IDENTIFICACIN Y EVALUACIN DE LA INCIDENCIA Y SEVERIDAD DEL ANILLAMIENTO DEL PEDNCULO DEL AGUACATERO EN LA SIERRA DEL TIGRE, JALISCO.Delgado Vargas Y. A. 1, Villanueva Betancourt J. S. 1, Leyva Mir S. G. 1, 1 Departamento de Parasitologa Agrcola | Universidad Autnoma Chapingo Km. 38.5 Carretera Mxico Texcoco, C.P. 56230. Correo electrnico: agni-02@hotmail.com, darthseus@hotmail.com, lsantos@correo.chapingo.mx,

Tesis Profesional Ingeniero Agrnomo Especialista en Parasitologa Agrcola

RESMENSe realiz el muestreo de 23 huertas de las localidades de los municipios de Mazamitla, Valle de Jurez y de la Manzanilla de la Paz, Jalisco, de donde se aislaron dos agentes causales de la pudricin del pednculo del aguacate (Persea americana var. Hass). Se llevaron a cabo los postulados de Koch y se identificaron morfolgicamente los agentes Colletotrichum gloesporoides y Alternaria sp.

Asimismo se evalu la incidencia del anillamiento del pednculo del aguacate la cual fue de 85.12% en la Sierra del Tigre, Jalisco, mientras que la evaluacin de la severidad para la misma zona fue de 14.70%. Se realiz una prueba de medias para determinar diferencias significativas en incidencia y severidad entre huertas con un mismo patgeno, misma que demostr que para el tratamiento C. gloesporoides existi una diferencia estadstica entre los valores obtenidos de las huertas, sin embargo para Alternaria sp., al evaluar la severidad al igual que la variable incidencia, tanto para C. gloesporoides como para Alternaria sp., no se demostr una diferencia significativa entre los tratamientos.

Palabras clave: Anillamiento, pednculo, incidencia, severidad, Colletotrichum gloesporoides, Alternaria sp.ABSTRACTTwenty three avocado (Persea americana var. Hass) orchards were sampled in the state of Jalisco, in the Mazamitla, Valle de Jurez and de la Manzanilla de la Paz locations where two pathogens were isolated from avocado stem end rot lesions. Kochs postulates were carried out, having isolated the pathogens on PDA media and were afterwards identified by morphological characteristics as Colletotrichum gloesporoides and a species of Alternaria sp. Incidence of stem end rot in La Sierra del Tigre in the state of Jalisco was of 85.12%. While the severity for said disease in the previously mentioned area is 14.70%. After having evaluated whether or not there was a statistical difference in the incidence and severity of each pathogen among each of its respective orchards, analysis proved that in fact there was a difference in severity of C. gloesporoides among its orchards, however no such statistical difference was found for the case of severity of Alternaria sp. As for the incidence analysis performed for both pathogens, it concluded that there was also no statistical difference amongst each of the orchards in which they were present.

Key words: Avocado Stem End Rot, Incidence, Severity, Colletotrichum gloesporoides, Alternaria sp.INTRODUCCINExiste una gran variacin entre los agentes causales del anillamiento del pednculo del aguacate. Sin duda alguna el patgeno y su incidencia varan de acuerdo al rea geogrfica en la que se lleven a cabo estudios. Tliz (2000) considera los siguientes patgenos como responsables de dicho sntoma en el aguacate: Alternaria sp., Botryodiplodia sp., Botrytis cinerea, Colletotrichum gloesporoides, Cilindrocladium scoparium, Dothiorella aromatica, Dothiorella gregaria, Fusarium roseum, Diplodia natalensis, Pestalotiopsis sp., Phomopsis perseae, Phytophora citricola, Rhizhopus stolonifer y Sclerotinia sclerotiorum en diversas partes del mundo.En estudios recientes realizados en la regin productora de aguacate de California se aislaron e identificaron nicamente tres agentes causales, cada uno con diferente incidencia en las huertas analizadas (Twizeyimana et al., 2013). Dichos agentes son Neofussicoccum luteum Pennycook & Samuels (teleomorfo Botryosphaeria lutea A.J.L. Phillips) el cual fue el responsable de haber ocasionado el 65% de la enfermedad, seguido por C. gloesporoides ocasionando un 33% y Phomopsis sp., responsable del 2% restante (Twizeyimana et al., 2013). Cabe mencionar que hongos originalmente no considerados como posibles agentes causales, como el caso de Neofussicoccum parvum, patgeno aislado de cancros en las ramas del aguacate, tambin es capaz de producir los sntomas del anillamiento, tal y como fue demostrado por Twizeyimana et al., 2013.Entre los primeros sntomas visibles ocasionados por los diferentes patgenos esta la constriccin alrededor del pednculo seguido por su deterioro y una decoloracin del fruto (Twizeyimana et al., 2013). Dicho sntoma se caracteriza distintivamente por la formacin de un anillo completo o incompleto que puede o no ser superficial, con una zona seca y descortezada sobre el pednculo, el fruto se mantiene adherido al pednculo hasta la madurez (Figura 0.1 y 0.2). Al permanecer adherido al rbol, el fruto pasa por una deshidratacin rpida, adquiriendo un aspecto momificado. Un corte longitudinal muestra que el pedicelo no presenta lesin alguna, encontrndose el dao solo en el hueso donde se produce una infeccin que se extiende de 2 a 3 mm sobre la pulpa (Morales, 2001). Se cree que el origen del inculo es interno, y que se trata de hongos endofticos que viajan a lo largo del pedicelo y penetran el fruto por el pednculo ya que en esta regin no existen sustancias fungitoxicas llamadas dienos presentes en la piel del fruto, que pudieran impedir su penetracin (Everett K.R., 2001). Sin embargo en ciertos estudios se demuestra que el desarrollo del hongo no se lleva a cabo hasta que procesos fisiolgicos relacionados con la madurez del fruto lo propicien, esto es hasta que el fruto est ms prximo a la madurez y los apresorios formados por elhongo puedan penetrar la piel debido a la disminucin de la concentracin de dienos en la piel ocasionado por el proceso de maduracin (Everett, KR. 2001, Twizeyimana et al., 2013).

Figura 0.1: Fruto de aguacate con anillamiento del pednculo. Valle de Jurez, Jalisco

Figura 0.2: Fruto disectado de aguacate con anillamiento del pednculo. Manzanilla de la Paz, Jalisco

La diseminacin de las esporas de los hongos se da por el viento, agua de lluvia y en ciertos casos por el riego que se maneje en los cultivares (Twizeyimana et al., 2013). Los hongos sobreviven en restos de hojas viejas, frutos y ramillas infectadas o momificada e inclusive en el suelo (Twizeyimana et al., 2013). La infeccin probablemente ocurre por la inflorescencia, colonizndose endfitamente el tejido del pedicelo, antes de la cosecha (Persley, 1993), aunque cabe mencionar que la mayora de los autores lo consideran como un problema postcosecha ya que raramente les ocasiona daos hasta despus del corte y la recoleccin de frutos (Everett, 1999, 2001, 2002 y Twizeyimana et al., 2013).Los objetivos generales de este trabajo fueron: Identificar el agente causal del anillamiento del pednculo del aguacate en los municipios de Mazamitla, Valle de Jurez y la Manzanilla de la Paz, del estado de Jalisco y Evaluar la incidencia y severidad de cada agente causal del anillamiento del pednculo del aguacate de los municipios de Mazamitla, Valle de Jurez y la Manzanilla de la Paz, del estado de Jalisco. Los objetivos particulares incluyeron: Calcular si existe diferencia significativa en incidencia y severidad de cada uno de los patgenos entre sus respectivas huertas e Identificar la o las huertas en las que hubo mayor incidencia y severidad.

MATERIAL Y MTODOSMuestreoLa investigacin se realiz en trascurso de los meses de Enero a Marzo de 2013. Se trabaj sobre el cultivo de aguacate de la variedad Hass, para la identificacin de las huertas se utiliz el nmero de inscripcin del SICAFI.

Se tom el 10.31% (23 huertas) de las huertas registradas ante SICAFI en los tres municipios, de Mazamitla 18 de un total de 177 huertas, de Valle de Jurez 2 de un total de 12 huertas, y de Manzanilla de la Paz 3 un total de 34 huertas.

La superficie muestreada de cada municipio fue para Mazamitla 82.3 de 421.57 hectreas, para Valle de Jurez 14.1 de 41.6 hectreas, y para la Manzanilla de la Paz 61.9 de 208.6 hectreas, dando un 23.6% (158.6 hectreas) entre los 3 municipios.

El nmero total de rboles muestreados fue de 3845 de las 23 huertas que equivale al 10% de la poblacin total de dichas huertas. La forma de muestrear fue mediante la tcnica de ziz-zag (Figuras 1-8), si en el muestreo se encontraba un rbol sin frutos era sustituido por el rbol inmediato. En la siguiente lista se muestra ms detalladas las caractersticas de cada huerta (edad del huerto, total de rboles, nmero de rboles muestreados).

1. HUE/08/14/057/0001: Plantacin de aguacate Hass establecida en 2005 en el municipio de la Manzanilla de la Paz, Jalisco. Tiene una superficie de 51.9 hectreas, con una poblacin de 10,380 rboles, de los cuales se muestrearon 1,038 rboles (Figura 1).

2. HUE/08/14/057/0002: Plantacin de aguacate Hass establecida en 2009, en el municipio de la Manzanilla de la Paz, Jalisco. Tiene una superficie de 9 hectreas, con una poblacin de 3,600 rboles, de los cuales se muestrearon 360 rboles (Figura 2).

3. HUE/08/14/057/0010: Plantacin de aguacate Hass establecida en 2009, en el municipio de la Manzanilla de la Paz, Jalisco. Tiene una superficie de 1 hectrea, con una poblacin de 204 rboles, de los cuales se muestrearon 21 rboles (Figura 3).

4. HUE/08/14/112/0004: Plantacin de aguacate Hass establecida en 2009, en el municipio de Valle de Jurez, Jalisco. Tiene una superficie de 12. 5 hectreas, con una poblacin de rboles 2500 rboles, de los cuales se muestrearon 250 rboles (Figura 4).

5. HUE/08/14/112/0010: Plantacin de aguacate Hass establecida en 2006, en el municipio de Valle de Jurez, Jalisco. Tiene una superficie de 1.6 hectreas, con una poblacin de 533 rboles, de los cuales se muestrearon 54 rboles (Figura 5).

6. HUE/08/14/059/0001: Plantacin de aguacate Hass establecida en 2006, en el municipio de Mazamitla, Jalisco. Tiene una superficie de 31 hectreas, con una poblacin de 12,400 rboles, de los cuales se muestrearon 1240 rboles (Figura 6).

7. HUE/08/14/059/0004: Plantacin de aguacate Hass establecida en 2004, en el municipio de Mazamitla, Jalisco. Tiene una superficie de 6 hectreas, con una poblacin de 738 rboles, de los cuales se muestrearon 74 rboles (Figura 7).

8. HUE/08/14/059/0006: Plantacin de aguacate Hass establecida en 2001, en el municipio de Mazamitla, Jalisco. Tiene una superficie de 2 hectreas, con una poblacin de 312 rboles, de los cuales se muestrearon 32 rboles (Figura 8).

Evaluacin de IncidenciaEn los sitios experimentales, se evalu la incidencia de la enfermedad mediante un muestreo, donde el tamao de muestra fue de 10% de la poblacin total.

Para obtener el porcentaje de incidencia (I%), se utiliz la siguiente formula:

Evaluacin de SeveridadEn los sitios experimentales, se evalu la severidad de la enfermedad mediante el conteo de los frutos en el rbol para la muestra, de los cuales se separaron en sanos y frutos enfermos (con anillamiento del pednculo). Para obtener el porcentaje de severidad (S%), se utiliz la siguiente frmula:

Aislamiento y Purificacin del PatgenoDe los rboles que presentaban frutos con anillamiento se colectaron muestras de material vegetativo. Posteriormente, las muestras se envolvieron en papel estraza y se colocaron dentro bolsas de plstico individuales. Las bolsas se etiquetaron con la fecha de recoleccin, el nmero de inscripcin de SICAFI (Sistema de Informacin de Campaas Fitosanitarias) de cada huerta. Las muestras se almacenaron en refrigeracin a 5C para su transporte y conservacin.Con la utilizacin de la cmara hmeda se trat de estimular el crecimiento, desarrollo y formacin de cuerpos fructferos de los patgenos. Para esto, al tejido se lav primeramente con agua, para eliminar materia orgnica de accin contaminante y se enjuag con agua destilada estril. El tejido estril se ubic sobre cajas Petri que en su interior contenan papel filtro humedecido. La cmara hmeda se coloc en la luz.

Para determinar las caractersticas morfolgicas de los microorganismos de estudio se emple Papa-Dextrosa-Agar (PDA). Una vez identificados los patgenos, se procedi a la purificacin de las colonias. Para lo cual se cort del medio de cultivo de aproximadamente un cuadro de PDA con colonia de 5mm por lado, el cual se coloc nuevamente en una caja Petri con PDA. El proceso de incubacin se realiz en condiciones de laboratorio a una temperatura de 24 2C y bajo la luz para la esporulacin de los microorganismos.La preparacin del inculo fue de la siguiente manera: En una licuadora se agregaron 250 ml de agua destilada estril, Se agreg el cultivo monosprico de 2 cajas Petri, Se agregaron 2 gotas de aceite tween 80, Se licu por aproximadamente 60 segundos. Anlisis EstadsticoSe utiliz un diseo completamente al azar Yij=+ i + eij. En el que se emple como unidad experimental cada huerto, la variable respuesta fue el porcentaje de severidad e incidencia, y se evalu cada agente causal. Por lo que se tienen 4 anlisis distintos, dos por cada agente causal donde se evala la incidencia y severidad. Para Alternaria sp., se tienen 5 tratamientos, y para Colletotrichum gloeosporioides se tienen 16 tratamientos. Se tuvieron 3 repeticiones para cada tratamiento, para obtener las repeticiones se dividi la huerta en 3 partes y se realiz el muestreo aleatorio (Castillo, 2008).

RESULTADOSIncidencia y SeveridadLa incidencia del anillamiento del pednculo del aguacate la cual fue de 85.12% en la Sierra del Tigre, Jalisco, mientras que la evaluacin de la severidad para la misma zona fue de 14.70%. Para la regin de Manzanilla de la Paz la incidencia fue de 84.60% y la severidad de 17.82%, para Mazamitla la incidencia fue de 85.56% y la severidad de 14.87% y finalmente para Valle de Jurez la incidencia fue de 83.38% y la severidad de 20.70% (Cuadros 1-6). Los agentes causales para cada huerta muestreada se encuentran identificados por color y agrupados de acuerdo a incidencia y severidad en los cuadros 10 y 11.Identificacin del Agente CausalBasndose en literatura en lnea se identificaron los hongos C. gloesporoides y Alternaria sp. usando el mtodo de preparacin en lactofenol y microscopio ptico de 40x (Figura 10 y 11).

Figura 10: Conidios de Colletotrichum gloesporoides aislados a partir de material inoculado.

Figura 11: Conidios septados de Alternaria sp. obtenidos a partir de material inoculado

Anlisis EstadsticoDe acuerdo al anlisis estadstico y las pruebas de medias Tukey realizadas (datos no mostrados) para la variable severidad y el agente C. gloeosporioides muestra una diferencia significativa siendo el tratamiento HUE/08/14/059/0070 el que mayor porciento de severidad presenta y el tratamiento HUE/08/14/059/0001 el que menor porciento de severidad presenta, el resto de los tratamientos son estadsticamente iguales. En cambio, para Alternaria sp., no existe diferencia en la variable severidad en los diferentes tratamientos. El procedimiento de ANOVA mostr que no existi diferencia significativa entre la variable incidencia de cada uno de los agentes causales.

CONCLUSIONES

Colletotrichum gloeosporioides fue el agente causal ms presente en los huertos de los tres municipios identificndose en 16 huertos; seguido por Alternaria sp., identificado en 5 huertos; y en 2 huertos no se pudo asociar con un agente causal a la enfermedad. Lo anterior se debe posiblemente a que otras de las causas del anillamiento del pednculo del aguacatero, segn Baiza (2003) son una deficiencia de zinc y boro, as como una baja produccin de hormonas por parte del rbol. Sin embargo, Garbanzo (2011) tambin menciona que otros aspectos que causan el anillamiento son: estrs hdrico a causa de veranos muy largos, altas aplicaciones de nitrgeno, periodos de lluvias y nublados, cambios bruscos de temperatura.

Aunque la severidad obtenida en las regiones no indica que sea una enfermedad sumamente agresiva, es indispensable su control debido a la alta incidencia que se encuentre en la regin. Actualmente la pudricin de pedicelo se controla al cosechar los frutos con pednculo largo (10 mm) para evitar que los hongos penetren hasta la pulpa, y no ocasionar daos mecnicos al fruto durante la cosecha, transporte, empaque y almacenamiento. En campo, se realizan aplicacin de agrimicion 100 y sulfato tribsico (100 g*L-1), benlate (100g*L-1), trioxil 400 (100 g*L-1) (Morales, 2001).Roa y Bejaramo (1990), controlaron a la pudricin de pedicelo en frutos de aguacate con Sempefresh al 1.25%, Tiabendazol (100 g*L-1) y Benomil (g*L-1) con una severidad de 9.7%.Se han propuesto sistemas de aplicacin que involucran el cobre en el periodo en el que est desarrollndose el fruto, junto con aplicaciones de calcio que pudieran reflejarse directamente en la consistencia de la piel y la habilidad del hongo de penetrar al fruto (Everett K.R., 2002). Aunque se ha demostrado de aplicaciones de Benomilo durante la floracin han sido 87% efectivas para evitar el avance de daos, contra especies de Alternaria sp., Cladosporium cladosporoides, Fusarium oxysporum y Botryosphaeria sp. (Everett K.R. 1999).

LiTERATURA CITADA

1. Agrios, George. 2005. Plant Pathology. 5th Edition. Elsevier Inc. United States of America. 2. Brathwaite, C., Sosa-Moss, C. 1995. Introduccin al Diagnostico de las Enfermedades de las Plantas: Diagnostico Fitosanitario I. Instituto Interamericano de Cooperacin para la Agricultura. Mxico. 3. Baiza, Vladimir. 2003. Guia tcnica del cultivo del aguacate. Programa Nacional de Frutas de El Salvador. Instituto Interamericano de Cooperacin para la Agricultura. Nueva San Salvador, El Salvador.

4. Castillo Mrquez, L.E. 2008. Introduccin a la Estadstica Experimental. 4ta Edicin. Departamento de Parasitologa Agrcola. Universidad Autnoma Chapingo. Chapingo, Estado de Mxico. Pp 23-27. 5. Everett K.R. Stevens P.S. Cutting J.G.M. 1999. Postharvest Fruit Rots of Avocado are Reduced By Benomyl Applications During Flowering. New Zealand Plant Protection Society. 153-156. 6. Everett K.R. 2001. Stem End Rots: Infection of Ripening Fruit. Avocado Growers Association Annual Research Report. Vol 1. 7. Everett K.R. 2002. Avocado Fruit Rots: A Review of Industry Funded Research. Vol 2. 8. Garbanzo, Marvin. 2011. Manual de Aguacate: Buenas Prcticas de Cultivo Variedad Hass. 2da edicin. Ministerio de Agricultura y Ganaderia. San Jos, Costa Rica. Pp. 65-66.9. Morales, G. J. L. 2001. Enfermedades del Cultivo de Aguacate en la Regin Aguacatera de Michoacn, Mxico. 2-10 pp. En: Memoria, XXVII Simposio Nacional de Parasitologa Agrcola Ing. Omar Galindo Alonso, realizado del 26 al 28 de Septiembre de 2001; Sede, Facultad de Agrobiologa Presidente Jurez, UMSNH, Uruapan, Michoacn, Mxico. 10. Roa, H. M.; y Bejaramo, E. A. T. 1990. Alternativas para el control de la madurez y enfermedades de postcosecha de frutos de aguacate (Persea americana M.) cultivar Hass, destinados a la exportacin. Tesis de licenciatura. Facultad de Agrobiologa Presidente Jurez, UMSNH, Uruapan, Michoacn, Mxico. 96 p.11. Tliz, O. D. 2000. Enfermedades del Aguacate. En: D. Teliz (Ed). El Aguacate y su Manejo Integrado. Editorial Mundi Prensa, Mxico. Pp. 139-181.12. Twizeyimana M., Forster, H., McDonald, V., Wang, D.H., Adaskaveg, J.E., and Eskalen, A. 2013. Identification and Pathogenicity of Fungal Pathogens Associated with Stem-End Rot of Avocado in California. Plant Disease, 50-72.