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Club de Inmunohistoquímica y Biología Molecular
Mª Dolores Lozano Escario Clínica Universidad de Navarra.
Pamplona.
“Cuando me invitan a dar charlas un poco filosóficas pienso que mi vida profesional está acabada “
Dr. JR Valentí. Especialista en Traumatología y Cirugía Ortopédica. Clínica Universidad de Navarra.
Marzo 1993- Abril 1995
Abril-Mayo 1995
Junio 1995…………………………………………. Departamento de Anatomía Patológica Clínica universidad de Navarra. Pamplona.
HPV en citología ginecológica…….
Desarrollo de la PAAF Técnicas de punción con TAC, ecoendoscopia, broncoscopia, EBUS Bloques celulares, biopsias pequeñas.
Rudolf Virchow (1821-1902)
Teoría general de la enfermedad basada en tres principios:
•Principio de la localización: no hay "enfermedades generales", todo proceso morboso se halla anatómicamente localizado.
•Principio de la lesión celular: si se quiere conocer lo que en la enfermedad es verdaderamente fundamental hay que recurrir al estudio de la célula.
•Principio del peligro: La vida de la célula enferma lleva en sí una cierta idea de "peligro", y esto es lo que básicamente distingue a la enfermedad de la salud en cuanto modos de vida.
Teoría celular:la célula es la unidad elemental de la estructura y formación de todos los seres vivos. Toda célula procede de otra célula
La Anatomía Patológica Humana (AP) es la rama de la Medicina que se ocupa del estudio, por medio de técnicas morfológicas, de las causas, desarrollo y consecuencias de las enfermedades.
El fin último es el diagnóstico correcto de biopsias, piezas quirúrgicas, citologías y autopsias. La Anatomía Patológica es una especialidad médica que posee un cuerpo doctrinal de carácter básico que hace que sea, por una parte, una disciplina académica autónoma y, por otra, una unidad funcional en la asistencia médica.
Completo, de calidad y reproducible
Patología: Estudio (logos) del sufrimiento (pathos)
Ciencia Básica Práctica Clínica
Estudio de cambios estructurales y funcionales en células, tejidos y órganos que subyacen la enfermedad
Técnicas: morfológicas
inmunológicas
microbiológicas
moleculares
Dimensión Asistencial
Investigación Aplicada
11 mm
Desarrollo de lineas celulares
Inmunocitoquímica
FISH
Técnicas complementarias en patología
Estudios moleculares
INTRODUCCIÓN
Tumores morfológicamente iguales
Alteraciones moleculares “diana” diferentes
Necesidad de información molecular
•Desarrollo de técnicas reproducibles para estandarizar las guías terapeúticas
•Diagnóstico AP completo
•Calidad de las muestras diagnósticas
ALK fusion
54-yr-old male never-smoker,
adenoca
Interpatient Heterogeneity in the Molecular Characteristics of NSCLC
Patients With the Same Diagnosis and Clinical Features (Stage IV NSCLC)
In 2012:
Most oncologists would agree that these patients have very different malignancies
Most oncologists would agree that these patients should receive different therapy
39-yr-old female
never-smoker, adenoca
EGFR Mt
65-yr-old male smoker,
squamous
KRAS Mt
Demanda de diagnósticos “precoces”, certeros, rápidos y mediante métodos mínimamente invasivos
Biopsias PAAF
Pacientes metastásicos
Desarrollo de las técnicas de imagen
• provide accurate diagnosis • manage the tissue in a way that immunohistochemical and/or molecular studies can be performed •use and integration of immunohistochemical (i.e. TTF-1/p63), histochemical (i.e. mucin stain), and molecular studies
Enero 2008- Enero 2012. CUN-Departamento de Anatomía Patológica
590 CPNM 441 citología (PAAF); 36 con Bx
149 biopsia / resección; 32 con PAAF previa
Líneas
celulares
Immunocitoquímica FISH
Técnicas complementarias en muestras citológicas y biopsias pequeñas
Estudio mutacional
Estudio Molecular
Citometría
de flujo
CD20
Immunocitoquímica
BCL-2
SAMPLE PROCUREMENT IN PATIENTS WITH SUSPECTED METASTATIC MELANOMA
•FINE NEEDLE ASPIRATION
•Direct FNA
•EUS guided FNA
•Bronchoscopy guided FNA
•SURGICAL SPECIMEN IMPRINTS
•EYE IMPRINTS
CYTOLOGICAL DIAGNOSIS BY PATHOLOGIST
• ACCURATE DIAGNOSIS
• IHQ (Melan A, S100, HMB45)
• Select smear for molecular testing containing more than 40% tumour cells.
DNA EXTRACTION
PCR AMPLIFICATION DIRECT SEQUENCING
• Exon 15 of BRAF gene
• Exons 9,11,13 and 17 of c-Kit gene
S-100
Melan A
FINAL REPORT
V600E mutation in BRAF gene L576P mutation in c-Kit gene
Varon 76 años, fumador 80 paq/año Citologia esputo “positiva para ca. Escamoso” Masas pulmonares bilaterales, adenopatías mediastínicas Mts. Hepáticas, óseas, pleurales y cerebrales PAAF con broncoscopio de adenopatías hiliares
2011C1865
2011C1865
TTF-1
p63
Del E746-S752 Exón 19
Del E746-S752 Exón 19
Respuesta parcial a los 6 meses del incio de TKIs
•Mujer 72 años, no fumadora
•Enfermedad diseminada
(origen desconocido)
•Metástasis cerebrales
•Se le había ofrecido
únicamente tratamiento
paliativo
TTF-1
CK-7
PAAF directa de un nódulo supraclavicular
Ac metastásico de probable origen pulmonar
del L747-E749, A750P Exon 19
Tratamiento con TKI (Tarceva)
“...los nuevos test moleculares no son una amenaza para los patólogos, sino una oportunidad para incorporar las nuevas tecnologías y desarrollarlas. Los citopatólogos juegan un papel primordial puesto que se les pide hacer más con menos muestra.....” Naylor and Ramzy, 2003
a todos ! gracias Muchas