EXAMEN CORTO RFLPSBiología Molecular

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VECTORES DE CLONACIÓN Y EXPRESIÓNBiología Molecular

CLONACIÓN GENICA

La clonación genica o clonación molecular, es la introducción de un fragmento de ADN denominado inserto dentro de una molécula de ADN denominada vector, que puede replicarse de manera autónoma e independiente del genoma de la célula hospedera

¿ QUÉ ES UN VECTOR DE CLONACIÓN?

Es una molécula pequeña de ADN que puede replicarse de manera autónoma en un huésped. ( célula bacteriana o de levaduras )Se utilizan en la clonación por que pueden seguir su desarrollo normal a pesar de que secuencias adicionales de ADN sean incorporados en su material genético.

Se auto replican utilizando la maquinaria de la célula huésped.

PLÁSMIDO

Los plásmidos son moléculas de ADN circulares, originalmente aisladas de bacterias y que pueden extraerse de las mismas e incorporarse a otras, a través del proceso de transformación.

Los plásmidos fueron modificados por los investigadores para ser empleados como “vectores”.

Así, el gen de interés puede insertarse en el plásmido-vector e incorporarse a una nueva célula.

PLÁSMIDOPara seleccionar las células (bacterias o células animales o vegetales) que recibieron el plásmido, éste lleva, además del gen de interés (por ej., el gen de la insulina humana), un gen marcador de selección (por. ej., de resistencia a un antibiótico), que le otorga a la célula que lo lleva la capacidad de sobrevivir en un medio de cultivo selectivo (medio con antibiótico, en este ejemplo).

Las células que sobreviven se dividen y generan colonias, formadas por bacterias idénticas

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VECTORES DE AMPLIFICACION

VECTORES DE EXPRESION

BACTERIÓFAGO LAMBDA

• Son virus que infectan naturalmente bacterias y se comportan como parásitos intracelulares obligados que se multiplican haciendo uso de la maquinaria biosintética

• El bacteriófago lambda es el fago más utilizado como vector de clonación

• Presentan cola y son incapaces de replicarse autónomamente por lo que necesitan infectar a la célula para poder hacerlo.

TRANSFECCIÓN

BACTERIÓFAGO LAMBDA

Su genoma consiste de una molécula lineal de aproximadamente 45000 pb, cuyos extremos son 12 nucleótidos, que contienen secuencias complementarias entre sí, denominados sitios cos, que utiliza para “circularizar” su genoma a través de la acción de una ligasa de la célula huésped.

CÓSMIDOSSon vectores híbridos combina las ventajas de plásmidos y fagos

Proporciona la secuencia “cos” que permite el empaquetamiento en cápside vírica

Secuencias plasmidicas de replicación y de genes de resistencia a antibióticos

Emplean la habilidad de las partículas infecciosas del bacteriófago lambda para empaquetar piezas lineales de ADN e introducirlas en las bacterias.

Son vectores que se reproducen de igual manera que los plásmidos en las bacterias.

PASOS EN LA CLONACIÓN DE UN CÓSMIDO

CROMOSOMAS ARTIFICIALES DE BACTERIAS

BACs: contienen genes que reducen su capacidad de copia, es más estable y no sufre reordenamientos

CROMOSOMAS ARTIFICIALES DE LEVADURA

YACs: contiene secuencias de centrómero, telómeros y un origen de replicación

APLICACIONES

Obtención de proteínas de interés médico, comercial, etc...(insulina, hormona del crecimiento, factores de coagulación)

Obtención de vacunas recombinantes(alternativa al uso de organismos patógenos inactivos)

La levadura fabrica las proteínas víricas con poder inmunológico

Inyección de proteínas víricas en un chimpancé

plásmido bacteriano

Integración del plásmido híbrido en el núcleo de una célula de levaduraADN

Extracción del ADN del virus

Plantas transgénicas

tumores

célula vegetal

Proliferación de hormonas crecimiento. Se forman tumores en las zonas de la lesión

Plásmido Ti

núcleo

cromosoma

cromosoma

Agrobacterium

inductor de tumorescontiene oncogenes(genes onc)

Ingeniero genético natural tras sutitución de genes onc por genes de interés

Transgénesis= introducción de ADN extraño en un genoma, de modo que se mantenga estable de forma hereditaria y afecte a todas las células en los organismos multicelulares.

Agrobacterium tumefaciens es patógena de plantas.Produce tumores