autor: br. peralta tingal elena elizabeth asesor: dr. q.f

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y

BIOQUIMICA

VALIDACION DEL METODO ANALITICO PARA LA

DETERMINACION DE AMILASA EN EL LABORATORIO

QUINTANILLA S.R.L.

INFORME DE INTERNADO

PARA OPTAR EL:

TÍTULO

DE QUÍMICO FARMACÉUTICO

AUTOR: Br. PERALTA TINGAL ELENA ELIZABETH

ASESOR: Dr. Q.F. PEDRO MARCELO ALVA PLASENCIA

TRUJILLO – PERU

2009

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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DEDICATORIA

A Dios

Porque siempre me guíe e ilumina, agradezco infinitamente por

darme el coraje para seguir adelante.

Te llevo siempre en mi vida y en todo momento…

A mi mamita Lidia

Por su amor incondicional

Me enseñaste el valor de la verdad y confiaste en mí

Gracias por tu apoyo, escuchar tus palabras me llenaron de

coraje para seguir adelante. Te quiero mucho

A mi papito Segundo

Por su apoyo incondicional

Por hacerme sentir fuerte para cumplir mis metas

Gracias de todo corazón, espero nunca defraudarte y ser motivo

de orgullo. Te quiero mucho



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ii

A mi esposo Oliverio

Por ser mi amigo y compañero de vida

Gracias por tu apoyo constante e incondicional, por creer en mí

y hacerme sentir importante, por tu cariño, paciencia y

comprensión, sé que siempre estaremos juntos para apoyarnos.

Te amo

A mi pequeñita Milagros

Por ser la razón de mí existir

Tú llenaste mi vida de dicha e ilusiones. Gracias por ser tan

pequeña y entenderme, por tu cariño, tus abrazos y tu alegría.

Mi vida no sería jamás la misma sin ti. Le ruego a Dios

siempre tengas salud y felicidad.

Te amo



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JURADO DICTAMINADOR

Mg. Q.F. Nelly Jave M. (Presidente)

Mg. Q.F. Jesús Gallardo M. (Miembro)

Dr. Q.F. Pedro Alva P. (Miembro)



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PRESENTACIÓN

Señores miembros del jurado:

Dando cumplimiento a lo establecido por el Reglamento de Grados y

Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional

de Trujillo, someto a vuestra consideración y elevado criterio profesional el

presente informe internado intitulado “Validación del método analítico para

la determinación de amilasa, en el Laboratorio Quintanilla S.R.L”., para

optar el Grado de QUÍMICO FARMACEÚTICO.

Es propicia esta oportunidad para manifestar mi más sincero

reconocimiento a nuestra Alma mater y toda su plana docente que, con su

capacidad y voluntad, contribuyen con mi formación profesional.

Dejo a vuestro criterio señores miembros del jurado dictaminador la

calificación del presente Informe de Internado.

Trujillo, Julio del 2009.

Peralta Tingal Elena Elizabeth



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v

RESUMEN

La validación del método analítico para la determinación de Amilasa se realizó en el

Laboratorio Quintanilla S.R.L – Clínica Peruano Americana. Antes de dar inicio a la

validación se realizó la calificación del Fotómetro BPC BioSed, que incluye: a)

Calificación de la instalación (IQ), b) Calificación Operacional (OQ) y c) Calificación

de la Performance (PQ). Los parámetros validados fueron: Linealidad, Repetitividad,

Precisión intermedia y exactitud, en 2 niveles; parámetros que se deben realizar

para una validación Tipo I, según la USP XXII. De los parámetros evaluados

estadísticamente, se comprobó que no existe diferencia significativa en ambos

niveles, así se puede utilizar 500 ul reactivo, con 10 ul de muestra bajo las mismas

condiciones; es lineal nivel 1 y 2 (> 0.990); Preciso nivel 1 y 2 (C.V < 4.0 %); exacto

nivel 1 y 2 (texp < ttab).

Palabras clave: Linealidad, Precisión, Exactitud



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ABSTRACT

The validation of the analytical method for the determination of amylase was made

in the Quintanilla Laboratory S.R.L. yields of the American Peruvian Clinic. Before

beginning the validation, photometer BPC BioSed qualification was made, it

includes: a) qualification of the installation (IQ), b) operational qualification (OQ) and

c) performance qualification (PQ). The validated parameters that must be made for

a validation type I, according to USP XXII. From the statistically parameters

evaluated, it was verified that significant difference in both levels does not exist,

That way 500 ul can be used reactive, with 10 sample ul under the same

conditions; Level is linear 1 and 2 ( > 0,990 ); Precise level 1 and 2 ( C.V < 4,0 % );

Exact level 1 and 2 ( texp < ttab ).

Key words: Linearity, Precision, Exactness



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ÍNDICE

PAGINAS PRELIMINARES

Dedicatoria………………………………………………………………………………….…… i

Jurado dictaminador …………………………………………………………….………… iii

Presentación…………………………………………………………………………………… iv

Resumen……………………………………………………………………………….………… v

Abstract………………………………………………………………………………..………… vi

INTRODUCCIÓN………………………………………………………………......……………1

MATERIAL Y MÉTODO…………………...…………………………………………..………5

RESULTADOS ……………………….…………………………………………………..……19

DISCUSIÓN……………………………………………………………........…………...……25

CONCLUSIONES……….…………………………………………………….……….………28

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………….………….…………….…29

ANEXOS……………………………………………………………………..…………….….…32



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UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

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- 1 -

I. INTRODUCCIÓN

En el mundo actual donde el interés de las industrias es mantener

controladas todas las variables que intervienen en los procesos productivos,

toman particular importancia los procesos de validación como una herramienta

importante para asegurar la trazabilidad de cada una de las variables que

intervienen en un proceso 7,14.

Para cualquier empresa es de suma importancia contar con sistemas que

demuestren que el producto o servicio final es de calidad. Esto toma una

relevancia aún mayor en un laboratorio de análisis clínicos, en donde deben

contarse con los estándares de calidad adecuados, de lo contrario pudiese tener

consecuencias que perjudiquen al paciente. Debido a esto, en los últimos años ha

tomado fuerza el concepto de “Aseguramiento de la Calidad”, que no es otra cosa

que demostrar que lo que declara de calidad, efectivamente lo posea 11,15.

La validación es la herramienta que nos da la certeza de tener un proceso

más eficiente y con menor ocurrencia de reprocesos y pérdidas. La validación es,

por lo tanto, un procedimiento claramente diseñado para establecer en forma

documentada que un sistema, un equipo, un proceso de producción o una

metodología analítica de control de un producto, cumple con los parámetros de

calidad especificados 2,3.

Para implementar un plan de validación es necesario un trabajo en conjunto

de las distintas áreas de un laboratorio, además, la colaboración y capacitación

del personal encargado. Por esta razón, el personal debe estar debidamente

entrenado y consciente que su trabajo es una gran responsabilidad 6,11.



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- 2 -

El hecho de contar con los procesos validados no sólo significa para un

laboratorio tener procesos de calidad que le permitan garantizar el proceso, sino

también significa un valioso ahorro en tiempo y dinero, ya que se minimizan los

riesgos de errores generados durante el proceso 1,3.

Durante la evaluación de la competencia técnica de los laboratorios clínicos,

la demostración de la validación y verificación de los procedimientos de examen

requiere la aplicación de criterios técnicos uniformes y consistentes 4.

La calidad de los servicios se apoya en la confiabilidad y uniformidad de las

mediciones, cuyo fundamento está establecido en la trazabilidad y en la

evaluación de la incertidumbre de las mismas 10.

Todo lo que se puede medir se puede controlar. Las mediciones recopilan

datos cuyas mediciones generan datos cuya evaluación constituye una de las

funciones más importantes de un sistema de calidad que pueden usarse

efectivamente para el control de procesos. Entre otros, la medición sistemática

puede tener los siguientes propósitos: a) Verificar la conformidad frente a los

requisitos (eficacia), b) Determinar la eficiencia de un proceso (competencia), c)

Suministrar datos con los que se hará un análisis de base (validación) 5.

Las amilasas son enzimas que degradan moléculas hidrocarbonadas

complejas en componentes más pequeños. La amilasa es producida por el

páncreas exócrino y las glándulas salivales para ayudar a digerir el almidón.

También se ha detectado la presencia de amilasa en hígado, trompas de Falopio,

músculo estriado, tejido adiposo, y leche humana. La determinación del nivel de

amilasa sérica se utiliza fundamentalmente para hacer el diagnóstico de

pancreatitis aguda. En este caso, se observa casi siempre un aumento en las



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- 3 -

primeras doce horas, alcanzándose el máximo después de veinte a treinta horas

de producido el ataque. El aumento de la amilasa urinaria esta retardado unas

seis a diez horas frente a la amilasa sérica. La amilasa sérica también esta

aumentada en: afecciones que producen bloqueo de la secreción salival como

parotiditis y paperas, úlcera péptica perforada, obstrucción intestinal, pancreatitis

crónica, carcinoma de cabeza de páncreas, colecistitis y apendicitis 18.

Para desarrollar la validación de la amilasa se aplican ciertos parámetros:

Linealidad, precisión y exactitud; estos parámetros se aplican sobre el analito

para determinar si el método cumple con las especificaciones y los resultados

que se obtengan sean confiables y puedan constituir un apoyo diagnóstico a la

salud de los pacientes

La exactitud expresa el grado de proximidad entre el valor que es aceptado

convenientemente como el valor verdadero, valor nominal, teórico o un valor de

referencia y el valor encontrado experimentalmente. Es la capacidad del método

analítico para proporcionar resultados lo más cercanos posibles al valor teórico o

nominal. Matemáticamente se expresa como el valor numérico del error

sistemático (diferencia entre el valor medio hallado y el verdadero) o bien como el

error relativo porcentual.

La Linealidad mide Capacidad del método para proporcionar resultados que

son directamente o por medio de transformaciones matemáticas proporcionales

a la concentración del analito en la muestra dentro de un rango establecido

La Precisión mide la capacidad de un método para proporcionar resultados

próximos entre sí, grado de dispersión de los resultados analíticos respecto a su

valor medio. Se puede estudiar a 2 niveles: La Repetitividad evalúa la precisión



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- 4 -

del método efectuando una serie de análisis sobre la misma muestra en las

mismas condiciones operativas (aparatos, reactivos, analistas) en un mismo

laboratorio y un periodo de tiempo cero; la Precisión intermedia evalúa la

precisión del método frente a las variaciones internas del laboratorio (analito, día,

instrumento, etc).

La validación demuestra que, siguiendo las actividades de un proceso tal y

cómo están descritas, se puede obtener un producto con los requisitos

especificados, ya que cada una de las etapas del proceso es diseñada y

controlada para tener la máxima seguridad que el producto cumple con las

especificaciones 9,15.

Los resultados obtenidos en el presente informe demostraron que el método

es lineal en el intervalo de las concentraciones de 50 % hasta el 150 % de la

muestra; preciso porque cumple la repetitividad (Nivel 1: C.V 2.0384 % y Nivel 2:

0.8572) y precisión intermedia (Nivel 1: C.V 1.5780 %, Nivel 2: 0.7260 %); exacto

porque no hay diferencia significativa entre la recuperación media (Nivel 1:

100.53 % , Nivel 2: 100.01) y el 100 % teórico.

Por lo tanto, al determinar los parámetros de validación, concluimos en dar

como validado al método analítico para la determinación de amilasa, en el

laboratorio quintanilla S.R.L.



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- 5 -

II. MATERIAL Y MÉTODOS

1. MATERIAL

1.1 MUESTRA

Standartrol Wiener 2 niveles, a partir del cual se obtuvieron las

concentraciones deseadas.

1.2 MATERIAL DE LABORATORIO

Baño María

Pipetas volumétricas de 5 mL

Micropipetas de 10 – 100 uL “Boeco”

Puntas descartables

Cronómetro

Calculadora

Tubos de vidrio

Guantes descartables

1.3 EQUIPOS

Los equipos fueron calibrados y verificados

Fotómetro automático BPC Biosed

Marca: “PRIME”

Calificación de la instalación: Enero 2009

Calificación de la operación: Enero 2009

Calificación de la Performance: Febrero del 2009



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1.4 REACTIVOS

Amilasa

Nombre: Amilasa 405 A

Fabricante: Wiener Lab (Argentina)

Lote: 0804007252

Vencimiento: 08/2009

Contenido del Kit de muestras: 3 x 10 mL

Composición

Sol. Contenida CNP – G3 2.25 mmol/l, acetato de calcio 6 mmol/l,

NaCl 70 mmol/l, tiocianato de potasio 90 mmol/L y Buffer MES pH 6,

mmol/l

Standartrol 2 niveles

Nombre: Standartrol 2 niveles

Fabricante: Wiener Lab (Argentina)

Lote: 0801002740

Vencimiento: 05/2009

Contenido del Kit de muestras: 3 x 5 mL

Composición

Standartrol S – E Nivel 1 (Normal): Suero homogeneizado y liofilizado

en viales para 5 mL con concentraciones normales o en los niveles

de decisiones médicas de metabolitos y enzimas

Standartrol S - E Nivel 2 (Patológico): Suero homogeneizado y

liofilizado en viales para 5 mL con concentraciones patológicas o en

los niveles de decisiones médicas de metabolitos y enzimas



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- 7 -

2. MÉTODO

2.1. DESARRROLLO DE PARÁMETROS EVALUADOS PARA LA VALIDACIÓN DEL

MÉTODO

Para validación el método analítico utilizado para la determinación de

amilasa, se tomaron los parámetros adecuados según criterios de

validación que aparecen reportados en la USP

Según la USP XXII, los métodos analíticos se clasifican en varias categorías

para su validación. Los métodos que son objeto de estudio en el presente

trabajo pertenecen a la categoría I y se clasifican como “Métodos

cuantitativos para la determinación de un analito”. Los parámetros de

validación que se deben considerar varían según la literatura consultada

para este tipo de métodos debe evaluarse: Linealidad, precisión y

exactitud.

A. Linealidad

Para evaluar la linealidad se procesaron 3 concentraciones

conocidas (50 %, 100 %, 150 %) del standartrol – 2 niveles, cada

uno por triplicado y por un mismo analista.

B. Precisión

Para determinar la Precisión del método, se tomaron en cuanta 2

parámetro: Repetibilidad y Precisión intermedia, que a continuación

se detalla:

Repetitividad

Se realizaron un número de 10 determinaciones del

standartrol en ambos niveles por un mismo analista, el mismo



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- 8 -

día, con los mismos reactivos y los mismos instrumentos de

medición.

Precisión intermedia

Se realizaron 10 determinaciones del standartrol en ambos

niveles, por 2 analistas diferentes, en días diferentes, pero con

los mismos reactivos y los mismos instrumentos de medición.

C. Exactitud

Se evaluó, tomando 3 concentraciones conocidas en ambos niveles,

se procedió según técnica y cada proceso por triplicado

2.2. PROCEDIMIENTO

A. Fundamento del Método:

La α-amilasa hidroliza el sustrato definido 2 – Cloro – p - nitrofenil

– α – D - maltotriósido (CNP), formándose 2 – cloro – nitrofenil – α

– D - maltósido (CNP –G2), maltotriosGa (G3) y glucosa. El CNP

absorbe a 405 nm y a la velocidad de aparición del color es

directamente proporcional a la actividad enzimática.

El uso de este sustrato definido, sustancia de estructura y peso

molecular conocido, posibilita la expresión de los resultados en U/I

y no requiere enzimas auxiliares.

Cada una de las determinaciones realizadas fue efectuada

empleado la técnica descrita en el inserto del Kit de reactivos; el

cual se describe a continuación:

- Preincubar 1 mL de Reactivo por 3 min. – Baño María–37º C

- Luego agregar 20 uL de muestra, agitar y mezclar bien

- Leer inmediatamente a 405 nm



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- 9 -

2.3. CALIFICACIÓN INSTRUMENTAL DEL FOTÓMETRO AUTOMÁTICO “PRIME”

La calibración del equipo con el cual se desarrolló la validación del método

analítico, es comprobar formal, sistemática y documentadamente de que el

equipo es el adecuado para los fines previstos, de tal forma se procede a la

calibración del equipo.

La validación del Fotómetro automático BPC Biosed “PRIME” es la

verificación del rendimiento del instrumento elegido para la técnica

analítica en particular, así como el software y el hardware que lo controla.

A. Calificación de la instalación (IQ)

Es la verificación documentada de que todos los aspectos claves de

la instalación están de acuerdo con las recomendaciones del

fabricante y corresponden a las especificaciones aprobadas en el

diseño

B. Calificación Operacional: (OQ)

Es la verificación de que los equipos funcionan en la forma

esperada y son capaces de operar satisfactoriamente; sobre todo

en el rango de los parámetros operacionales para los que han sido

diseñados. Se realiza por un técnico calificado (los parámetros

sobre los problemas y posibles soluciones, se pueden observar en

el anexo II del presente trabajo

C. Calificación de la performance (PQ)

Se realiza para demostrar la reproducibilidad del proceso bajo

condiciones normales de operación y bajo condiciones limites de

operación. Se verifica por el usuario, trabajando con estándares

certificados.



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- 10 -

2.4. ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Para asegurar que los diferentes procedimientos de validación se

encuentran dentro de los límites establecidos.

2.4.1 EVALUACION ESTADÍSTICA DE LA LINEALIDAD

2.4.1.1 Cálculos de los parámetros de Regresión

a. Ecuación de la Recta de Regresión

Con los datos obtenidos en este ensayo se procedió a

elaborar la recta de regresión, la cual tuvo la siguiente

fórmula:

abxy

Donde:

ordenadas de eje elcon regresión de recta la de Intercepto a

regresión de recta la de Pendiente b

utilizadas muestras las deón Cocentraci x

niveles- 2 lStandartro departir a obtenidas Lecturas y

b. Fórmula empleada para calcular la pendiente o

coeficiente de regresión (b)

La pendiente o coeficiente de regresión fue

determinada empleando la siguiente fórmula:

n

xx

n

yxxy

b2

2

Donde:

ionesdeterminac de Número n

obtenidas Lecturas y

utilizadas muestras las deión Concentracx



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- 11 -

c. Fórmula empleada para el cálculo del intercepto (a):

n

xbya

d. Fórmula empleada para el Calculo del coeficiente de

Correlación (r):

n

yy

n

xx

n

yxxy

r2

2

2

2

e. Fórmula empleada para el Calculo del coeficiente

Determinación (r2)

22 )(rr



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- 12 -

2.4.1.2 Cálculos efectuados en el test de linealidad de la

Pendiente b

a. Cálculo del Test de Regresión (t de Student) para el

Coeficiente de Correlación

Se calcula el valor de regresión (Test de regresión) con

n – 2 grados de libertad y un intervalo de confianza de

95 % (α=0.05), luego se compara con el valor de la ttabla

(t tabulado) para el nivel de confianza requerido

)1(

)2(

2r

nrtregresion

Donde:

nCorrelació de eCoeficient :r

ionesdeterminac de Número :n

b. Cálculo del valor de la varianza residual( (2,yxS )

2

2

2,

n

xybyayS yx

Donde:

onesdetremiaci de nº n

abcisas de eje elcon Intercepto

regresión de recta la de Pendiente

a

b

c. Cálculo del valor de la varianza de la pendiente b (2bS )

n

xx

SS

yxb 2

2

2,2

)(



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- 13 -

d. Cálculo del valor de la desviación estándar de la

pendiente b (Sb)

Se obtuvo a partir del valor de la varianza de la

pendiente b

2bb SS

e. Fórmula empleada para determinar el Intervalo de

Confianza de la pendiente:

btsbCI .

Donde:

b pendiente la deestándar Desviación : S

libertad de grados 2-ny % 95 del ciasignifican de nivelun parat:t

regresión de recta la de Pendiente :b

b

tab

f. Cálculo del valor de texp

Se determinó empleando la siguiente fórmula

bS

bt exp

Donde:



b



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- 14 -

2.4.1.3 Cálculos efectuados en el test de Proporcionalidad

a. Cálculo de la varianza del Término Independiente ( 2aS ):

n

x

ba SS 2

.22

b. Fórmula empleada para determinar la Desviación

Estándar del Término independiente:

2aa SS

c. Fórmula empleada para determinar el Intervalo de

Confianza del Intercepto a

btsaConfInt .

Donde:


libertad de grados 2-ny % 95 del ciasignifican de nivelun parat:t


b

tab

El método será lineal si texp es mayor al ttab con el 95 % de

confianza y n-2 grados de libertad y el coeficiente de correlación (r)

es igual o mayor que 0.990 2.



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2.4.2 EVALUACIÓN ESTADÍSTICA DE LA PRECISIÓN

2.2.4.1 Repetitividad

a. Determinación de la media

Se utilizó la siguiente fórmula:

n

x

x

n

i

i 1

Donde:

ionesdeterminac de Numero

Media

n

X

b. Determinación de la Desviación Estándar (s)

Se utilizó la siguiente fórmula:

1

1

2

n

xx

s

n

i

i

c. Determinación del coeficiente de variación

Se utilizó la fórmula descrita a continuación

x

sCV

100*

Donde:

Media

estándar Desviación

X

S

d. Determinación del Porcentaje de Recuperación

Se utilizó la fórmula descrita a continuación

100Teórica.CC

Práctica.CC% xR

Donde:

iónConcentrac:CC



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2.2.4.2 Precisión Intermedia

Los valores de concentraciones prácticas, de la media, de

la desviación estándar y coeficiente de variación se

obtuvieron de manera idéntica que en el ensayo de

repetibilidad.

a. Test F (Snedecor)

Este test se realizó con el objetivo de comparar la

semejanza del comportamiento entre los 2 analistas a

través de su varianza obtenida por el tratamiento de los

datos individuales

2

2

1

2

analista

analista

calculadoS

SF

Si F calculado < F crítico (8; 0.05) no hay diferencia

significativa entre las varianzas obtenidas a través de

los 2 analistas

El método será preciso si en los ensayos de repetibilidad y

Precisión intermedia se obtienen coeficientes de variación

menores al 5 % 2.



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- 17 -

2.2.4.3 Evaluación estadística de repetitividad del método en la

reducción de reactivo (de 1 mL a 500 mL)

a. Varianza (S2)

1

)( 2

2

n

xxs

i

Donde:

grupo del ionesdeterminac de nº:n

prueba cada de promedioValor : x

prueba cada de uniarioValor :x

Varianza: S

i

2

b. Valores de Varianza Combinada ( 2, yxs )

2

)1()1(

21

222

212

,

nn

SnSns yx

Donde:

grupo) (2º ionesdeterminac de nº:n

) grupo (1º ionesdeterminac de nº:n

grupo segundo del Combinada Varianza: S

grupoprimer del Combinada Varianza:S

combinada Varianza: S

2

1

22

21

2yx,

c. Determinación de la prueba “t”

2

2,

1

2,

21

n

S

n

S

xxt

yxyx

Donde:

grupo segundo del Tamaño:n

grupoprimer del Tamaño:n

combinada Varianza:S

prueba cada de uniarioValor :x,x

2

1

2yx,

21



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- 18 -

2.4.3 EVALUACION ESTADÍSTICA DE LA EXACTITUD

2.4.3.1 Cálculo del % de recuperación

En la determinación de la exactitud del método los valores

de las concentraciones se expresaron como % de

recuperación de la siguiente forma:

100Teórica.CC

Práctica.CC% xR

1

1

2

2

n

xx

s

n

i

i

100ónRecuperaci (%) Media

Standar Desviación. xVC

2.4.3.2 Cálculos efectuados en la aplicación del t de Student

Para la aplicación de esta prueba fue necesaria la

determinación del valor de texp mediante la siguiente

fórmula:

CV

nRt

%100exp

Donde:

n variacióde eCoeficient CV

ionesdeterminac de nº n

ónRecuperaci de % los de promedio delValor R %

El método será exacto si el valor de ttab es mayor que el texp, al 95%

de confianza y n-2 grados de libertad en la aplicación del Test de

Student 2.



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III. RESULTADOS



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TABLA 1:

Evaluación estadística de repetitividad del método en la reducción de reactivo,

para el método utilizado para la determinación de la Amilasa

RESULTADO

ESPECIFICACIONES NIVEL 1 NIVEL 2

T DE STUDENT

(VARIANZA

COMBINADA)

2,137

1,173

< 2,228*

* Tabla de t de Student para: g/l = n-2 y p= 0.005

TABLA 2:

Valores de los parámetros de regresión lineal obtenidos en el ensayo de

Linealidad del método utilizado para la determinación de la Amilasa

RESULTADO


ECUACIÓN DE LA

RECTA

y = 0,6123 x + 10,912

y = 3,1467 x + 115,79

---------------

PENDIENTE B

0,6123

3,1467

---------------

INTERCEPTO A

10,912

115,79

---------------

COEFICIENTE DE

CORRELACIÓN (r)

0,997

0,998

> 0,990*

COEFICIENTE DE

DETERMINACIÓN (r2)

0,994

0,996

> 0,990*

* Tabla de Significación de r para: g/l= n-2 y p=0.05



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TABLA 3:

Tratamiento estadístico de los parámetros del Test de Linealidad de la pendiente

(b), obtenidos en el ensayo de Linealidad del método utilizado para la

determinación de la Amilasa

PARÁMETROS DEL TEST DE

LINEALIDAD DE LA PENDIENTE

RESULTADO


COEFICIENTE DE VARIACIÓN 1,3787 % 0,4758 % < 5 %

TEST DE REGRESIÓN

(T DE STUDENT) 34,0539 43,4153 > 2,3646*

INTERVALO DE CONFIANZA DE LA

PENDIENTE - 0,76 - 1,98 0,59 - 5,70 --------

INTERVALO DE CONFIANZA DEL

INTERCEPTO 10.62 - 11.21

115.48 –

116.11 --------


TABLA 4:

Tratamiento estadístico de los valores obtenidos en el ensayo de Precisión

(Repetibiliad y Precisión intermedia) del método utilizado para la determinación

de la Amilasa

PARÁMETROS DE REGRESIÓN

RESULTADO


REPETIBILIDAD:

COEF. VARIACIÓN

2,0384 % 0,8572 % < 5 %

PRECISIÓN INTERMEDIA:

COEF. VARIACIÓN

1,5780 % 0,7260 % < 5 %

TEST F (SNEDECOR) 0,2165 0,4939 < 3.35*

* Tabla de la distribución F de Snedecor. para: g/l = n-2 y p= 0.05



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TABLA 5:

Tratamiento estadístico de los valores obtenidos en el ensayo de Exactitud del

método utilizado para la determinación de la Amilasa


RESULTADO



PORCENTAJE DE RECUPERACIÓN

REPETIBILIDAD:

COEF. VARIACIÓN PORCENTAJE DE

RECUPERACIÓN

PORCENTAJE DE RECUPERACIÓN

100,53% 100,01% 98 % - 102 %

COEF. VARIACIÓN 1,3795 % 0,4880 % < 5 %

T DE STUDENT 1.1526 0.0068 < 2.306*




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IV. DISCUSION

La validación de un método analítico se mide con los parámetros que sean

evaluados para el proceso; estos serán dependientes directos de la naturaleza del

método y las especificaciones con las que se debe cumplir. En el método validado

en el presente trabajo, esta clasificado como un método de determinación

cuantitativo, a los que corresponden evaluar Linealidad, Precisión, exactitud y

sensibilidad; sin embargo las características señaladas como requeridas puedan

ser no necesarias y viceversa; así tenemos que la sensibilidad es un parámetro

del análisis cuantitativo para niveles bajos de compuestos, es decir se emplea

cuando se realizan determinaciones de analitos a nivel de trazas, no siendo este

el caso no se realizó la aplicación en el proceso 5,13.

En la tabla 1 se presentan los resultados obtenidos de la comparación entre

el uso de 1000 uL y 500 uL de reactivo ; se realizaron 10 determinaciones con

cada uno : 1 mL de Reactivo frente a 20 uL de muestra y 500 uL de Reactivo

frente a 10 uL de muestra, bajo las mismas condiciones de reacción indicadas en

el inserto y para ambos niveles (normal y patológico); en la aplicación de la

prueba t de student, se obtuvo 2,137 y 1,173 nivel 1 y 2 respectivamente, siendo

estos menores al valor crítico: 2,228 (0.05; 10); por tanto, no existe diferencia

significativa y se puede aplicar la reducción sin afectar el resultado final 14.

En la tabla 2, se muestran los parámetros que evalúan la linealidad del

método; para ello se analizaron las siguientes concentraciones: 50 %, 100 % y

150 %, luego de efectuar los cálculos se determinó que el método presenta la

capacidad de brindar resultados linealmente proporcionales a la concentración



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del analito en estudio. El coeficiente de correlación, nos indica el grado de

relación entre la concentración (x) y la respuesta (y), se obtuvo un coeficiente de

correlación de 0.997 y 0.998 nivel 1 y 2 respectivamente, y tenemos que en las

tablas de r para n-2 gl (8; 0.005) es 0.990, los valores obtenidos aceptan una

correlación positiva con una probabilidad superior al 95 %. La pendiente b o

coeficiente de regresión está relacionada con la sensibilidad del método, de tal

forma que a mayor pendiente mayor sensibilidad (respuesta del analito frente a

los cambios de la concentración del analito); esto se observa en los gráficos 1 y

2.8, 12.

En la tabla 3, tenemos la aplicación del test de linealidad de la pendiente, se

obtuvo un texp de 34,053 y 43,415 nivel 1 y 2 respectivamente, que es mayor al

ttabla(n - 2 gl) que es de 2,3646 con un nivel de confianza del 95 %, este valor es

tan alto que indica que la probabilidad de que la pendiente “b” sea diferente de

cero es muy elevada. También se determinó que cumplen con las

especificaciones del coeficiente de variación: 1,3787 % y 0,4758 % nivel 1 y 2;

deben ser < 5 %. Sin embargo no son suficientes para demostrar la linealidad del

método, sino que además se demostró mediante el empleo de un Test de

linealidad, siendo uno de los más confiables la prueba t de student, utilizada para

determinar la significancia estadística de la varianza de la pendiente b, la

aplicación demostró que cumple con el criterio de linealidad, pues el valor del texp

(34,0539 y 43,4153 nivel 1 y 2 respectivamente, es mayor al ttab (2.228).

En la tabla 4, para determinar la precisión del método, se evaluó la

repetibilidad, que se define como el grado de concordancia entre los valores de

una serie repetida de ensayos analíticos efectuados sobre una muestra

homogénea por un mismo analista bajo la mismas condiciones, es decir, la



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capacidad de un método para dar resultados semejantes cuando se aplica a una

muestra; para ello se efectuaron 10 determinaciones para ambos niveles (normal

y patológico), la precisión se expresa por la desviación Standard pero la mejor

forma de medirla es mediante el coeficiente de variación, se obtuvo 2,0384 % y

0,8572 nivel 1 y 2, respectivamente, lo cual nos indica que cumple con el criterio

de precisión (CV <5 %). En la determinación de la Precisión intermedia se

efectuaron 10 mediciones similares a los efectuados para la repetibilidad (antes

descritas), definida como la medida de la precisión de los resultados de un

método analítico efectuado sobre la misma muestra homogénea pero con

analistas diferentes. El Coeficiente de variación obtenido en el ensayo fue de

1,5780 % y 0,7260 % nivel 1 y 2; el cual es menor al establecido por la USP para

este tipo validación (CV < 5 %). La precisión está relacionada con la dispersión de

una serie de mediciones, pero no nos indica de lo cerca que esta del valor exacto,

por ello podemos tener mediciones muy precisas pero poco exactas 16, 17.

En la tabla 5, se muestra el tratamiento estadístico aplicado para determinar

la exactitud del método; que expresa la cercanía entre el valor teórico y el valor

práctico obtenido al aplicar el análisis, se realizaron 3 concentraciones (50 %, 100

% y 150 %) por triplicado para cada uno de los niveles; si la diferencia entre el

Valor Teórico y el práctico es grande revela la posible existencia de errores que

deberían ser corregidos. El coeficiente de variación obtenido fue de: 1,3795 % y

0,4880 % (< 5 %); la exactitud se demostró con la aplicación del t de student con

el 95 % de confianza y 8 gl, obteniéndose un valor de texp de 1.1526 y 0,0068

nivel 1 y 2, siendo éste menor al punto crítico 2.306 (ttabla), con la probabilidad de

cometer error de p = 0.05 y n – 1 gl; indicando que no existe diferencia

significativa, por tanto el método es exacto 2, 10,17.



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V. CONCLUSIONES

Luego de haber aplicado los parámetros establecidos de validación del método

analítico para la determinación de amilasa, en el Laboratorio Quintanilla S.R.L se

concluye lo siguiente:

El método es lineal en el intervalo de las concentraciones de 50% hasta el

150 % de la muestra

El método es preciso porque cumple la repetitividad (Nivel 1: C.V 2.0384 % y

Nivel 2: 0.8572) y precisión intermedia (Nivel 1: C.V 1.5780 % y Nivel 2:

0.7260 %)

El método es exacto porque no hay diferencia significativa entre la

recuperación media (Nivel 1: 100.53 % y Nivel 2: 100.01) y el 100 % teórico.



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- 27 -

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Alzate, R ; Mora, C.: Diplomado en Buenas Prácticas de Manufactura con

Énfasis en Validación y Auditoría. Facultad de Ciencias Químicas y

Farmacéuticas. Universidad de Chile. Santiago. Mayo 2006.

2. Castro, M.: Validación de Métodos analíticos. Asociación Española de

Farmacéuticos de la Industria. Sección Catalana 1º ed. Ed Farma

Internacional. España.2000. Pp: 70-74

3. Castillo, B ; González, R.: Protocolo de Validación de Métodos Analíticos

para la Cuantificación de Fármacos. Revista Cubana de Farmacia [online].

ene.-abr. 2000, vol.30, no.1. Pp: 2-4. Disponible en:

http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034751519960

00100009&lng=es&nrm=iso>. ISSN 0034-7515.

Consultado 16 de febrero del 2009

4. Castelluci, F.: “Recomendaciones Armonizadas para la validación de

Métodos de Análisis (Informe Técnico)”. París. 2005. Pp: 5-6

5. Fernández, A ; Aguilera.: Validación de los Métodos Analíticos para la

Identificación y Cuantificación del Dextrometorfano Jarabe. Revista

Cubana de Farmacia. 2002. 36(1):28-34.

6. García H ; Aparici, M.: La formación como herramienta de la gestión de

calidad. Industria Farmacéutica 2002 Julio / Agosto. Pp: 71 – 75.

7. Guía de Validación de Métodos Analíticos. Disponible en:

http://www.ministeriodesalud.go.cr/protocolos/guiavalidacionmetodosana

liticos.pdf

Consultado 14 de marzo del 2009



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8. Guidelines for Collaborative Study - Procedures to Validate Characteristics

of a Method of analysis, AOAC International, revised May 2002, publicado

originalmente en J. Assoc. Off. Anal. Chem. 72, 694-704 (2000).

9. ICH.: Guidance for Industry. Q2B Validation of Analytical Procedures:

Methodology. Noviembre. 2003. Pp: 1 – 10. Disponible en:

http://www.fda.gov/cder/guidance/1320fnl.pdf


10. Líneas directivas para evaluar y expresar incertidumbre en la medida NIST

resultan ", NIST nota técnica 1297, 2001, el Instituto Nacional de

Estándares y la Tecnología.

11. Organización Mundial de la Salud.: Curso de Gestión de Calidad para

Laboratorios. Módulo 1, EE.UU. 2007. Pp: 4-6. Disponible en:

www.paho.org/Spanish/aad/tsh/ev/labs-CGC.htm.


12. Organización Mundial de la Salud. : Comité de Expertos de la OMS en

Especificaciones para las Preparaciones Farmacéuticas. 2003. 32º

Informe, Anexo 5. Ginebra.

13. Organismo Argentino de Acreditación.: Guía para la Validación de Métodos

de Ensayo. Argentina. 2003. Pp: 1 – 16. Disponible en:

http://www.oaa.org..ar/evaluadores/DC-LE-05.pdf


14. Rodríguez, G ; Blanco, R.: “Aseguramiento de la calidad analítica y norma

ISO 17 025 en laboratorios químicos y clínicos”. Rev. Costarricense de

Ciencias Médicas. San José, Costa Rica. Vol. 22 (2). 2001. Disponible en:

http://www.ia.csic.es/sea/revista/VOL36-34/03.pdf




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15. Taylor, J. : Validation of Analytical Methods. Analytical Chemistry, Vol. 55

(6). 2006. Pp: 12 – 15

16. Tapia, M.: Desarrollo y Validación de Metodologías Analíticas. Memoria de

práctica para optar al título de Químico Farmacéutico. Santiago.

Universidad de Chile. 2003.

17. The United States PHARMACOPEA Convention. The United States

PHARMACOPEA XXIX. 29º Edition. USA. 2006. Pp: 1436-1437, 3328-3331.

18. Winn-Deen, E.: DEVELOPMENT OF A DIRECT ASSAY FOR "-AMYLASE, Clin.

Chemistry .Vol. 34 (10), 2005-2008. Pp: 8 - 12



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- 30 -

ANEXOS



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ANEXO Nº I

I. CÁLCULOS PARA COMPARAR ENTRE EL USO DE 1000 uL y 500 uL DE RVO,

SEGÚN PRUEBA t DE Student

a. Cálculo de la varianza (s2); Varianza combinada y t Student

1

)( 2

2.

n

xxs

i

yx

2

)1()1(

21

222

212

,

nn

SnSns yx

2

2,

1

2,

21

n

S

n

S

xxt

yxyx

T Student Punto crítico

NIVEL 1 2,137 < 2,228

NIVEL 2 1,173 < 2,228



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II. CÁLCULOS PARA DETERMINAR LA LINEALIDAD DEL MÉTODO

a. Cálculo de la recta de Regresión

Se determina la curva de regresión, sobre los puntos individuales y sin

promediar

Para el caso de una recta la función toma la forma de la siguiente ecuación

abxy

Tabla 1: Linealidad del método – NIVEL 1

CC

Nominal del

analito (%)

CC

del analito

“x”

Resultado

en CCs

“y”

xy

x2

y2

f(x/y)

50%

42 42,30 1786,4700 1783,6544 1789,2900 1,0016

42 41,90 1769,5767 1783,6544 1755,6100 0,9921

42 42,50 1794,9167 1783,6544 1806,2500 1,0063

100 %

69 42,23 4810,3450 4816,8227 4803,8761 0,9987

69 69,31 4765,9269 4816,8227 4715,5689 0,9894

69 68,67 4874,1961 4816,8227 4932,2529 1,0119

150 %

102 70,23 10482,0005 10496,6855 10467,3361 0,9986

102 69,40 10756,5755 10496,6855 11022,9001 1,0248

102 102,31 10251,4805 10496,6855 10012,0036 0,9766

∑ 642 642,27 51291,49 51291,49 51305,09 8.9735

Promedio 0.9971

Desviación estándar 0,0138

Coeficiente de variación % 1,379 %



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Tabla 2: Linealidad del método – NIVEL 2

CC

Nominal del

analito (%)

CC

del analito

“x”

Resultado

en CCs

“y”

Xy

x2

y2

f(x/y)

50%

279 279,15 77779,5645 77634,6769 77924,7225 1,0019

279 276,18 76952,0334 77634,6769 76275,3924 0,9912

279 280,56 78172,4328 77634,6769 78713,9136 1,0069

100 %

419 419,26 175865,595 175952,284 175778,948 0,9995

419 420,93 176566,104 175952,284 177182,065 1,0035

419 418,21 175425,155 175952,284 174899,604 0,9970

150 %

593 593,47 352107,729 352008,845 352206,641 1,0003

593 595,55 353341,8 352008,845 354679,803 1,0038

593 590,89 350577,007 352008,845 349150,992 0,9959

∑ 3874 3874 1816787 1816787 1816812 8.9735

Promedio 0,9964

Desviación estándar 0,0048

Coeficiente de variación % 0,476 %

De los datos obtenidos de la tabla 1 se obtienen los siguientes

valores:

a (Intercepto) b (Pendiente)

NIVEL 1 10,912 0,6123

NIVEL 2 115,79 3,1467

Ecuación de la recta

Ecuación de la recta

NIVEL 1 y = 0,6123 x + 10,912

NIVEL 2 y = 3,1467 x + 115,79



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b. Cálculo del coeficiente de Correlación “r”

Coef. Correlación (r) Criterio de aceptación

NIVEL 1 0,997 > 0.990

NIVEL 2 0,998 > 0.990

c. Cálculo del coeficiente de Determinación “r2”

Se determinó para evaluar el grado de ajuste de la ecuación

Coef. Determinación

(r2) Criterio de aceptación

NIVEL 1 0,994 > 0.990

NIVEL 2 0,996 > 0.990

d. Cálculos efectuados en el test de linealidad

Cálculo del Test de Regresión ( t de Student )para el Coeficiente de

Correlación)

Test de regresión

t - Student

Criterio de aceptación

NIVEL 1 34,0539 > 2,3646

NIVEL 2 43,4153 > 2,3646

Intervalo de Confianza (rango aceptable) Intervalo de confianza de

la pendiente b

bS Pendiente b Int. Conf.

NIVEL 1 0,5805 0,6123 0,76 - 1,98

NIVEL 2 1,0804 3,1467 0,59 - 5,70



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Intervalo de confianza del intercepto a

Sa Intercepto a Int. conf

NIVEL 1 0.1270 10,912 10.62 - 11.21

NIVEL 2 0.1326 115,79 115.48 – 116.11

e. Calculo del Coeficiente de Variación (C.V) de los factores de respuesta

Coeficiente de variación

(CV) Criterio de aceptación

NIVEL 1 1.3787 % < 5 %

NIVEL 2 0.4758 % < 5 %



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III. CÁLCULOS PARA DETERMINAR LA PRECISIÓN DEL MÉTODO

a. Cálculo de la Precisión

Datos de Repetitividad y Precisión Intermedia

Tabla 3: Repetitividad y Precisión Intermedia del método – NIVEL 1

Ensayo

nº

Analista 1

(13/03/09)

Cant. Recuperada

(98 % - 102 %)

Analista 2

(14/03/09)

Cant. Recuperada

(98 % - 102 %)

1 71,79 104,04% 70,59 102,30%

2 70,82 102,64% 71,11 103,06%

3 69,99 101,43% 70,17 101,70%

4 69,51 100,74% 69,99 101,43%

5 70,14 101,65% 70,08 101,57%

6 68,35 99,06% 68,78 99,68%

7 70,22 101,77% 71,08 103,01%

8 73,77 106,91% 70,29 101,87%

9 70,76 102,55% 69,78 101,13%

10 70,26 101,83% 69,93 101,35%

Tabla 4: Repetitividad y Precisión Intermedia del método – NIVEL 2

Ensayo

nº

Analista 1

(13/03/09)

Cant. Recuperada

(98 % - 102 %)

Analista 2

(14/03/09)

Cant. Recuperada

(98 % - 102 %)

1 419,26 100,06% 423,12 100,98%

2 413,21 98,62% 420,17 100,28%

3 418,21 99,81% 419,68 100,16%

4 423,68 101,12% 425,64 101,58%

5 416,29 99,35% 417,58 99,66%

6 422,25 100,78% 420,65 100,39%

7 423,07 100,97% 420,55 100,37%

8 423,25 101,01% 418,67 99,92%

9 420,08 100,26% 420,08 100,26%

10 423,96 101,18% 424,33 101,27%



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b. Análisis estadístico

Tabla 5: Análisis estadístico

Análisis Estadístico NIVEL 1 NIVEL 2 Criterio de

Aceptación Repetitividad Repetitividad Precisión

Intermedia

Repetitividad Precisión

Intermedia

Nº de determinaciones 10 20 10 20 ...........

Media (Promedio: x) 70,56 70,37 420,33 420,69 ...........

Desviación Estándar (S) 1,44 1,11 3,60 3,05 ...........

Coeficiente de Var. (C.V) 2,038 % 1,578 % 0,857 % 0,726% < 5 %

c. Test F (Snedecor)

Este test fue realizado con el objetivo de comparar la semejanza del

comportamiento entre los 2 analistas a través de su varianza obtenida por el

tratamiento de los datos individuales.

NIVEL 1 NIVEL 2

Analistas Desv. Standard

(S)

Varianza

(s2)

Desv. Standard

(S)

Varianza

(s2)

1 1,4400 2,0736 3,6000 12,9600

2 0,6700 0,4489 2,5300 6,4009

Comparación de las varianzas entre el analista 1 y el analista 2

2

2

1

2

analista

analista

calculadoS

SF

NIVEL 1 NIVEL 2 Punto crítico

F calculado 0,2165 0,4939 < 3.35

Interpretación:

Como Fcalculado < Fcrítico, no hay diferencia significativa entre las varianzas

obtenidas a través de los 2 analistas, por esto podemos considerar que las

varianzas son estadísticamente homogéneas



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IV. CÁLCULOS PARA DETERMINAR LA EXACTITUD DEL MÉTODO

a. Calculo del % de Recuperación, Desviación Standard y Coeficiente de variación

Tabla 6: Exactitud del método – NIVEL 1

Ensayo nº CC del analito CC Nominal

(%)

Cantidad

Recuperada

Cantidad Recuperada

(%)

1

42 50 42,30 100,71%

42 50 41,90 99,76%

42 50 42,50 101,19%

2

69 100 69,31 100,45%

69 100 68,67 99,52%

69 100 70,23 101,78%

3

102 150 102,31 100,30%

102 150 104,99 102,93%

102 150 100,06 98,10%

Media (%) Recuperación 100,53%

Desviación Standard 0,0139

Coeficiente de variación 1,3795 %

Tabla 7: Exactitud del método – NIVEL 2

Ensayo nº CC del analito CC Nominal

(%)

Cantidad

Recuperada

Cantidad Recuperada

(%)

1

279 50 279,15 100,05%

279 50 276,18 98,99%

279 50 280,56 100,56%

2

419 100 419,26 100,06%

419 100 420,93 100,46%

419 100 418,21 99,81%

3

593 150 593,47 100,08%

593 150 595,55 100,43%

593 150 590,89 99,64%

Media (%) Recuperación 100,01%

Desviación Standard 0,0049

Coeficiente de variación 0,4880 %

b. Análisis estadístico según ( t de Student )

NIVEL 1 NIVEL 2 Punto crítico (8;0.05)

t de Student 1.1526 0.0068 < 2.306



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ANEXO Nº III

1. CALIFICACIÓN DEL FOTÓMETRO

Los parámetros a evaluar en un fotómetro, se detallan a continuación:

a. Calificación de Instalación (IQ)

Es la verificación documentada de que todos los aspectos claves d la

instalación están de acuerdo con las recomendaciones del fabricante y

corresponden a las especificaciones aprobadas en el diseño. Las

cuales muestran en la tabla siguiente:

Tabla 1: Criterios para evaluar la calificación de la instalación:

Parámetros Descripción

Nombre del equipo Fotómetro BPC Biosed

Modelo o tipo Prime

Número de serie 022346

Rango de voltaje 85 – 264

Frecuencia 47 – 63 Hz

Condiciones en las que fue

recibido Nuevo

Aspectos verificados para su

aceptación de recepción.

Presición y exactitud

con uso de estándares

Localización del equipo en el

laboratorio Área de Bioquímica

Instructivo de mantenimiento Anexo I - A

Instructivo de operación Anexo I - B

b. Calificación de Instalación (OQ)

Es la verificación de que los equipos funcionen en la forma esperada y

son capaces de operar satisfactoriamente, sobre todo en el rango d los

parámetros operacionales para los que han sido diseñados. Es

realizado por un técnico calificado.

Mediante la calificación operacional (OQ) se verifica y documenta el

funcionamiento del equipo, conforme a las especificaciones y rangos

de operación.



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- 40 -

Esta rutina debe efectuarse por lo menos una vez al año, si no ha

habido cambios en el proceso o reparaciones en los equipos , y cada

vez que se realicen cambios en el proceso o reparaciones o

reemplazados en los equipos. La calificación operacional comprende

las verificaciones siguientes:

Capacitación del personal para operar el equipo.

Documentación completa para operar (manuales de operación,

POEs, calibración de instrumental)- Operatitividad del equipo

(energía eléctrica, agua, aperturas, cierres)

Ausencia de vibraciones

Buen funcionamiento de los controles de operación (alarmas,

termostatos, instrumentos).

Ambiente adecuado.

Secuencia de operaciones, incluidas las automáticas.

Tabla 2: Parámetros a evaluar en un fotómetro

PARÁMETROS EVALUACIÓN

Longitud de onda Exactitud

Absorbancia Presición

Relación señal/ ruido Adecuada



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- 41 -

Tabla 3: Solución de problema a Espectrofotómetro automatizado

PROBLEMA CAUSA PROBABLE SOLUCIÓN

El

espectrofotómetro

no se energiza

Interruptor de

encendido/apagado esta en

posición apagado

Mover el interruptor a la posición

encendido

No hay energía eléctrica en la

toma de alimentación

Verificar alimentación eléctrica

general. Comprobar que no se haya

disparado alguna seguridad

Mal conectado el cable de

alimentación eléctrica

Conectar firmemente el cable de

alimentación

Los botones del

teclado no

responden

Inicialización incompleta del

equipo durante el arranque Apagar el equipo y encenderlo

nuevamente Activación de un comando

equivocado durante el arranque

Puerto serial RS

232 no responde

Inicialización incompleta de

equipo durante l arranque

Apagar el equipo y encenderlo

nuevamente

Cable de interconexión mal

conectado Verificar conexión

Pantalla LCD difícil

de leer

Control de contraste desajustado Ajustar contraste

Sistema de iluminación de fondo

quemado Lamar al representante

Impresora

atascada

Papel término arrugado entre la

cabeza de impresión y la placa

térmica al momento de rasgar o

cortar el papel

Remover el exceso de papel con unas

pinza de punta fina

Apagar el equipo, retirar el papel y

reinstalar nuevamente

El papel de la

impresora no se

auto alimenta o

avanza

Papel de la impresora instalado

erróneamente

Apagar el equipo, reinstalar rollo de

papel

Borde delantero del papel nio

alineado o doblado

Apagar equipo. Reinstalar rollo de

papel. Cortar borde delantero y

alinear nuevamente en el sistema de

alimentación

Control de alimentación de papel Llamar al representante

La lectura presenta

fluctuaciones

Hay interferencia n le recorrido de

la luz

Verificar que la cubeta no presente

rayones

Verificar que no hay partículas

flotando en la cubeta

Frotar las paredes de la cubeta con

un pieza de tela limpia

Verificar que el rango seleccionado de

trabajo es adecuado para la muestra

bajo análisis

La lectura presenta

valores negativos.

No hay lectura de

absorbancia

No hay muestra Añadir una muestra a la solución

Colocación incorrecta de la cubeta Verificar la orientación de la ventana

de la cubeta

Selección errónea de la longitud

de onda

Ajustar la longitud de onda al rango

compatible con el análisis

Equipo calibrado erróneamente

con una muestra en lugar de una

solución estándar

Calibrar con una solución estándar

con agua destilada



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- 42 -

c. Calificación de Performnce - Desempeño (PQ)

Se realiza para demostrar la efectividad y reproducibilidad del proceso,

bajo condiciones normales de operación, y bajo condiciones límites de

operación. Es verificado por el usuario, trabajando con estándares

certificados.

El proceso en donde se demuestra que un instrumento se desempeña

de acuerdo a la especificación adecuada para su uso rutinario.

Conocer la variación normal del proceso es importante para determinar

si esta operando en un estado de control y si es capaz d producir el

resultado específico de manera consistente. Se puede hacer a través

de cartas de control.



autor: br. peralta tingal elena elizabeth asesor: dr. q.f

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