanitarias descritas en la metodología, 4 individuos de la especie Didelphis
albiventris, 1 de la especie Akodon bogotensis. Adicionalmente se encontraron
madrigueras de roedores de la especie Rattus rattus, en donde se realizó captura
directa y muestreo de 4 individuos.
En la segunda fase, se capturaron 3 individuos de la especie Felis catus, 1 de la
especie Cerdocyon thous, el cual era un animal fugado de la exhibición del
zoológico 20 días antes de la captura. De la especie Didelphis albiventris se
capturaron 6 individuos y se realizó captura directa de 2 individuos de la especie
Rattus rattus.
Durante la segunda fase del estudio se recapturaron 7 individuos de la especie
Didelphis albiventris; 3 de la fase de pre-muestreo y 4 de la segunda fase.
80
Lo anterior indica que en total fueron capturados 23 animales de siete especies
diferentes dentro de las que se encuentran, félidos, cánidos, roedores y
marsupiales.
Tabla 4. Especies capturadas Nombre científico Nombre común # individuos
capturados Dasyprocta fuliginosa Ñeque 1 Mustela frenata Comadreja 1
Didelphis albiventris Zarigüeya 10
Akodon bogotensis Ratón campestre de Bogotá 1 Rattus rattus Rata domestica 6 Cerdocyon thous Zorro cangrejero 1 Felis catus Gato domestico 3 TOTAL DE INDIVIDUOS 23
4.1 EFECTIVIDAD DE LAS TRAMPAS
Debido a la naturaleza de conservación e investigación de este estudio, y a que la
mayoría de los pequeños mamíferos no voladores sólo pueden ser censados
mediante trampeo (Voss 1988), se emplearon trampas humanitarias y no otros
métodos utilizados como envenenamiento, captura en mallas y cacería con
escopeta en la captura de otros vertebrados.
Dentro de la metodología planteada se tuvo en cuenta la técnica del trampeo con
atrayentes alimenticios o cebos, la cual estaba reportada como efectiva en la
captura de mamíferos. Los resultados nos indican que la captura de mamíferos en
la zona andina puede llegar a ser muy dispendiosa. El trampeo de pequeños
mamíferos no voladores en zonas de montaña con trampas tipo Sherman resulta
menos dispendioso debido a la fácil manipulación por su tamaño, sin embargo con
las trampas tipo Tomahawk se presentaron dificultades para el transporte de
estas, por su tamaño y por la complejidad del terreno.
81
Teniendo en cuenta los datos obtenidos se calcularon los siguientes índices,
según el método propuesto por Medellin (1993).95
4.1.1 Esfuerzo de captura (EC)
Donde: N°TmC = Número de trampas colocadas.
NM = Noches de muestreo
Reemplazando,
Primera fase (Pre-muestreo)
Segunda fase
95NARANJO, E., RAMÍREZ, N., Diversidad de mamíferos en cafetales y selva mediana de las cañadas de la selva lacandona, Chiapas, México. En: Acta Zoológica Mexicana 20(1): 63-81 (2004).
82
4.1.2 Éxito de captura total (ECT)
Donde: N°TCp = Número total de capturas.
NM = Noches de muestreo.
N°TmC = Número de trampas colocadas.
Reemplazando,
Primera fase (Pre-muestreo)
*Se excluyeron los individuos muestreados por captura directa
Segunda fase
El éxito de captura pudo verse afectado debido a las diferentes variables
consideradas en este estudio como la modificación del hábitat, la cercanía a zonas
83
urbanas, la estación climática, entre otras; y a algunas limitaciones tales como el
reducido número de trampas en relación con el área abarcada.
El resultado del éxito de captura puede ser atribuido a factores que influencian la
vida silvestre en la montaña. El reducido número de capturas en el bosque alto
andino puede ser producto de la intensa perturbación hecha en esta área, además
de la presencia de especies dominantes en dicho territorio.
Posiblemente este efecto se deba a preferencias en el hábitat por parte de D.
albiventris, pues la mayor parte de los registros directos que se lograron de esta
especie estaban cerca de las fuentes de comida del zoológico como el área de
lombricultura y compostaje y la exhibición de venados y pecarís; además, el tipo
de vegetación, cumple con los requerimientos biológicos de dicha especie.
Otro aspecto importante que afectó el índice de capturas se debe a la baja
efectividad que mostraron las trampas tipo Sherman, ya que presentaron
inconvenientes al momento de la calibración, lo que aumentaba o disminuía su
sensibilidad, impidiendo el éxito de la captura. Esto se corroboró al encontrar
algunas trampas cerradas con el cebo completo y sin haberse efectuado una
captura, principalmente en días de lluvia, por lo que se asumió que ésta provocó
su desactivación. Y en otras oportunidades, se encontró la trampa con materia
fecal de roedor en su interior, con el cebo ausente o parcialmente consumido.
Lo anterior se ve reflejado en los índices calculados, teniendo un resultado del
éxito de captura total (ECT) en la primera fase del 1.7%, y un ECT en la segunda
fase del 0.74%. Son valores muy bajos teniendo en cuenta que el esfuerzo de
captura (EC) en la primera fase fue de 288 trampas/noche y en la segunda fase
fue de 1350 trampas/noche, pues con 138 días de trampeo considerando ambas
fases, solo se obtuvieron muestras de 23 individuos, de 7 especies diferentes.
84
4.1.3 Éxito de captura por especie (ECSp)
Donde: N°TCpSp = Número total de capturas por especie.
NM = Noches de muestreo.
N°TmC = Número de trampas colocadas.
Reemplazando,
Primera fase (Pre-muestreo) Didelphis albiventris
*Solo se incluyen trampas Tomahawk por ser las empleadas para individuos de mayor masa
corporal.
Akodon bogotensis
*Solo se incluyen trampas Sherman por ser las empleadas para individuos de menor masa
corporal.
85
Segunda fase Didelphis albiventris
*Solo se incluyen trampas Tomahawk por ser las empleadas para individuos de mayor masa
corporal.
Según Sánchez, 199996 Didelphis marsupialis tiene poca prevención para entrar
en trampas y se ceba fácilmente, y aparentemente D. albiventris muestra un
comportamiento similar. Esto explicaría por qué se capturó en mayor proporción
individuos de D. albiventris con trampas Tomahawk, y no se capturó un mayor
número de otras especies.
Por lo anterior, es previsible que las siete especies registradas no sean las únicas
representantes de este grupo para este tipo de ecosistema.
Felis catus
*Solo se incluyen trampas Tomahawk por ser las empleadas para individuos de mayor masa
corporal.
96SÁNCHEZ, F. Abundancia, diversidad y uso de hábitat de grandes mamíferos en bosque andino y reforestado en Manizales (Caldas, Colombia). Trabajo de grado, Departamento de Biología, Universidad Nacional de Colombia, Bogotá. 1999
86
Cerdocyon thous
*Solo se incluyen trampas Tomahawk por ser las empleadas para individuos de mayor masa
corporal.
El mayor número de capturas se obtuvo de la especie Didelphis albiventris,
posiblemente por lo planteado previamente de la facilidad de atraer esta especie
por su escasa prevención para entrar en este tipo de trampas. De la especie
Rattus rattus se capturaron 6 individuos, los cuales fueron sacrificados debido a
que esta especie es considerada como una plaga la cual puede ser vector de
enfermedades para los animales del zoológico. El sacrifico de estos roedores se
realizó por dislocación cervical.
La especie Felis catus, se cree no es una especie propia de esta zona pero por
ser un animal doméstico y por la cercanía de esta montaña a zona urbana, se
pueden encontrar fácilmente individuos de esta especie, pues allí encuentran una
alta disponibilidad de alimento por la variedad de roedores y aves que habitan
dicha montaña y por el acceso a los alimentos del zoológico.
De las demás especies capturadas, Mustela frenata, Dasyprocta fuliginosa,
Cerdocyon thous, y Akodon bogotensis solo se obtuvo la captura de un individuo,
probablemente por la dominancia territorial de la especie Didelphis albiventris, y su
rango de distribución.
87
4.1.4 Índice de recaptura (IR)
Donde: TC = Total de capturas
TIR = Total de Individuos Recapturados
Reemplazando,
En los trabajos realizados en Sudamérica con mamíferos terrestres pequeños en
bosques tropicales húmedos se han reportado mayores índices de recapturas de
didélfidos que de roedores.97 Esto puede estar relacionado con lo mencionado
anteriormente con respecto a la fácil captura y atracción de esta especie hacia las
trampas, además, teniendo en cuenta el home range (ámbito de hogar) de esta
especie, todas las recapturas se realizaron en los transectos 1, 2, 3 y 4, con una
cobertura de 200 mts x 140 mts.
Aunque en la segunda fase el ECT fue más bajo que en la primera, se obtuvo un
mayor índice de recaptura (IR), ya que la mayoría se realizaron durante la
segunda fase, teniendo un resultado del 50% en las especies capturadas por
medio de trampas. Para el cálculo del IR no se tuvieron en cuenta las capturas
realizadas por método directo, como es el caso de los roedores.
97MALCOLM, J. Estimation of mammalian densities in continuous forest north of Manaus. En: Four Neotropical Rainforest Editorial A. H. Gentry. Yale University, New Haven, Connecticut. 1990. Pp. 339-357
88
Es importante destacar que todas las recapturas obtenidas fueron únicamente de
la especie Didelphis albiventris. Lo anterior sugiere que dicha especie se adaptó
adecuadamente a todos los cambios provocados en esta zona, como la apertura
de los transectos, en los que ocasionalmente se atravesaban senderos de
animales o se encontraba cerca a madrigueras. Posiblemente esto si haya tenido
un impacto importante en el éxito de captura de otras especies diferente a la
Didelphis albiventris, sin embargo no se tenía la certeza de la existencia estas. Si
bien se cruzaron algunos senderos, esto no afectó la captura y recaptura de la
especie mencionada anteriormente, ya que algunos individuos se recapturaron
hasta 5 veces y en diferentes transectos.
La mayoría de las recapturas se obtuvieron en época de lluvia, lo cual puede estar
asociado con la disponibilidad de alimento y de agua para esta especie.
4.2 EFECTIVIDAD DE LOS CEBOS
Efectividad se define como la capacidad de lograr el efecto que se desea o se
espera.
Basados en este concepto, el efecto deseado era capturar pequeños mamíferos
no voladores mediante el uso de cebos como atrayentes.
Por esta razón, se excluyeron del estudio aquellos casos en los que no se
efectuaron capturas, así el cebo se encontrara mordido, o no se encontrara.
89
Figura 29. Cebos mordidos por roedores
Fuente: Los autores
Para el cálculo de la efectividad de los cebos, se tuvieron en cuenta el total de
capturas y recapturas, ya que en este caso, lo que se busca establecer es la
atracción de cada cebo utilizado, independientemente del número de capturas por
individuo
Donde: TC = Total de Capturas
x = Cebo
TCE = Total de cebos efectivos
Efectividad por cebo:
•
•
•
90
•
•
•
•
•
•
•
•
•
91
Figura 30. Efectividad de los cebos
Durante el estudio, se destacó la efectividad de la carne como el principal
atrayente para individuos de diferentes especies, especialmente para Didelphis
albiventris y ocasionalmente para Felis catus.
Asimismo, otros cebos como la piña y el plátano, permitieron la captura de otros
individuos de la especie Didelphis albiventris aunque con más bajos resultados
que la carne.
Sin embargo, se dificulta establecer con precisión la efectividad individual de los
alimentos, ya que fueron empleados como cebos compuestos. Tal es el caso de la
carne-naranja, carne-pan, piña-banano, mazorca-mango, entre otros.
Por otro lado, algunos cebos demostraron ser mecanismos atrayentes para
algunas especies imposibles de identificar con precisión, ya que estos se
encontraron parcialmente mordidos, fuera de las trampas o en determinados
92
casos ausentes, como lo muestra la Figura 29. Se presume que algunas veces,
estos hallazgos fueron causados por la presencia de roedores.
4.2.1 Cebos no efectivos
De los 32 cebos empleados durante el estudio, 12 fueron efectivos, y con los 20
restantes, no se obtuvo ningún resultado, ya que éstos fueron encontrados en el
mismo estado en el que fueron dejados. Estos fueron: Yuca, zanahoria, pimentón,
apio, galleta de carne para perro (Grills), pata de gallina, avena, miel, maíz,
tomate, huevo cocido, mantequilla de maní, menudo de res, queso, guayaba,
mamoncillo, rodentina, uvas, maní y arracacha.
4.3 HALLAZGOS AL EXAMEN CLÍNICO.
Los hallazgos más relevantes durante el examen clínico de los individuos
capturados fueron:
4.3.1 PIEL
4.3.1.1 Heridas en la nariz
La mayoría de individuos de la especie Didelphis albiventris capturados en trampa
tipo Tomahawk por primera vez presentaron heridas leves a nivel de trufa y nariz;
lo que se asocia a intentos de escape.
93
Figura 31. Herida en nariz de Zarigüeya
4.3.1.2 Otras lesiones
En el momento de la captura algunos individuos de la especie Didelphis albiventris
fueron encontrados con lesiones de origen desconocido, en áreas como la cavidad
oral, cola y región pélvica. Estas lesiones fueron tratadas al momento de la
inmovilización, realizando limpieza y desinfección con clorhexidina, y según el
estado de la lesión se administró antibiótico tópico, o sistémico de larga acción.
Figura 32. Lesión en piel de Didelphis albiventris
4.3.1.3 Ectoparásitos
En las especies Rattus rattus y Didelphis albiventris se encontraron parásitos
externos como pulgas y garrapatas no clasificados. En el caso de las zarigüeyas
94
se administró Fipronil (Frontline®) en la región dorsal según las indicaciones del
producto.
4.3.2 Otros hallazgos.
4.3.2.1 Gestación
Al momento de la captura se obtuvieron hallazgos importantes. Dentro de estos,
se considera que el más trascendental fue el de la gestación en dos hembras de la
especie Didelphis albiventris, capturadas en la misma temporada, ambas en el
mes de Febrero de 2008. La primera hembra preñada capturada se encontró en
una etapa temprana de su gestación, en donde las crías se encontraban dentro
del marsupio pero aún en estado embrionario. Es importante tener en cuenta que
estos animales tienen una gestación muy corta, de una a dos semanas, y pasado
este tiempo los fetos nacen en estado embrionario y se desplazan por sus propios
medios hacia la bolsa marsupial de la madre, en donde permanecen por varias
semanas. Cada hembra puede llegar a tener de 2 a 5 crías en su marsupio.
Este individuo mencionado previamente se recapturó luego de una semana y
media, y se corroboró su estado de gestación nuevamente, lo cual nos demostró
que la captura no le provocó ningún daño a ella ni a sus crías.
La otra hembra capturada se encontraba en un estado más avanzado de su
gestación, pues se observó perfectamente el desarrollo de los fetos, los cuales ya
presentaban pelo en algunas zonas de su cuerpo, tenían sus extremidades bien
definidas, pero sus ojos aun se encontraban cerrados.
95
Lo anterior nos puede revelar que la especie Didelphis albiventris se encontraba
en época de apareamiento, durante este mes, o que ya había pasado este periodo
y estaban en época de nacimientos.
Debido al manejo clínico de esta especie, este hallazgo sólo se evidenció luego de
la inmovilización química. En estos casos, se obtuvo sangre con el protocolo
establecido, disminuyendo la manipulación y se aumentó la frecuencia del
monitoreo hasta su total recuperación.
Figura 33. Gestación temprana y avanzada de Zarigüeyas
4.3.2.2 Otitis
Una zarigüeya recapturada presentó un caso de otitis grave en el momento de la
captura. Esta lesión fue tratada con Acido salicílico y ácido láctico (Epiothic
spherulites®) y oxitetraciclna y polimixina B tópico (Terramicina® ungüento
oftálmico) luego de realizarse una limpieza con clorhexidina (Baxidin®)
96
Figura 34. Otitis en individuo de la especie Didelphis albiventris
4.4 RESULTADOS DE LABORATORIO
Se llevaron a cabo dos pruebas de laboratorio, una en el mes de febrero y otra en
el mes de marzo.
La implementación de la técnica de aglutinación microscópica (MAT) de referencia
internacional, se hace para la detección de anticuerpos totales, especialmente de
IgG, además de determinar anticuerpos IgM.98
La epidemiología de la Leptospirosis dentro de un ecosistema es compleja, ya que
las Leptospiras de varios serogrupos pueden ser mantenidas por varias especies
animales, incluyendo especies domésticas y silvestres que comparten el mismo
hábitat. Las diferentes cepas patógenas de Leptospira afectan potencialmente a
un gran número de especies animales, que actúan como hospedador de
mantenimiento (huésped adaptado) o accidentales (huésped no adaptado), en
función de la adaptación o preferencia del serovar involucrado.99
98INSTITUTO COSTARRICENSE DE INVESTIGACION Y ENSEÑANZA EN NUTRICION Y SALUD (INCIENSA). Centro Nacional de referencia de Leptospirosis. Análisis de laboratorio. Disponible en: www.inciensa.sa.cr 99ALFARO, C., ARANGUREN, Y., CLAVIJO, A. Óp. Cit.
97
Es importante reconocer que la Leptospirosis comprende tres fases100:
A. FASE LEPTOSPIRÉMICA: llamada septicémica, tiene una duración de 7 a
10 días. Se caracteriza por la presencia de Leptospira spp. en sangre, las
cuales pueden ser aisladas por cultivo de las muestras o por inoculación
directa en animales de laboratorio a partir de sangre, orina, macerados de
hígado, riñón, bazo, cerebro y pulmón.
B. FASE INMUNITARIA: se caracteriza por la presencia de los anticuerpos
específicos en sangre los cuales pueden ser detectados mediante pruebas
serológicas, a partir de la segunda semana del inicio de la enfermedad.
C. FASE LEPTOSPIRÚRICA: se caracteriza por la excreción de Leptospiras
por la orina, siendo posible su aislamiento en esta muestra, a partir de los
15 días del inicio de los síntomas. En los bovinos su excreción puede
persistir por años.
Al emplear la técnica de MAT un título mayor o igual a 1:400 para una o mas
serovariedades se considera positivo por diagnóstico laboratorial; un título de
1:100 en una sola muestra se considera sospechoso.101
100Ibíd. 101INSTITUTO COSTARRICENSE DE INVESTIGACION Y ENSEÑANZA EN NUTRICION Y SALUD. Óp. Cit
98
Tabla 5. Interpretación de títulos serológicos. TITULOS SEROLOGICOS INTERPRETACIÓN
1. Negativos Caso negativo. 2. Bajos 1:100 – 1:200 Sospechoso. 3. Moderado 1:200 – 1:400 Inicio de infección, resto de
anticuerpos postinfección. Útil realizar 2do muestreo serológico.
4. Moderado alto 1:400 – 1:800 Infección probable. 5. Altos mayor a 1:800 Infección activa.
Fuente: Los autores, modificado de: HERRERA B.
4.5 Prevalencia serológica
De los 23 individuos capturados, se encontraron evidencias de la presencia de
Leptospira en 16 de ellos. En términos de prevalencia puntual, esto equivale a
69.56% (16/23).
Siendo 27 la sumatoria de titulaciones para cada serovar, la prevalencia para
cada cepa fue, en orden descendente, 44.44 % para L. icterohaemorragiae,
18.51% para L. canicola, 14.81% para L. pomona, 11.11% para L. bratislava,
7.4% para L. hardjo y 3.7% para L. grippotyphosa.
La alta prevalencia observada para el serovar L. icterohaemorragiae
posiblemente está relacionada con la presentación de éste en todas las
especies capturadas durante la investigación. Adicionalmente, algunos de los
títulos se mantuvieron positivos hasta por tres muestras, en individuos
remuestreados, aumentando la prevalencia de este serovar en la población.
Esto coincide con los reportes publicados por Wallach, 1983, que revela la
presencia de este serovar en todas las especies encontradas durante el
estudio.
99
Figura 35. Prevalencia serológica.
Para el serovar L. hardjo 2 individuos fueron positivos, para L. pomona 4, para
L. icterohaemorragiae 12, para L. bratislava 3, para L. canicola 5 y para L.
grippotyphosa 1, encontrando una prevalencia serológica para el serovar L
icterohaemorragiae.
Figura 36. Número de animales por serovar.
100
4.6 RESULTADOS POR SEROVAR.
4.6.1 Leptospira hardjo.
Figura 37. Resultados para L. hardjo
4.6.2 Leptospira pomona
Figura 38. Resultados para L. pomona
101
4.6.3 Leptospira icterohaemorragiae
Figura 39. Resultados para L. icterohaemorragiae
4.6.4 Leptospira bratislava
Figura 40. Resultados para L. bratislava
102
4.6.5 Leptospira canicola
Figura 41. Resultados para L. canicola
4.6.6 Leptospira grippotyphosa
Figura 42. Resultados para L. grippotyphosa
Los resultados positivos a una dilución 1:100, pueden indicar cuatro posibles
interpretaciones:
• El individuo se encuentra en una fase temprana de la enfermedad, en
donde se está iniciando la producción de anticuerpos.
103
• El individuo se encuentra en una fase tardía de la enfermedad, en donde los
anticuerpos ya llegaron a su punto más alto y está disminuyendo la carga
bacteriana por lo que la respuesta inmune está disminuyendo.
• El individuo presenta una enfermedad crónica, en donde la respuesta de
anticuerpos es baja, ya que la mayor carga bacteriana persiste en los
riñones y/o aparato genital, que son sitios con baja respuesta inmune. Esto
es característico en un huésped de mantenimiento, que resulta una fuente
de alta diseminación.
• El individuo estuvo expuesto en algún momento de su vida a esta bacteria,
y presenta anticuerpos a ella, sin presentar la enfermedad.
Los resultados de la prueba de laboratorio fueron variables para todas las
especies.
4.7 RESULTADOS POR ESPECIE.
4.7.1 Mustela frenata (Comadreja)
La muestra sanguínea de la especie Mustela frenata se encontró contaminada y al
observar en el microscopio de campo oscuro únicamente se encontraron
bacterias.
4.7.2 Dasyprocta fuliginosa (Ñeque)
El individuo de la especie Dasyprocta fuliginosa solo fue positivo para el serovar L.
icterohaemorragiae y en la dilución 1:50. En reportes anteriores102 ya se había
encontrado la presencia de este serovar en roedores, lo que se ve confirmado con
102 WALLACH, J.D. Y BOEVER, W.J. Op. Cit
104
nuestros resultados. Sin embargo, es un título bajo que no genera un alto riesgo
para la población de la montaña.
4.7.3 Didelphis albiventris. (Zarigüeya)
De la especie Didelphis albiventris se capturaron 10 individuos de los cuales 7
resultaron positivos a los diferentes serovares estudiados, algunos de ellos,
presentaron positividad para anticuerpos de más de un serovar. Si bien Wallach,
1983, reporta la presencia de L. pomona, L,icterohaemorragiae, L. canicola y L
grippotyphosa, no hace referencia a la presentación de los otros dos serovares.
En algunos casos se realizó una sola muestra debido a que no hubo recapturas,
estos animales tuvieron los siguientes resultados:
o Un individuo de esta especie resultó ser positivo para el serovar L.
icterohaemorragiae en la dilución 1:200. Este título es considerado como bajo,
lo que indica que es un animal que posiblemente presenta la enfermedad, sin
embargo, para confirmar este resultado, sería necesario la evaluación de una
segunda muestra, ya que es imposible establecer un diagnóstico definitivo con
un solo suero y una titulación de este valor.
o En otro caso, se encontró positividad para L. pomona en la dilución 1:400, y
para L. canicola y L. bratislava en la dilución 1:50. Este individuo, presentó
positividad a tres serovares, confirmando así la posibilidad de un organismo
presente varias cepas simultáneamente y con títulos diferentes. Aunque los
valores para los dos últimos serovares son bajos, pueden indicar que en algún
momento el individuo estuvo expuesto a la enfermedad, en cuanto a los
elevados títulos para L. pomona son considerados como indicadores de una
probable infección. Los serovares L. pomona y L. canicola han sido reportados
105
anteriormente en marsupiales, sin embargo la presencia de L. bratislava en
este género, aun no ha sido reportada.
o Solo un individuo resultó positivo únicamente a L. hardjo con la titulación más
baja.
En otros casos en los que se efectuaron recapturas, fue posible tomar más de una
muestra que sirvieron para el control y seguimiento de la presencia de anticuerpos
de Leptospira, estos tuvieron diferentes comportamientos como se describe a
continuación:
o Un único individuo fue recapturado dos veces, por lo que se obtuvieron 3
muestras de suero sanguíneo, debido con intervalos de 20 a 30 días. En la
primera muestra de suero los resultados fueron de 1:50 para el serovar L.
icterohaemorragiae, y en la segunda muestra resultó ser positivo para los
serovares L. pomona y L. icterohaemorragiae, con aglutinación en la dilución
1:100 y 1:400 respectivamente. Al titular la tercera muestra, los resultados
fueron positivos a L. icterohaemorragiae en la dilución 1:400 y no presentó
positividad a ningún otro serovar. Cabe destacar que para el serovar L.
icterohaemorragiae los resultados fueron superiores en la segunda y tercera
muestra de suero, lo que -conociendo el comportamiento de la respuesta
inmune- nos indica que al elevarse y mantenerse la producción de
anticuerpos, la enfermedad está evolucionando, y en la primera muestra la
aglutinación a una dilución 1:50 indicaba una fase inicial de la Leptospirosis, y
no una fase final.
106
Figura 43. Resultados serológicos de Zarigüeya #1
En la Figura 43 se puede observar la respuesta típica de los anticuerpos en
caso de infección con algún serovar, como se ve en el caso de L.
icterohaemorragiae.
o En otro caso se obtuvieron dos muestras de suero, para control y seguimiento
de este. En la primera fue positivo para el serovar L. icterohaemorragiae en la
dilución 1:200. La muestra control resultó ser negativa para todos los
serovares, lo que puede revelar la fase final de la enfermedad.
Figura 44. Resultados serológicos de Zarigüeya #. 7.
107
o Un animal resultó negativo para todos los serovares en la primera muestra,
al contrario, para la segunda muestra presentó positividad para los
serovares L. icterohaemorragiae y para L. canicola con una titulación de
1:50 en ambos casos. Estos resultados no son muy elevados y no indican
la presencia de la enfermedad en el organismo.
Figura 45. Resultados serológicos de Zarigüeya #8.
o De otra zarigüeya se obtuvieron dos muestras sanguíneas que revelaron
diferentes resultados. Para la primera muestra, tuvo positividad para L.
icterohaemorragiae y L. canicola. En la segunda fue positivo nuevamente para
L. icterohaemorragiae, por primera vez para L. grippotyphosa y L. bratislava.
Sin embargo, para todos los serovares la aglutinación se dio en la dilución
más baja, lo que puede sugerir una producción de anticuerpos permanente
pero estable que no demuestran enfermedad. Este individuo, fue el único
animal positivo a L. grippotyphosa. durante todo el estudio.
108
Figura 46. Resultados serológicos de Zarigüeya #14
o Otro animal fue muestreado dos veces, obteniendo seropositividad a L.
icterohaemorragiae en las dos muestras, para la primera en la dilución 1:50,
aumentando en la segunda a 1:400. Mientras que solo fue positivo para L.
pomona en la primera muestra en la dilución 1:50.
Figura 47. Resultados serológicos de Zarigüeya #15
4.7.4 Akodon bogotensis (Ratón campestre de Bogotá) De la especie Akodon bogotensis, el único animal capturado fue positivo para el
serovar L. icterohaemorragiae en la dilución más baja, 1:50. Este título no es
representativo y no es un indicio de la presencia de la enfermedad, sin embargo,
como se ha mencionado anteriormente, los animales portadores, en gran parte
109
roedores, no presentan títulos altos de la enfermedad, lo que podría indicar su
comportamiento como huésped de mantenimiento. Sin embargo, para afirmar este
concepto, sería necesario valerse de pruebas complementarias tales como el
cultivo de orina para confirmar la eliminación de la bacteria y por consiguiente su
diseminación al medio ambiente.
4.7.5 Rattus rattus (Rata doméstica) De los seis individuos capturados de la especie Rattus rattus, solo uno fue
negativo para todos los serovares. Este resultado no coincide con los hallazgos
esperados, ya que las ratas domésticas son consideradas como uno de los
principales reservorios para esta bacteria, adicionalmente, han sido reportados los
serovares L. icterohaemorragiae, L. grippotyphosa y L. canicola en esta especie.
o Otro individuo de esta especie fue positivo para L. icterohaemorragiae en la
dilución 1:50 y para L. canicola en la dilución 1:400. En los roedores se han
reportado los dos serovares mencionados, y posiblemente este animal este
actuando como hospedero de mantenimiento para el último serovar, y
presentar la enfermedad con prevalencia del primero. No obstante, para
confirmar el diagnóstico hay que tener en cuenta las mismas consideraciones
que con el individuo de la especie Akodon bogotensis.
o Un individuo presentó los siguientes resultados: positivo a L. pomona y L.
icterohaemorragiae con una titulación de 1:100 y 1:200, respectivamente. Lo
anterior, se interpreta como un titulo bajo correspondiente a un animal
sospechoso de portar la enfermedad. No obstante, hay que tener en cuenta
que el serovar L. pomona no ha sido previamente reportado en roedores, lo
que sugiere que se debe profundizar más en estudios relacionados con estas
cepas.
110
o Los resultados de otra muestra mostraron positividad para L. hardjo, L.
canicola y L. bratislava con unas diluciones de 1:50, 1:800 y 1:200,
respectivamente. Aunque el resultado para L. hardjo es bajo, y las titulaciones
obtenidas frente a la cepa de L. bratislava no son significativamente altas,
debe descartarse su posible papel como fuente de diseminación mediante las
pruebas complementarias anteriormente mencionadas. En cuanto al resultado
para L. canicola de este animal, fue el más elevado de todo el estudio, lo que
corresponde a una titulación moderada alta, revelando así un fuerte indicio de
infección. Adicionalmente estudios anteriores han reportado la presencia de
este serovar en roedores.
o Los dos últimos individuos pertenecientes a la especie Rattus rattus,
correspondientes a los sueros 21 y 22, fueron positivos a L.
icterohaemorragiae para el primero y L. canicola para el segundo, en las
diluciones 1:50 y 1:100, respectivamente.
4.7.6 Felis catus (Gato doméstico)
De la especie Felis catus únicamente el animal fue positivo para el serovar L.
icterohaemorragiae en la dilución 1:50.
Del total de animales capturados, 1 individuo de la especie Rattus rattus; 2 de la
especie Felis catus, el único de Cerdocyon thous, y 2 Didelphis albiventris no
presentaron positividad a ningún serovar evaluado en este estudio.
4.8 RELACIÓN MACHOS VS. HEMBRAS
Del total de animales seropositivos, resultó en mayor proporción la presencia
de Leptospira spp. en machos. Sin embargo, no existen reportes que confirmen
111
que esta bacteria tiene tropismo de género. No obstante, hay que tener en
cuenta que hubo una mayor proporción de capturas de machos (14) frente a
las hembras (9), lo que podría disminuir la precisión de este resultado.
Figura 48. Relación Machos vs. Hembras positivos.
4.9 RELACIÓN ADULTOS VS. JUVENILES POSITIVOS
Adicionalmente, el gráfico anterior demuestra una mayor seropositividad de
individuos adultos frente a juveniles. Sin embargo, de la misma forma que en el
análisis anterior, es necesario tener en cuenta que hubo una mayor captura de
animales adultos (16) frente a juveniles (7).
Figura 49. Relación Adultos Vs. Juveniles positivos
112
5 CONCLUSIONES
La metodología planteada, incluía la elaboración de transectos, algunos con el
uso de herramientas, en donde se perturbaba el hábitat, probablemente
ahuyentando las especies que allí habitan, esto pudo haber disminuido el éxito
de captura al iniciar el estudio ya que los transectos habían sido abiertos poco
tiempo antes de ubicar la trampas.
Antes de la ubicación de las trampas, estas deben ser calibradas
correctamente para reducir los factores de error. Las trampas tipo Sherman
presentaron problemas al momento de la activación o desactivación, debido a
la sensibilidad que fue muy variable por la inadecuada calibración, y no se
logró una cantidad importante de capturas con estas trampas.
Por el contrario, las trampas tipo Tomahawk resultaron ser altamente efectivas
para la captura de pequeños mamíferos no voladores, contribuyendo con la
mayoría de las capturas del estudio. Estas se realizaron en un gran porcentaje
con cebos compuestos, en donde el principal alimento era la carne, con un
30% de efectividad.
De los 32 cebos empleados durante el estudio, 12 fueron efectivos, y con los
20 restantes, no se obtuvo ningún resultado.
La Leptospirosis es un problema de salud pública en aumento a nivel mundial
que afecta tanto a la población humana como animal. En los últimos años se
113
han reportado un significativo número de brotes en países del trópico, que
están relacionados con los cambios climáticos e impacto ambiental.
Los resultados obtenidos durante el estudio permitieron establecer la presencia
de Leptospira spp. en la montaña del zoológico Jaime Duque. Aunque se
confirmó la presencia de los serovares L. icterohaemorragiae, L, pomona, L,
hardjo, L, canicola, L. bratislava y L. grippotyphosa en algunos individuos, no
todos los animales capturados resultaron seropositivos.
De los serovares evaluados el que se encontró en mayor proporción fue L.
icterohaemorragiae con una prevalencia de 44.44%, afectando un gran número
de los individuos capturados. En un estudio realizado en el Zoológico Jaime
Duque se encontró que los serovares con mayor prevalencia fueron L.
grippotyphosa y L. pomona difiriendo de los resultados obtenidos en este
estudio, ya que del serovar L. grippotyphosa solo resultó un animal positivo.
Sin embargo, en ambos estudios se encontró positividad en los cuatro
serovares en común (L. grippotyphosa, L. canicola, L. icterohaemorragiae y L.
pomona) lo que sugiere que, los animales que habitan en la montaña pueden
ser fuente de transmisión para la colección del zoológico, o viceversa,
probablemente a través de fuentes de agua o diversos fómites.
Además se concluye que varios serovares pueden estar presentes en un
individuo sin manifestar signos de enfermedad, y actuar posiblemente como
huésped de mantenimiento de los serovares positivos.
Debido a que las muestras fueron evaluadas por diferentes laboratorios, no se
puede establecer la comparación de los resultados individuales, ya que se
realizaron lecturas en diluciones diferentes.
114
La mayoría de los animales capturados pertenecían a la especie Didelphis
albiventris, y aunque se considera como la especie predominante en esta
zona, se conoce de la presencia de otras especies que allí habitan, tales como
zorros grises, roedores y guatines, siendo estos últimos una especie
introducida en esta área por el hombre.
Durante el período de estudio, el mayor índice de captura y recaptura fue en la
época de lluvia, probablemente asociado con la disponibilidad de alimento.
Esto mismo pudo estar relacionado con los hallazgos de gestación en dos de
los individuos, y con la captura de un animal infantil. Lo anterior puede indicar
que la época de apareamiento está altamente relacionada con la estación
climática.
Todos los hallazgos encontrados en el examen clínico fueron registrados en las
historias individuales. A excepción de la presentación de otitis, herida previa a
la captura y heridas causadas por intentos de escape, no se encontraron
patologías importantes que comprometieran la integridad y salud de los
animales.
Por último, se creó un banco de sueros almacenados en el Laboratorio de
genética de la Universidad de La Salle, que servirá para futuras investigaciones
en el campo de la salud animal.
115
6 RECOMENDACIONES
La Leptospirosis, por ser una enfermedad zoonótica, es importante el
conocimiento de esta y tomar las medidas de bioseguridad necesarias para
garantizar la prevención y el control de la enfermedad, tales como:
• El mantenimiento de condiciones higiénico-sanitarias para minimizar la
diseminación de la enfermedad. (Lavado de manos, cambio de ropa de
trabajo, no comer beber o fumar en las zonas de trabajo)
• Disponer de cuartos de aseo adecuados y un lugar de almacenamiento
adecuado de los equipos de protección, limpieza, mantenimiento y
reparación de estos.
• Evitar el uso de fuentes de agua comunales, y realizar pruebas de calidad de
agua periódicamente que puedandisminuir asi el riesgo de transmisión de la
bacteria por este medio.
• Mantenimiento de un buen sistema de desagües, teniendo en cuenta el
drenaje de los terrenos encharcados, la eliminación racional de residuos,
control y depuración de aguas
• Uso de equipos de protección personal (Guantes, botas e impermeables)
• Capacitar al personal del zoológico Jaime Duque acerca de las
enfermedades zoonóticas, informando el riesgo de estas.
116
• Implementar un programa preventivo y de monitoreo, que contribuya a evitar
el desarrollo de la enfermedad en todos las especies.
Para obtener mejores resultados en el uso de trampas es importante calibrar
correctamente las trampas a utilizar según la masa corporal de los individuos que
se desean capturar.
Si se desea abarcar un área de dimensiones superiores se recomienda el uso de
un mayor número de trampas.
En futuros estudios, podrían utilizarse cebos olfativos para comprobar su eficacia
frente a los cebos alimenticios.
Evaluar la posibilidad de realizar muestreos futuros que den a conocer el estado
de salud de los individuos de la montaña, entre ellos, urocultivo para determinar la
presencia de Leptospira en los diferentes mamíferos que allí habitan.
Vacunar a los animales del zoológico contra Leptospirosis y otras enfermedades.
Sin embargo, hay que tener en cuenta que la vacunación de los animales evita la
enfermedad, pero no necesariamente la infección. Los animales vacunados
pueden presentar una infección asintomática pero con leptospiruria. Para la
elección de la vacuna se deben tener en cuenta las Leptospiras que predominen
en la zona.
Realizar pruebas serológicas a los trabajadores del Zoológico Jaime Duque, con el
fin de controlar la presencia de la enfermedad.
117
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126
8 ANEXOS
8.1 ANEXO A. Dosis de los fármacos anestésicos por especie.
Especie Agente Dosis
(Mg/Kg.) Frecuencia Fuente
Ketamina 5 – 20
Zorro cangrejero
Xilacina 1-2
1 vez
FOWLER, M. E & CUBAS, Z. S.
Biology, Medicine, and Surgery
of South America Wild Animals.
Iowa State University Press. 1
ed. Estados Unidos. 2001.
Ketamina 15-25 Chucha, Fara o
Zarigüeya Xilacina 1
1 vez
FOWLLER, MURRAY E. Zoo
and wild animal medicine. W.B.
Saunders Company.
Filadelphia.1978
Ketamina 20 Ñeque
Xilacina -
1 vez
BEYNON, PETER H. &
COOPER, JOHN E. Manual de
animales exóticos. Harcourt
Brace. Madrid. 1999.
Ketamina 75-95 Ratón silvestre
Xilacina 5 1 vez
CARPENTER, JAMES W.
Formulario de Animales exóticos.
3ra edición. Buenos Aires. 2006.
Ketamina 75-95 Rata doméstica
Xilacina 5 1 vez
CARPENTER, JAMES W.
Formulario de Animales exóticos.
3ra edición. Buenos Aires. 2006.
Ketamina 10-25 Comadreja
Xilacina 1-2
1 vez CARPENTER, JAMES W.
Formulario de Animales exóticos.
3ra edición. Buenos Aires. 2006.
Ketamina 4-15
Gato
Xilacina 0.3-1.5
1 vez
BIRCHARD, S Y SHERDING, R.
Manual clínico de procedimientos
en pequeñas especies. 2°
edición. Volumen 1. Madrid.
2000.
Antídoto o agente reversivo de la Xilacine: Yohimbina, solución de 2 mg/ml (Yobine®).
127
8.2 ANEXO B. HISTORIAS CLÍNICAS.
HISTORIA CLINICA N° 1 MAMIFEROS CAPTURADOS
Fecha de captura: 8 /08/ 07
Nombre común: Ñeque o Guatín Nombre científico: Dasyprocta fuliginosa Sexo: M Edad: Adulto Peso: 2.550 gr Identificación: Condición general: Buena, con algunas heridas en los miembros posteriores Observaciones a la captura: EXAMEN CLÍNICO Ojos: Ok Mucosas: Ok Piel y pelaje: Ok Extremidades: Ok FC: FR: T.LL.C: 2 seg Temperatura: MORFOMETRIA Longitud total: Cuerpo: Cola: ANESTESIA Fármaco: Ketamina Fármaco: Xilacine Concentración: 50 mg/ml Concentración: 20 mg/ml Dosis básica: 20 mg/Kg Dosis básica: 1 mg/Kg Dosis total: Dosis total: Volumen Total: 1 ml Volumen Total: 0.125 ml Vía de administración: I.M Hora de administración: 11:13 m Tiempo de inducción: 5 min. MONITOREO
Hora FC FR Hora FC FR Hora FC FR Tiempo de la inmovilización: Procedimientos realizados: Obtención de muestra sanguínea para serología. OTROS FARMACOS Fármaco: Concentración: Dosis básica: Dosis total: Volumen Total: Vía de administración: Número de suero: T1 Hora de liberación: Observaciones:
128
8.3 ANEXO B. FORMATO DE CAPTURAS CON TRAMPAS.
CAPTURA# 1
Fecha de puesta: 09/08/07 Hora: TARDE Fecha de retirada: 10/08/07 Hora MAÑANA
Transecto N°: PM* Trampa N°: -- Cebo: Carne Estrato vegetativo: Arbustivo Clima: Seco
Nombre común: Comadreja Nombre científico: Mustela frenata Identificación --- Observaciones:
CAPTURA# 2
Fecha de puesta: 16/08/07 Hora: TARDE Fecha de retirada: 17/08/07 Hora MAÑANA
Transecto N°: PM* Trampa N°: T3 Cebo: Carne, Banano, Mango Estrato vegetativo: Rasante Clima: Seco
Nombre común: Zarigüeya Nombre científico: Didelphis albiventris Identificación AVID * 047*541*336 Observaciones:
CAPTURA# 3
Fecha de puesta: 30/08/07 Hora: TARDE Fecha de retirada: 31/08/07 Hora MAÑANA
Transecto N°: PM* Trampa N°: T2 Cebo: Carne, Mazorca Estrato vegetativo: Rasante Clima: Seco
Nombre común: Zarigüeya Nombre científico: Didelphis albiventris Identificación AVID *047*813*576 Observaciones:
129
8.4 ANEXO C. FORMATOS DE RECAPTURAS.
INDIVIDUO CHIP # AVID *047*541*336
Recaptura N°: 1
Fecha: 30/ 01/ 08
Nombre común: Zarigüeya Nombre científico: Didelphis albiventris
Transecto N°: 3 Trampa N°: T4 Cebo: Banano y piña Estrato vegetativo: Arbustivo Clima: Seco
Procedimiento: Liberación: Remuestreo: X
ANESTESIA Fármaco: Ketamina Fármaco: Xilacine Concentración: 50 mg/ml Concentración: 20 mg/ml Dosis básica: 15 mg/Kg Dosis básica: 1 mg/Kg Dosis total: Dosis total: Volumen Total: 0.6 ml Volumen Total: 0.08 ml
Vía de administración: I.M Hora de administración: 11:35 m Tiempo de inducción: 4 min. MONITOREO Hora FC FR Tiempo de la inmovilización: 35 min. Procedimientos realizados: Obtención de muestra sanguínea para serología para control. Marcación con violeta de genciana. OTROS FARMACOS Fármaco: Epiotic spherulites Concentración: -- Dosis básica: -- Dosis total: -- Volumen Total: -- Vía de administración: Tópico Número de suero: 1C Hora de liberación: Observaciones: Presentaba secreción purulenta por la oreja izquierda compatible con otitis.
130