coprocultivo(6)

Laboratorio de Microbiología

PRÁCTICA NO.6ANALISIS MICROBIOLOGICO DE HECES ( COPROCULTIVO)

OBJETIVO.

El alumno manejará los procesos microbiológicos para la realización de coprocultivos. Comprenderá los momentos en los cuales debe como médico recurrir a ésta técnica. Identificará y diferenciará las bacterias patógenas de la flora normal del tracto gastrointestinal.

FUNDAMENTO TEÓRICO.

El tracto gastrointestinal contiene una flora normal muy diversa, pero pertenecen a una sola familia de bacterias, las Enterobacterias.

A). Recolección de la muestra: Para enfermedades gastrointestinales es preferible el examen de heces frescas o también un raspado del ano con hisopo. La muestra debe ser refrigerada si no se va a cultivar enseguida.

B). Examen directo: No es muy recomendable antes del cultivo, debido a que la

morfología microscópica de las Enterobacterias es muy similar entre ellas y no permitiría una diferenciación entre ellas.

C). Cultivo: Se deposita la muestra con un asa sobre un medio sólido y se procede por estría múltiple, se incuba a 37oC por 24 a 48 horas

D). Medios de cultivo: Agar sangre, Agar desoxicolato, EMB, Mac Conkey, SS, etc.

.La técnica de coprocultivo que aquí se

describe es un procedimiento de rutina para aislar Salmonella, Shigella, y cepas comensales y patógenas de Escherichia coli.(en ésta práctica no analizaremos crecimiento de Yersinia enterocolítica .Para aislar Staphylococcus aureus es recomendable añadir una placa de agar sal y manitol, y para aislar Candida albicans otra de agar Sabouraud.

E). Flora normal y patógena.

FLORA NORMAL FLORA PATÓGENABacteroides fragilis.Lactobacilus spp.( anaerobios).Clostridium perfringensPeptostreptococcus spp.Proteus spp.Candida spp.Pseudomona spp.

Salmonella typhiSalmonella spp.Shigella spp.Escherichia coli (enterotoxina).Klebsiella spp.Yersinia enterocolítica.Vibrio cholerae.

CASO CLINICOPaciente de 35 años de edad, sexo masculino, serología positiva para VIH conocida desde 4 años antes, el motivo de la consulta fue por fiebre y repercusión general. Ingresó al hospital relatando una historia de 1 mes de evolución caracterizada por anorexia, decaimiento, pérdida progresiva de peso, sensación febril, diarreas líquidas intermitentes, sin sangre ni moco, no acompañadas de dolor abdominal. Al realizar tinción de Gram encontramos bacilos gram negativos y el crecimiento del coprocultivo en agar SS fue positivo presentando colonias circulares de coloración negra.

PREGUNTAS EXPLORATORIAS:

1.- ¿Cuáles son los microorganismos que selectivamente crecen en el agar SS?

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2.- ¿Cómo se manifiesta clínicamente la salmonelosis no tifoidea?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3.- ¿Tiene algo que ver para la salmonelosis no tifoidea el echo de que el paciente tenga VIH?

Escuela de Medicina Universidad Xochicalco


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4.- Investiga ¿cómo se manifiesta la gastroenteritis aguda en un paciente?______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

MATERIAL.RECIPIENTE ESTERIL DE BOCA ANCHA ( O HISOPO ESTERIL CON MEDIO DE TRANSPORTE)Cajas Petri con Agar Sangre.Cajas Petri con Agar Salmonella-Shigella (SS).Cajas Petri con Agar MacConkey.Tubos de ensaye con rosca conteniendo un hisopo estéril.Mecheros Meker.Mechero Bunsen.Asa de Nicromo.Equipo de Tinción de Gram. Portaobjetos.

Material Biológico.Muestra de materia fecal.

TÉCNICA.

1. Método para el aislamiento de microorganismos en material fecal.

A). Toma con el asa estéril un poco de materia fecal y depositarla cerca de la orilla de cada una de las placas.

(Agar sangre, , MacConkey, SS)B). Proceder al aislamiento por el método de

estría cruzada (múltiple).C). Incubar a 37oC por 24 a 48 horas.D). Interpretar los resultados , anotando las

características morfológicas de cada colonia diferente que haya crecido.

E). Hacer un frotis de cada colonia diferente, y teñirlo con Gram.

OBSERVACIONES: Las muestras para coprocultivo deberían

tomarse antes de administrar antibióticos y preferentemente antes de tomar antidiarreicos.

Indicar siempre el juicio diagnóstico de presunción y si el paciente es menor de un año.

Solicitar las investigaciones especiales, especialmente para (S.aureus).

En el caso de búsqueda de portadores de Salmonella, se deberá fundamentar adecuadamente el pedido y se necesitan 3 muestras negativas para asegurarse que el paciente no es portador.

EXAMENES DE LOS CULTIVOS.

Agar MacConkey: Características: Es un medio

moderadamente selectivo. Las sales biliares y el cristal violeta inhiben a la mayoría de las bacterias Gram-positivas y a algúnas Gram- negativas. La fermentación de lactosa hace virar el indicador a rojo.

Aspecto de las colonias: Los fermentadores típicos de lactosa ( E. coli, Klebsiella y Enterobacter ) dan colonias rosas o rojas rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas. Las fermentadoras débiles o lentas de lactosa (Citrobacter, Serratia)



pueden dar colonias incoloras a las 24 hrs. Y rosadas a las 48 hrs. Proteus, Salmonella, Shigella y Yersinia, dan colonias incoloras. Enterococcus forma pequeñas colonias.

Agar Salmonella –Shigella (SS):Característsicas: Es un medio

selectivo para Salmonella y Shigella. La alta concentración de sales biliares y citrato inhibe todas las bacterias Gram- positivas y muchas Gram- negativas, incluidos los coliformes. La fermetación de lactosa hace virar el rojo neutro a rojo. El SH2 formado a partir del tiosulfato da un precipitado negro al reaccionar con hierro.

Aspecto de las colonias. Los fermentadores de lactosa están bastante inhibidos y dan colonias rojas. Las colonias de Salmonella aparecen sin inhibir, transparentes con el centro negro. Las especies de Shigella son mas o menos inhibidas y dan colonias transparentes sin

centro negro. Las colonias de Proteus son similares a las de Salmonella.

Agar EMB (eosina y azul de metileno):Características: Es un medio

selectivo, utilizado para aislar bacilos entéricos Gram Negativos permite la diferenciación de bacterias fermentadoras de lactosa de las no fermentadoras. Este medio permite diferenciar Salmonella y otros organismos lactosa negativos de organismos coliformes. Las colonias de Salmonella y Shigella son traslúcidas, de color ámbar o incoloras.Los coliformes que utilizan lactosa y/o sacarosa producen colonias de color azul o negro con centros oscuros y brillo metálico. Otros coliformes como Enterobacter presentan colonias mucosas de color rosa. Las cepas de Enterococcus faecales son parcialmete inhibidas.

RESULTADOS.

1. Morfología macro y microscópica de bacterias aisladas de materia fecal.

Mac Conkey SS

CARACTERÍSTICA RESULTADO CARACTARÍSTICA RESULTADOTAMAÑO TAMAÑOFORMA FORMAELEVACIÓN ELEVACIÓNMARGEN MARGENCOLOR COLORSUPERFICIE SUPERFICIEDENSIDAD DENSIDADCONSISTENCIA CONSISTENCIAOLOR OLORPIGMENTACIÓN PIGMENTACIÓN

EMB

CARACTERÍSTICA RESULTADO



TAMAÑOFORMAELEVACIÓNMARGENCOLORSUPERFICIEDENSIDADCONSISTENCIAOLORPIGMENTACIÓN

Escriba el diagnóstico presuntivo de la muestra analizada.___________________________________________________________________________________

SIGNIFICADO CLINICO .

Los medios menos selectivos com o Mac Conkey permiten apreciar la composición de la microbiota normal aerobia facultativa. En un sujeto sano debe predominar E. coli, con pequeños porcentajes de otras enterobacterias: Klebsiella, Enterobacter y Proteus. En Mac Conkey suelen detectarse también enterococos ( como pequeñas colonias incoloras). Si se busca Salmonella y no se detectó en el primer cultivo, se sembrarán nuevas placas.

En el caso de Salmonella es necesaria la confirmación serológica, y si se sospecha de una gastroenteritis por E. coli debe determinarse si se ha aislado una cepa patógena, mediante serología u otras técnicas.

La presencia abundante de Candida albicans, Staphilocuccus aureus y Pseudomona aeruginosa en la materia fecal, se considera patógena si al paciente se le ha suministrado antibióticos previo. Estos medicamentos alteran la flora habitual cambiando el ambiente, de manera tal que los microorganismos que normalmente eran inocuos; se tornan patógenos.

La mayoría de las diarreas son transitorias (1-30 días), se han reportado casos de síntomas persistentes hasta de 10 meses, la etiología del agente detectado en dichos casos ha sido la Shigella flexneri

CUESTIONARIO.

1. Explique ¿por qué razón no podemos descartar que un paciente sea portador de Salmonella si en el primer cultivo obtuvimos un resultado negativo para éste microorganismo?

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__________________________________________________________________________________________________________________________2. ¿Por qué es necesario refrigerar las muestras de

heces fecales si van ha ser tratadas posteriormente?

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3. ¿Qué medios de cultivo se utilizarían si desearamos aislar Yersinia enterocolítica? ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

4. ¿Por qué es tan difícil el aislamiento de Yersinia sp?

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administración de antibióticos?____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

OBSERVACIONES Y CONCLUSIONES.________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

INSTRUCCIONES: Marque con una paloma para indicar que el alumno realizó la actividad y con una X que no la realizó.

Participación individual

Nombre A B C D E

A) Al realizar la práctica toma en cuenta las medidas de seguridad.

B) Demuestra habilidad y destreza al manejar el material de laboratorio.

C) Al preguntarle sobre el tema, fundamenta correctamente su respuesta.

D) Coopera con el resto del equipo para que todos realicen su práctica.

E) Al término de la práctica elimina o conserva adecuadamente su material y la muestra.

Evaluación del trabajo en equipo

EQUIPO SI NO

Planificamos el trabajoDistribuimos bien las actividadesEl resultado fue el esperado

EVIDENCIAS SI NO

1.- Formato completo2.- Práctica realizada3.-Resultados de la práctica completos4.-Material y equipo limpio5.- Revisión bibliográfica


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