análisis microbiológico de pearcings como ecosistemas orales secundarios

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UNIVERSIDAD INTERAMERICANA DEL ECUADOR

Microbiología Oral II

Dra. Rocío Díaz

microbiológico en piercings como ecosistemas orales secundarios”

1. TEMA

“Análisis microbiológico en piercings como

ecosistemas orales secundarios”

2. ANTECEDENTES

La microbiología ligada a la odontología ha sido muy poco difundida y estudiada por lo que

debemos realizar una extensa investigación acerca de los microorganismos específicos y

de los no específicos ya que la cavidad oral tiene la flora bacteriana más extensa del

cuerpo humano.

Las diferentes culturas del mundo, a veces desconocidas por las sociedades más

avanzadas, son la cuna de esta práctica, el perforado, como rito o señal de pertenencia a

una u otra tribu, o a veces para indicar que una persona es ya madura. Dicha práctica

difiere de las actuales, donde un perforado se coloca normalmente por cuestión de

estética o gusto.

Con referencia a la salud estas joyas pueden provocar muchas complicaciones orales en

especial las de la lengua ya que en estas se proliferan una gran gama de bacterias.

Los piercings linguales provocan también un excedente salival, si tenemos en cuenta que

la saliva es un importante agente regulador del equilibrio bacteriológico bucal, tanto el

exceso como el defecto de ella puede provocar graves problemas en la flora bucal, por

ello el exceso salival provocado.

3. JUSTIFICACIÓN

Jazmin Cedeño CajasVerónica Granda VelozJaime Núñez Bernal

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Dra. Rocío Díaz


Al realizar este proyecto hemos determinado que es importante realizar Investigaciones

de la cavidad bucal y de factores que pueden intervenir en está como es el caso de

artefactos artificiales presentes ya sean prótesis dentales, aparatos de ortodoncia,

ortopedias y piercings (linguales, de frenillos o labiales). Con esto determinar las

complicaciones linguales si son asociadas a infecciones producidas por el uso permanente

de piercings y por la microflora existente en la boca y a la posible transmisión de

microorganismos del piercing a la mucosa.

Además de las complicaciones relacionadas con la perforación, tales como fracturas de

dientes, gingivitis, sangrado, infecciones, las recesiones gingivales, y sobre todo la

alteración y cambios que puede sufrir la flora normal bacteriana de la lengua como

principal afectada por las perforaciones.

Esperamos que con los análisis que se realizaran a cada uno de los piercings podremos

concientizarnos acerca de las complicaciones higiénicas que pueden presentar estos

aparatos extraños en la cavidad oral.

Como un aspecto de suma importancia lo que queremos analizar con este proyecto es el

reconocimiento de microorganismos presentes tanto en la lengua perforada como en los

piercings ya sea metal como de plástico, sus causas de proliferación, sus resultados y la

prevención de los mismos.

4. OBJETIVOS

4.1. Objetivo General.


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Desarrollar el análisis microbiológico de los microorganismos existentes en piercings como

ecosistemas orales secundarios

4.2. Objetivos específicos.

Recolectar muestras de dos pacientes de sus respectivos piercings.

Cultivar y aislar microorganismos existentes en la perforación de la lengua y además

en los piercings a través de medios de cultivo específicos.

Realizar una comparación entre los distintos microorganismos que se encontraran en

los pacientes a analizar.

Identificar los microorganismos de los cultivos a través del análisis microscópico,

coloración Gram y pruebas bioquímicas de identificación.

Promover el cuidado de la salud personal a través de la promoción de este proyecto y

la incidencia de los microorganismos en el desarrollo de patologías que pueden

producir la utilización de piercings.

5. INTRODUCCIÓN

La cavidad bucal representa un ambiente que tiene características que favorecen la

ubicación y el crecimiento de una gran variedad de microorganismos.


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En la cavidad bucal, las áreas con diferentes ambientes fisioquímicos y nutricionales, como

la mucosa del carrillo, la lengua, las hendiduras gingivales y la superficie de los dientes,

favorecen la adherencia y el crecimiento de tipos selectos de microorganismos. Por

ejemplo, la espiroqueta treponema microdentium para vivir depende de otros

microorganismos y de un ambiente anaerobio como el de las hendiduras de la encía.

Las fuentes intrínsecas de nutrientes para los microorganismos de la cavidad bucal son los

materiales que se encuentran en torno de los dientes, los exudados, las células epiteliales

degradadas y los componentes de la saliva, ciertas proteínas salivales proporcionan

aminoácidos que influyen en el crecimiento de Streptococcus mutans y de Streptococcus

sanguis; la saliva de los sujetos con caries influye mejor en el crecimiento de los

Streptococcus mutans. Además la comida que ingerimos permanece en la cavidad bucal,

sirve como fuente extrínseca de nutrientes para la microflora bucal.

Los Stafilococos son miembros de la flora microbiana normal en humanos. Constituyen un

género de bacterias esféricas, sin movimiento y no esporuladas. Son catalasa-positivo y

capaces de crecer y producir ácido a partir de la glucosa por vía anaerobia, se tiñen

fácilmente en tinciones básicas comunes y son intensamente grampositivos.

Su crecimiento es abundante, y las colonias sobre la superficie de agar son medianamente

grandes, redondas, lisas y brillantes. En forma característica, se divide en más de un plano

y pertenece en conjuntos irregulares que asemejan racimos de uvas.

Los Piercing intraorales están incrementando su popularidad en los últimos años, la

inserción de objetos de metal en los tejidos intra y peribucal han alcanzado una gran

difusión en la población de adolescentes y adultos jóvenes. El lugar donde se colocan más

frecuentemente es en la cara dorsal de la lengua.


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Estos aditamentos causan reacciones adversas a consecuencia de los piercing son

numerosas pero la más observada es el dolor y la inflamación. El edema, Fibrosas

Inflamatoria y Mucoceles, que se origina en los casos de piercing en la lengua es debido a

la vascularización del área, la cual lleva a una obstrucción con invaginación del metal en el

cuerpo de la lengua durante la curación. En otras partes de la boca las complicaciones son

asociadas a infecciones producidas por la microflora existente en la boca.

Las otras complicaciones vienen dadas por astillamiento o fractura dentaria por el

golpeteo del metal contra la superficie de los dientes y trauma gingival.

6. MARCO TEÓRICO


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La lengua es un órgano móvil situado en el interior de la boca, impar, medio y simétrico,

que desempeña importantes funciones como la masticación, la deglución, el lenguaje y el

sentido del gusto. La musculatura tiene un origen hipobranquial como la epiglotis y es

posterior a la formación de la envoltura

lingual. La amígdala palatina tiene el mismo

origen tímico que el resto de los elementos

del anillo de Waldeyer. La lengua es un

músculo potente, tanto que llega a ser el

más poderoso de todo el cuerpo en

relación tamaño/fuerza.

La lengua tiene forma de cono, presenta un

cuerpo, una V lingual una raíz y un hueso

llamado hioides. El cuerpo o porción bucal

comprende los 2/3 anteriores, la raíz o

porción faríngea, el 1/3 posterior, separados ambos por la V lingual o istmo de las fauces.

Las partes de la lengua son:


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Cara superior: También se llama dorso de la lengua, que presenta la V lingual,

abierta hacia delante, formada por las papilas caliciformes. La superficie del dorso

de la lengua por delante de la V lingual, está en relación con el paladar, suele ser

lisa y poseer unos surcos congénitos y otros adquiridos que diferencian las lenguas

de los individuos. Un tipo de lengua repliegues glosoepiglóticos.

Cara inferior: Descansa en el suelo de la boca. En la línea media se encuentra el

frenillo o filete lingual, de forma semilunar, muy resistente que limita los

movimientos de la lengua. De no ser por este frenillo, podríamos incluso morir

tragándonos la lengua, de allí su gran importancia. A ambos lados del frenillo de la

lengua, en su parte más anterior, aparecen dos tubérculos perforados en su centro

que son los orificios de los conductos de Wharton u orificios de salida de las

glándulas salivales submandibulares. Más posteriores se encuentran los orificios de

salida de los conductos deBartolini de las glándulas sublinguales. Las venas raninas

se visualizan azuladas en la cara inferior de la lengua, a ambos lados del frenillo.

Bordes linguales: Son libres, redondeados y en relación con los arcos dentarios e

importantes.También cuentan con filtradores de bacterias

Base de la lengua: Es gruesa y ancha y está en relación de adelante hacia atrás con

los músculos milohioideos y genihioideos, con el hueso hioides y con la epiglotis a

la que se halla unida por los tres repliegues glosoepiglóticos.

Punta lingual: También se le llama vértice lingual. Sirve para degustar los

alimentos mediante la masticación

La cavidad oral puede ser considerada como un gran ecosistema. Este ecosistema está

formado por una amplia población bacteriana y por el conjunto de los ecosistemas

primarios, formados por las distintas zonas que componen la cavidad (superficies

dentales, lengua, surco gingival). La mayoría de las especies que residen en la cavidad


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bucal son transitorias; de manera que la cifra especies bacterianas residentes es de unas

20 aproximadamente.

La inmensa mayoría de las bacterias residentes en la cavidad son compatibles con la salud

del hospedador, sin embargo en circunstancias especiales del ambiente oral, bajo

determinadas condiciones y comportamientos del huésped y debido a los mecanismos de

virulencia de los microorganismos el equilibrio establecido entre la microbiota oral y los

tejidos se rompe; si esto sucede se habla de disbiosis.

Las bacterias están en la boca en una cantidad tal que no causan daño, forman una

comunidad en la que existen ciertas especies pero no otras.

Las especies suelen colaborar entre sí para su supervivencia, tal es así que a veces se

necesita la presencia de ciertas bacterias para que puedan llegar otras. Además, su

presencia evita la colonización por otras bacterias u hongos, y previene determinadas

infecciones.

La microbiota bucal y el sistema inmunológico están en equilibrio de modo que la flora no

supera unos límites. Su presencia estimula las defensas, por lo que tienen un efecto

beneficioso.

No nacemos con esta variedad de microorganismos en nuestra cavidad oral, pues en la

placenta no hay gérmenes. El primer contacto con ellos es durante el parto, provenientes

del canal vaginal materno.

La cavidad bucal es considerada como un ecosistema abierto debido a que está en

contacto permanente con el exterior, recibiendo un flujo continuo de especies nuevas,

que provienen del medio ambiente o de otros individuos.

DORSO DE LA LENGUAJazmin Cedeño CajasVerónica Granda VelozJaime Núñez Bernal

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La lengua interviene en la masticación, deglución, lenguaje y sentido del gusto. Contiene

papilas filiformes, fungiformes y caliciformes, donde se encuentran los corpúsculos

gustativos, sobre todo en las dos últimas. También se localizan en el paladar, faringe,

laringe, y pilares del velo del paladar.

Generalmente se ven microorganismos anaerobios facultativos (S. salivarius), cocos gram

negativos anaerobios estrictos y bacilos gram positivos anaerobios facultativos.

En la lengua y partes blandas predomina Streptococcussalivarius. En la saliva, la flora no es

muy abundante, pues solo recoge las bacterias de la lengua y partes blandas y muy pocos

anaerobios de los dientes y del surco gingival; además, tiene diversas sustancias

antibacterianas, como lisosima y lectoperoxidasas.

MATERIALES ARTIFICIALES

En caso de que se hayan utilizado elementos ajenos a los tejidos del hospedador. Como

materiales artificiales estos no estarían considerados como ecosistemas primarios.

El piercing de lengua es un ecosistema secundario de la cavidad oral.


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El piercinges definido como una práctica de

modificación corporal. Con fines estéticos que

necesita la perforación de la piel y mucosa, con la

ayuda de agujas con el objetivo de colocar un

objeto generalmente llamado joya y de naturaleza

metálica.

Esta fractura constituye una potencial vía de acceso

para agentes infeccioso, en el momento de la

realización como en el momento de cicatrización.

Las infecciones no son las solas complicaciones posibles, los fenómenos alérgicos son

frecuentes y bien conocidos así como otras complicaciones de tipo traumatológico.

Las infecciones se producen ya que la piel y la mucosa constituyen la principal barrera y la

más eficaz contra los microorganismos, bacterias, virus etc.

Aunque existen múltiples variantes de este piercing tales como la horizontal, orbital o

superficial, entre otras, su forma más común es en vertical, en el centro de la lengua.

El piercing en la lengua puede incluso dificultar el habla y la masticación, favorecer la

aparición de un molesto tejido cicatrizante o lesionar los nervios de la lengua. También

pueden producirse traumatismos en los dientes por el choque con la ‘joya’.

Muchos son los dentistas que no aconsejan esta práctica por razones obvias

de salud:


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1. Puede provocar una obstrucción de las vías respiratorias debido a la hinchazón e

inhalación del metal

2. Aparición de hemorragias por una sección de las arterias que irrigan la lengua

3. Riesgo de infección

La lengua, más que cualquier otra parte del cuerpo, es susceptible al riesgo de infección.

En su estado natural, la boca contiene numerosas bacterias, lo que favorece la aparición

de infecciones si el piercing no ha sido bien desinfectado antes de su colocación. Estas

infecciones pueden afectar desde las mandíbulas a toda la boca.

Si además la persona padece problemas dentales o bucales, colocarse un piercing en la

lengua puede ser una mala idea, no sólo por el riesgo de infección adicional sino porque

deberá ser retirado cada vez que sea necesario realizar una radiografía.

En la lengua, puede provocar en cualquier momento dolor e hinchazón si no es totalmente

tolerado, a esto se una un aumento de saliva y puede provocar hipersensibilidad o alergia

al metal y entumecimiento en la punta.


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El piercing en la lengua podría ser causante de que tanto el habla como la manera de

masticar se dificulten o modifiquen. Puede originar que aparezca un desagradable tejido

cicatrizante que daña las terminaciones nerviosas de la lengua y por si fuera poco una

posible obstrucción de las vías respiratorias debido a la hinchazón e inhalación del metal.

PROBLEMAS QUE OCASION LOS PIERCINGS

Los piercing ocasionan numerosos problemas

como el dolor y la inflamación, edema,

Fibrosas Inflamatoria y Mucoceles, que se

origina en los casos de piercing en la lengua es

debido a la vascularización del área, la cual

lleva a una obstrucción con invaginación del

metal en el cuerpo de la lengua durante la

curación. En otras partes de la boca las

complicaciones son asociadas a infecciones producidas por la microflora existente en la

boca.

Las otras complicaciones

vienen dadas por astillamiento o fractura dentaria por el golpeteo del metal contra la

superficie de los dientes y trauma gingival. Esto es generado ya que estos generan un

panal de bacterias que crecen en pocas semanas de colocarlos. Los investigadores,


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encontraron 80 bacterias que tienden a causar graves infecciones bucales. De las 80

bacterias 67 se habían acumulado en los pernos de acero inoxidable.

Estudios han arrojado que las perforaciones en la lengua aumentan los riesgos de sufrir

infecciones en la boca, que más tarde se pueden expandir a otras zonas del cuerpo. De

esta manera, se han registrado casos de Hepatitis C, abscesos cerebrales (cuando las

bacterias u hongos infectan parte del cerebro) y una infección cardíaca denominada

endocarditis (inflamación provocada en las cámaras y válvulas cardíacas). Los

investigadores señalan que varias de las bacterias que se encuentran en los pernos de

metal también se muestran en las infecciones sistémicas, es decir, en todo el organismo.

Las infecciones graves se pueden desarrollar a pocas semanas de la perforación o pueden

aparecer en varios meses. Actualmente, la American Dental Association se opone

rotundamente a la colocación de piercings en la lengua.

BIOPELÍCULA

Un foco de infección podría hallarse en las

capas finas de bacterias, conocidas

normalmente como biopelículas (o biofilms),

que cubren los piercing y que actúan como

reserva de gérmenes.

La biopelícula es un gran ecosistema

microbiano organizado, conformado por uno o

varios microorganismos asociados a una

superficie viva o inerte, con características funcionales y estructuras complejas. Este tipo


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de conformación microbiana ocurre cuando las células planctónicas se adhieren a una

superficie o sustrato.

Muchas de estas bacterias normalmente se producen en las biopelículas, una combinación

pegajosa de bacterias, células, lípidos, proteínas, hilos de azúcar molecular y otras

sustancias. Los investigadores consideran que las superficies de acero inoxidable son más

propicias a la formación de biopelículas que los pernos de plástico.

Para el científico SharukhKhajotia, especialista en biomateriales dentales de la Universidad

de Oklahoma, las biopelículas forman una cubierta protectora para las bacterias. Esto

significa que las bacterias son difíciles de combatir con los antibióticos, reveló el

especialista.

Las biopelículas están asociadas a la naturaleza crónica de infecciones como las que se

presentan en los pulmones de pacientes con fibrosis quística.

También se ha encontrado que más del 60% de las infecciones bacterianas son causadas

por biopelículas.

Por este motivo, han sido ampliamente estudiadas y actualmente se las consideran una

amenaza clínica potencialmente peligrosas ya que son capaces de crecer en catéteres e

implementos médicos y quirúrgicos. Una biopartícula bien conocida es la placa dental.

Los pendientes de acero inoxidable podrían recoger más bacterias que los de plástico, lo

que incrementa potencialmente el riesgo de infección y otras complicaciones.

LA PREVELENCIA DE MICROORGANISMOS SEGÚN EN MATERIAL DEL

PIRSING


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Los pendientes de acero inoxidable y titanio en la lengua tiene mas prevalencia que los

pendientes de plástico, no solo por las bacterias y el

riesgo potencialmente mayor de infecciones locales

en el conducto del piercing, sino también debido al

riesgo de dientes astillados y al deterioro de las

encías", apuntó la autora.

Los dientes astillados y el deterioro de las encías así

como la enfermedad de las encías, son algunas de

las complicaciones a largo plazo asociadas con los

piercings en la lengua, según una investigación anterior.

Las primeras complicaciones incluyen dolor,

inflamación, sangrado prolongado y dificultades para

tragar. Y lo que es más, la boca contiene tantas

bacterias que el procedimiento de perforación para el

piercing en sí mismo podría elevar el riesgo de

infección, una de las complicaciones más comunes de

perfora r la lengua.

Los pendientes de acero inoxidable eran los principales culpables, ya que representaban el

mayor recuento de bacterias, seguidos, aunque en un grado mucho menor, de los

pendientes de titanio.

Ambos metales tienen un recuento mucho más alto de bacterias que los pendientes de

plástico.


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7. PARTE EXPERIMENTAL

En el presente proyecto abordaremos el tema de microorganismos y microflora presentes

en lengua y piercings de lengua como ecosistemas orales secundarios tomando dos casos

con un piercing de plástico y uno de metal en dos pacientes respectivamente.


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Toma de muestra

Se tomarála muestradel piercing de cada paciente.

1. Para la toma de muestra del piercing se va a retirar el piercing de la lengua con

guantes estériles y sin comprometer el mismo con ninguna otra superficie evitando

lo más posible la contaminación con microorganismos no pertenecientes a nuestro

estudio, a continuación sembramos directamente en cadamedio de cultivo

previamente preparado.

Material necesario para la recogida de las muestras:

Guantes estériles

Mechero

Cajas Petri con sus respectivos medios de cultivo

Análisis microbiológico

Los pendientes se extraerán después de un mes y se tomarán muestras microbiológicas de

los mismos para realizar la respectiva muestra en cada uno de los medios de cultivo

utilizados.

Un medio de cultivoes un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el

desarrollo de los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo


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puede ser inoculado(es decir, se le añaden organismos) y a continuación incubadoen

condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano.

Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios

y deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante.

Los medios de cultivo contienen como mínimo: carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales

inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias

inductoras del crecimiento. También se añaden colorantes que actúan como indicadores

para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de

unas bacterias y no de otras.

De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en:

• Líquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se denominan caldos

de cultivoy no tienen agar en su formulación.

• Sólidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulación. Estos medios inmovilizan a las

células, permitiéndoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Las

colonias permiten al microbiólogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que

contengan más de un tipo de colonia no provienen de un cultivo puro. Las placas de agar

también se utilizan para la determinación de células viables (recuento en placas).

Para el análisis microbiológico del presente proyecto se van a utilizar diferentes medios de

cultivo como:

1. Agar Base (Sangre y Chocolate).- La infusión de músculo de corazón y la peptona,

otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran

variedad de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El

cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta

nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemólisis.La siembra


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se realizapor inoculación directa del material en estudio, sobre la superficie del

medio de cultivo.

2. Agar Manitol.-Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta

concentración salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol

acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla

brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de

una zona roja o púrpura. Las colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin

exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la

coagulasa.

En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente

de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono

fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el

agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol es

el indicador de pH.


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3. Agar MuellerHinton.- Se recomienda su uso en forma rutinaria para la realización

del antibiograma en medio sólido, debido a una serie de factores que se detallan a

continuación: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de

sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y

tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos crecen satisfactoriamente y una

gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de

cultivo.

Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es útil para realizar las

pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos.

4. Agar Mac Conkey.- El Agar MacConkey es un

medio selectivo y diferencial recomendado para el cultivo y aislamiento de


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microorganismos Gram negativos a partir de muestras clínicas, de alimentos, agua,

productos lácteos y productos farmacéuticos. En este medio se aislan y diferencían

bacilos entéricos Gram negativos fermentadores y no fermentadores de la lactosa.

El procedimiento para la preparación, inoculación e incubación de los medios de cultivo

que se van a utilizar es el siguiente:

1. Pesar los reactivos necesarios para preparar 250 mL de medio. Y ponerlos en el

matraz.

2. Con la probeta, medir la cantidad necesaria de agua y añadirla al matraz con el

polvo de medio de cultivo.

3. Mezclar los reactivos con el agua en el matraz y utilizar la varilla de agitación para

disolver grumos y lograr una mezcla homogénea.

4. Cuando la solución esté homogénea, tapar con un pedazo de gasa.

5. Colocar sobre el reverbero y dejar que se caliente siguiendo las indicaciones del

fabricante.

6. Vaciar el medio en las cajas de Petri estériles siguiendo la técnica aséptica. Las

cajas no pueden ser destapadas a menos que sea entre los mecheros. Las tapas no

se tocan por dentro con los dedos, ni se sacan del área de esterilidad.


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7. Ya sólidas, se cierran adecuadamente y se etiquetan con el tipo de medio, grupo,

tipo de muestra y fecha de elaboración.

8. Se realiza la respectiva siembra de muestra y a continuación se incuba las cajas

Petri con su contenido de acuerdo a lo requerido.

Se van a realizar diferentes pruebas microbiológicas para la determinación de

microorganismos existentes en piercings linguales que se citaremos bibliográficamente.

GRAM DE GOTA FRESCA

METODO DE COLORACION GRAM

Coloración diferencial utilizada para demostrar propiedades tintoriales de todos los tipos

de bacterias. Las bacterias Gram positivas retienen el cristal violeta tras la decoloración y

aparecen de color azul intenso. Las bacterias Gram negativas no son capaces de retener el

cristal violeta tras la decoloración y sé contracolorean de rojo con la safranina.Jazmin Cedeño CajasVerónica Granda VelozJaime Núñez Bernal

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TECNICA DE TINCION GRAM

Tomar con una asa bacteriológica una muestra de cada colonia y hacer un frotis

sobre el portaobjetos.

Fijar el material al portaobjetos de modo que no sea arrastrado durante el proceso

de tinción, pasando el portaobjetos 3 o 4 veces por la llama de un mechero de

Bunsen o una lámpara de alcohol.

Colocar el preparado sobre un soporte de tinción y cubrir la superficie con solución

cristal violeta.

Luego de dos minutos, lavar bien con agua.

Cubrir el preparado con el yodo de Gram durante un minuto, lavar nuevamente

con agua.

Sostener el portaobjetos entre el pulgar y el índice y bañar la superficie con unas

gotas de decolorante (acetona - alcohol) hasta no arrastrar más de colorante

violeta. Esto requiere de dos minutos.

Lavar con agua corriente y colocar nuevamente el portaobjeto sobre el soporte.

Cubrir la superficie con contracolor (safranina) durante un minuto. Lavar con agua

corriente.


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Colocar el preparado sobre un soporte de tinción en posición vertical, dejando que

escurra el exceso de agua y se seque el extendido.

Examinar el preparado al microscopio con objetivo de 100X. Las bacterias Gram

positivas se tiñen de azul oscuro; las bacterias Gram negativas aparecen rojo

rosadas.

Reportar el número, tipo y morfología de las bacterias encontradas.

8. ANÁLISIS DE RESULTADOS

Se realizaron 5 aislamientos de cada muestra en cada medio de cultivo preparado y

posteriormente las diferentes pruebas microbiológicas para la identificación de los

microorganismos aislados cuyos resultados e interpretación fueron los siguientes:


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Paciente 1.- El primer paciente de nuestra investigación es una mujer de 22 años que porta piercing lingual por más de 6 años.

Agar MacConkey

En la presente placa no se obtuvo crecimiento por lo que se concluye que el aislamiento

en Agar MacConkey fue nulo.

Agar Manitol

De la misma forma que la anterior placa el crecimiento en Agar Manitol es nulo.


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Agar Mueller Hinton


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En Agar Mueller Hinton hubo crecimiento de una colonia:

Colonia 1

Color: Blanquecina

Diámetro: De 0.3 a 0.5 mm

Catalasa: Positiva (+)

Coagulasa: Negativa (-)

Fresco: Bacilos y Diplobacilos curvados, Streptobacilos en cadenas cortas con movimiento

positivo (+)


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Gram: Diplobacilos agrupados en cadenas cortas y curvadas Grampositivos (Presencia de

bacilos de coloración bipolar).


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Interpretación de Resultados


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De acuerdo a la tabla 1 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet teniendo en

cuenta la morfología, respiración y coloración Gram citamos los siguientes

microorganismos:

ANAEROBIOS:

- Actinomyces,

- Arachnia,

- Bifidobacterium

- Clostridium

- Eubacterium,

- Lactobacillus,

- Propionibacterium

Según la tabla 68 del Manual de Microbiología de Álvarez y Boquet descartamos

CLOSTRIDIUM ya que presenta formación de esporas y EUBACTERIUM, LACTOBACILLUS Y

PROPIONIBACTERIUM por no presentar bacilos ramificados, por lo cual el microorganismo

aislado puede pertenecer a las siguientes familias:

- Actinomyces sp.

- Arachnia sp.

- Bifidobacterium sp.

Descartamos a ACTINOMYCES SP debido a que este microorganismo está presente en

inflamaciones con pus y la muestra tomada no tenía estas características.

Se descarta ARACHNIA SP, ya que este microorganismos necesita un medio enriquecido

con sal como es el Agar Manitol.


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Por ello llegamos a la conclusión de que el microorganismo aislado pertenece a la familia

de BIFIDOBACTERIUM SP.

Basados en el libro de Microbiología Estomatológica Martha Negroni

Definimos la única especie de interés odontológico es el Bifidobacterium Dentium.

Su hábito normal es frecuente en boca, se considera protector del organismo y

favorecedor de las defensas, aislado de la placa dental, caries y abscesos odontológicos.

Las colonias son blancas cremosas, son anaerobios estrictos su disposición celular son

bacilos y diplobacilos curvados cadenas cortas Grampositivos y movilidad positiva.

Agar Sangre


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En Agar sangre del primer paciente hubo crecimiento de dos colonias.

Colonia 1

Color: Blanca Grisácea

Diámetro: De 2 a 5 mm

Hemólisis: Alfa hemólisis




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Fresco: Bacilos arracimados con movilidad negativa (-)

Gram: Bacilos Grampositivos agrupados, curvados, en letras chinas y empalizados (presencia de bacilos gramnegativos).


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Debido a la escasa información del microorganismo aislado para su identificación nos

basamos en el libro de Microbiología Oral de Liébana Ureña en el cuál después del

respectivo análisis y comparación de las características del microorganismo aislado

llegamos a la conclusión por la concordancia encontrada, que ésta colonia pertenece al

género Leptotrichia la cual está constituido por una sola especie, Leptotrichia bucalis ya

que éste es un bacilo recto o curvado, inmóvil, con extremos afilados o redondeados, y

que se asocian en parejas, cadenas o empalizadas, los cuales en cultivos jóvenes aparecen

como grampositivos y en cultivos viejos hay presencia de gramnegativa.


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Leptotrichia bucalis es anaerobio, pero ésta se puede adaptar a una atmósfera oxigenada.

Leptotrichia Bucalis puede crecer en medios de cultivo que contengan peptonas, extracto

de levadura y suero sanguíneo lo cual está contenido en agar sangre y el microorganismo

aislado creció bien en agar sangre enriquecido con sangre.

Por lo descrito anteriormente concluimos con que el microorganismo aislado pertenece a

Leptorichia Bucalis.

Colonia 2

Color: Gris


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Diámetro: De 1 a 2 mm

Hemólisis: Nula

Catalasa: Negativa (-)


Fresco: Cocobacilos con movilidad variable (v)

Gram: Bacilos Grampositivos en letras chinas


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Fijándonos en la tabla 1 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet citamos a los microorganismos con forma bacilar Grampositivos con respiración aerobia y anaerobia facultativa: Bacillus, Mycobacterium, Nocardia, Streptomyces, Corynebacterium, Erysipelothrix y Listeria.

Descartamos Erysipelothrix debido a que es catalasa negativa, por su disposición celular y capacidad de esporulación descartamos a Bacillus spp, Mycobacterium spp, Nocardia spp, Streptomyces spp quedándonos con Corynebacterium spp y Listeria spp.

Según la tabla 9 descartamos a Listeria, ya que presenta movilidad positiva y beta hemólisis, por lo cual el microorganismo aislado pertenece a la familia Corynebacterium spp debido a que éste presenta bacilos rectos o ligeramente curvados en empalizada o letras chinas, con hemólisis variable, no esporulados que crecen bien en agar sangre y forman colonias pequeñas, de color gris y bordes contínuos.

Según la tabla 11 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet que corresponde a características diferenciales de las principales especies del género corynebacterium concluimos que el microorganismo aislado por presentar hemólisis negativa y catalasa


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positiva además de que su hábitat natural es vías respiratorias altas es Corynebacterium Pseudodiphthericum.

Agar Chocolate


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En Agar Chocolate del primer paciente se encontró una colonia.

Colonia 1

Color: Verde con halo rojo

Diámetro: De 0.5 a 2.5 cm

Catalasa: Negativa (-)


Fresco: Bacilos sueltos de movilidad variable (v)


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Gram: Bacilos Grampositivos agrupados y en letras chinas


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De acuerdo a la tabla 1 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet los

microorganismos Grampositivos, morfología bacilar anaerobios pertenecen a las familias:

Actynomices, Aracnnia, Bifidobacterium, Clostridium, Eubacterium, Lactobacillus y

Propionibacterium.

Basándonos en la tabla 68 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet descartamos

Actinomyces spp, Aracnnia spp, Bifidobacterium spp, Eubacterium spp, Lactobacillus spp y

Propionibacterium ya que no forman esporas y el microorganismo aislado presento

pequeñas esporas, por lo tanto el microorganismo aislado pertenece al género

Clostridium.


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La tabla 66 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet nos dice las características

del género clostridium que son bacilos alargados con paredes paralelas, Grampositivos,

con formación de esporas positivas, anaerobios o aerotolerantes y catalasa negativa.

Según la tabla 67 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet Clostridium tetany

presenta movilidad variable y esporas y esporas terminales positivas y subterminales

variable por lo cual concluimos con que el microorganismo aislado es Clostridium Tetani.

Paciente 2.- El segundo paciente es un hombre de 17 años con piercing lingual desde hace 3 años.

Agar MacConkey

El crecimiento en Agar MacConkey fue nulo.

Agar Manitol

En Agar Manitol el crecimiento de microorganismos no se dio.


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Agar Mueller Hinton

En Agar Mueller Hinton se encontraron dos colonias:


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Colonia 1

Color: Blanquecina

Diámetro: 2 a 4 mm

Catalasa: Levemente Positiva (+)


Fresco: Bacilos y Streptobacilos con movilidad positiva (+)

Gram: Bacilos y Streptobacilos Grampositivos en cadenas cortas y curvadas.


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De acuerdo a la tabla 1 del Manual de guía de Alvarez y. Boquet de acuerdo a su

morfología, respiración y coloración Gram tenemos los siguientes microorganismos:

ANAEROBIOS FACULTATIVOS

- Corynebacterium

- Erysipelotrix

- Listeria

Tabla 9 Clave Diferencial de Bacilos Grampositivos Aerobios y Anaerobios Facultativos del

Manual de Guía de Alvarez y Boquet de acuerdo a la prueba de catalasa tenemos y

disposición de las células descartamos a CORYNEBACTERIUM Y LISTERIA.

Por lo cual el microorganismo aislado puede pertenecer a la siguiente familia

ERYSIPELOTRIX SP.

Basados en el libro de Microbiología oral de Liébana Ureña Definimos la especie

Erysipelotrix Rhusiopathiae.

Este microorganismo se lo aísla en abrasión o herida punzante de la piel con exposición a

un animal, con mayor frecuencia se asocia con personas que manipulan a animales

Es una bacteria Gram positiva con morfología de bacilar, es anaerobio facultativo. Las

colonias son rugosas de 0,1 a 0.2 mm de diámetro y convexas.

La morfología de las células se observan como bacilos pequeños, rectos o ligeramente

curvados con extremos redondeados. Su agrupación puede ser en pares y cadenas cortas.


http://es.wikipedia.org/wiki/Bacilo

http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_positiva

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Colonia 2

Color: Amarilla




Fresco: Cocos y diplococos agrupados con movilidad positiva (+)

Gram: Cocos y diplococos Gramnegativos agrupados


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De acuerdo a la tabla 1 del Manual de guía de Alvarez y Boquet de acuerdo a su

morfología, respiración y coloración Gram tenemos los siguientes microorganismos:

ANAEROBIA

- Veillonella

Este microorganismo se caracteriza por presentar forma de cocos dispuestos en pares

(diplococos), son anaerobios estrictos, Gram negativos, no poseen movilidad, no

forman esporas. Las colonias de esta especie miden aproximadamente de 1 a 3 mm de

diámetro, de superficie lisa, opacas, de color blanco grisáceo.

Forman parte de la microbiota normal de cavidad bucal, colon y vagina. Bajo algunas

circunstancias se comportan como patógenos oportunistas. Se han podido aislar de

saliva y lengua con mayor frecuencia.

De acuerdo al libro de Microbiología Estomatológica Martha Negroni A nivel

odontológico las especies más importantes son Veillonella Dispar y Veillonella

Atypica.

Estos microorganismos se los encuentran en estado de salud en el dorso de la lengua y

forma parte de la biopelicula supragingival aislados y coagregados con Actynomyces

Agar SangreJazmin Cedeño CajasVerónica Granda VelozJaime Núñez Bernal

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En Agar Sangre crecieron dos colonias.

Colonia 1

Color: Verde Amarillenta

Diámetro: De 0.5 a 1.5 cm

Hemólisis: Beta hemólisis



Fresco: Bacilos grandes sueltos con movilidad positiva (+)


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Gram: Bacilos Grampositivos empalizados.


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Comenzamos diferenciando este microorganismo con la tabla número uno del libro de

Álvarez E. Boquet diferenciando la coloración y morfología además de la respiración, así

tenemos bacilos Grampositivos con respiración aerobia y anaerobia facultativa tenemos

los siguientes microorganismos: bacillus, mycobacterium, nocardia, streptomyces,

corynebacterium, erysipelothrix, listeria.

Según la tabla número nueve y diez del libro de Álvarez E. Boquet que corresponde a

bacilos aerobios y anaerobios facultativos descartamos por su respiración erysipelothrix,

quedando: bacillus, mycobacterium, nocardia, streptomyces, corynebacterium, listeria.


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Si mismo según la tabla número nueve y diez del libro de Álvarez E. Boquet que

corresponde a bacilos aerobios y anaerobios facultativos descartamos por su morfología a

bacillus, streptomyces y nocardia. Quedando corynebacterium y listeria.

De la misma manera según la tabla número nueve y diez del libro de Álvarez E. Boquet

que corresponde a bacilos aerobios y anaerobios facultativos descartamos por su

movilidad y hemolisis a corynebacterium, asi quedando listeria por su morfología y

disposición de las células además por ser Grampositivos y sobre todo por tener hemolisis

beta si con esta descripción llegamos a identificar a listeria monocytogenes.

Colonia 2

Color: Gris


Hemólisis: Nula



Fresco: Cocos agrupados con movilidad negativa (-)


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Gram: Bacilos y Diplobacilos Grampositivos en letras chinas


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Dra. Rocío Díaz



Comenzamos diferenciando este microorganismo con la tabla número 1 del Manual de

Microbiología de Álvarez y Boquet diferenciando la coloración y morfología además de la

respiración, así tenemos bacilos Grampositivos con respiración anaerobia tenemos los

siguientes microorganismos: actinomices spp, aracnnia spp, bifidobacterium spp,

clostridium spp, eubacterium spp, lactobacillus spp, propionibacterium spp.

Según la tabla número 68 del Manual de Microbiologia de Álvarez y Boquet que

corresponde a bacilos Grampositivos anaerobios descartamos Clostridium spp porque no

presenta formación de esporas por lo tanto nos quedamos con los microorganismos


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actinomyces spp, aracnnia spp, bifidobacterium spp, eubacterium spp, lactobacillus spp,

propionibacterium spp.

A si mismo según la tabla número 68 del Manual de Microbiologia de Álvarez y Boquet

que corresponde a bacilos Grampositivos anaerobios descartamos por su morfología a

actinomyces spp, aracnnia spp, bifidobacterium spp. Quedando eubacterium spp,

lactobacillus spp, propionibacterium spp.

De la misma manera según la tabla número 68 del Manual de Microbiología de Álvarez y

Boquet que corresponde a bacilos Grampositivos anaerobios descartamos por su catalasa

a propinobacterium spp, asi quedando eubacterium spp, lactobacillus spp.

Analizando esta bacteria y según la tabla número 69 del Manual de Microbiología de

Álvarez y Boquet que corresponde a características morfológicas de bacilos Grampositivos

anaerobios no esporulados descartamos lactobacillus por solo presentar basilos aislados o

agrupados en parejas o cadenas, así de esta manera quedando eubacterium por presentar

bacilos finos en forma de “ v “, cruz, empalizadas, parejas, cadenas, aislados.

Este género está formado por bacilos Grampositivos, a veces móviles, las colonias son de

color gris con bordes irregulares. Forman parte de la microbiota normal del tracto

intestinal, en la cavidad oral, las de mayor interés son E. alactolyticum, E. saburreum, E.

yurii, E. brachy, E. nodatum y E. timidum, quedándonos con Eubacterium saburreum ya

que este microorganismo crece en zonas mucosas de la cavidad bucal que no es expuestas

a oxígeno.


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Agar Chocolate

En la presente placa se aislaron dos colonias.


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Colonia 1

Color: Verde Amarillenta

Diámetro: De 1 a 1.5 mm



Fresco: Bacilos y cocos agrupados con movilidad positiva (+)


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Gram: Bacilos Grampositivos sueltos, agrupados y en letras chinas


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Según la tabla 1 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet entre los

microorganismos grampositivos de morfología bacilar tenemos: Aerobios como Bacillus,

Mycobacterium, Nocardia, Streptomyces y Anaerobios facultativos como

Corynebacterium, Erysipelothrix y Listeria.

De acuerdo a la tabla 9 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet decimos que

entre los microorganismos grampositivos de morfología bacilar catalasa positiva se

encuentran: Bacillus spp, Corynebacterium spp, Listeria spp, Nocardia spp y Streptomyces

spp. Según su disposición celular en empalizada o letras chinas y la capacidad de

esporulación negativa, basaándonos en los resultados obtenidos de la colonia aislada el

microorganismo pertenece a las familias Corynebacterium spp o Listeria spp.


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Descartamos el género Corynebacterium debido a que según la tabla 10 del Manual de

Microbiología de Alvarez y Boquet son microorganismos de respiración anaerobia

facultativa con algunas cepas aerobias, movilidad negativa y el microorganismo aislado

presentó movilidad positiva (+).

Según la tabla 9 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet la Listeria

monocytogenes presentan bacilos con extremos redondeados en empalizada y a veces

dan lugar a cadenas cortas.

En Listeria monocytogenes se presentan bacilos pequeños (0,4 a 0,5 micrones de ancho x

0,5 a 1,2 de largo) no ramificado y anaerobio facultativo capaz de proliferar en un amplio

rango de temperaturas (1°C a 45°C) y una elevada concentración de sal. Es catalasa

positiva y no presenta cápsula ni espora. Tiene flagelos perítricos, gracias a los cuales

presenta movilidad.

Por las características citadas, debido a la disposición de los bacilos, a su buen desarrollo

en Agar Chocolate y a las características de las colonias concluimos en que el

microorganismo aislado es Listeria monocitogenes.

Colonia 2

Color: Blanca grisácea

Diámetro: 1 mm


Coagulasa: Positiva (+)

Fresco: Bacilos sueltos con movilidad negativa (-)


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Gram: Bacilos en empalizada.


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De acuerdo a la tabla 1 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet entre los

microorganismos grampositivos de forma bacilar podemos encontrar a los Aerobios:

Bacillus, Mycobacterium, Nocardia y Streptomyces; Anaerobios facultativos:

Corynebacterium, Erysipelothrix y Listeria; y Anaerobios: Actinomyces, Araccnia,

Bifidobacterium, Clostridium, Eubacterium, Lactobacillus y propionibacterium.

Según la tabla 9 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet entre los bacilos

grampositivos catalasa positiva encontramos a Bacillus spp, Corynebacterium spp, Listeria

spp, Nocardia spp y Streptomyces spp. Descartamos Bacillus spp debido a que se presenta

en cadenas y su capacidad de esporulación es positiva, Corynebacterium spp y Listeria spp

se presentan en empalizada o letras chinas y el microorganismo aislado se presentó en

forma de V o flores y bacilos sueltos, elmicroorganismo aislado no produjo hifas

ramificadas por lo cual no pertenece a las familias Streptomyces spp o Nocardia spp.Jazmin Cedeño CajasVerónica Granda VelozJaime Núñez Bernal

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Basándonos en la tabla 68 del Manual de Microbiología de Alvarez y Boquet decimos que

entre los microorganismos grampositivos anaerobios con formación de esporas negativa

encontramos a Actinomyces spp, Aracnnia spp, Bifidobacterium spp, Lactobacillus spp y

Propionibacterium spp de los cuales descartamos a las familias Actinomyces, Aracnnia y

Bifidobacterium debido a que presentan bacilos ramificados y a las familias Eubacterium y

Lactobacillius ya que tienen catalasa negativa y el microorganismo aislado no presento

ramificaciones, además de ser catalasa positiva.

El microorganismo grampositivo morfología bacilar catalasa positiva, formación de

esporas y ramificaciones negativa, que coincide con las características de la colonia aislada

y que crece bien en Agar Chocolate pertenece al género Propionibacterium spp.

La tabla 44-1 del Libro de Diagnóstico Microbiológico de Bailey y Scott dice que los

propionibacterium son bacilos grampositivos pleomorfos similares a los difteroides

dispuestos en empalizada, las colonias son pequeñas y de color blanco a blanco grisáceo.

Según la microbiología Oral de Liebana Ureña las especies del género propionibacterium

que tienen interés odontológico so P. acnés, P. avidum, y P. propiónico de los cuales

Propionibacterium propiónico son aerotolerantes y produce catalasa positiva y crecen

bien en medios selectivos como agar chocolate, por lo tanto el microorganismo aislado es

Propionibacterium Propiónico.

9. Conclusiones

Desarrollamos el análisis microbiológico de los microorganismos existentes en

piercings como ecosistemas orales secundarios

Recolectamos muestras de dos pacientes de sus respectivos piercings.


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Dra. Rocío Díaz


Cultivamos y aislamos microorganismos existentes en la perforación de la lengua y

además en los piercings a través de medios de cultivo específicos.

Realizamos una comparación entre los distintos microorganismos que se

encontraron en los pacientes analizados.

Identificamos los microorganismos de los cultivos a través del análisis

microscópico, coloración Gram y pruebas bioquímicas de identificación.

Promovimos el cuidado de la salud personal a través de la promoción de este

proyecto y la incidencia de los microorganismos en el desarrollo de patologías que

pueden producir la utilización de piercings.

10. bibliografía

Manual de Técnicas en Microbiología M. V. Alvarez E. Boquet y Boquet y M. I.

De Fez.

Microbiología Oral J. Liébana Ureña.

Diagnóstico Microbiológico de Bailey y Scott.

Microbiología Estomatológica Marta Negroni.

11. webgrafía

www.wikipedi.org

www.losmicrobios.com

www. microral.wikispaces.com


http://www.microral.wikispaces.com/

http://www.losmicrobios.com/

http://www.wikipedi.org/

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análisis microbiológico de pearcings como ecosistemas orales secundarios

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