COPROCULTIVOINT. T.M. FELIPE ROMERO CHIRI

INTRODUCCCION

• La porción inferior del intestino tiene una flora bacteriana normal amplia, por lo que los agentes infecciosos causales de diarrea por diversos mecanismos y que pueden ser ubicados en diversos grupos de microorganismos

La mayor parte de estos microorganismos en el adulto en equilibrio, son anaerobio (90%) y son bifidobacterias y bacteroides; el resto esta constituida por germenes aerobios (colibacterias, enterococos y lactobacilos) que representan hasta el 9%, hasta que el restante 1% esta constituido por clostridios, estafilococos y algunas especies de hongo.

Las principales causas de trastornos gastrointestinales agudos incluyen:

•Toxinas (de: Estafilococos, Escherichia coli ), •Bacilos entéricos gram negativos invasores,•Fermentadores lentos de la lactosa, • Shigella, y la Salmonella.

• EL COPROCULTIVO : Es un prueba diagnostica que por medio del cultivo nos permite la información del origen de la causa de las gastroenteritis y también nos dan una idea de cual es el tratamiento mas optimo e idóneo para el caso

Recolección de la muestraLa muestra del coprocultivo será tomada en un vaso especial para recolectar muestra, es un frasco de boca ancha que debe de estar estéril. Las muestras de heces para estudio bacteriológico debenobtenerse en la etapa aguda de la enfermedad, antes deadministrar antimicrobianos y deben ser transportadas con prontitud al laboratorio.

Tamaño de la muestra

• Heces Pastosas formadas: El tamaño de un nuez ( 1-2gr)

• Heces Liquidas: volumen de 5-10 ml

Preservación• El líquido o solución conservadora se prepara de la siguiente manera:

• NaCl 4.2 g• K2HPO4 3.1 g• KH2PO4 1.0 g• Glicerol 300 ml • H2O 700 ml

• Añade rojo fenol

Se aconseja emulsionar aproximadamente 1g de heces en 1º ml de este liquido

Transporte

• Puede utilizar el medio de transporte Stuar o Cary Blair

Medio semisólido, no nutritivo. tioglicolato de sodio, azul de metileno,

• Si la muestra no se envía en forma inmediata se debe refrigerar.4 ºC• Si se va a procesar en el plazo de 1 o 2 horas después de su emisión,

no necesitan medio de transporte.• Mientras tanto mantener refrigerada las muestras, para evitar el

sobrecrecimiento de la flora normal que puede enmascarar o destruir a los enteropatógenos.

Reacción Inflamatoria• Dentro de las pruebas de laboratorio recomendadas para abordar la

enfermedad diarreica, se encuentra en primer lugar la citología del moco fecal, la cual nos permite diferenciar la etiología de una infección viral o bacteriana.

• Un reporte de más de 10 leucocitos por campo orienta a una etiología infecciosa:

• > MN: etiología viral,• > PMN: etiología bacteriana.

Medios de Cultivo

• Para facilitar el aislamiento de bacterias entéricas patógenas se utilizan :

• Medios de enriquecimiento • Medios selectivos.

Medios de enriquecimiento

• Caldo con tetrationato (Mueller y Kauffmann). Contiene tiosulfato de sodio, sales biliares y yodo-iodurada, Salmonella

• Caldo con selenito (Leifson). • Posee selenito, ácido de sodio permite el rápido desarrollo de salmonelas y

shigellas.• • Agua Peptonada Alcalina • La viabilidad de los vibrios se mantiene intacta a pH alcalino

Medios Selectivos

Agar MacConkey

Peptona

Sales Biliares

Lactosa

Cristal Violeta

Permite diferenciar las bacterias fermentadoras de lactosa de las no

fermentadorasSel-Dif

S.S agar

Citrato Fe, Tiosulfato Na

Sales biliares

Verde brrillante

Rojo Neutro

Permite aislar a las bacterias del género de las salmonellas y shiguellas

Lactosa

Shigella y Salmonella lactosa neg, aparecen como colonias lisas, transparentes a opacas

XLD agar

xilosa, Lactosa sacarosa

lisina

tiosufalto de sodio y

citrato férrico amonio

Rojo Fenol

Permite aislar a las bacterias del género de las salmonellas y shiguellas

Salmonellas: Negras prod SH2 y rojas sin SH2

Xilosa, Lisina, Desoxicolato

Shiiguella: Rojas

Desoxicolato de sodio

TCBS Agar

Tiosulfato Na

Citrato Na

Bilis

Cit ferricoPermite aislar al género

de los vibrios

la sacarosa es fermentada por los vibrios que dan colonias de tamaño mediano, lisas, opacas, de color amarillo

Inhib GP y coliformes alcalinizan el medio

H2S

Sacarosa

ClNa Crecimiento

MICROORGANISMOS PATÓGENOS CAUSANTES

DE ENFERMEDADES ENTÉRICAS

MORFOLOGIA• Bacilo Gram negativo.• No forma esporas• Móviles (flagelos perítricos).• Catalasa positivos.• Oxidasa negativos.

CARACTERÍSTICAS NUTRICIONALES:No exigente.Fermenta Glucosa, maltosa y manitol Lactosa y sacarosa neg.Es aerobio anaerobio facultativo

CARACT. COLONIAS:Agar Mac Conkey las colonias son lactosa –Transparente o incoloras 2-3 mmAgar SS: colonias incoloras 1-2 mm, colonias con centro obscuroAgar XLD: color rojo con el centronegro debido a la producción de H2S

SALMONELLA

Colonizan el intestino delg

Transmisión: alimentos de origen animal contaminados

La infección se localiza en el íleon y colon

• El aislamiento de salmonelas se puede realizar en medios poco selectivos como el agar MacConkey o en medios de cultivo con selectividad media como el agar S-S o agar Hektoen..

Epidemiologicamente :Las que infectan sólo al hombre: S Typhi, S Partyphi A y S Partyphi C y que se transmiten en forma directa ó indirecta de una persona a otra

Los coprocultivos son positivos en aproximadamente la mitad de los casos durante la primera semana con fiebre, pero el mayor número de cultivos positivos se obtiene en la segunda y tercera semanas de la enfermedad

Positiva con antisuero Vi = S. Typhi

Tratamiento: Las quinolonas: Ciprofloxacina. Sulfametoxazol-trimetoprim.cefalosporinas de 3a generación, ceftriaxonaEl cloramfenicol,

La identificación bioquímica se debe complementar con la aglutinación mediante antisueros polivalentes.

Positiva con antisuero D = suspechoso de S. Typhi*

No positiva con antisueros Vi o D = negativa

Bioquímica Diferencial Salmonella

• TSI +K/A -, +

• LIA +K/K SH2

• CITRATO +• UREA - • SIM

MOVILIDAD +INDOL -

H2S +

MORFOLOGIA• BGN.• Miden 0.7 µm x 3 µm• No forma esporas• No Móviles• Catalasa positivos.• Oxidasa negativos.

CARACTERÍSTICAS NUTRICIONALES:No exigente.Fermenta Glucosa, acido sin gas. Lactosa --Es aerobio anaerobio facultativo

CARACT. COLONIAS:Agar Mac Conkey las colonias son lactosa –Convexas incoloras 2-3 mmAgar SS: colonias incoloras Agar XLD: son transparentes 1-2 mm

SHIGUELLA

Cuatro especies y cada especie varios serotipos: Shigella dysenteriae (serogrupo A, 13 serotipos), Shigella flexneri (serogrupo B, 6 serotipos), Shigella boydii (serogrupo C, 18 serotipos) yShigella sonnei (serogrupo D, 1 serotipo).

Transmisión : alimentos contaminados

Ocasionan una diarrea disentérica por invasión de las células del colon. Los cultivos deben realizarse con muestras de las partes fecales con moco, pus o sangre. S. dysenteriae Y flexneri es el aislamiento más común en muchas partes del mundo, pero S. sonnei predomina en América del Norte y en Europa.

.[

Identificación serológica

Antisuero monovalente A1 (Si aglutinación + = S. dysenteriae 1)

Antisuero polivalente B (Si aglutinación + = S. flexneri

Antisuero polivalente D (Si aglutinación + = S. sonnei)

Debido a los elevados niveles de resistencia a la ampicilina y al trimetoprim-sulfametoxazol observados en los últimos años se ha sugerido como alternativa el tratamiento con: Fluoroquinolona : ácido nalidíxico, ciprofloxacina, norfloxacina, ofloxacina como tto 1 lineaCefalosporina de 3ª generación. ceftriaxona, pivmecilinam. Macrolidos: azitromicina

Diferencial de Shiguella

• TSI K /A -- , --• LIA K / A --• CITRATO --• UREA --• SIM

S --I -+M --

E. ColiMORFOLOGIA• Bacilo Gram negativo.• tienen forma de barra o

baston, poseen flagelos y pili.

• No forma esporas• Móviles (flagelos perítricos).• Catalasa positivos.• Oxidasa negativos.• Reducen nitratos a nitritos.• Producen vitamina B y K.

CARACTERÍSTICAS NUTRICIONALES:No exigente.Fermenta glucosa y lactosa con producción de gas.Es anaerobio facultativo

CARACT. COLONIAS:Agar Mac Conkey las colonias son rojas con halo turbioSS: colonias de color rosa a rojoXLD: grandes, amarillas con o sin precipitado de bilis

Afecta: mucosa colon

Diarrea secretora, fiebre

Afecta: mucosa intestinal

Evacuaciones escasasMoco, sangre dolor, fiebre

Diarrea inicio brusco, dolorSeguida hemorragia

Sindrome uremico hemolitico

Diarrea secretora acuosa con moco y sangre fiebre baja

8-12 dia/ 4 dias diarrea del viajero

Paises en desarrollo

adherencia difusa (DAEC

108 UFC

serotipo O157:H7

Para identificar a E. Coli como Enteropatogena se utiliza antisuero POLIVALENTE A, B y C

Para identificar a E. Coli como Entero invasiva se utiliza antisuero A Y Antisuero B

Para identificar a E. Coli comoEntero Hemorragica se utiliza antisuero 157

Diferencial E.Coli• Resultados• TSI A / A + , - • LIA K / A -• CITRATO --• UREA ---• SIM

S --I +M +

VIBRION SPPMORFOLOGIA• BGN. Ligeramente curvado• No forma esporas• Móviles (flagelos perítricos).• Catalasa positivos.• Oxidasa positivos.

CARACTERÍSTICAS NUTRICIONALES:Poco exigentesaerobios y anaerobios facultativosfermentan la sacarosa, lactosa +-

CARACT. COLONIAS:Agar Mac Conkey de incoloras a rosa clarasAgar TCBS: colonias amarillas brillantes de 2 a 4 mm de diámetro, lisas, opacas,Pueden ser planas con centro elevado

Habitat: ambiente hídrico, marino y fluvial.

El Vibrio cholerae presenta serogrupos toxigénicos O1 u O139 Serogrupo O1 están clasificados en dos biotipos: El Tor y el clásicodos serotipos (Inaba y Ogawa) con base en la aglutinación con antisueros

• Gastroenteritis : tipo colérico o no colérico. • La forma epidémica de cólera, cursa con vómitos y diarrea líquida

secretora muy abundante, con pérdida rápida de agua y electrolitos que causa una profunda deshidratación.

• De distribución prácticamente mundial, su prevalencia es baja, al menos en países desarrollados.

• La mayor parte de las especies son sensibles a :• Tetraciclinas: Doxiciclina • Fluoroquinolonas: Ciprofloxacino, Norfloxacino.• Macrolidos: Eritromicina, Azitromicina• Trimetoprina-sulfametoxazol,

Diferencial Vibrio• TSI A / A - , -• LIA K / K - , - • CITRATO --• UREA --• SIM

S --I --M +

GRACIAS……