Ciencia y Tecnología Alimentaria

ISSN: 1135-8122

somenta@gmail.com

Sociedad Mexicana de Nutrición y Tecnología

de Alimentos

México

Vendrell, M. C.; Sinde, E.; Torres, M.; Gil, P.; Rodríguez, L. A.

Estudio de microorganismos patógenos en la fuente termal de o tinteiro en ourense

Ciencia y Tecnología Alimentaria, vol. 2, núm. 2, diciembre, 1998, pp. 92-95

Sociedad Mexicana de Nutrición y Tecnología de Alimentos

Reynosa, México

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=72420205

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Cienc. Tecnol. Aliment. Vol. 2, No. 2, pp. 92-95, 1998Copyright 1998 Asociación de Licenciados en Ciencia y Tecnología de los Alimentos de Galicia (ALTAGA). ISSN 1135-8122

Vendrell, M. C.; Sinde, E.; Torres, M.; Gil, P.; Rodríguez, L. A*

Área de Microbiología. Facultad de Ciencias. Universidad de Vigo, Campus Orense. España.

* Autor para la correspondencia. Email: lalopez@uvigo.es

ESTUDO DE MICROORGANISMOS PATÓXENOS NA FONTE TERMALDO TINTEIRO EN OURENSE

STUDY OF MICROBIAL PATHOGENS IN THE HOT SPRINGOF TINTEIRO AT OURENSE

ESTUDIO DE MICROORGANISMOS PATÓGENOS EN LA FUENTETERMAL DE O TINTEIRO EN OURENSE

ResumenSe ha realizado el estudio microbiológico sobre un total de 6 muestras recogidas de dos puntos situados en la

fuente termal del Tinteiro (provincia de Ourense, España) y otros cuatro puntos en las inmediaciones de ésta, con el objetode comprobar su posible contaminación bacteriológica, pues al ser agua de consumo público debe ser potable en su calidadde alimento.

En este trabajo se ha determinado en los puntos muestreados la presencia de patógenos para humanos, del tipocoliforme fecal, Staphylococcus, Enterococcus, Clostridium sulfito-reductor, Pseudomonas, Vibrio y Salmonella, cuyapresencia en aguas de consumo está prohibida por la Legislación Española.

Palabras clave: : fuente termal, contaminación, patógenos.

AbstractA microbiological analysis has been done in 6 samples got in two places situated in the hot spring of Tinteiro

(Ourense, Spain) and 4 places in the surroundings of this spring, to evaluate bacterial contamination, because water is afood of public consumption and must be potable.

In the tested samples have been analized the presence of human pathogens such as faecalis coliforms, sulfitereductor Clostridium, Pseudomonas, Staphylococcus, Enterococcus, Vibrio and Salmonella, prohibited by the SpanishLegislation.

Keywords: Hot spring, contamination, pathogens.

ResumoFíxose o estudio microbiolóxico sobre un total de 6 mostras recollidas de dous puntos situados na fonte termal do

Tinteiro (provincia de Ourense, España) e outros catro puntos nas inmediacións desta, co obxectivo de comproba-la súaposible contaminación bacteriolóxica, pois ó ser auga de consumo público debe de ser potable na súa calidade de alimento.

Neste traballo determinouse nos puntos estudiados a presencia de patóxenos para humans do tipo coliformefecal, Staphylococcus, Enterococcus, Clostridium sulfito-reductor, Pseudomonas, Vibrio e Salmonella, pois a súa presenciaen augas de consumo está prohibida pola Lexislación Española.

Palabras clave: fonte termal, contaminación, patóxenos.

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INTRODUCCIÓN

Las aguas termales se incluyen en las aguasmineromedicinales, y son aguas que tienen un interés ouna finalidad terapéutica. Estos tipos de agua han dadolugar a una industria muy importante sujeta a una serie denormas legales en relación con su: captación, elaboración,circulación y comercio que son de obligado cumplimientopor las personas implicadas en dichos procesos.

Las aguas naturales, bien sean superficiales oprofundas sólo excepcionalmente son estériles, si bienpuede admitirse que las aguas mineromedicinales por supropia mineralización y muchas veces por su elevadatemperatura, no constituyen un medio adecuado para eldesarrollo de los microorganismos. Este tipo de aguaspueden contener microorganismos (flora y fauna) que, aveces, están directamente relacionados o son dependientesde las características físicas y químicas de las aguas quelos vehiculizan. (Arnijo, Bacaioca, 1994).

En las aguas termales se pueden encontrar algas,diatomeas, rotíferos bacterívoros, protozoos y bacterias.Entre éstas últimas se encuentran: las ferrobacterias,organismos autótrofos que se hallan en las aguasferruginosas y precisan del hierro para cubrir sus exigenciasvitales; las manganesobacterias, que precisan el manganesopara vivir; sulfobacterias, que intervienen en el ciclo delazufre; y bacterias halófilas, que resisten altasconcentraciones de sal. Estos microorganismosconstituyen la flora normal de este tipo de agua, y por tanto,el hallazgo de otras bacterias impropias de esta localizacióny que además son patógenas para el hombre, supone unacontaminación exógena del agua que la convierte en nopotable.

La fuente de agua termal es de utilidad pública ycomo tal debe cumplir las condiciones de potabilidad deagua. En la Legislación Española (BOE número 226 del20 de Septiembre de 1990, relativa a la reglamentacióntécnico sanitaria para el abastecimiento y control de calidadde las aguas potables de consumo público) se diferenciaentre análisis normales, mínimos, completos, ocasionalese iniciales, estableciéndose las condiciones y frecuenciaen que deberán ser realizados. Los análisis completos,realizados en este trabajo, incluyen la determinación decoliformes totales, coliformes fecales, Enterococcus,Clostridium sulfito-reductores, patógenos humanos ybacterias aerobias a 37º y 22ºC.

Debido a la naturaleza de estas bacterias, esevidente que una de las mayores fuentes de contaminaciónde las aguas mineromedicinales, son las aguas residualesque llevan como flora normal estos microorganismosfecales. Otra fuente importante de contaminación son lasaguas de desecho de industrias como mataderos, quevierten sus residuos por colectores cuyas aguascontaminadas terminan desembocando, o bien en lasproximidades de la fuente, o bien en ella misma.(Rheinheimer, 1987).

La utilidad de esta agua aparte de su uso terapéutico,está muy extendida en procesos relacionados con alimentosy en tratamientos de la Industria Alimentaria.

El objetivo de este trabajo ha sido evaluar si existecontaminación en la fuente estudiada, y de haberla, sipuede provenir de las aguas de sus alrededores, pues alexistir infiltraciones en el suelo, el agua contaminada puedemezclarse con el agua de la fuente.

MATERIAL Y MÉTODOS

El muestreo se llevó a cabo en seis puntos de lafuente termal de O Tinteiro (Ourense, España), dos de ellosen la propia fuente en dos bocas de emisión distintas, y losotros cuatro situados en sus inmediaciones, ya que debidoa las características geológicas del suelo (capas de materialporoso) existen posibilidades de filtración, debido a quela surgencia no se encuentra perfectamente sellada. Lasmuestras se recogieron en botellas estériles de 1 litro y sellevó a cabo su análisis bacteriológico inmediatamentedespués de su llegada al laboratorio (APHA et al., 1985;Borrego, 1992; Edberg et al., 1990; Olivieri, 1982;Rheinheimer, 1987.

Se determinó la presencia/ausencia de coliformesfecales y totales, Enterococcus, Vibrio cholerae,Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa,Clostridium sulfito-reductores y Salmonella siguiendo losmétodos oficiales de análisis microbiológicos de aguaspotables de consumo directo especificados en el BOEnúmero 268 de 9 del Noviembre de 1983.

El método usado en todas las bacterias analizadas(excepto coliformes y Clostridium), fue el método defiltración por membrana: Se midieron 100mL del agua demuestra en probetas estériles y se filtraron en un aparatode filtración estéril. Tras la filtración de la muestra serecogieron las membranas (filtros) y se depositaron enplacas con el medio de cultivo sólido adecuado para elcrecimiento selectivo de cada bacteria.

En cada análisis se realizó:

Investigación de coliformes totales y coliformes fecales(Escherichia coli)

0´1mL y 1mL del agua de cada muestra sesembraron en tubos de Caldo Lactosado de concentraciónnormal y de doble concentración, manteniéndose 24 horasa 37ºC. A partir de los tubos que presentaron gas en lacampana Durham y turbidez en el medio, se tomaronmuestras que se sembraron en medio eosina azul demetileno (medio Levine), incubándolos 24 horas a 37ºC.De las colonias crecidas en este medio se procedió a suaislamiento y posterior identificación por las pruebasbioquímicas de Gram, Movilidad, Oxidasa, Catalasa, Rojode metilo, Voges-Proskauer, Nitratos, O/F, Citrato, Indol,Lisina, Ornitina, Glucosa , Lactosa, Manitol y Sorbitol (Al-

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Jebouri y Tropolle, 1984; APHA et al., 1985; Avila et al.,1989; Borrego, 1992; Edberg et al., 1990).

Investigación de Clostridium sulfito-reductores

20mL del agua de cada muestra se sembraron entubos que contenían el medio Agar Sulfito-Polimixina-Sulfodiacina (Agar SPS) licuado, añadiéndose acontinuación parafina estéril para crear un ambiente deanaerobiosis. Se incubaron 48 horas a 37ºC, siendo valorpositivo el crecimiento de colonias negras (APHA et al.,1985; Borrego, 1992; Hobbs et al., 1982).

Investigación de Salmonella

Se empleó el medio de enriquecimiento caldoRappaport-Vassiliadis, sembrándose 5 mL de muestra en5 mL de caldo, incubándose 24 horas a 37ºC.Posteriormente se sembró a partir de este caldo el medioselectivo Agar Salmonella-Shigella (agar SS), siendocolonias típicas las de color negro con halo transparente,realizándose posteriormente las pruebas bioquímicas deGram, Movilidad, Oxidasa, Catalasa, O/F, Rojo de Metilo,Voges-Proskauer, Indol, T.S.I., Citrato, Glucosa, Lactosa,Manitol y Sorbitol (APHA et al., 1985; Borrego, 1992;Harvey y Price, 1980; Monzón et al., 1986; Moriñigo etal., 1986; Moriñigo et al., 1989a; Moriñigo et al., 1989b;Van Schothorst y Renaud, 1983).

Investigación de Staphylococcus aureus

Una vez recogida la membrana del aparato defiltración, se depositó en medio Chapman-Stone,incubándose 24 horas a 37ºC. Ante la aparición de coloniassospechosas de color blanco o crema, fueron sembradasen medio Vogel-Johnson a 37ºC durante 24 horastomándose como colonias típicas aquéllas de color negrorodeadas de halo amarillo. Posteriormente se procedió asu aislamiento e identificación utilizando las pruebasbioquímicas de Gram, Movilidad, O/F, Oxidasa, Catalasa,DNAasa Nitratos, Arginina, Xilosa, Arabinosa y Sacarosa(Alico y Dragonjac, 1986; APHA et al., 1985; Borrego,1992; Borrego et al., 1988; Kloss y Schleifer, 1986).

Investigación de Enterococcus o Streptococcus fecalesdel grupo D

Tras la filtración, la membrana se colocó enmedio Slatenz-Bartley, incubándose 24 horas a 37ºC, ytomándose como colonias típicas las de color rosado orojo. A partir de éstas, se aislaron y sembraron en medioBilis-esculina para identificar los Enterococcusmanteniéndose a 37ºC durante 24 horas y observandola aparición de colonias con color marrón oscuro onegro. Posteriormente se procedió a su identificaciónbioquímica mediante las pruebas de Gram, Movilidad,Catalasa, O/F, Nitratos, Lactosa, Ramnosa, Sacarosa,Manitol y Sorbitol (APHA et al., 1985; Borrego, 1992;Division Merck, 1994).

Investigación de Pseudomonas aeruginosa

La membrana de filtración se depositó en AgarPseudomonas, incubándose 24 horas a 37ºC. Las coloniastípicas, de color verde, se aislaron e identificaronbioquímicamente mediante las pruebas de Gram,Movilidad, Oxidasa, Catalasa, O/F, Nitratos, Gelatinasa,Arginina, Glucosa, Trealosa, Inositol y Sacarosa (Alonsoet al., 1989; APHA et al., 1985; Borrego, 1992; De Vicente,1986; De Vicente et al., 1986; De Vicente et al, 1991).

Investigación de Vibrio cholerae

La membrana de filtración se depositó en AgarTiosulfato-Citrato-Sales biliares-Sacarosa (Agar TCBS),incubándose 24 horas a 37ºC y tomándose como coloniastípicas las de color amarillo o verde. Se aislaron eidentificaron por las pruebas bioquímicas de Gram,Movilidad, Oxidasa, O/F, Nitratos, Ornitina, Arginina,Gelatinasa, Citrato, Glucosa, Manitol, Sacarosa, Lactosay Arabinosa (APHA et al., 1985; Borrego, 1992; DivisiónMerck, 1994).

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Del estudio bacteriológico se han obtenido losresultados que se resumen en la tabla 1.

Se han tomado como referencia los límites máximosespecificados en el BOE número 226 del 20 de Septiembrede 1990, relativa a la Reglamentación Técnico- Sanitariapara el abastecimiento y control de calidad de las aguaspotables de consumo público. En él se especifica que el

* Toma de muestra: Punto 1 y 6 situados en la propia fuente, punto 2, 3y 5 situados en las inmediaciones, punto 4 situado en el colector

Punto 1 Punto 2 Punto3 Punto4 Punto 5 Punto 6

Clostridium Ausencia Presencia Presencia Presencia Ausencia Presencia

Coliformes

totales

Ausencia Presencia Presencia Presencia Presencia Ausencia

Coliformes

fecales

Ausencia Ausencia Presencia Presencia Presencia Ausencia

Pseudomonas

aeruginosa.

Presencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Presencia

Staphylococcus

aureus

Ausencia Ausencia Presencia Ausencia Ausencia Ausencia

Enterococcus. Presencia Presencia Presencia Presencia Presencia Presencia

Vibrio

Cholerae

Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia

Salmonella Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia

Tabla 1. Resultados obtenidos en este estudio*

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agua potable no debe presentar microorganismospatógenos ni fecales, siendo agua no potable aquella quelos presente.

La evaluación de los resultados nos permite concluirque en ninguno de los puntos investigados se puedeconsiderar potable el agua de la muestra recogida, pues entodos aparecen al menos uno de los microorganismosprohibidos por la legislación para ser considerada agua enbuen estado microbiológico.

En todos los puntos se observa ausencia del géneroSalmonella, aunque los Enterococcus aparecen en todoslos puntos muestreados.

En los puntos 1 y 6, correspondientes a la fuente,se ha detectado una contaminación cuyo origen se debe ala afluencia de microorganismos fecales y patógenosprovenientes de las inmediaciones, en cuyos parajes se hacomprobado la presencia de un colector residual. El análisisdel agua vertida en este colector revela una contaminaciónmuy intensa que se extiende debido al río que afluye enesta zona y que llega hasta la fuente.

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