descubriendo la estructura de las proteÍnas lucía pérez coello
DESCRIPTION
DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello. ESCIVE 2009. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/1.jpg)
DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez CoelloLucía Pérez Coello
![Page 2: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/2.jpg)
A alumna Lucía Pérez Coello, de 2º de bacharelato do I. E. S. Otero Pedrayo de Ourense, estivo durante o verán do 2009 no IBCM (Instituto de Bioloxía Celular e Molecular de Oporto), participando no programa Estancias Científicas (ESCIVE), organizadas en España pola Fundación Española para la Ciencia y la Tecnología (FECYT).
A CONTINUACIÓN PRESÉNTANOS O TRABALLO DESENVOLVIDO DESPOIS DA SÚA ESTANCIA.
![Page 3: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/3.jpg)
ESCIVE
OBJETIVO: impulsar el contacto de jóvenes de entre 15 y 17 años con el trabajo cotidiano en centros y departamentos de investigación españoles y portugueses.
![Page 4: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/4.jpg)
http://www.youtube.com/watch?v=cehkhV6AIlA&feature=player_embedded
IBMC
![Page 5: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/5.jpg)
Instituto
Biología
Molecular
Celular
BIOLOGÍA DE LA INFECCIÓN E INMUNOLOGÍA
BIOLOGÍA MOLECULAR Y ESTRUCTURAL
BIOMATERIALES
GENÉTICA HUMANA Y DOLENCIAS GENÉTICAS
MECANISMOS DE ADAPTACIÓN CELULAR
NEUROBIOLOGÍA BÁSICA Y CLÍNICA
SEÑAL E IMAGEN
![Page 6: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/6.jpg)
Descubriendo la Descubriendo la estructura de las estructura de las
proteínasproteínas
Lucía Pérez Coello
Felipe Demígio Fernandes Pereira
ESCIVE – Ciencia Viva2009
![Page 7: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/7.jpg)
Objetivo
• Estudiar la estructura de las proteínas;
• Comprender su función;
• Determinar los mecanismos de
funcionamiento e interacción con otras
moléculas.
![Page 8: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/8.jpg)
Lisozima
• Enzima
• Estructura tridimensional determinada por primera vez por David Phillips, en 1965.
• Se encuentra en las lágrimas, saliva y moco humanos.
• Producida por varios organismos.
• Destruye la pared celular de las bacterias. Estrutura primária da Lisozima
![Page 9: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/9.jpg)
Pasos para determinar estructuras de
proteínas
![Page 10: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/10.jpg)
1. Producción de 1. Producción de proteínasproteínas
• Clonación
• Expresión (Escherichia coli)
• Purificación Cromatografia• Filtración en gel• Intercambio iónico• Afinidad
![Page 11: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/11.jpg)
2. Cristalización2. Cristalización
MEJORA DE LOS CRISTALES
Las proteínas, como muchas moléculas, pueden ser llevadas a formar cristales cuando son colocadas en condiciones apropriadas. Para que cristalice, la proteína purificada es sometida a una precipitación lenta a partir de una disolución acuosa.
ENSAIOS DE CRISTALIZACIÓN
CONDICIONES DE CRISTALIZACIÓN
OPTIMIZACIÓN
![Page 12: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/12.jpg)
Métodos de cristalización
• Gota colgante
• Gota sentada
•Diálisis
•Difusión en gel
![Page 13: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/13.jpg)
Diagram of hanging drop method. Reservoir solution (blue) usually contains buffer and precipitant. Protein solution (red) contains the same compounds, but in lower concentrations. The protein solution may also contain trace metals or ions necessary for precipitation of particular proteins (McRee, 1993).
![Page 14: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/14.jpg)
![Page 15: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/15.jpg)
1 2 3 4 5 6
A
B
C
D
30 mg/mL 20 mg/mL 10 mg/mL
8+2
7+3
6+4
5+5
(L)
• Preparamos 3 disoluciones (de concentraciones diferentes) que contengan Lisozima en 0,1 M NaAc pH 4.8
• Disolución reservorio: 1 ml de 10% (m/v) NaCl, 0,1 M NaAc pH 4,8 e 25% (v/v) Etilenoglicol
• La gota de la lámina contiene: 6-7 L de disolución de Lisozima y 4-3 L de disolución reservorio (volumen total de 10 L)
•Ponemos las láminas sobre los pozos y los sellamos con silicona
• Los cristales deben crecer dentro de 1-2 días y estar preparados para enfriamiento criogénico.
![Page 16: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/16.jpg)
![Page 17: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/17.jpg)
![Page 18: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/18.jpg)
NUESTROS NUESTROS CRISTALESCRISTALES
![Page 19: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/19.jpg)
![Page 20: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/20.jpg)
![Page 21: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/21.jpg)
![Page 22: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/22.jpg)
![Page 23: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/23.jpg)
![Page 24: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/24.jpg)
![Page 25: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/25.jpg)
Próximos pasos
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/7/73/X_ray_diffraction.png
![Page 26: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/26.jpg)
Se obtiene una muestra y se somete a
enfriamiento criogénico para evitar que se
desestabilice.
![Page 27: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/27.jpg)
DifractómetroDifractómetro
![Page 28: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/28.jpg)
Montaje del cristalMontaje del cristal
![Page 29: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/29.jpg)
3. Difracción3. Difracción
![Page 30: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/30.jpg)
Ley de Bragg :
n= 2d sin
![Page 31: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/31.jpg)
Construyendo el modeloConstruyendo el modeloLos mapas de densidad electrónica son el resultado final del experimento de difracción. Su interpretación en términos de un modelo molecular es la primer tarea del cristalográfo.
![Page 32: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/32.jpg)
![Page 33: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/33.jpg)
Estructuras Estructuras en 3D en 3D
LysozymeLysozyme
![Page 34: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/34.jpg)
![Page 35: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/35.jpg)
http://lysozyme.co.uk/lysozyme-structure.php
![Page 36: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/36.jpg)
![Page 37: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/37.jpg)
Presentación del trabajo realizado
![Page 38: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/38.jpg)
![Page 39: DESCUBRIENDO LA ESTRUCTURA DE LAS PROTEÍNAS Lucía Pérez Coello](https://reader035.vdocuments.co/reader035/viewer/2022062309/568143a5550346895db028a4/html5/thumbnails/39.jpg)