I. PARTE PRCTICACOLORACION GRAMOBJETIVOS DE APRENDIZAJE1. La base terica y qumica de los procedimientos de tincin diferencial. 2. La base qumica de la tincin de Gram. 3. El procedimiento para diferenciar entre dos grupos principales de bacterias: Gram positivas y Gram Negativas. PRINCIPIO:La tincin diferencial requiere el uso de al menos 3 reactivos qumicos que se aplican en secuencia a un frotis fijado por calor. El primer reactivo es llamado tincin primaria o colorante primario. Su funcin es impartir color a todas las clulas. Con el objetivo de establecer un contraste de color, el segundo reactivo usado es un agente decolorante, el cual puede decolorar la clula completa o solo parte de ella. El reactivo final, el colorante de contraste, le da a las clulas decoloradas un color que contrasta con el del colorante primario. El colorante de contraste no puede ser absorbido por clulas que no han perdido el colorante primario. De esta manera, tipos de clulas o sus estructuras se pueden distinguir unas de otras en funcin del colorante que es absorbido.Esta coloracin es la ms usada en la bacteriologa porque nos permite diferenciar a dos grupos diferentes de bacterias como Gram Positivas (retienen el primer colorante que es el cristal violeta) y las Gram negativas (no retiene el primer colorante se decoloran siendo finalmente teidas por el colorante de contraste Safranina) Esto es esencial para la clasificacin y diferenciacin de microorganismos. ASPECTOS TERICOS EN RELACIN CON LA TINCIN GRAM:Un microorganismo Gram positivo debe de presentar una pared celular sana. El mismo microorganismo, si sufre dao de la pared por una u otra causa, se vuelve Gram negativo. Esto indica la importancia de la pared para la retencin o el escape del colorante. El colorante bsico entra al microorganismo, donde forma con el yodo una laca insoluble en agua. El alcohol o acetona empleado para aclarar deshidrata las paredes de los microorganismos Gram positivos, tratados con mordiente, y forma una barrera de laca no puede atravesar. En las clulas de Gram negativas, los lpidos de la pared (ms abundante que as Gram positivas), se disuelven por este tratamiento, lo que permite el escape del complejo de cristal violeta con yodo.

II. PARTE PRCTICA1.- MATERIALES. - BIOLOGICOSMuestra con hisopo (Gradilla, mano, lavatorio, autoclave)- VIDRIOSLaminas.Lamina

-PLASTICOSDispensador.Suero fisiolgico.- REACTIVOSBatera de colorantes para la tincin Gram.-INSTRUMENTOSMicroscopio Suero fisiolgico

Dispensador

Microscopio

2.- TOMA DE MUESTRA CONSIDERACIONES GENERALESNada es ms importante que la apropiada seleccin, recoleccin y el transporte de una muestra clnica. Seleccionar el sitio anatmico correcto del cual obtener la muestra clnica y utilizar las tcnicas y los materiales estriles apropiados para la recoleccin de las muestras. Recolectar un volumen de muestra adecuado, para evitar los falsos-negativos.3.-PROCEDIMIENTOS1. Obtencin de muestra La toma de muestra realizada en esta prctica fue con hisopado en la mesa, mano, Gradilla, lavadero

2. Prepare un frotis con este cultivo sobre una lmina portaobjetos desengrasado y fijarlo al mechero.

3. Lleve la lmina al lavadero y realice la tincin de la siguiente manera:

a) Cubra la preparacin con solucin acuosa de Cristal violeta o Violeta de genciana dejando que el colorante actu durante (2-3min).

b) Lavar con agua corriente (agua de cao).

c) Luego cubrir con solucin de Lugol o yodo dejando actuar el mordiente durante (12 min).

d) Lavar con agua corriente (agua de cao).

e) Decolorar la preparacin con Alcohol Acetona durante (20 a 30 seg.).

f) Lavar con agua corriente (agua de cao).

g) Cubrir el frotis con solucin contraste de Safranina por (1 a 2 min).

h) Lavar con agua corriente (agua de cao).

i) Dejar secar la preparacin o ponerlo al mechero.

j) Observar al microscopio a 100 x con Aceite de Inmersin.

Dato 1:En muchos laboratorios se utilizan otros mtodos de diferenciacin, la tincin de contraste o ambas.

Para que sirve dichos colorantes: Acetona, o un volumen de acetona con dos volmenes de alcohol; es un decolorante mucho ms rpido que el alcohol etlico de 70 por 100. La decoloracin rpida puede ser desventajosa en ciertas bacterias o cuando los microorganismos escasean en el frotis, o bien en manos de tcnicos inexpertos. Safranina, se usa tambin para la tincin de contraste, pero no tiene ventajas evidentes. Dato 2: Los siguientes microorganismos comunes son Gram positivos, o sea que se tien de color Azul oscuro:

Estafilococos Neumococos ntrax y su grupo Hongos Estreptococos Difteroires Clostridios

III. RESULTADOS La accin del calor, introducido en este mtodo, hace que haga accesible a la coloracin porque ya est fijada la muestra.

Despus de colorear con Gram es muy importante porque nos Permite observar y diferenciar bacterias que son causante de producir enfermedades.

IV. CONCLUSIONES.Tanto las bacterias Gram positivas como las Bacterias Gram negativas se presentan morfolgicamente como cocos o bacilos, sin embargo al ejecutar tincin de Gram en estas para identificar su grupo taxonmico, las Grampositivas se tien de color violeta esto se debe a que gracias a que contienen una pared gruesa de peptidoglicano y gran cantidad de cidos teicicosque permitenfijar y retener rpidamente el colorante inicial yademsson resistentes a la decoloracin, mientras que las Gram negativas se tien de color rosado las cuales poseen unapareddelgadacon menoscantidad depeptidoglicanoylpidos,lacualrequieredeun colorante de contra tincin como la safranina o la fucsina.Las colonias de bacterias a las que se les realiz tincin de Gram se tomaron de una muestra de suelo, mesas, trpode, autoclave y mano, lo cual explica la presencia de estas bacterias, debido a que predominanlasbacteriasGramnegativas.Sin embargo tambin se encuentranbacteriasGrampositivas,peroenmenorproporcinquelasGramnegativas,locual tambin explica la presencia de estas bacterias en las diferentes muestras.De acuerdo a esto Fue posible observarbacteriasGramnegativasconformadecocos y bacilo (con forma de barra o vara) y Gram positivas como Staphylococcus sp.V. BIBLIOGRAFIA

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Morfolog%C3%ADa_y_Tinci%C3%B3n.pdf

http://www.academia.edu/6245506/TINCI%C3%93N_DE_GRAM_Y_OBSERVACI%C3%93N_MICROSC%C3%93PICA