citometrÍa de flujo aplicación al estudio de las ......una incidencia de 3 a 5 casos nuevos por...

Detección de enfermedad mínima residual en Mieloma Múltiple por

CITOMETRÍA DE FLUJO

Bioqca. María Belén Venegas

El MIELOMA MÚLTIPLE es una neoplasia que se caracteriza por la proliferación clonal de células plasmáticas que infiltran médula ósea y

producen una inmunoglobulina monoclonal (componente M) que

puede ser detectado en suero u orina.

Presenta la tríada :

*Plasmocitosis medular * Componente M * Lesiones óseas.

Neoplasias de Células Plasmáticas

Who Classification of Tumours of Haematolpoietic and Lymphoid Tissues. 2008: 200-213

Criterios diagnósticos

*Componente M en suero u orina.

* > 10% de CP en M.O o biopsia de plasmocitoma.

*Lesiones tisulares o síntomas relacionados con la proliferación/acumulación de CP. -Calcio elevado en suero (>10,5 mg/dl) -Insuficiencia renal (Creatinina >2mg/dl) -Anemia (Hb <10gr/dl o <2 gr del valor normal) -lesión ósea lítica u osteosporosis.

*Otras disfunciones: síndrome de hiperviscosidad, amiloidosis, infecciones bacterianas recurrentes (más de 2 episodios en 12 meses).

*En ausencia de una banda monoclonal sérica o de cadenas livianas en orina (MM no secretor), es necesario demostrar una infiltración de MO mayor a 30 % de CP monoclonales.

El MM es la segunda neoplasia hematológica más frecuente (13%) y tiene una incidencia de 3 a 5 casos nuevos por cada 100.000 hab/año. La mediana de edad al diagnóstico es de 62 años, con sólo el 15% de los pacientes con menos de 50 años y 2% con menos de 40 años.

MM Sintomático

Utilidad de la CMF en las discrasias de Células Plasmáticas

• Clasificación diagnóstica: diagnóstico diferencial MM vs GMSI

• Evaluación pronóstica:

* N° CP clonales

* Patrones de expresión antigénica.

* Riesgo de progresión de GMSI y de MM indolente.

• Monitoreo del tratamiento (EMR)

Identificación de las CP

CP-N vs CP-MM

CD19 CD27 CD38 CD45

CD28 CD33 CD56

CD20 CD117 IgS

Monitoreo de la terapia: *Detección de Componente M *CLLs

Nuevos tratamientos para Mieloma Múltiple

Tasa de remisión de la enfermedad

Monitoreo del tratamiento

Métodos más sensibles para la detección de EMR

CMF ASO-PCR NGS

MRI-PET/TC

Nuevos criterios para evaluar respuesta al tratamiento

Detección de EMR POR CMF

Ventajas • Alta aplicabilidad

• Rápida

• Relativamente simple

• Alta sensibilidad (“ < 10 -4”)

• Ampliamente disponible

Limitaciones • Infiltración heterogénea

• Calidad de la muestra (hemodilución)

• Muestra fresca (<24hs).

Detección de EMR POR CMF

Ventajas • Alta aplicabilidad

• Rápida

• Relativamente simple

• Alta sensibilidad (“ < 10 -4”)

• Ampliamente disponible

Limitaciones • Infiltración heterogénea

• Calidad de la muestra (hemodilución)

• Muestra fresca (<24hs).

• Menor sensibilidad que métodos moleculares

• Falta de estandarización

Flores-Montero J, Sanoja-Flores L, Paiva B, et al. Leukemia. 2017. doi: 10.1038/leu.2017.29

Protocolo Bulk Lisis

Adquisición de > de 107 células

Calidad de la muestra

(hemodilución)

Mayor sensibilidad

Paiva B, et al. Blood. 2016;127:3165-3174.

NGF vs CMF 4 colores

- + Total

- 55/110 (50%) 18/110 (16%) 73/110 (66%)

+ 3/110 (3%) 34/110 (31%) 37/110 (34%)

Total 58/110 (53%) 52/110 (47%)

NGF vs CMF convencional

Next Generation Flow

CMF convencional


NGF vs NGS

NGF

NGS

- + Total

- 7/27 (26%) 6/27(22%) 13/27(48%)

+ 1/27(4%) 13/27(48%) 14/27(52%)

Total 8/27(30%) 19/27(70%)


NGF


Identificación automática

International Myeloma Working Group (IMWG)

Características individuales de las técnicas actualmente disponibles para monitorear MRD en MM


NGF impacto en PFS

Lahuerta JJ, Paiva B, et al. J Clin Oncol 2017; manuscript accepted

LOD (20 CP-MM en 10 7 células totales)

LOQ(50 CP-MM en 10 7 células totales)

Nuevos criterios para EMR en MM IMWG(2016)

• MRD negative in marrow (NGF or NGS) and by imaging as defined below, confirmed ≥ 1 year apart. Subsequent evaluations can be used to further specify duration of negativity (eg, MRD negative at 5 years)

Sustained MRD negative

• MRD negative as defined below (NGF or NGS) PLUS disappearance of all areas of increased tracer uptake observed at baseline or previous PETs/CTs or decrease to less mediastinal blood pool SUV or decrease to less than that of surrounding normal tissue

Imaging MRD negative

• Absence of phenotypically aberrant clonal PCs by NGF on bone marrow aspirates using the EuroFlow standard operating procedure for MRD detection in MM (or equivalent validated method) with minimum sensitivity of 1 in 105 nucleated cells

Flow MRD negative

• Absence of clonal PCs by NGS on bone marrow aspirates where presence of a clone is defined as < 2 identical sequencing reads obtained after DNA sequencing of bone marrow aspirates using the LymphoSIGHT® platform (or equivalent validated method) with minimum sensitivity of 1 in 105 nucleated cells

Sequencing MRD negative

IMW

G M

RD

Negativity C

rite

ria (

Requir

es C

R)

CR, complete response; CT, computed tomography; IMWG, International Myeloma Working Group; MM, multiple myeloma; MRD, minimal residual disease; NGF, next-generation flow; NGS, next-generation sequencing; PC, plasma cell; PET, positron emission tomography; SUV, standardized uptake value. LymphoSIGHT® is a registered trademark of Sequenta, Inc.

Kumar S, et al. Lancet Oncol. 2016;17:e328-e346.

MUCHAS GRACIAS!!

citometrÍa de flujo aplicación al estudio de las ......una incidencia de 3 a 5 casos nuevos por...

Documents