MICROBIOLOGIA HUMANA PRACTICA 3

CUESTIONARIO Nº 03 - MEDIOS DE CULTIVO

1. ¿Por qué se utiliza sangre de carnero y no sangre humana en la preparación del Agar Sangre?

La sangre se obtiene específicamente de un cordero sacrificado para el consumo de su carne. Asépticamente, mediante punción yugular y en recipientes estériles la sangre.

Ha sido procesada sin uso alguno de aditivos o preservantes para remover la fibrina, factor que estimula la coagulación de la sangre, que interfiere con la preparación y utilización en el medio de cultivo. Esta libre de citratos u otros anticoagulantes y libre de otros agentes complejos, que puedan intervenir en el desarrollo microbiano, Además está libre de factores inmunológicos que comúnmente se encuentran en la sangre humana interfiriendo con el diagnostico.

Empleo: Los Glóbulos Rojos de cordero son los adecuados para la preparación de Agar Sangre y Agar Chocolate. Comúnmente se utiliza la sangre de cordero entre un 5 – 10 %, como medio de enriquecimiento nutritivo en la preparación de medios de cultivo. Este es utilizado principalmente para el crecimiento, identificación y observación de las reacciones hemolíticas causadas por alguna bacteria con importancia clínica.

EAPMH-FMH-UNJFSC CICLO IV 2010-II 1

MICROBIOLOGIA HUMANA PRACTICA 3

2. Señale los microorganismos que crecen en el Agar Mc Conkey

El agar McConkey es un medio sólido que permite el crecimiento de bacilos gram negativos fermentadores y no fermentadores de lactosa. Más frecuentemente utilizado.

Es un medio selectivo y diferencial. Es selectivo porque tiene mucha concentración de sales biliares que solo permiten que crezcan las enterobacterias.

Es diferencial porque aquellas enterobacteriáceas que fermenten la lactosa formarán colonias de color rosa. Las que no fermentan la lactosa serán colonias incoloras.

Lactosa + Lactosa -

3. Señale la utilidad de los siguientes medios de cultivo de enriquecimiento: Caldo Selenito, Agua peptonada alcalina.

Caldo Selenito

Se usa para enriquecimiento de miembros del grupo Salmonella, cuando se aíslan de materiales infecciosos como heces, orina, etc. El selenito inhibe a los coliformes, enterococos y estafilococos, no así a las Salmonella, Proteus, Shiguella y Pseudomonas.

Este caldo selectivo favorece el crecimiento de Salmonella spp. En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el selenito de sodio inhibe la flora Gram positiva y la mayoría de la flora entérica excepto Salmonella spp. Durante las primeras 8-12 horas de incubación.

EAPMH-FMH-UNJFSC CICLO IV 2010-II 2

MICROBIOLOGIA HUMANA PRACTICA 3

Agua peptonada alcalina

Medio de enriquecimiento utilizado para la búsqueda de Vibro sp. a partir de muestras clínicas y de alimentos. La viabilidad de los vibrios se mantiene intacta a pH alcalino, y este medio ha sido recomendado por numerosos autores para incrementar la recuperación de los mismos en materia fecal y otras muestras. (V. cholerae, V. parahaemolyticus, V. fluviales, V. vulnificus).

4. Señale la utilidad y composición del Medio Ruiz – Castañeda

Medio bifásico, para el cultivo de bacterias como Brucella, estafilococos, pseudomonas, E. coli, Salmonella, Neumococo, a partir de muestras sanguíneas, endocultivos, cultivos de médula y líquido céfalo raquídeo (raro), el medio clásico de Ruiz Castañeda, que utiliza una fase sólida y otra líquida, es el más apropiado para el diagnóstico.

En la mayoría de los procesos agudos, tras incubar el medio 2-4 días, es posible observar en la fase sólida pequeñas colonias que se deslizan por el agar en forma que recuerdan las lágrimas de cera resbalando por la vela. Una pequeña proporción de casos presenta el crecimiento entre los 5-15 días, y sólo de forma excepcional, éste se retrasa hasta pasados 30-45 días. Su composición se basa en caldo cerebro corazón y agar cerebro corazón.

5. Señale la utilidad y algunos ejemplos de medios de transporte

Los medios de transporte son medios diseñados especialmente para la transportación de muestras para cultivos, aseguran la viabilidad de los microorganismos desde el momento de la toma de la muestra hasta su siembra en el laboratorio.  El medio de Stuart modificado se usa para el transporte de gonococos, streptococos beta hemolíticos, haemophylus y otros microorganismos exigentes. La siembra debe efectuarse hasta las 36 horas siguientes a la obtención de la muestra.

Son utilizados para asegurar la viabilidad de la bacteria sin multiplicación significativa de los microorganismos desde el momento de su extracción hasta su posterior estudio. Se utilizan generalmente cuando las muestras deben ser enviadas de un laboratorio a otro. Se recomienda un límite de dos horas desde la recolección de

EAPMH-FMH-UNJFSC CICLO IV 2010-II 3

MICROBIOLOGIA HUMANA PRACTICA 3

las muestras y su estudio en el laboratorio, pero este límite de tiempo es superado (frecuentemente cuando se trata de muestras tomadas en un consultorio). Esta demora hace necesario el uso de medios de transporte adecuados. Los medios de transporte más frecuentemente utilizados son los de Stuart, Amies y Carey - Blair. Existe una unidad descartable de cultivo de transporte llamada Culterette que consiste en un tapón estéril de poliestireno y un ampolla en la parte inferior que se rompe cuando se ejerce presión liberando el medio de transporte de Stuart alrededor del extremo del tapón impregnado en la muestra.

Hasta hace algunos años los componentes orgánicos mencionados debían ser obtenidos por el microbiólogo y el medio de cultivo se preparaba en el laboratorio. Actualmente se dispone comercialmente de la mayor parte de los medios e incluso de sus componentes adicionales.

Un gran número de medios de cultivo usados en el laboratorio de microbiología son mixtos, es decir que tienen como finalidad la de varios grupos de los mencionados, por ejemplo, el agar S- S es selectivo (pues tiene un inhibidor: el verde brillante) y es a la vez un medio diferencial (lleva lactosa y un indicador) que permite diferenciar las bacterias fermentadoras o no de dicho polisacárido. El medio de Thayer y Martin para Neisseria es un medio enriquecido (contiene plasma) y es selectivo (tiene 3 antibióticos inhibidores de la flora bacteriana y fúngica: colistina, vancomicina y nistatina).

Medio de CARY BLAIR:

Se utiliza para el transporte de muestras fecales o raspados rectales, para coprocultivo. Se recomienda este medio, ya que permite el desarrollo de salmonellas y shigellas aun después de 49 días a 28°C.

El medio de Cary Blair se utiliza primordialmente en el transporte de coprocultivos, debido, a que la viabilidad de las especies de Shigella es superior que en otros medios de transporte.  Se ha obtenido desarrollo de Salmonellas y Shigellas hasta después de 45 días de estar en medio de Cary Blair.Y, se ha obtenido desarrollo de Vibrio cholerae después de 92 días en este medio.

b) Medio de AMIES C/CARBON:

Este medio se obtuvo de una modificación del medio stuart al cual se reemplazo el glicero fosfato por un buffer inorgánico superior, la adicción del carbón

EAPMH-FMH-UNJFSC CICLO IV 2010-II 4

MICROBIOLOGIA HUMANA PRACTICA 3

permitió la absorción de toxina y bactericidas del medio, lo que permite el desarrollo de patógenos aun presencia de antibacterianos.

EAPMH-FMH-UNJFSC CICLO IV 2010-II 5