Diapositiva 1

APLICACIONES CLNICAS DE LA ESPECTROMETRIA DE MASAS M Jess Maza Castillo Residente 1 Anlisis Clnicos Hospital Universitario de Guadalajara 25 Abril 2007

Diapositiva 2

- 1.Deteccin de Helicobacter pylori - 2.Evaluacin de la funcin pancretica exocrina

Diapositiva 3

DETECCIN DE Helicobacter pylori 1.QU ES? -Bacilo gram negativo que se encuentra en la mucosa gstrica asociado a distintas enfermedades digestivas

Diapositiva 4

-Catalasa y oxidasa positivo -Vive en mucosa gstrica antral -Libre en mucus, en la superfcie de las clulas epiteliales o en el intersticio celular -NO es invasivo -NO se ha aislado en hemocultivos -MVIL -FORMA ESPIRAL -UREASA POSITIVA CARACTERISTICAS

Diapositiva 5

2. HISTORIA Robin Warren y Barry Marshall -1982 Demuestran que la principal causa de la lcera pptica y gstrica es Helicobacter pylori La bacteria que destron al estrs -2005- Premio Nobel. La bacteria que destron al estrs

Diapositiva 6

3. EL POR QU SE SU IMPORTANCIA TRATAMIENTO Las infecciones por H.pylori afectan aproximadamente a la mitad de la poblacin mundial DOS RAZONES PATOLOGA

Diapositiva 7

Helicobacter pylori Infiltrado inflamatorio Gastritis atrfica autoinmune (tipo A) Gastritis atrfica multifocal (tipo B) MALT PMN prominentes Linfoma Gastritis central difusa Ulcera duodenal Gastritis central superficial Cncer difuso Cncer intestinal lcera gstrica Vasculares Autoinmune Dermatolgicas Encefalopatias Diabaetes mellitus Extradigestivas RR=3.8

Diapositiva 8

MECANISMOS POR LOS CUALES H. Pylori LESIONA LA MUCOSA GSTRICA Sustancias externas Lipopolisacrido Ureasa Induce apoptosis Endotoxina Actividad citotxica Urea+ H 2 O CO 2 + 2NH 4 + Daa la microcirculacin

Diapositiva 9

4. DIAGNSTICO INVASIVOS NO INVASIVOS DIRECTOS INDIRECTOS -CULTIVO -HISTOLOGA -TC.MOLECULARES (PCR) -TC.MOLECULARES.( Jugo pancretico, saliva o heces) -ANTGENO EN HECES -UREASA RPIDA -PRUEBA DEL ALIENTO (con urea *C13) -SEROLOGA

Diapositiva 10

SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD S(%) E(%) UREASA RPIDA HISTOLOGA CULTIVO TEST DE ALIENTO SEROLOGA- ELISA ANTGENOS EN HECES 97 94.1 98.2 100 77.4 100 95.5 93.5 91 50 89.5 77.8

Diapositiva 11

PRUEBA DEL ALIENTO. DETERMINACIN DE 13 CO2 EN EL ALIENTO Prueba estndar entre las pruebas diagnsticas no invasivas de infeccin por Helicobacter pylori

Diapositiva 12

Test de la urea marcada Test de la urea marcada O NH 2 UREASA *CO 2 + 2NH 4 + O NH 2 UREASA *C

Diapositiva 13

1.PROCEDIMIENTO PARA LA REALIZACIN DEL TEST Sobre de cido ctrico Comprimido de urea (*C) Tubos de recogida de muestra 2 tapones verde (basal) 2 tapones blanco (post)

Diapositiva 14

200ml AGUA + AC.CTRICO 10 MIN 2.Muestra Posterior 125 ml AGUA + UREA (Comprimido) 1.Muestra Basal 30 MIN + 2 tubos

Diapositiva 15

2.ANLISIS DE LA MUESTRA -Los valores corresponden a la relaccin 13 CO 2 /CO 2 en el aire espirado y el resultado se expresa como enriquecimiento isotpico ( 13 CO 2 /CO 2 )m - ( 13 CO 2 /CO 2 )c ( 13 CO 2 /CO 2 )c = ---------------------------------------- x 1000 o / oo 1. Basal o / oo 2. Post o / oo o0 / oo Post Basal o / oo

Diapositiva 16

RESULTADOS Paciente 1 o / oo < 5 Negativo Si o / oo > 5 Positivo Si 1. Basal -23.74 2. Post -22.47 1.27 < 5 o / oo Negativo Paciente 2. 1. Basal -22.39 2. Post 69.28 91.67 > 5 Positivo

Diapositiva 17

Falsos negativos -Realizacin de la prueba antes de 4 semanas de finalizar el tratamiento erradicador Tratamiento con inhibidores de la bomba de protones o sales de Bismuto en el momento de la prueba o dias previos Vaciamiento gtrico rpido Realizacin de la prueba en las 4 h despus de la endoscopia Falsos positivos Produccin de ureasa por otros bacterias en pacientes aclohdricos.(gastritis crnica atrfica) Recoger las muestras antes de tiempo. Recoger las muestras demasiado tarde. Elevacin por la accin hidroltica sobre la urea de la flora bacteriana.

Diapositiva 18

Fisiologa del pncreas Digestin de carbohidratros, protenas, lpidos conversin en molculas absorbibles EVALUACIN DE LA FUNCIN PANCRETICA EXOCRINA PNCREAS 1. Endocrino 2. Exocrino - Porcin enzimtica - Porcin acuosa

Diapositiva 19

Pancreatitis crnica - Proceso inflamatorio progresivo e irreversible caracterizado por la fibrosis de la glndula con destruccin del parnquima exocrino en la primera fase y en una segunda fase del parnquima endocrino -Malabsorsin por afectacin del pncreas exocrino, (esteatorrea, creatorrea), y en fases avanzadas, diabetes mellitus

Diapositiva 20

1.Clasificacin: ( Marseille Rome) 1. Pancreatitis Crnica calcificante 2. Pancreatitis crnica obstructiva Obstruccin del conducto pancretico principal 3.Pancreatits inflamatoria Fibrosis densa e infiltrado inflamatorio mononuclear Alcohol

Diapositiva 21

3. Sintomatologa: 1.Dolor crnico (80%): 1.Dolor crnico (80%): Dolor continuo abdominal de intensidad moderada. 2.Diarrea y prdida de peso 2.Diarrea y prdida de peso: Inadecuada digestin de los alimentos y la imposibilidad del organismo para asimilarlos. Desnutricion progresiva

Diapositiva 22

4. Diagnstico: -Pruebas de imagen: Radriografa, Ecografa, Ultrasonidos,... -Pruebas de funcin pancretica exocrina. -Mtodos con intubacin duodenal: Jugo pancretico -Mtodos sin intubacin duodenal: - Niveles de enzimas en suero - CUANTIFICACIN DE LA GRASA FECAL(VAN DE KAMER) ( S y E) - Cuantificacin de quimiotripsina fecal - Cuantificacin de elastasa fecal - Prueba del pancreolauril - Prueba de bentiromina - TEST DE TRIGLICRIDOS MIXTOS.TEST DE ALIENTO

Diapositiva 23

APLICACIONES CLNICAS -Detectar decrementos en la actividad de la lipasa intraduodenal. -Seguimiento de la evolucin de la enfermedad pancretica ( este test es ms sensible que el estudio de esteatorrea, ya que esta no se produce hasta que la produccin de lipasa es menor del 10%. -Monitorizacin del efecto del tratamiento

Diapositiva 24

Fundamento: Se basa en marcar con 13 C distintos sustratos que requieren la participacin de enzimas pancreticas para su escisin y absorcin. Los niveles de 13 CO 2 en aire espirado nos permitirn valorar la actividad enzimtica del pncreas.

Diapositiva 25

REPRESENTACIN DEL TEST DE ALIENTO CON TG MIXTOS MARCADOS GLICEROLGLICEROL C 20 1,3 diesteraril-2-13C-carboxil-octanoil glicerol 13 C 8 C 20 Lipasa pancretica GLICEROLGLICEROL C 20 13 C 8 C 20 Absorcin intestinal 13 C 8 + GLICEROLGLICEROL Oxidacin heptica 13 CO 2 Respiracin

Diapositiva 26

COMIDA DE PRUEBA ( 13 C-Triglicridos Mixtos) Ingredientes Mantequilla (20 gramos) Biscottes (15 gramos) Agua (200 mL) Modo de preparacin Untar la mantequilla en ambos biscottes Aadir los 250 mg de 13 C-Triglicridos en la mantequilla 50 tubos: 2 basales + 48 posteriores

Diapositiva 27

PROTOCOLO DEL TEST DEL ALIENTO 1.+ 10mg METOCLOPRAMIDA 10 min 2 tubos BASALES 2. CADA 15 MINUTOS COMIDA DE PRUEBA: Biscotes, mantequilla, 13C-TG mixtos 48 tubos POSTERIORES DURACIN: 6HORAS

Diapositiva 28

ANLISIS DE LAS MUESTRAS o / oo = ---------------------------------------- x 1000 ( 13 CO 2 /CO 2 )m - ( 13 CO 2 /CO 2 )c ( 13 CO 2 /CO 2 )c Resultados: % de 13C-recovery/h y valores acumulados durante 6 h. Se calcula utilizando un programa matemtico que calcula el porcentaje de sustracto recuperado como 13 CO 2 -Los valores corresponden a la relaccin 13 CO 2 /CO 2 en el aire espirado y el resultado se expresa como enriquecimiento isotpico

Diapositiva 29

NEGATIVO

Diapositiva 30

POSITIVO

Diapositiva 31

TRAS TTO CON KREN

Diapositiva 32

BUENA ALTERNATIVA A LAS TCNICAS TRADICIONALES - No invasivo -Recogida de muestra sencilla - No radioactivo (13C) PACIENTE INVESTIGADOR -Fcil conservacin -Manejo -Anlisis de las muestras VENTAJAS -Realizacin del test en mujeres frtiles, embarazadas, nios y ancianos -No instalaciones especiales: Espectrometria de masas ( 13 CO2 )

Diapositiva 33

FALSOS POSITIVOS: Vaciamiento gstrico retrasado Dao extenso de la mucosa intestinal (celacos, enfermedad de Crohn) Tiempo de contacto corto entre la comida de prueba y las secreciones pancreato-biliares (pacientes gastrectomizados) Diabetes y enfermedad heptica severa FALSOS NEGATIVOS: Enfermedad pancretica moderada

Diapositiva 34

-Este test es capaz de detectar disfuncin pancretica incluso en ausencia de esteatorrea, as como de diferenciar si la esteatorrea est asociada o no a enfermedad pancretica (La esteatorrea se produce si la lipasa cae por debajo de 40KU/h. )