CUESTIONARIO DE RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES DE MICROBIOLOGÍA

1. Características del vidrio utilizado para la fabricación del material de cristalería para los laboratorios: Presenta un coeficiente medio de dilatación muy bajo, por lo cual resiste sin romperse, cambios

bruscos de temperatura y elevados calentamientos. Alto punto de tensión, lo cual lo hace capaz de resistir cualquier deformación como resultado de

una acción calorífica. Resistencia química muy buena; frente al agua, ácidos (menos al ácido fluorhídrico y fosfórico

caliente), soluciones de sal, disolventes orgánicos. Alta resistencia mecánica; puede resistir la rotura común, rayado y oscurecimiento causado por los

álcalis. Fácil de limpiar Transparencia Almacenable en el refrigerador y congelador. Gran estabilidad al ataque químico. (García J., 2006)

2. Uso de materiales de vidrio en el laboratorio de Microbiología:Ventajas:

Puede resistir todas las temperaturas de trabajo de un laboratorio de rutina. Es muy resistente a los ataques químicos. Resiste deformaciones como resultado de una acción calorífica. Transparencia

Desventajas: No soportan saltos térmicos Son pesados No se pueden sellar herméticamente.

Uso de materiales de plástico en el laboratorio de Microbiología:Ventajas:

Su bajo peso y resistencia frente a la rotura Más estables frente a los ácidos (excepto el ácido sulfúrico fumante, el ácido nítrico y perclórico

concentrado) Más estables frente a los álcalis

Desventajas: Porosidad frente al anhídrido carbónico del aire por lo que las disoluciones que permanecen

almacenadas en estos recipientes por un largo tiempo se carbonatan. Generalmente no pueden calentarse por encima de los 70°C. (García J., 2006)

3. Materiales de laboratorio

Materiales Descripción y uso ClasificaciónPortaobjetos

Es una fina placa de cristal sobre el cual se disponen objetos para su examen microscópico. Vidrio

Cubreobjetos Son láminas muy finas de vidrio con las que se Vidrio

cubren las muestras que se verán al microscopio.

Cajas de Petri

Recipiente de vidrio o de plástico cilíndrico, con una base ancha pero de poca altura, se utiliza para hacer cultivos en microbiología.

Vidrio ó plástico

Pipetas graduadas (terminales y no terminales) Son recipientes tubulares de vidrio o de plástico.

Están destinadas a medir líquidos. Existen 2 tipos de pipetas graduadas:Terminales: la escala de graduación termina en la punta de la pipetaNo terminales: la escala de graduación no termina en la punta de la pipeta.

Vidrio

Pipetas Pasteur

Pueden ser de plástico o de vidrio. Se utilizan para el traspaso de líquidos en volúmenes pequeños. Vidrio o plástico

Tubos de ensayoEs un tubo cilíndrico pequeño utilizado en la contención de muestras líquidas y también para calentarlas, etc.Los puede haber de muchas formas: con/sin tapón, con/sin graduación, múltiple uso/desechables, vidrio/plástico.

Vidrio o plástico

Matraces Recipiente de cristal donde se mezclan las soluciones químicas, generalmente de forma esférica y con un cuello recto y estrecho, que se usa para contener líquidos. Tipos:M. de destilación: Para realizar destilaciones.M. Kitazato: Para realizar filtraciones al vacío.M. volumétrico: Cuando se preparan soluciones valoradas.M. Aforado: Para contener sustancias.M. Erlenmeyer: Permite contener sustancias o calentarlas.

Vidrio.

Probeta Es un instrumento volumétrico, que permite medir volúmenes considerables con un ligero grado

Vidrio o plástico.

de inexactitud. Sirve para contener líquidos.Están hechas normalmente de vidrio pero también las hay de plástico. Así mismo las hay de diferentes tamaños (volúmenes).

Tubos de Durham

Se utilizan en microbiología para determinar la producción de gases de microorganismos. Vidrio

Asas de inoculación

Pueden ser de plástico o de metal. Se utilizan para inoculación o transferencia de cultivos. Pueden ser rectas, redondas, en ángulo, o espatuladas.

Metal o plástico.

Mecheros

Sirven para calentar o esterilizar muestras o reactivos químicos. Pueden ser de alcohol o de gas (mechero de bunsen)

De vidrio o metal.

Estufa bacteriológica

Es un equipo indispensable en la sección de bacteriología, se utilizan para realizar cultivos de bacterias y hongos, a unas condiciones controladas de temperatura.

Metal

Baño bacteriológico

Es utilizado para realizar pruebas serológicas y procedimientos de incubación, agitación,inactivación, biomédicos, farmacéuticos.

Metal

Horno Pasteur Aparato en forma de estufa utilizado para la Metal

esterilización por calor seco de distintos materiales u objetos.

Autoclave

Dispositivo que sirve para esterilizar material de laboratorio, utilizando vapor de agua a alta presión y temperatura. Esterilización por calor húmedo.

Metal

Jarra de anaerobiosis Las jarras para anaerobiosis se emplean principalmente para cultivos en placas. La atmósfera anaerobia en el interior de estas jarras se puede conseguir segúnvarios procedimientos. Acero

Centrifuga

Son muy útiles para precipitar células y moléculas, también permiten separar células de los medios de cultivo. Metal

Nefelómetro de Mac Farland

Es un instrumento para medir partículas suspendidas en un líquido. En microbiología, para saber el número de bacterias por mililitro en suspensiones bacteriológicas.

Metal, acero y otros.

Membranas Millipore Permite la filtración ultrarrápida de medios de cultivo de tejido, aditivos, tampones y otras soluciones acuosas. Esta membrana también se utiliza en muchas de las unidades de filtración estériles listas para usar.Ideal para eliminar partículas en disolventes.

Polyethersulfone

(PES)

Cuentacolonias

Está diseñado para el conteo rápido y preciso de las colonias de bacterias y moho en placas de cultivo.

Metal, plástico y otros.

Figuras 1-20: Tomadas de: Manual de Prácticas de Laboratorio. Microbiología General. (2012).

4.

Microscopio óptico de campo claro. Tomada de: Herrero, J. (s.f.). Http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/13097/1/Microscopio.pdf.

5. Manejo correcto y cuidados del microscopio compuesto: El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que pudieran lo. (Guardado en

estuche, campana y otros). Las partes mecánicas deben limpiarse con un paño suave. (Humedecer el paño con Xilol si se ha trabajado

con aceite de inmersión). La limpieza de las partes ópticas requiere precauciones especiales. Nunca deben tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con los dedos. Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento sobre la platina y bajado hasta el tope;

el condensador debe estar en su posición más baja, para evitar que tropiece con alguno de los objetivos. Guardar en lugares secos, para evitar que la humedad favorezca la formación de hongos. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para

prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.

Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Para transportar el microscopio deben utilizarse siempre las dos manos, sujetándolo por el brazo con una

mano y por el pie con la palma de la otra. (Herrero, s.f.)

6. Pasos a seguir para enfocar imágenes en un microscopio compuesto:1. Conectar el microscopio a la corriente eléctrica. 2. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. 3. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.4. Encender la fuente de luz con la intensidad mínima y se va aumentando poco a poco. 5. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición).6. Para realizar el enfoque: Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo

macrométrico. Mirando, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

7. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso.

(Herrero, s.f.)

7. Límite de resoluciónEs la distancia mínima que debe existir entre dos puntos para que puedan ser discriminados como tales. El Límite de Resolución es la inversa del Poder de Resolución, de manera que cuanto mayor sea éste, menor será el Límite de Resolución.

Poder de resolución:Es la capacidad del microscopio de distinguir dos puntos separados como tales. El Poder de Resolución (p) de un microscopio se relaciona con el Límite de Resolución (d) de la siguiente manera:

P= 1d

Poder de amplificación:

La amplificación de un microscopio es el producto de número de aumentos del objetivo por los del ocular.

AUMENTOTOTAL=Aumento del objetivo× Aumento del ocular (Herrero, s.f.)

8. Tipos de microscopio electrónico: Microscopio electrónico de transmisión. Microscopio electrónico de barrido.

Diferencias y ventajas: MICROSCOPIO ELECTRÓNICO (M.E):

- Es el instrumento más adecuado para el estudio de la morfología interna de la célula.- Los rayos de luz son reemplazados de por un HAZ de ELECTRONES que se desplazan en el vacío generados por calentamiento de un filamento metálico y acelerados mediante alto voltaje de 50.000 a 60.000 voltios.

- Las lentes convencionales son reemplazadas por BOBINAS ELECTROMAGNÉTICAS con las que se obtienen grandes aumentos. - El gran aumento, unido al alto poder de resolución, permite obtener una información muy detallada acerca de la ultraestructura de la célula y logra visualizar componentes no visibles con el Microscopio Óptico. - A pesar de todas sus ventajas, el M.E. no resulta apto para la observación de células vivas o de células enteras, ya que se queman; solamente observa células muertas y deshidratadas en un medio vacío. (Herrero, s.f.)

MICROSCOPIO ÓPTICO (M.O):- Con el Microscopio Óptico se pueden observar Células vivas o preparaciones fijadas o coloreadas; se distinguen la forma de las células y la presencia de la mayoría de sus componentes pero es imposible reconocer la estructura de los mismos.- El M.O. cuenta con un reducido PODER de RESOLUCIÓN. - En su parte superior se encuentra una lente, el OCULAR, que es donde aplica el ojo el observador. - Con el microscopio de luz se resuelven detalles del orden del micrón, mientras que con el microscopio electrónico se alcanzan a resolver objetos del orden de los angstrom.- Utiliza luz o fotones y no se puede ver la imagen en forma tridimensional. (Herrero, s.f.)

8.Asa recta: Sirve para trasladar una sola colonia a medios de identificación, o sub-cultivo o para observar la movilidad de las bacterias o la producción de metabolitos ácidos.

Asa redonda: Sirve para la siembra por estrías e inoculaciones en general. (Marroquín, 2009)

9.Resiembra o Pase bacteriano: La resiembra periódica es una técnica que permite la supervivencia de los cultivos en cortos períodos de tiempo, por eso se reconoce como un método de conservación a corto plazo. Se basa en transferir el cultivo del medio seco a uno fresco proporcionándole las condiciones óptimas de crecimiento, lo que condiciona el elevado riesgo de contaminación y variabilidad de las características de las cepas, las cuales constituyen sus principales desventajas. (Marroquín, 2009)

BIBLIOGRAFÍA:

García, J. (2006). Auxiliares de Laboratorio. España. Ed. Mad, S.L. Herrero, J. (s.f.). Fundamentos de Microscopía. España. Universitat d’ Alacant. Disponible en: RUA.

Repositorio Institucional de la Universidad de Alicante. URL: http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/13097/1/Microscopio.pdf. Fecha de acceso: 20 de agosto de 2015.

Marroquín, J. (2009). Microbiología. Perú. Universidad Católica Santo Toribio de Mogrovejo. Disponible en: USAT. URL: http://usat.edu.pet/jcustodio91/guia-II. Fecha de acceso: 20 de agosto de 2015.

Ramos, A; Sepúlveda, T. Barragán, L; Matsumoto, K; Vives, F. & Gonzáles, M. (2012). Manual de Prácticas de Laboratorio. Microbiología General. México. Universidad Autónoma y Metropolitana. Extraído el: 15 de Febrero de 2016. Desde: www.izt.uam.mx/ceu/publicaciones/MMBG/files/manual_microbiología_general.pdf