citocinas elevadas en la fase aguda con el chkv

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIAPASFACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

CAMPUS IV

MATERIA: PROYECTO DE INVESTIGACION IPROPUESTA DE TESIS:

CITOCINAS EN CHIKV FASE AGUDA.

NOMBRE DEL ALUMNO (A):KARLA AREVALO HERNANDEZ

NOMBRE DEL CATEDRATICO:DOCTOR SERGIO ARREVILLAGA DOMINGUEZ.

TAPACHULA CHIAPAS HOY 17 DE SEPTIEMBRE DEL 2015

SEMESTRE: OCTAVO GRUPO: “A”

CITOCINAS EN CHIKV FASE AGUDAANURADHA VENUGOPALAN*, RAVI P. GHORPADE, ARVIND CHOPRA

CENTRO PARA ENFERMEDADES REUMATICA EN PUNE, INDIA. RECIBIDO: 21 DE MAYO 2013; ACEPTADO: 30 DE SEPTIEMBRE 2014;

PUBLICADO: 24 DE OCTUBRE 2014 EN LA REVISTA ISSUE 9(10). doi:10.1371/journal.pone.0111305

Introducción

La chikunguya es una enfermedad viral febril transmitido por 2 vectores, inicia provocando un cuadro agudo, después de 3-7dias de ser infectado presentando como síntomas: (CDC. OPS/OMS 2011)

Mosquito tigre

SINTOMAS VALOR EN %Artralgia (dolor articular) 71 a 100vv%

Fiebre mayor a 39 °C 70 a 100%

Mialgias (dolor muscular) 46 a 72%

fatiga 50 a 70%

conjuntivitis 34 a 50%

Depresion 50 a 70 %

Rash (erupciones en la piel)

28 a 77 %

Cefaleas 17 a 74 %

Nausea con o sin vomito 4 a 59 % Basado a la literatura estandar , citocinas se clasifican en: Th1: IFN α,β, y Y, TNF α, IL-1B, CXCL-10,/10, MCP-1). Y Th2 : ( IL-6, IL-4, IL-10, IL-13) tambien las clasifican como citocinas proinflamatorias e anti-inflamatorias. (Caio Marcio Barros de Oliveira 2011).

IFN α,β, y Y, , TNF α, IL-1B, IL-6, , IL-13, CXCL-10,/10, MCP-1, MCP-1, IL-4, y IL-10 se midieron con el Kit ELISA DUO SET.

El virus del chikunguya:

Es un arbovirus de la familia togovidirae Genero: alfa virus del grupo A . (chopra A, anuradha V. etal (2012)

Estructura de virus chikunguya

Envoltura: una membrana compuesta por lípidos, y glucoproteínas de envoltura . Nucleocapside: capside icosaedrica de 40 nm. (OPS, 2003).

Genoma: ARN + de cadena sencilla la molécula mide 12 kb de longitud. (OPS, 2003).

El CHIKV consta de: 5 proteínas estructurales: ( E1 E2 E3 6K Y C ). 4 Proteínas no estructurales (NSP1, NSP2, NSP3, NSP4 ).

TIENE 3 GENOTIPOS: asiático , áfrica occidental y ECSA (Linaje de cepas africanas , centro y sur ) (Martínez FN, González LJ, e tal 2009) .

tamaño 60 -70 nm

Doble envoltur

a.

AGENTE CAUSAL

CICLO REPLICATIVO DEL VIRUS DEL CHIKUNGUYA

ANTECEDENTES

Un resurgimiento de una cepa africana del CHIKV en 2006 causo una epidemia sin precedentes extendida en el sur de Asia varias regiones vecinas (Chopra A, 2012 )() Leo YS, Chow ALP 2009).

Se realizo una encuesta en la comunidad rural durante la epidemia y reportamos el perfil clinico CHIKV aguda y su secuela MSK. (Chopra A, 2012 ).

Estabamos intrigados por la enorme intensidad del dolor MSK y pilialtralgias la mayoria de los casos se recuperaba 3 semans despues de la infeccion (Brihton SW 2014 ).

OBJETIVOS

Es realizar un ensayo de citocinas seleccionadas el propósito es examinar algunas de las correlaciones y los patrones de regulación positiva de citocinas inmunes patológicas.

Obtener el perfil de citocinas de los casos examinados en las cuatro semanas del inicio de la enfermedad.

A) Poblacion de estudio: Sintomatico:Fase aguda ( 0 a 5 dias).Fase subaguda(6 a 14 dias).Fase extendidas( 15 a 30 dias).Asintomaticos:RecuperadosControles sanos

B) Lugar de estudio: poblacion rural durante la epidemia de la india de CHIKV en 2006 en BAVI ( pueblo en el distrito de SHOPAPUR) estado maharahtra india occidental (Chopra A, 2012)(2).C) Criterio de inclusion: todos los pacientes con diagnostico de CHIKV D) Criterio de exclucion : se excluia a los paciente con otras enfermedades, E) Se les aplica una carta de conocimiento informada.F) Tipo de estudio: cohorte es un estudio epidemiológico, observacional, analítico, longitudinal prospectivo, en el que se hace una comparación de la frecuencia de enfermedad (o de un determinado desenlace) entre dos poblaciones,

F)Analisis estadistico:

Calculos SPSS version 12.0 Análisis no paramétrico con kruskal – wallis (para diferenciar citocinas) Coeficiente de correlación de Pearson .

Se realizo un análisis de regresión lineal para determinar predictores de resolución de síntomas dentro de un mes del estudio de cohorte.

METODOLOGIA

https://es.wikipedia.org/wiki/Estudio_epidemiol%C3%B3gico

https://es.wikipedia.org/wiki/Estudio_observacional

https://es.wikipedia.org/wiki/Estudio_anal%C3%ADtico

https://es.wikipedia.org/wiki/Enfermedad

POBLACION OBJETIVON:1650

CASOS CON CHIKV N:437

183(MUESTRAS DE SANGRE RECOGIDAS)

CASOS SINTOMATICOSN: 437

183(42%) MUESTRAS DE SANGRE RECOGIDA

CASOS RECUPERADOSN:72

49(58%) MUESTRAS DE SANGRE RECOGIDAS

SUJETOS SIN CHIKVN:683


POBLACION PROYECTADA(Sep 2006- Nov 2006)

N: 1192(72%)

4 SEMANA CON LA ENFERMEDAD 31 CASO


4 SEMANAS CON LA ENFERMEDAD41 CASOS

20( 49%) MUESTRAS DE SANGRE RECOGIDAS

4 SEMANAS CON LA ENFERMEDAD122 CASOS73 (60%) MUESTRAS DE SANGRESRECOGIDAS

4 SEMANAS CON LA ENFERMEDAD315 CASOS110(35%) MUESTRAS DE SANGRESRECOGIDAS

FASE DE LA ENFERMEDAD AGUDA.

23 (21%)MUESTRA DE SANGRE RECOGIDA

FASE DE LA ENFERMEDAD AGUDA.

22 (20%)MUESTRA DE SANGRE RECOGIDA

SINTOMATICO PROLONGADO DE LA ENFERMEDAD AGUDA65 (59%) MUESTRA DE SANGRE COLECTADA

FIGURA1. numero de casos identificados y muestras de sangre recogidas durante la encuesta y en el posterior periodo de seguimiento.

Él suero se almaceno a – 80 °c

Las muestras se obtuvieron asépticamente

Se examino frotis para excluir el parasito dela malaria

Se realizo VSG en tubos wintrobe

caída a 1 hora.

Se realizo proteína C reactiva utilizando nefelometría.

Metodologia

Anti CHIKV Igm E Igg.

inmunocromatografiae inmunoflueresencia indirecta.

KIT ELISA DUOSET CITOCINAS:

Th1: (IFN α,β, y Y. TNF α, IL-1B, CXCL-10,/10, MCP-1).

TH2: ( IL-6, IL-4, IL-10, IL-13).

Elisa sándwich para medir las citocinas naturales y recombinantes.

Suero de pacientes -80 °c:

PRUEBA

AGUDA (N = 23)*

SUBAGUDA (N = 22)*

SIMTOMATICO EXTENDIDO (N = 65)*

SIMTOMATICO TOTAL (N = 110)*

RECUPERADO (N = 22)*

N (%) N (%) N (%) N (%) N (%)

CHIKV IgM + 4 (17%) 12 (55%)

40 (62%) 56 (51%) 7 (32%)

CHIKV IgG+ 12 (52%)

3 (100%)

2 (13%) 17 (40%) 8 (50%)

CHIKV IgM+IgG- 1 (4%) 0 10 (63%) 11 (26%) 2 (13%)CHIKV IgM-IgG+ 9 (39%) 1 (33%) 0 10 (24%) 4 (25%)CHIKV IgM+IgG+ 3 (13%) 2 (67%) 2 (13%) 7 (17%) 4 (25%)CHIKV IgM-IgG- 10

(43%)0 4 (25%) 14 (33%) 6 (38%)

PCR (>6 mg/L) 6(26.1%)

2 (9.1%) 8 (12.3%) 16 (14.5%) 4 (18.2%)

FR (>40 IU/ml) 2 (8.7%)

0 3 (4.6%) 5 (4.5%) 0

ANA 1 (4.3%)

1 (4.5%) 3 (4.6%) 5 (4.5%) 2 (9.1%)

TABLA 1: Perfil serológico de frecuencia de resultado positivo de los casos sintomáticos (N = 110 ) con casos recuperados (N = 22 ) de CHIKV con enfermedad dentro de un mes de duración .

PCR = proteína C reactiva ; RF = Factor reumatoide ; ANA = Anticuerpo antinuclear

.Nota : Anti CHIKV IgM fue probado en todo el 110 sintomático y 22 sujetos recuperados ; Anti IgG CHIKV solamente se probó en 42 sujetos sintomáticos ( aguda = 23 ; subaguda = 3 y ampliado sintomática = 16) y 16 sujetos recuperados ;

RESULTADOS

Figura 2: se muestra la dispersión de ensayos de diversas citocinas en suero de los casos de CHIKV con 1 mes con la enfermedad sintomático (n=110), recuperados (22), comparando con controles sanos, la mediana que se muestra como barritas horizontales fue mayor (p<0.05) en el cohorte de estudio sintomático y recuperado. Los ensayo de suero para TNF-a, IL-6, IL-13, CXCL-10/IP-10, fueron mayores en el grupo recuperado.

CITOCINAS

FASE AGUDA

FASE SUBAGUDA

FASE SINTOMATICO EXTENDIDA

TOTAL SINTOMATICO

RECUPERADO

CONTROLES SANOS

(PG./ML) N = 23 N = 22 N= 65 N = 110 N = 22 N = 80 14.16 MEDIANA 5.71 4.68 9.61 1.58IFN-A [23.51] D ESTANDAR [0.26] [0.40] [22.32] ND [0.50] (8.90–4.90) R

INTERCUARTILIGO(5.37–5.82) (4.40–5.16) (5.84–28.42) (1.15–1.90)

112.57 MEDIANA 46.24 38.11 76.00 13.36IFN-B [191.88] D ESTANDAR [2.57] [3.43] [181.64] ND [3.92] (70.10–390.40) R

INTERCUARTILICO (43.11–47.82) (35.28–41.70) (48.26–227.99) (9.82–16.25)

85.24 MEDIANA 29.33 26.84 37.70 15.82 1.72IFN-Y [476.59] D ESTANDAR [201.56] [329.49] [348.42] [86.18] [153.13] (30.61–416.17) R

INTERCUARTILICO(10.02–76.40) (8.34–127.36) (9.62–133.69) (0.64–97.57) (0.88–8.22)

71.44 MEDIANA 61.81 66.15 65.65 79.48 2.65CXCL-10/IP-10

[277.41] D ESTANDAR [118.57] [93.85] [161.87] [111.97] [21.44]

(21.76–415.95) R INTERCUARTILICO

(6.09–97.82) (5.98–99.86) (6.67–107.23) (31.79–149.04) (2.06–3.96)

11.15 MEDIANA 8.56 8.19 10.44 4.92IL-1B [1.49] D ESTANDAR [0.32] [0.18] [1.82] ND [1.34] (10.02–12.44) R


90.99 MEDIANA 94.30 107.54 97.20 257.88 20.65TNF-A [26.12] D ESTANDAR [60.38] [231.76] [355.80] [475.71] [328.60] (18.01–188.33) R

INTERCUARTILICO(4.2–1959.1) (57.79–276.20) (53.05–229.05) (60.69–610.03) (11.73–50.51)

1576.40 MEDIANA 1218.88 1869.23 1605.09 32.23MCP-1 [541.83] D ESTANDAR [584.95] [776.26] [570.59] ND [76.45] (1333.64–1892.25) R

INTERCUARTILIGO(514.56–1608.27)

(711.79–1955.56) (1254.59–1892.25) (18.31–58.73)

119.58 MEDIANA 392.57 170.53 137.94 1.00IL-4 [89.36] D ESTANDAR [34.10] [24.26] [111.85] ND [0.61] (88.98–249.31) R


172.39 MEDIANA 233.74 250.93 235.07 501.16 33.40IL-6 [230.68] D ESTANDAR [142.59] [197.89] [194.47] [203.08] [354.81] (29.19–513.40) R

INTERCUARTILIGO(103.16–278.85)(86.60–498.81) (82.21–456.99) (224.57–557.53) (8.46–472.96)

13.12 MEDIANA 46.12 72.97 17.44 1.98IL-10 [43.88]D ESTANDAR [22.11] [11.87] [41.47] ND [0.87] (6.46–22.05) R


581.34 MEDINANA 449.69 576.09 558.63 751.61 177.77IL-13 [46.63] D ESTANDAR [345.68] [939.43] [784.39] [1315.41] [688.76] (420.15–780.05) R

INTERCUARTILIGO(427.82–830.07)(461.38–1093.22) (440.37–856.74) (606.44–835.81) (142.29–212.07)

Tabla 2. perfil de citoquinas de los casos con enfermedad CHIKV el plazo de un mes de duración (N = 110 ) .

TABLA 3COEFICIENTE DE CORRELACIONES POSITIVAS DE PEARSON SIGNIFICATIVAS ENTRE LAS CITOCINAS Y LAS VARIABLES CLÍNICAS Y DE LABORATORIO SELECCIONADOS. DÉBIL (0.1 A 0.3) MODERADA (0.4 A 0.6) FUERTE (0.7 A 0.9) PERFECTO (1.0).

CITOCINAS FASE AGUDA

FASE SUBAGUDA

Extended FASE SINTOMATICA

RECUPERADO total

(pg./ml) n = 23 n = 22 n = 65 n = 22 N = 132 IFN-b (1.00) IFN-b (1.00)IiFN-a IL-1b (0.94) ND ND ND IL-1b (0.90) CXCL-10/IP-10

(0.59) CXCL-10/IP-10 (0.51)

IiFN-b CXCL-10/IP-10 (0.50)

ND ND ND CXCL-10/IP-10 (0.52)

Fatigue (0.42) Pain Intensity (0.23) CXCL-10/IP-10

(0.45)– Recuento de plaqueta

(0.35)Bajo dolor de cabeza (0.48)

CXCL-10/IP-10 (0.18)

IiFN-y MCP-1 (0.65) CXCL-10/IP-10 (0.25) TNF-a (0.51 MCP-1 (0.74) IL-6 (0.31) IL-13 (0.18) CHIKV-G (0.83) TNF-a (0.24)CXCL-10/IP-10 pro IL-6 (0.57) Cantidad plaqueta

(0.52)CHIKV-G (0.58) – IL-10 (0.37)

IL-6 (0.62) IL-6 (0.39) IL-13 (0.45) Fatigue (0.47)IiL-1b CXCL-10/IP-10

(0.61)ND ND ND CRP (0.37)

CXCL-10/IP-10 (0.41) Headache (0.20)TNF-a pro IL-6 (0.48) Dolor de cabeza

(0.48)IL-6 (0.60) hemoglobina (0.44) IL-6 (0.61)

IL-13 (0.23) Platelet Count (0.41)MCP-1 pro – ND ND ND TLC (0.37) R Gender (0.38)iIL-4 CHIKV-M (0.58) ND ND ND Myalgia (0.47) IL-10 (0.85)IiL-6 CRP (0.54) CHIKV-G (0.72) CHIKV-G (0.53) – Skin Rash (0.19) R Gender (0.48) CANTIDAD LEUCOCITOS

TOTALES (0.51) IL-13 (0.26)

IL-13 – Dolor de cabeza (0.52)

CRP (0.28) – –

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4208842/table/pone-0111305-t003/

TABLA 4COEFICIENTE DE CORRELACIONES NEGATIVAS DE PEARSON SIGNIFICATIVAS ENTRE LAS CITOCINAS Y LAS VARIABLES CLÍNICAS Y DE LABORATORIO SELECCIONADOS. DÉBIL (-0.1 A - 0.3) MODERADA (-0.4 A - 0.6) FUERTE (-0.7 A -0.9) PERFECTO (-1.0). Mientras una se eleva la otra citosina baja.

CITOCINAS

FASE AGUDA

FASE SUBAGUADA

FASE SINTOMATICA EXTENDIDA

RECUPERADOS TOTAL

(PG/ML) N = 23 N = 22 N = 65 N = 22 N = 132IFN-A IL-4 (-0.73) ND ND ND CHIKV-IGM (-0.51) IL-10 (-0.44) MYALGIA (-0.37) IL-4 (-0.69) IL-10 (-0.51)IFN-B IL-4 (-0.73) ND ND ND MYALGIA (-0.37) IL-10 (=0.44) CHIKV-IGM (-0.50) IL-4 (-0.68) IL-10 (-0.51)IFN-C – – DOLOR DE CABEZA (-

0.27)– –

CXCL-10/IP-10 TOTAL DE LEUCOCITOS (-

0.51)– – – –

MCP-1 (-0.54) IL-4 (20.52) IL-1B IL-4 (-0.86) ND ND ND CHIKV-M (-0.69) IL-10 (-0.56) IL-4 (-0.77) CHIKV-IGG (-0.49) IL-10 (-0.62)TNF-A HEMOGLOBINA (-0.47) TOTAL DE

LEUCOCITOS(20.56)

– EDA ANO (-0.49) –

MYALGIA (-0.48) MCP-1 RECUENTO DE PLAQUETAS(-

0.54)– – – –

GENERO (-0.51) IL-6 (-0.45)

IL-4 IL-6 (-0.42) ND ND ND –

IL-10 IL-6 (-0.45) ND ND ND –


Tabla 5Comparación del perfil de citoquinas en los casos CHIKV con controles sanos en diferentes estudios informó.

citocinas/ quimiocinas.

aguda (n = 23)

Subaguda (n = 22)

Sintomatico extendido (n = 65)

2–19 dias(n = 10)

aguda (n = 35)

aguda (n = 6)

RA(n = 105)

IFN-a 8.9 3.6 3.0 15 ND ND 2.8

IFN-b 8.4 3.5 2.9 ND ND ND ND

IFN-c 50.1 17.2 15.8 + 0.9 ND 2.7

CXCL-10/IP-10

26.9 23.3 25.0 1000 2.3 33.9 1.2

IL1-b 2.3 1.7 1.7 + 0.82 ND 4.9

TNF-a 4.4 4.6 5.2 + 1.5 ND 3.7

MCP-1 49.0 37.9 33.2 ND ND 1.9 1.1

IL-4 108.7 392.6 170.5 + 0.07 ND 6.5

IL-6 3.8 7.0 7.5 4.0 2.0 196.7 9.3

IL-10 6.4 23.1 38.5 15 0.4 1.9 3.3

IL-13 3.3 2.5 3.2 + ND ND 10

estudio actual (HC=80 NG et al 2009 (HC= 9)

Kelvin et al 2011 (HC=10)

chaaithanya etal. 2011(HC=6)

el-gabalawy etal 2012 (HC=200) (HC=200)

Los valores expresados como proporción de las medianas de los casos a los controles.IFN-interferón; Factor de Necrosis Tumoral TNF =; CXCL-10 / IP-10 = inducida por interferón gamma Protein-10; IL = interleucina; MCP = quimiotáctica de monocitos proteína. HC = controles sanos; ND = No Hecho; + = Más alto que los controles sanos; Nota: En el estudio actual, el IFN-α, IFN-β, IL-1β, MCP-1, IL-4 e IL-10 se pusieron a prueba en 4 temas de sub- fase aguda y de extenderse fase sintomática. Todas las otras citoquinas se probaron en 23, 22 y 65 sujetos de la fase sintomática aguda, sub-aguda y extendida, respectivamente


CONCLUSIONES

Un intenso numero de citoquinas fue evidente en la fase aguda y persistente en sujetos recuperados .

En la fase sintomática temprana persistente IgM y menor cantidad IgG a anti- CHKV.

intenso fenotipos de citocinas Th2 parecen ser asociado con el retraso en la resolución de los síntomas MSK .

Curiosamente, citocinas como máximo TNF -α, IL- 6 e IL- 13 y baja IGM anti-CHIKV, la respuesta se encuentra en los sujetos se recuperados del CHIKV con plazo de un mes con la enfermedad .

citocinas elevadas en la fase aguda con el chkv

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