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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
INVESTIGACIÓN
TEMA:
“ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO Y FITOQUÍMICO
DE LAS HOJAS DE DOS VARIEDADES DE
ACHOTILLO (Nephelium lappaceum L.)”
TRABAJO DE TITULACIÓN PRESENTADO COMO REQUISITO PREVIO
PARA OPTAR POR EL GRADO DE QUÍMICO Y FARMACÉUTICO
AUTORES:
LILIANA DEL ROCÍO CEDEÑO GÓMEZ
JORGE PATRICIO GANCHOZO MORÁN
TUTORA:
QF. LAURA VALDEZ LÓPEZ M.Sc.
CO-TUTORA:
Dra. MIGDALIA MARTÍNEZ Ph.D
GUAYAQUIL - ECUADOR
2018
ii
FICHA DE REGISTRO DE TESIS/TRABAJO DE GRADUACIÓN
TÍTULO Y SUBTÍTULO: ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO Y FITOQUÍMICO DE LAS HOJAS DE DOS VARIEDADES DE ACHOTILLO (Nephelium lappaceum L.)
AUTOR(ES) (apellidos/nombres): LILIANA DEL ROCÍO CEDEÑO GÓMEZ, JORGE PATRICIO GANCHOZO MORÁN
REVISOR(ES)/TUTOR(ES) (apellidos/nombres):
ADONIS BELLO Ph.D. (REVISOR) Q.F. LAURA VALDEZ (TUTORA)
INSTITUCIÓN: UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
UNIDAD/FACULTAD: FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
MAESTRÍA/ESPECIALIDAD:
GRADO OBTENIDO: TERCER NIVEL – QUIMICO FARMACÉUTICO
FECHA DE PUBLICACIÓN: 14 DE MARZO 2018 No. DE PÁGINAS: 63
ÁREAS TEMÁTICAS: FITOQUÍMICA
PALABRAS CLAVES/ KEYWORDS:
achotillo, fenoles, flavonoides, fitoquímico, farmacognóstico.
RESUMEN/ABSTRACT (150-250 palabras): El trabajo de investigación titulado “ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO Y
FITOQUÍMICO DE LAS HOJAS DE DOS VARIEDADES DE ACHOTILLO (Nephelium lappaceum L.)”, tuvo como
finalidad la identificación de compuestos activos presentes en las hojas de dos variedades de achotillo cultivada
en una Finca correspondiente al Cantón Quevedo Provincia de Los Ríos. El presente proyecto inició con el lavado,
secado y molienda de las hojas; métodos de percepción y características organolépticas de las hojas, se realizaron
los estudios farmacognósticos para lo cual se llevaron a cabo diferentes análisis para determinar contenido de
humedad, cenizas totales, cenizas solubles en agua respectivamente. En el tamizaje fitoquímico se determinó
cualitativamente la presencia de azucares reductores, saponinas y flavonoides en las dos variedades de hojas;
con respecto al análisis cuantitativo para las dos variedades de achotillo se evidenció que las hojas amargas
contienen mayor cantidad de fenoles y flavonoides que las hojas dulces.
ADJUNTO PDF: SI NO
CONTACTO CON AUTOR/ES: Teléfono: 0985534819 - 0980126767
E-mail: liliana.cedenog@ug.edu.ec
jorge.ganchozo@hotmail.com
CONTACTO CON LA INSTITUCIÓN:
Nombre: SEDE CIENCIAS QUIMICAS
Teléfono: 042293680
E-mail: www.fcq.ug.edu.ec
X
xiii
DEDICATORIA
Dedicamos nuestro trabajo y toda nuestra carrera universitaria a
nuestro Dios Todopoderoso por brindarnos la sabiduría suficiente
para tomar las mejores decisiones y brindarnos la oportunidad de
ser profesionales, para honrarlo y venerarlo en todo lo que nos
propongamos en nuestra vida.
A él le dedicamos este trabajo, por estar siempre presente en cada
paso que damos apoyándonos en nuestras luchas y victorias y
darnos las fuerzas necesarias para no desmayar y seguir adelante
hasta alcanzar nuestro objetivo.
Liliana y Jorge
xiv
AGRADECIMIENTOS
Agradezco en primer lugar a mis amados padres que han sido los pilares fundamentales
en mi vida, gracias a ellos me he convertido en una mujer guerrera que no desmaya
ante los obstáculos que se presentan en la vida.
El camino que he tenido que seguir para cumplir este objetivo de ser profesional no fue
nada fácil tantas horas de desvelo y de sacrificio constante me permitieron cumplir mi
sueño, y gracias a las personas que supieron alentarme en los momentos más difíciles
y a mis queridos amigos Mayra y Wladimir por siempre estar pendiente de mí cuando
más necesitaba de una mano amiga.
Agradezco a mi hermosa familia, a mis hermanos, a mis suegros, a mi esposo Miller,
que me apoyaba en cada paso desvelándose conmigo y ayudándome en todo lo que
necesitaba, mi hermoso hijo Dereck que, aunque no entendía mi esfuerzo siempre me
apoyaba para seguir adelante, era mi inspiración para ser mejor cada día gracias por
estar siempre a mi lado.
Agradezco a mi amigo y compañero de tesis Jorge por estar dispuesto a colaborar
cuando más lo necesitaba gracias amigo mío por tu buena actitud.
Mi gratitud a la Dra. Migdalia Miranda Martínez, por su valiosa ayuda y orientación del
trabajo, sin importar cuan ocupada se encontraba siempre estaba dispuesta a
ayudarnos sin problemas y con una gran sonrisa.
A mi segunda madre y tutora la Dra. Laura Valdez López que estuvo pendiente de
nosotros en cada momento, que estuvo siempre dispuesta a colaborarnos y guiarnos en
nuestro trabajo, ayudándonos con mucha paciencia y amor.
Agradezco infinitamente a mi querido profesor Dr. Oswaldo Pesantes por facilitarnos el
Laboratorio de Productos Naturales para Investigación Docencia y Estudiantil, y al Dr.
Carlos Silva por estar dispuesto a ayudarnos en cada momento y prestarnos el
laboratorio de Análisis Químico de Alimentos.
Muchísimas gracias
Liliana
xv
“ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO Y FITOQUÍMICO DE LAS HOJAS DE DOS
VARIEDADES DE ACHOTILLO (Nephelium lappaceum Linneo.)”
AUTORES: Ganchozo Morán Jorge Patricio
Cedeño Gómez Liliana del Rocío
TUTOR: QF. Laura Valdez López.
RESUMEN
El trabajo de investigación titulado “ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO Y FITOQUÍMICO
DE LAS HOJAS DE DOS VARIEDADES DE ACHOTILLO (Nephelium lappaceum L.)”,
tuvo como finalidad la identificación de compuestos activos presentes en las hojas de
dos variedades de achotillo cultivada en una Finca correspondiente al Cantón Quevedo
Provincia de Los Ríos. El presente proyecto inició con el lavado, secado y molienda de
las hojas; métodos de percepción y características organolépticas de las hojas, se
realizaron los estudios farmacognósticos para lo cual se llevaron a cabo diferentes
análisis para determinar contenido de humedad, cenizas totales, cenizas solubles en
agua respectivamente. En el tamizaje fitoquímico se determinó cualitativamente la
presencia de azucares reductores, saponinas y flavonoides en las dos variedades de
hojas; con respecto al análisis cuantitativo para las dos variedades de achotillo se
evidenció que las hojas amargas contienen mayor cantidad de fenoles y flavonoides que
las hojas dulces.
Palabras claves: achotillo, fenoles, flavonoides, fitoquímico, farmacognóstico.
xvi
"STUDY PHARMACOGNOSY AND PHYTOCHEMICALS OF THE LEAVES OF
TWO VARIETIES OF ACHOTILLO (Nephelium lappaceum L.)"
AUTHORS: Ganchozo Morán Jorge Patricio
Cedeño Gómez Liliana del Rocío
TUTOR: QF. Laura Valdez López.
ABSTRACT
The research work entitled "Study pharmacognosy and phytochemicals of the leaves of
two varieties of achotillo (Nephelium lappaceum L.)", aimed to identify active compounds
present in the leaves of two varieties of achotillo cultivated in a farm corresponding to
the canton Quevedo, provincia de Los Rios. This project began with the washing, drying
and milling of the leaves; Methods of perception and organoleptic characteristics of the
leaves, both bitter and sweet; Subsequently, pharmacognosy studies were conducted
for which different analyses were carried out to determine moisture content, total ashes,
water soluble ashes, respectively, by which it was demonstrated that it complies with the
requirements of established quality. In the phytochemicals, the presence of reducing
sugars, saponins and flavonoids were determined qualitatively in which there was no
significant difference between the two varieties of leaves; With respect to the quantitative
analysis for the two varieties of Achotillo, it is was that the bitter leaves contain more
phenols and flavonoids than the sweet leaves.
Key words: achotillo, phenols, flavonoids, phytochemical, pharmacognostic.
xvii
ÍNDICE GENERAL
DEDICATORIA .......................................................................................................................xiii
AGRADECIMIENTOS ............................................................................................................ xiv
RESUMEN ............................................................................................................................... xv
ÍNDICE GENERAL ................................................................................................................ xvii
INTRODUCCIÓN ...................................................................................................................... 1
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ................................................................................... 2
HIPÓTESIS ............................................................................................................................... 2
OBJETIVO GENERAL ............................................................................................................. 2
OBJETIVO ESPECÍFICOS ..................................................................................................... 2
CAPÍTULO I. MARCO TEÓRICO ........................................................................... 3
I.1. ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIÓN ........................................................... 3
I.2. MARCO TEÓRICO ............................................................................................................ 4
I.2.1. Nephelium lappaceum L. generalidades .................................................................... 4
I.2.2. Características ............................................................................................................... 5
I.2.4. Descripción Botánica ..................................................................................................... 7
I.2.4.1. Árbol .......................................................................................................... 7
I.2.4.2. Raíces ....................................................................................................... 8
I.2.4.3. Hojas ......................................................................................................... 8
I.2.4.4. Flores ......................................................................................................... 9
I.2.4.5. Fruto .......................................................................................................... 9
I.2.5. Valores nutritivos y medicinales del achotillo o rambután (Nephelium lappaceum
L.) ................................................................................................................................................ 9
I.2.6. Estudio Farmacognóstico........................................................................................... 11
I.2.6.1. Conceptos de la farmacognosia ............................................................... 11
I.2.7. Estudio fitoquímico ...................................................................................................... 11
I.2.8. Marco conceptual ........................................................................................................ 13
CAPÍTULO II. MATERIALES Y MÉTODOS ....................................................................... 15
II.1. METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN ................................................................ 15
II.1.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN .......................................................................... 15
II.2. VARIABLES DE LA INVESTIGACIÓN ........................................................................ 15
II.2.1. VARIABLE INDEPENDIENTE .................................................................... 15
II.2.2. VARIABLE DEPENDIENTE ....................................................................... 15
Metabolitos secundarios encontrados en las dos variedades de hojas. ....................... 15
II.2.3. VARIABLE INTERVINIENTE ..................................................................... 15
xviii
II.6. ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO ...................................................................... 16
II.6.1. RECOLECCIÓN Y SELECCIÓN DEL MATERIAL VEGETAL ................. 16
II.7. MÉTODOS DE PERCEPCIÓN DE LAS HOJAS ....................................................... 16
II.7.1. MACROMORFOLOGÍA ............................................................................ 16
II.7.2. CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS ........................................................... 16
Se tomó en cuenta el olor, sabor, color, condición, y textura de la droga. ............. 16
II.8. SECADO, MOLIDA Y ALMACENAMIENTO .............................................................. 16
II.9. DETERMINACIÓN DE LOS PARÁMETROS FÍSICO-QUÍMICOS ......................... 17
II.9.2. DETERMINACIÓN DE HUMEDAD POR SECADO EN ESTUFA. MÉTODO
GRAVIMÉTRICO. ................................................................................................. 17
II.9.3. DETERMINACIÓN DE CENIZAS TOTALES. ............................................. 18
II.9.4. DETERMINACIÓN DE CENIZAS SOLUBLES EN AGUA. ......................... 19
II.9.6. DETERMINACIÓN DE SUSTANCIAS SOLUBLES. .................................... 19
II.10. ESTUDIO QUÍMICO CUALITATIVO. ........................................................................ 20
II.10.1. TAMIZAJE FITOQUÍMICO ........................................................................ 20
................................................................................................................................................... 25
II.11. ANALISIS DEL EFECTO ANTIOXIDANTE .............................................................. 26
II.11.1. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FENOLES TOTALES ........................ 26
II.11.2. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FLAVONOIDES TOTALES
EXPRESADOS COMO QUERCETINA .............................................................................. 27
II.12. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA ......................................................................... 27
CAPÍTULO III. RESULTADOS Y DISCUSIÓN .................................................................. 29
III.2. CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS DE LAS HOJAS ............................. 30
III.3. DETERMINACIÓN DE LOS ÍNDICES FARMACOGNÓSTICOS DE LAS HOJAS
31
III.4. TAMIZAJE FITOQUÍMICO ........................................................................................... 32
III.5. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FENOLES ................................................ 34
III.7. SUSTANCIAS EXTRAÍBLES ....................................................................................... 38
II.8. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA ........................................................................... 39
CONCLUSIONES ................................................................................................................... 40
RECOMENDACIONES ......................................................................................................... 40
BIBLIOGRÁFIA ....................................................................................................................... 41
ANEXOS .................................................................................................................................. 45
xix
ÍNDICE TABLAS
Tabla I. Clasificación taxonómica del Achotillo (Nephelium lappaceum). ...................... 7
Tabla II. Valores nutricionales del achotillo (Nephelium lappaceum L.) .......................10
Tabla III. Fitoquímicos más estudiados .......................................................................12
Tabla IV. Características Macromorfológicas del Nephelium lappaceum L. .................29
Tabla V. Mediciones de largo y ancho del Nephelium lappaceum L. ...........................30
Tabla VI. Características Organolépticas del Nephelium lappaceum L. .......................30
Tabla VII. Resultados de la determinación de los índices farmacognósticos del
Nephelium lappaceum L. .............................................................................................31
Tabla VIII. Resultados del Tamizaje Fitoquímico en Extracto Etéreo del Nephelium
lappaceum L. ...............................................................................................................32
Tabla IX. Resultados del Tamizaje Fitoquímico en Extracto Alcohólico del Nephelium
lappaceum L. ...............................................................................................................33
Tabla X. Resultados del Tamizaje Fitoquímico en Extracto Acuoso del Nephelium
lappaceum L. ...............................................................................................................34
Tabla XI. Absorbancia según su concentración para la curva de calibración con patrón
Ácido Gálico ................................................................................................................35
Tabla XII. Resultados obtenidos de la Absorbancia de Fenoles ..................................35
Tabla XIII. Absorbancia según su concentración para la curva de calibración con patrón
Quercetina. .................................................................................................................36
Tabla XIV. Resultados obtenidos de la Absorbancia de Flavonoides ..........................37
Tabla XV. Resultados obtenidos de Materia Extraíble en Etanol de las Hojas Dulces .38
Tabla XVI. Resultados obtenidos de Materia Extraíble en Etanol de las Hojas Amargas
....................................................................................................................................38
Tabla XVII. Resultados del factor de retención utilizando como revelador el ácido
sulfúrico. ………………………………………………………………………………………39
xx
ÍNDICE FIGURAS
Figura 1. Árbol Nephelium lappaceum L. .............................................................................. 5
Figura 2.Fruto Nephelium lappaceum L. ................................................................................ 6
Figura 3. Hoja (Nephelium lappaceum L.) .............................................................................. 8
Figura 4. Tamizaje fitoquímico. Extracción sucesiva con disolventes ............................. 24
Figura 5. Reacciones cualitativas a realizar en los extractos ............................................ 25
Figura 6.Curva de calibración con patrón Ácido Gálico ..................................................... 35
Figura 7. Curva de calibración con patrón Quercetina ....................................................... 37
Figura 8.Cromatografía de capa fina de las dos variedades de achotillo ....................... 39
1
INTRODUCCIÓN
El rambután o mamón chino se ha transformado en los últimos años en una de las
frutas “no tradicionales” más populares en el mercado de nuestro país. El color atractivo
y la apariencia característica de la fruta, el exquisito sabor de su pulpa, la relativa
rusticidad y capacidad productiva de los árboles de esta especie, han permitido que este
cultivo se transforme en una actividad frutícola promisoria de las zonas tropicales
húmedas de nuestro país. El achotillo (Nephelium lappaceum L.), es un frutal tropical
exótico, perteneciente a la Familia Sapindaceae, y es nativo de la región de Malasia e
Indonesia. El achotillo se ha difundido desde tiempos prehistóricos en la mayoría de los
países tropicales del Sureste de Asia. (Fraire, 2001)
El campo Agroindustrial no sólo se enfoca en la parte del proceso de
transformación; también es su compromiso de investigar nuevas formas de
aprovechamiento de los recursos existentes para desarrollar un manejo integral
adecuado, que incentive y ayude al productor agrícola a ofertar productos que luego
garanticen, seguridad y salud al consumidor, fomentando y desarrollando investigación.
En la bibliografía revisada se pudo encontrar diversos estudios realizados a la
cáscara y al fruto, en donde se dan a conocer compuestos de gran importancia química
como flavonoides, polifenoles, terpenos; cabe mencionar que no existen análisis
farmacognósticos y fitoquímicos realizados a las hojas de Nephelium lappaceum L., por
lo que el estudio a las hojas de achotillo será de gran aporte al incorporar información
publicada por primera vez.
Debido a la gran cantidad de nutrientes que posee la especie Nephelium
lappaceum L., ha sido de gran interés estudiar la composición de dichas variedades de
hojas del achotillo, con la finalidad de conocer los múltiples beneficios de los
compuestos químicos que se encuentran presentes. El desarrollo de este tipo de
investigación en el Ecuador, ayudan a descubrir diferentes moléculas de interés
farmacológico que aún no se hayan desarrollado; por lo que es de gran interés para los
investigadores fomentar este tipo de estudio.
2
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
¿Los compuestos químicos hallados en las hojas de dos variedades de achotillo
(Nephelium lappaceum L.) tendrán potencial farmacológico?
HIPÓTESIS
El estudio fitoquímico y farmacognóstico de las hojas de Nephelium lappaceum L.
permite identificar los principales compuestos químicos presentes en las dos variedades
de achotillo.
OBJETIVO GENERAL
Estudiar Farmacognóstica y Fitoquímicamente las hojas de dos variedades de
Nephelium lappaceum L. que se cultivan en la Ciudad de Quevedo.
OBJETIVO ESPECÍFICOS
Determinar los parámetros físicos y químicos de las hojas de dos variedades de
achotillo.
Analizar, mediante tamizaje fitoquímico, la composición química de dos variedades
de las hojas de achotillo.
Evaluar la concentración de fenoles totales y flavonoides de las hojas de la planta.
Demostrar los compuestos químicos de las hojas Nephelium lappaceum L.
mediante cromatografía de placa delgada.
.
3
CAPÍTULO I. MARCO TEÓRICO
I.1. ANTECEDENTES DE LA INVESTIGACIÓN
Como parte fundamental de presente investigación se procede a la revisión
bibliográfica de estudios con variables semejantes al presente, los cuales servirán de
base para la realización del presente, los cuales serán descritos brevemente su
metodología y resultados en los párrafos a continuación.
En un estudio realizado por Flores & Prieto, (2015) sobre el tema “estudio
Farmacognóstico y Fitoquímico del Rizoma de Zingiber officinale Roscoe “Jengibre” de
la Ciudad de Chanchamayo - Región Junín – Perú”, el cual tuvo como objetivo principal
establecer los parámetros de calidad e identificación de los fitoconstituyentes de la
droga, cuya metodología implementada fue de tipo experimental mediante la
identificación, clasificación taxonómica, perdida de humedad en secado y parámetros
de calidad, la macromorfología, determinación de sustancias solubles en agua y en
etanol 70ºGL, determinación de cenizas totales, determinación de cenizas solubles en
agua y de cenizas insolubles en ácido clorhídrico. Se determinó índices menores a los
máximos establecidos, mostrando la calidad y pureza de nuestra droga. El estudio
químico cualitativo se realizó mediante tamizaje fitoquímico según técnicas de la
Universidad de la Habana, Miranda (2001), que emplea el método de extracción
discontínua: maceración con agitación constante y solvente de polaridad creciente; éter
dietílico, etanol 70º GL y agua.
Otro estudio realizado fue el elaborado por Bucay (2014) con el tema “estudio
Farmacognóstico y Actividad Antimicrobiana de la Violetilla (Hybanthus parviflorus)
perteneciente a la parroquia de Calpi del cantón Riobamba para fiebre, artritis, purgante
y como antimicrobiano. La investigación fue de tipo experimental, investigativo utilizando
material vegetal en el laboratorio de la Facultad de Ciencias de la ESPOCH. El estudio
empezó con recolección, el lavado con hipoclorito de sodio a 10 ppm, temperatura
ambiente y su molienda, el cual se sometió a extracciones de polaridad creciente, el
tamizaje fitoquímico y su evaluación microbiológica en el extracto etéreo e
hidroalcohólico. Se demostró humedad residual de 4.71 %, cenizas solubles en agua
0.85, cenizas insolubles en ácido 1.82 %, cenizas solubles en agua 0.85, cenizas 3.53
%. Los fitoquímicos encontrados fueron: alcaloides, esteroides, lactonas, coumarinas,
triterpenos, azúcares reductores, fenoles, taninos y saponinas.
4
I.2. MARCO TEÓRICO
I.2.1. Nephelium lappaceum L. generalidades
El rambután o comúnmente conocido en el Ecuador como achotillo es una fruta
exótica proveniente del continente asiático, que al momento no tiene una alta
comercialización por su escasa producción, sin embargo, diversos estudios han
encontrado gran potencial nutritivo y de contenido sustancial para avances científicos
medicinales. (Moreno, 2013)
De acuerdo a Arias et al., (2016) menciona que “el achotillo de nombre científico
Nephelium lappaceum L. originario del archipiélago malasio es un fruto exótico cultivado
en climas tropicales como los que existe en América Latina y el Caribe por ser zonas
húmedas”.
El cultivo de achotillo en el país es muy pequeño debido al desconocimiento o
popularidad de la fruta, por lo que no tiene gran demanda, sin embargo, quienes la han
consumido la fruta concuerdan que es muy agradable de sabor y textura, además de su
alto contenido nutritivo de calcio, manganeso y potasio. (Moreno, 2013)
Osorio, Leyva, & Toledo, (2017), mencionan que “el achotillo pertenece a la familia
de la sapindácea, es un árbol perenne de tamaño medio, nativo de Asia, parecidos al
lichi y logan, posee flores pequeñas de 2mm sin pétalos que dan frutos de pulpa blanca,
jugosa y mielosa”.
N. lappaceum L, como se describió anteriormente es una fruta tropical de sabor
dulce agradable al paladar, la fruta se caracteriza por tener un aspecto de erizo de color
variable desde amarillo hasta rojos, consumido comúnmente de forma fresca. (Moreno,
2013)
5
I.2.2. Características
Estefano, (2014) N. lappaceum L, es una especie exótica que posee diversas
características que lo diferencia de las demás plantas y frutos. Este fruto proviene de un
árbol perenne, de ciclo corto, pertenecientes a la familia de Sapindaceae de orden
Sapindales y de género Nephelium conocida en el Ecuador como achotillo y en otras
partes del mundo como rambután, mamón chino, entre otro.
Figura 1. Árbol Nephelium lappaceum L.
Fuente: (Andrade, y otros, 2013).
El árbol de achotillo es de altura media de 10 a 12 metros, produce frutos el género
hembra durante la etapa adulta a partir de los 4 años en adelante, con hojas alternas y
pinnadas, con flores pequeñas de 2 a 3 milímetros color rosadas, blanca o verdosas de
donde brotan racimos de 10 a 20 frutos de características peculiares. (Andrade et al.,
2013)
6
Figura 2.Fruto Nephelium lappaceum L.
Fuente: (Pérez, y otros, 2014).
Según Pérez, y otros (2014). “el fruto N. lappaceum L. tiene una extraña apariencia
de espinas suave en la cascara de color marrón rojizo con pulpa blanquecina traslucida
de sabor dulce posee una similitud a la consistencia de la uva, con semilla no consumible
de 1 a 2 cm de color café”.
Nephelium lappaceum L. se desarrolla en el nivel del mar hasta los 1200 metros
sobre el nivel del mar, pero tiene su altura óptima es de 300 y 600 metros sobre el nivel
del mar, debe tener una humedad relativa mayor de 80 %, temperatura promedio de 25
a 32°C y con lluvias. Su mejor desarrollo se presenta en suelos profundos, limosos,
areno-limosos, francos con una tendencia ácida y muy ricos en materia orgánica. (Arias,
2016)
Existen más de 100 variedades de achotillo a nivel mundial; se caracterizan por
la calidad de la fruta, maduración, requerimientos climáticos. Entre las variedades más
importantes de Nephelium lappaceum L. se describen a continuación: (Moreno, 2013)
Leabarbudus: es un fruto grande redondo, con una cáscara amarillo-rojiza a la
maduración, está considerada como la mejor variedad porque tiene una mezcla
dulce y ácida y el arilo no se pega a la cubierta de la semilla. (Moreno, 2013).
7
Binjai: tiene un fruto oval, alargado, con una cáscara roja profunda, cuando
madura, tiene una textura crujiente y buen sabor, aunque no es tan jugosa como
la variedad anterior. (Moreno, 2013).
Rapiah: es un fruto pequeño y redondo, el pericarpio es grueso y duro, de
espiternos cortos y cuando llega a la madurez puede ser verde, amarilla o roja
(Moreno, 2013).
Seechompoo: el fruto es grande y rojo al madurar, el arilo es dulce y la cobertura
de la semilla se separa fácilmente del arilo, el pericarpio y los espiternos son
propensos a daño durante el transporte del fruto. (Moreno, 2013).
I.2.3. Taxonomía de Nephelium lappaceum
Según Rodríguez (2017), se estima que el nombre del achotillo es N. lappaceum
L., este fruto comestible consta de una clasificación taxonómica, donde se encuentra
ordenado desde la clase hasta la especie. (tabla I).
Tabla I. Clasificación taxonómica del Achotillo (Nephelium lappaceum L.).
Reino Plantae
Clase Magnoliopsida
Orden Sapindales
Familia Sapindáceae
Género Nephelium
Especie lappaceum Linneo
Fuente: (Rodríguez, 2017)
I.2.4. Descripción Botánica
I.2.4.1. Árbol
Al respecto, Moreno, (2013), manifiesta que “el rambután es un árbol de 15 a 25
metros, el diámetro del tronco es de 50 a 60 centímetro, además consta de una corteza
de color oscuro con copa semi abierto y los primeros frutos se dan al tercer año”.
8
Por su parte el autor Arias, (2015) afirma que:
“El achotillo proviene de Indonesia y Malasia, este es un árbol tropical
que crece como una planta silvestre en distintos lugares, ya que tiene
gran capacidad para adaptarse a varios tipos de suelos, este árbol
crece durante 3 años y su fruto se da luego del crecimiento total.”
I.2.4.2. Raíces
Los autores, Maridueña, Moreno, & Villafuerte (2012), establecen que “las raíces
del árbol de achotillo no son profundos en el suelo por lo que este puede extenderse
varios metros en la superficie, es decir que son raíces laterales que crecen sobre el
suelo superficial”.
I.2.4.3. Hojas
Según, Maridueña, (2013), expresa que “las hojas del achotillo son de forma
pinnadas y compuestas, este mide 30 cm de largo su color es verde oscuro, posee
pequeños pelos cuando son jóvenes, además tienen 15 pares de venas principales en
la parte inferior”.
Figura 3. Hoja (Nephelium lappaceum L.)
Fuente: Plantas medicinales Filipinas
Al respecto, Moya, (2013), manifiesta que las hojas de N. lappaceum L. “poseen
de dos a cuatro pares de folíolos, las cuales son alternos y opuestos, además puede
medir 20 cm de largo y 10 cm de ancho, el haz presenta un color verde claro brillante,
sin embargo, el envés es todo lo contrario”.
9
I.2.4.4. Flores
Vela, (2015), concierne que las flores del achotillo “son hermafroditas, las cuales
funcionan como una flor femenina y masculina, por otro lado, el estambre no tiene una
función establecida, mientras que las panículas emergen de forma escalonada, luego
de un año y medio aparecen los primeros brotes”.
Según, manifiestan los autores Alemán et al., (2013), manifiestan que la flor es el
aparato reproductor de la planta este cumplen con los procesos de fecundación de
semillas, además consta de los órganos como: cáliz, corola, estambres, estigmas y
ovarios”, cabe destacar que cada una de estas partes es esencial en el periodo de
inflorescencia.
I.2.4.5. Fruto
Grijalva, (2012), indica que “los frutos del achotillo son avalados consta de una
cobertura rojiza con pelos espinarte, este varia de tamaño y color, ya que puede ser rojo
o verde, en su interior se encuentra una drupa cubierta de carne jugosa, el cual es
comestible”.
El Instituto Interamericano de Cooperación para la Agricultura, IICA (2015), afirma
que los frutos “son globosos u ovoides de color rojo o amarillo, además posee tricomas
largos, también consta de un arilo blanco o translúcido, el cual es jugoso y rico en
vitamina C”. Cabe recalcar que varían de color tanto la fruta y los espinaretes.
I.2.5. Valores nutritivos y medicinales del achotillo o rambután (Nephelium
lappaceum L.)
Torres, (2014), estima que “el rambután presenta una composición muy nutritiva
y medicinal las cuales están compuestas de minerales, vitaminas y nutrientes, además
posee muchos beneficios para la salud. (tabla II)
10
Tabla II. Valores nutricionales del achotillo (Nephelium lappaceum L.)
Carbohidratos 20.87 g
Fibra alimentaria 0.9 g
Grasas 0.21 g
Proteínas 0.65 g
Tiamina (vit. B1) 0.013 mg
Riboflavina (vit. B2) 0.022 mg
Niacina (vit. B3) 1.352 mg
Vitamina B6 0.02 mg
Ácido fólico (vit. B9) 8 μg
Vitamina C 4.9 mg
Calcio 22 mg
Hierro 0.35 mg
Magnesio 7 mg
Manganeso 0.343 mg
Fósforo 9 mg
Potasio 42 mg
β-caroteno 2 µg
Sodio 11 mg
Zinc 0.08 mg
Fuente: (USDA, 2016)
López, (2012), concierne que “las propiedades del achotillo aporta con vitaminas,
como A, B1, B2, B3, entre otras existentes, además posee calcio, hierro, sodio, potasio,
las cuales ayuda con la eliminación de radicales libres ya que tiene propiedades
antioxidantes, antisépticas, antivíricas, también sirve como calmante y mejora el sistema
nervioso”.
11
I.2.6. Estudio Farmacognóstico
I.2.6.1. Conceptos de la farmacognosia
De acuerdo a Bruneton, (2016) “la farmacognosia es una ciencia que estudia las
características biológicas, bioquímicas y económicas de la extracción de las drogas
naturales y sus componentes del medio natural en el que se encuentran para su
utilización en la farmacología”.
La farmacognosia se dedica al estudio de los fitomedicamentos, dicho término se
introdujo por primera vez en 1815 por Seydler, está compuesto por dos palabras
“pharmakon” que significa droga y “gnosis” que se refiere a conocimiento. (Carreño, y
otros, 2015)
El estudio farmacognóstico está constituido por una serie de procesos, las cuales
permite la descripción botánica y clasificación taxonómica de las plantas, tiene como
principal utilidad identificar la actividad farmacológica para su posterior uso en la
farmacología. (Carreño, y otros, 2015)
El estudio farmacognóstico permite la identificación de las drogas que pueden ser
utilizadas de forma de fármacos en su estado natural encontrados en las frutas, raíces,
hojas o tallos, cuyas propiedades son extraídas dentro de su complejidad y constituye
una forma bruta de medicamento.
I.2.7. Estudio fitoquímico
La fitoquímica está relacionada con las sustancias químicas contenidas en las
plantas, las cuales, aunque nos son consideradas esenciales para el metabolismo
humano son beneficiosas para la prevención y tratamiento de enfermedades que
afectan la salud, existen más de 2000 fitoquímicos que se agrupan de acuerdo a su
función. (Instituto Nacional de Nutrición, 2013)
12
En la siguiente tabla se presentan los Fitoquímicos más estudiados.
Tabla III. Fitoquímicos más estudiados (Nephelium lappaceum L.)
POLIFENOLES
Ácido Elágico
Geranina
Corilagina
FLAVONOIDES Flavona
TIROLES Caroteno
Fuente: (Hernández, y otros, 2015)
13
La Fitoquímica es una disciplina científica que tiene como objeto el aislamiento,
análisis, purificación, elucidación de la estructura y caracterización de la actividad
biológica de diversas sustancias producidas por los vegetales. (Instituto Nacional de
Nutrición, 2013).
Como se indicó la fitoquímica se dedica al estudio de los metabolitos secundarios
existentes en las plantas: estructura, propiedades, función en el organismo vegetal,
aprovechamiento. (Instituto Nacional de Nutrición, 2013)
I.2.8. Marco conceptual
Farmacognosia: De acuerdo a (Bruneton, 2016) “la farmacognosia es una ciencia
que estudia las características biológicas, bioquímicas y económicas de la extracción de
las drogas naturales y sus componentes del medio natural en el que se encuentran para
su utilización en la farmacología”.
Fitoquímica: La Fitoquímica es una disciplina científica que tiene como objeto el
aislamiento, análisis, purificación, elucidación de la estructura y caracterización de la
actividad biológica de diversas sustancias producidas por los vegetales. (Instituto
Nacional de Nutrición, 2013).
Nephelium lappaceum L: De acuerdo a (Arias, y otros, 2016), menciona que “el
achotillo de nombre científico Nephelium lappaceum L originario del archipiélago
malasio es un fruto exótico cultivado en climas tropicales como los que existe en américa
latina y el caribe por ser zonas húmedas”.
Droga: (Bruneton, 2016) considera como “todo material de origen natural ya sea
en bruto u obtenido por sencillas operaciones como extractos que contienen los
principios activos con actividad farmacológica para el uso directo en la elaboración de
medicamentos con efectos sobre el sistema nervioso central”.
Principio activo: (Pérez, y otros, 2014), menciona que “son sustancia química
pura (aislada de la droga) responsable de la actividad farmacológica y del uso
terapéutico que se le atribuye a una droga”.
14
Medicamento: (Carreño, y otros, 2015) menciona que “son sustancias
medicinales (natural o sintética) con propiedades para prevenir, curar, diagnosticar una
enfermedad: se prescribe a una dosis y se ha elaborado de una forma correcta para su
administración”.
15
CAPÍTULO II. MATERIALES Y MÉTODOS
II.1. METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
II.1.1 TIPO DE INVESTIGACIÓN
El trabajo de titulación realizado presentó un método de investigación de carácter
empírico y experimental, y se llevó a cabo en el Laboratorio de Farmacognosia y
Fitoquímica en la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad de Guayaquil, en el
cual se determinó cualitativamente los compuestos presentes en las hojas de dos
variedades de achotillo.
II.2. VARIABLES DE LA INVESTIGACIÓN
II.2.1. VARIABLE INDEPENDIENTE
Variedades de las hojas de Nephelium lappaceum.
II.2.2. VARIABLE DEPENDIENTE
Metabolitos secundarios encontrados en las dos variedades de hojas.
II.2.3. VARIABLE INTERVINIENTE
Época del año
Tipo de suelo
16
II.6. ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO
II.6.1. RECOLECCIÓN Y SELECCIÓN DEL MATERIAL VEGETAL
Se recolectaron las dos variedades de hojas de la especie Nephelium lappaceum
L. en una Finca del Cantón Quevedo Provincia de Los Ríos, correspondiendo a plantas
adultas de aproximadamente 15 a 25 m de altura. Se trabajó con hojas recolectadas
entre los meses de junio y agosto del 2017 en estado de floración.
De la muestra recolectada se emplearon hojas de diferentes tamaños,
previamente lavadas con agua potable para su posterior secado.
II.7. MÉTODOS DE PERCEPCIÓN DE LAS HOJAS
II.7.1. MACROMORFOLOGÍA
La descripción macromorfológica de las hojas se realizó a simple vista. Se
evaluaron las hojas por medio de los órganos sensoriales en los cuales se tomó en
consideración: forma del limbo, borde, ápice, base, peciolo, venación, y consistencia.
También se efectuaron mediciones de largo y ancho de las hojas y se calcularon valores
promedios.
II.7.2. CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS
Se tomó en cuenta el olor, sabor, color, condición, y textura de la droga.
II.8. SECADO, MOLIDA Y ALMACENAMIENTO
El secado se llevó a cabo mediante el uso de la estufa utilizando las muestras de
las dos variedades de hojas y se las sometió a 105°C por dos horas. Una vez que la
muestra se secó se procedió a molerla, y luego se colocó en frascos herméticos en un
lugar fresco y seco.
17
II.9. DETERMINACIÓN DE LOS PARÁMETROS FÍSICO-QUÍMICOS
II.9.1. PARÁMETROS DE CONTROL DE LA CALIDAD.
Los métodos fisicoquímicos de análisis pueden determinar y establecer la calidad
de una droga y completar su identificación. Los distintos análisis se llevaron a cabo en
el Laboratorio de Farmacognosia y Fitoquímica de la Facultad de Ciencias Químicas de
la Universidad de Guayaquil. Los diferentes ensayos se realizaron según la metodología
descrita por (Miranda y Cuéllar, 2000).
II.9.2. DETERMINACIÓN DE HUMEDAD POR SECADO EN ESTUFA.
MÉTODO GRAVIMÉTRICO.
Se basa en la determinación gravimétrica de la pérdida en masa que muestra una
droga después de ser desecada en la estufa.
Procedimiento
En una cápsula de porcelana, se pesó 5 g de la muestra distribuyéndola
uniformemente.
Se colocó 3 veces en la estufa a 105 °C hasta peso constante.
Se llevó la cápsula al interior del desecador hasta que ésta alcance la temperatura
ambiente.
Realizar los cálculos:
Expresión de los resultados:
Hg =M2 − M1
M2 − M X 100
Donde:
Hg = pérdida en peso por desecación (%)
M2 = masa de la cápsula con la muestra de ensayos (g)
M1 = masa de la cápsula con la muestra de ensayo desecada (g)
M = masa de la cápsula vacía
100 = factor matemático para el cálculo
18
II.9.3. DETERMINACIÓN DE CENIZAS TOTALES.
La ceniza es el residuo obtenido después de la incineración de la materia orgánica
hasta que queda libre de carbón, y representa el contenido de material mineral presenta
en esa materia.
Procedimiento
Se determinó la masa de 2,0 g de la porción de ensayo pulverizada y tamizada en
un crisol de porcelana previamente tarado. Se incineró en un horno mufla a una
temperatura de 700°C, durante 2 h. (Miranda & Cuéllar, 2000)
Se colocó el crisol en una desecadora por 30 minutos para que llegue a
temperatura ambiente, luego se procedió a pesar, repitiéndose el proceso hasta que dos
pesadas sucesivas no difieran en más de 0,5 mg por g (masa constante). Para obtener
la masa constante los intervalos entre calentamiento y pesada son de 30 min. (Miranda
& Cuéllar, 2000)
Expresión de los resultados:
M2 - M
M1 - M C = x 100
En donde:
C = porcentaje de cenizas totales en base hidratada.
M = masa del crisol vacío (g)
M1= masa del crisol con la porción de ensayo (g)
M2= masa del crisol con la ceniza (g)
100= factor matemático para los cálculos.
19
II.9.4. DETERMINACIÓN DE CENIZAS SOLUBLES EN AGUA.
Procedimiento
A las cenizas totales obtenidas, se le añadió 20 mL de agua. Después de tapar el
crisol se calentó suavemente a la llama del mechero durante 5 min. La solución se filtró
utilizando papel de filtro libre de cenizas. El filtro con el residuo se transfirió al crisol
inicial, y luego se procedió a incinerarlo en un horno mufla a 700°C, durante 2 h.
Posteriormente se colocó en una desecadora y cuando alcanzó la temperatura ambiente
se pesó. Se repite el procedimiento hasta alcanzar peso constante. (Miranda & Cuéllar,
2000)
Expresión de los resultados.
M2 - Ma
M1 - MCa = x 100
En donde:
Ca = porcentaje de cenizas solubles en agua en base hidratada.
M2 = masa del crisol con las cenizas totales (g).
Ma =masa del crisol con las cenizas insolubles en agua (g)
M1 = masa del crisol con la muestra de ensayo (g)
M = masa del crisol vacío.
100 = factor matemático.
II.9.6. DETERMINACIÓN DE SUSTANCIAS SOLUBLES.
Se basa en la extracción de las sustancias solubles en agua, alcohol o mezclas
hidroalcohólicas, mediante maceración y evaporación hasta sequedad de una alícuota
del extracto. (Miranda & Cuéllar, 2000)
20
Procedimiento.
De la muestra de ensayo previamente pulverizada y tamizada, se pesó
exactamente 4 g y se transfirieron a un Erlenmeyer de 250 mL; se añadieron 100 mL de
alcohol etílico, luego se agito por 15 minutos, dejándolo en reposo por 4 horas; después
se llevó a reflujo por una hora, una vez terminado el tiempo de espera se procedió a
filtrarlo. Se tomó una alícuota de 20 mL transfiriéndola a una cápsula previamente
tarada. Se evaporó sobre baño de agua, luego se llevó a desecar en estufa a 105oC
durante 3 h, se enfrío y pesó. (Miranda & Cuéllar, 2000)
Expresión de los resultados
R.500.100
M (100-H)Ss =
En donde:
Ss = sustancias solubles (%).
H = humedad de la muestra (%)
500 y 100 = factores matemáticos para los cálculos.
R = residuo de la muestra (g)
M = masa de la muestra (g).
II.10. ESTUDIO QUÍMICO CUALITATIVO.
II.10.1. TAMIZAJE FITOQUÍMICO
Antes de realizar la extracción completa de la muestra a ser analizada, es
necesario llevar a cabo pruebas preliminares sencillas y rápidas que permitan detectar
cualitativamente la presencia de determinados grupos de compuestos. Esto se logra
mediante las técnicas de "screening" (tamizaje), que se ayudan de las reacciones
coloreadas y selectivas para evidenciar estos grupos de constituyentes mediante
formación de precipitados, coloraciones, etc.
No debe olvidarse que cuando se obtiene un resultado negativo, este puede
deberse a la ausencia de la clase de compuestos buscada, a la selección errónea del
solvente para extraer, a la presencia de sustancias extrañas que interfieran o a una
21
concentración en el orden de trazas del compuesto ensayado; y es 100 % seguro
cuando es positivo.
El tamizaje fitoquímico se realizó a las hojas secas y pulverizadas, según
procedimiento descrito por (Miranda & Cuéllar, 2000)
Se utilizó un sistema de extracción con disolventes de menor a mayor polaridad,
sobre las hojas pulverizadas y tamizadas, para obtener los diferentes metabolitos
extraídos según la polaridad de los extractos. La droga seca se extrajo con éter etílico,
etanol y agua por 48 horas con cada disolvente para obtener los respectivos extractos,
los cuales se emplearon en los diferentes ensayos. (Miranda & Cuéllar, 2000)
II.10.1.1. Ensayo de Sudan
Sirve para identificar compuestos grasos. Se le añade 1 mL de una solución
diluida en agua del colorante Sudan III o Sudan IV. Se calienta en baño de agua hasta
evaporación del solvente. El resultado Es positivo cuando existe la presencia de gotas
o una película coloreada de rojo.
II.10.1.2 Ensayo de Dragendorff
Sirve para elucidar la presencia de alcaloides, en caso de que la alícuota tomada
del extracto esté en un solvente orgánico, se evapora en baño de agua y se redisuelve
el residuo en 1 mL de ácido clorhídrico al 1%. En caso de ser un extracto acuoso, se
añade 1 gota de ácido clorhídrico concentrado a la alícuota, se calienta suavemente y
se deja enfriar. Se añaden III gotas del reactivo de Dragendorff a la solución acuosa
acida, se puede observar y anotar: opalescencia (+), turbidez definida (++), precipitado
(+++).
II.10.1.3. Ensayo de Mayer
Se realiza una solución acuosa ácida como la descrita anteriormente. Se adiciona
una piza de cloruro de sodio en polvo, se agita y se filtra. Se adicionan de II a III gotas
de la solución de Mayer, se puede observar y anotar: opalescencia (+), turbidez definida
(++), precipitado coposo (+++).
22
II.10.1.4. Ensayo de Wagner
Se procede de la misma forma que los ensayos descritos previamente. Se adicionan de
II a III gotas del reactivo de Wagner y se anotan los resultados de la misma manera.
II.10.1.5. Ensayo de Liebermann-Burchard
Sirve para elucidar la presencia de triterpenos y/o esteroides, debido a que ambos
metabolitos poseen un núcleo del androstano, generalmente insaturado en el anillo B y
la posición 56. En caso de que la alícuota del extracto no se encuentra en cloroformo,
el solvente debe evaporarse en baño de agua y el residuo debe redisolverse en 1 mL
de cloroformo. Se añade 1 mL de anhídrido acético y se mezcla homogéneamente. Se
adiciona por las paredes del tubo de II a III gotas de ácido sulfúrico concentrado sin
agitar. Un ensayo positivo se reconocer por un cambio rápido de coloración:
Rosado-azul muy rápido.
Verde intenso-visible, aunque rápido.
Verde oscuro-negro-final de la reacción.
Muy pocas veces puede observarse el primer cambio. El tercer cambio
generalmente ocurre cuando el material evaluado tiene cantidades significativas.
II.10.1.6. Ensayo de Fehling
Sirve para elucidar la presencia de azúcares reductores. En caso de que la
alícuota del extracto no se encuentra en agua, se debe evaporar el solvente en baño de
agua y el residuo debe redisolverse en 1 a 2 mL de agua. Se añaden 2 mL del reactivo
y se calienta en baño de agua de 5 a 10 min. Se considera positivo si la solución se
colorea de rojo o aparece precipitado rojo.
II.10.1.7. Ensayo de Catequinas
Se toma I gota de la solución alcohólica, mediante un capilar y aplicará sobre papel
filtro. Sobre la mancha se aplicará solución de carbonato de sodio. La aparición de una
mancha verde carmelita a la luz UV indica un ensayo positivo.
23
II.10.1.8. Ensayo de Shinoda
Sirve para elucidar la presencia de flavonoides. En caso de que la alícuota del
extracto se encuentra en alcohol, se diluye con 1 mL de ácido clorhídrico concentrado y
un pedacito de cinta de magnesio metálico. Después de la reacción se esperan 5min,
se adiciona 1 mL de alcohol amílico, se mezclan las fases y se deja reposar hasta que
se separen. En caso de que la alícuota del extracto se encuentra en agua, se procede
de igual forma, a partir de la adición del ácido clorhídrico concentrado. El ensayo se
considera positivo cuando el alcohol amílico se colorea de amarillo, naranja, carmelita o
rojo intenso en todos los casos.
II.10.1.9. Ensayo de Mucílagos
Sirve para elucidar la presencia de una estructura tipo polisacárido, el cual forma
un coloide hidrófilo de alto índice de masa que aumenta la densidad del agua donde se
extrae. Se enfría una alícuota del extracto en agua de 0 a 5 ºC y si la solución toma una
consistencia gelatinosa el ensayo es positivo.
II.10.1.10. Ensayo de Resinas
Se adicionan a 2 mL de la solución alcohólica, 10 mL de agua destilada. La
aparición de un precipitado indica un ensayo positivo.
II.10.1.11. Ensayo de Espuma
Sirve para elucidar la presencia de saponinas, tanto del tipo esteroidal como
triterpénica. En caso de que la alícuota se encuentre en alcohol, se diluye con cinco
veces su volumen en agua y se agitará, dicha mezcla, vigorosamente durante 5 a 10min.
El ensayo se considerará positivo si apareciese espuma en la superficie del líquido de
más de 2 mm de altura y persistente por más de 2min.
II.10.1.12. Ensayo de Cloruro Férrico
Sirve para elucidar la presencia de compuestos fenólicos y/o taninos. En caso de
que el extracto de la planta se realiza con alcohol, el ensayo determina tanto fenoles
como taninos. Se adicionan III gotas de una solución de tricloruro férrico al 5% en
solución salina fisiológica a una alícuota del extracto alcohólico. Si el extracto es acuoso,
24
el ensayo determina fundamentalmente taninos. Se adiciona acetato de sodio para
neutralizar y se añaden III gotas de una solución de tricloruro férrico al 5% en solución
salina fisiológica a una alícuota del extracto, un ensayo positivo puede dar la siguiente
información general:
Desarrollo de una coloración rojo-vino: compuestos fenólicos en general.
Desarrollo de una coloración verde intensa: taninos del tipo pirocatecólicos.
Desarrollo de una coloración azul, taninos del tipo pirogalotánicos.
Figura 4. Tamizaje fitoquímico. Extracción sucesiva con disolventes
Fuente: (Miranda & Cuéllar, 2000)
50 g Material vegetal
Extraer con 150mL de éter etílico por maceración durante
48 horas a temperatura ambiente
EXTRACTO
ETÉREO
Medir volumen
RESIDUO
SÓLIDO
Filtrar y pesar
Extraer con 3 veces el peso del
residuo en volumen con etanol
por maceración durante 48 horas
RESIDUO SÓLIDO
Filtrar y pesar
EXTRACTO
ALCOHÓLICO
Medir volumen
Extraer con 3 veces el peso del
residuo en volumen con agua destilada
por maceración durante 48 horas
RESIDUO SÓLIDO
Desechar
EXTRACTO
ACUOSO
Medir volumen
25
Figura 5. Reacciones cualitativas a realizar en los extractos
Fuente: (Miranda & Cuéllar, 2000)
SUDÁN (ACETES Y GRASAS)
DRAGENDORFF, MAYER Y WAGNER
(ALCALOIDES)
BALJET (LACTONAS Y COUMARINAS)
LIEBERMANN-BUCHARD (TRITERPENOS-
ESTEROIDES)
CATEQUINAS
RESINAS
FEHLING (AZÚCARES REDUCTORES)
BALJET (LACTONAS)
LIEBERMANN-BUCHARD (TRITERPENOS-
ESTEROIDES)
ESPUMA (SAPONINAS)
CLORURO FÉRRICO (FENOLES Y TANINOS)
NINHIDRINA (AMINOÁCIDOS)
BORNTRAGER (QUINONAS)
SHINODA (FLAVONOIDES)
KEDDE (CARDENÓLIDOS)
ANTOCIANIDINA
DRAGENDORFF. MAYER Y WAGNER
(ALCALOIDES)
DRAGENDORFF, MAYER Y WAGNER
(ALCALOIDES)
CLORURO FÉRRICO (TANINOS)
SHINODA (FLAVONOIDES)
FEHLING (AZÚCARES REDUCTORES)
ESPUMA (SAPONINAS)
MUCÍLAGOS
PRINCIPIOS AMARGOS
EXTRACTO
ETÉREO
EXTRACTO
ALCOHÓLICO
EXTRACTO
ACUOSO
26
II.11. ANALISIS DEL EFECTO ANTIOXIDANTE
II.11.1. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FENOLES TOTALES
MÉTODO FOLIN-CIOCALTEU
El método de Folin-Ciocalteu se basa en la capacidad de los fenoles para
reaccionar con agentes oxidantes. El reactivo de Folin-Ciocalteu contiene molibdato y
tungstato sódico, que reaccionan con cualquier tipo de fenol, formando complejos
fosfomolíbdico-fosfotúngstico.
Procedimiento
1. Solución diluida de Folin-Ciocalteu: Tomar 10mL del reactivo Folin-Ciocalteu y diluir
a 100 mL con agua destilada.
2. Solución de carbonato de sodio 7,5 %: Pesar 75 g de Na2CO3 anhidro y disolver en
un litro de agua destilada.
3. En tubos de ensayos de aproximadamente 50 mL de capacidad adicionar:
4. 200 µL de extracto de la muestra o de la solución diluida de ácido gálico.
5. 10 mL de solución diluida de Folin-Ciocalteu
6. 1, 8 mL de agua destilada
7. Agitar y esperar cinco minutos
8. Adicionar 8 mL de solución 7,5 % de Na2CO3. Agitar suavemente
9. Dejar en reposo durante dos horas
10. Leer la absorbancia a 765 nm
11. El blanco es agua destilada
Pesar 500 mg de ácido gálico y disolver en 20-30 mL de etanol al 96%. Transferir
cuantitativamente a matraz aforado de 50 mL y enrasar con agua destilada.
De esta solución concentrada de ácido gálico tomar alícuotas de 1, 2, 3, 4, 5, 10,
30 y 40 mL y diluirlas a 100 mL. Estas diluciones corresponden a concentraciones de
10, 20, 30, 40, 50, 100, 300 y 400 mg/L de ácido gálico.
El contenido de fenoles totales se expresó en mg de ácido gálico/L de extracto.
27
II.11.2. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FLAVONOIDES TOTALES
EXPRESADOS COMO QUERCETINA
Procedimiento
1. Solución de tricloruro de aluminio al 10 % en etanol al 96 %
2. Solución de Acetato de potasio (CH3CO2K) diluida en agua (1 M)
3. Diluir 10 mg de quercetina en etanol al 96 % y de ahí diluir a 10, 25, 50, 100, 200,
250, 300 y 350 µg/mL.
En tubos de ensayos adicionar:
1. 0,5 mL de extracto o solución patrón
2. 1,5 mL de etanol al 96 %
3. 0,1 mL de tricloruro de aluminio al 10 %
4. 0,1 mL de acetato de potasio 1 M
5. 2,8 mL de agua destilada
6. Esperar 30 minutos y leer a 415 nm
7. El blanco es etanol al 96 %
8. El contenido de flavonoides totales se expresó en base a quercetina (µg/mL)
II.12. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
Procedimiento
En la cámara se adiciona los solventes orgánicos (fase móvil) la mezcla de:
Hexano-Cloroformo-Acetato de Etilo-Metanol (10:5:5:2,5).
En la silicagel con ayuda de un lápiz y regla se mide 1 ml en la parte inferior la
misma que será la línea de referencia y en la parte superior 1,5 ml.
En la parte inferior se realizaron las punzadas con ayuda de un capilar.
Luego la silicagel se la coloca en la cámara que esta con la fase móvil y se
espera hasta que los solventes se desplacen sobre la fase estacionaria.
28
Si en la silicagel al ser expuesta a la luz UV muestra manchas de colores significa
que existe la presencia de grupos cromóforos altamente saturados.
Luego se adiciona el revelador no selectivo (revelador universal) que es ácido
sulfúrico al 50% en etanol.
𝑹𝒇 = 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑓𝑎𝑠𝑒 𝑚𝑜𝑣𝑖𝑙
29
CAPÍTULO III. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
En este capítulo se expondrán en tablas, los datos experimentales y los resultados
obtenidos en las diferentes pruebas realizadas a las hojas de achotillo.
III.1. EVALUACIÓN MACROMORFOLÓGICA DE LAS HOJAS
La evaluación macromorfológica de las hojas de Achotillo (N. lappaceum L.), se
logró determinar mediante Manual de Practicas de Laboratorio (Miranda & Cuéllar,
2000).
Tabla IV. Características Macromorfológicas del Nephelium lappaceum L.
SEGÚN SU FORMA
De acuerdo al peciolo Peciolada
De acuerdo al ápice Mucronada
De acuerdo a la base Obtusa
De acuerdo al borde del limbo Entera
De acuerdo al contorno o forma Elíptica
De acuerdo a las nerviaciones Palminervia
SEGÚN SU SUPERFICIE
Glabra
SEGÚN SU TEXTURA
Membranosa
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
Los resultados de las dimensiones de las hojas estudiadas se informan en la tabla
V, donde se pudo apreciar que las hojas de las dos variedades tienen dimensiones
similares, ligeramente superiores para la variedad amarga.
30
Tabla V. Mediciones de largo y ancho del Nephelium lappaceum L.
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
III.2. CARACTERÍSTICAS ORGANOLÉPTICAS DE LAS HOJAS
Las características organolépticas de la droga cruda no se pueden comparar con
otras plantas, ya que se utiliza los órganos de los sentidos para poder indicar las
características de la misma y son propias de cada planta, las observaciones se refieren
en la tabla VI.
Tabla VI. Características Organolépticas del Nephelium lappaceum L.
OLOR Sui generis
COLOR
Verde
CONDICIÓN Fresca y completa
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
Hojas
Valor Promedio Largo
(cm) ± S
Valor Promedio Ancho
(cm) ± S
Achotillo Dulce 13,44 ± 0,75 6,24 ± 0,38
Achotillo Amargo 13,66 ± 0,80 6,77 ± 0,42
31
III.3. DETERMINACIÓN DE LOS ÍNDICES FARMACOGNÓSTICOS DE LAS HOJAS
En la Tabla VII se detalla los resultados obtenidos de los ensayos Físico- Químicos
de las hojas de Achotillo (Nephelium lappaceum L.).
Tabla VII. Resultados de la determinación de parámetros físico-químicos del
Nephelium lappaceum L.
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
En la Tabla VII se detalla los resultados obtenidos de los ensayos Físico- Químicos
de las hojas de Achotillo (Nephelium lappaceum L.); los valores para la humedad
residual de las hojas de las dos variedades dulces y amargas fueron de 6.5 % y 6.3 %
respectivamente; Según (Solis y col. 2009) el resultado de humedad en semillas fue de
6,1 % que comparado al de esta investigación son similares.
Anotando que la humedad nos permite conocer la estabilidad de la materia prima, si
existe un exceso de agua en una droga puede provocar el crecimiento microbiano, la
presencia de hongos o insectos y el deterioro, seguido de la hidrólisis de los principios
activos.
En cuanto a cenizas totales de hojas de dos variedades de achotillo dulces y
amargas fueron de 7,16 % y 10 % respectivamente. Según (Solís y col. 2009) el valor
de cenizas que obtuvieron de las semillas fue de 1,22 % que refleja una diferencia
significativa con respecto a las hojas de dos variedades de achotillo. Las cenizas totales
nos indican el contenido de sales mineral de la planta, es importante porque la materia
mineral puede ser responsable de alguna acción farmacológica.
Al no encontrarse una investigación similar en la que se haya estudiado humedad
y cenizas en hojas de achotillo se tomó como referencia un estudio en las semillas de
Nephelium lappaceum L. para realizar una comparación, en la cual se concluyó que
existe diferencia significativa entre las semillas y las hojas de la planta.
PARÁMETROS PORCENTAJE (%)
Hojas Dulces ± S PORCENTAJE (%)
Hojas Amargas ± S
Humedad Residual 6,5 ± 0,2 6,3 ± 0,5
Cenizas Totales 7,2 ± 0,7 10,0 ± 0,2
Cenizas solubles en agua
1,2 ± 0,4 1,4 ± 0,3
Sustancias Extraibles 24,1 ± 0,2 24,0 ± 0,7
32
Los resultados que se obtuvieron para cenizas solubles en agua en hojas dulces
fueron de 1,2 % y 1,4 % en hojas amargas de esta especie; al no encontrarse
antecedentes de este análisis los resultados que se exponen se informan por primera
vez.
III.4. TAMIZAJE FITOQUÍMICO
La Tabla VIII, IX y X presenta los resultados del Tamizaje Fitoquímico, que
permitieron conocer cualitativamente la presencia de metabolitos secundarios presentes
en los extractos de éter, alcohol y agua, donde se observa una diferencia significativa
en cuanto al tipo y cantidad de metabolitos presentes, con el cual identificamos,
compuestos grasos, saponinas, triterpenos y esteroides, antocianidinas, taninos,
flavonoides, principios amargos, azúcares reductores.
Tabla VIII. Resultados del Tamizaje Fitoquímico en Extracto Etéreo del Nephelium
lappaceum L.
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
Leyenda: + ensayo positivo; ++/+++ muy positivo; - negativo
Al no haber encontrado una publicación científica relacionada a un estudio
fitoquímico de hojas de achotillo, se tomó como referencia la investigación
“Composición, comportamiento de fase y estabilidad térmica de la grasa comestible
natural de semillas de rambután (Nephelium lappaceum L.)” realizada por Solís y col,
(2009), en donde lograron aislar los principales ácidos grasos: 40,3% de ácido oleico,
34,5% de ácido araquídico, 6,1% de ácido palmítico, 7,1% de ácido esteárico, 6,3% de
góndola y 2,9% de ácido behénico corroborando así que la especie estudiada contiene
compuestos grasos.
EXTRACTO ETÉREO
HOJAS DULCES
HOJAS AMARGAS
ENSAYOS TIPO DE COMPUESTO
RESULTADOS RESULTADOS
Sudan
Compuestos
grasos
+
+
Dragendorff Alcaloides
- -
Baljet Cumarinas
-
-
Liebermann-burchard
Triterpenos y esteroides
Verde intenso Verde intenso
33
Tabla IX. Resultados del Tamizaje Fitoquímico en Extracto Alcohólico del
Nephelium lappaceum L.
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
Leyenda: + ensayo positivo; ++/+++ muy positivo; - negativo
EXTRACTO ALCOHÓLICO
ENSAYOS
TIPO DE
COMPUESTO
HOJAS
DULCES
HOJAS
AMARGAS
RESULTADOS RESULTADOS
Catequinas
Catequinas
-
-
Resinas
Resinas
-
-
Fehling
Azucares reductores
++
+++
Baljet
Cumarinas
-
-
Lieberman- burchard
Triterpenos y esteroides
+ +
Espuma
Saponinas
+++
+++
Cloruro férrico
Taninos
++
++
Ninhidrina
Aminoácidos
libres
-
-
Borntrager Quinonas
- -
Shinoda
Flavonoides
+++
+++
Antocianidina
Antocianidinas
+++
+++
dragendorff
Alcaloides
-
-
34
Tabla X. Resultados del Tamizaje Fitoquímico en Extracto Acuoso del Nephelium
lappaceum L.
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
Leyenda: + ensayo positivo; ++/+++ muy positivo; - negativo
III.5. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FENOLES
La Tabla XI y Figura 6 expresan las concentraciones con respecto a la
absorbancia obtenidos para la curva de calibración con patrón Ácido Gálico la misma
que sirve para determinar la concentración de Fenoles. La ecuación que se ajusta a la
curva es y = 1,0488x + 0,0049, con un coeficiente de correlación R² = 0,9975.
EXTRACTO ACUOSO
ENSAYOS
TIPO DE
COMPUESTO
HOJAS DULCES HOJAS AMARGAS
RESULTADOS RESULTADOS
Dragendorff
Alcaloides
-
-
Cloruro férrico Taninos
++ ++
Shinoda Flavonoides
Roja amarilla
Fehling Azucares reductores
++ +++
Espuma Saponinas
++ ++
Mucílagos Mucílagos/ Estructura tipo
polisacárido
-
-
Principios amargos
Principios amargos
+ +
35
Tabla XI. Absorbancia según su concentración para la curva de calibración con
patrón Ácido Gálico
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
Figura 6.Curva de calibración con patrón Ácido Gálico
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
El contenido de Fenoles en el extracto alcohólico de Achotillo (Nephelium
lappaceum L.) se determinó mediante la fórmula que se obtuvo en la curva de
calibración; los valores para la muestra de hojas de achotillo dulce oscilan entre los
0,710 μg/g, y para la muestra de hojas de achotillo amarga oscila entre los 0,763 μg/g.
Tabla XII. Resultados obtenidos de la Absorbancia de Fenoles
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
y = 1,0488x + 0,0049R² = 0,9975
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
4,5
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 4,5
abso
rban
cia
concentración ácido Gálico (mg/ml)
ALICUOTA Absorbancia Concentración (mg/mL)
1 0,1133 0,1
2 0,2071 0,2
3 0,2889 0,3
4 0,3925 0,4
5 0,4806 0,5
10 0,9156 1,0
30 2,7092 3,0
40 3,9133 4,0
Hojas Achotillo Dulce Hojas Achotillo Amarga
0,7486 0,8053
36
En la determinación de fenoles se obtuvieron concentraciones de 0,710 µg/g y 0,763
µg/g para las hojas dulces y amargas respectivamente, que en comparación al estudio
titulado “Actividades antioxidantes in vitro de extractos de diferentes hojas de cinco
variedades de Rambután (Nephelium lappaceum) y su correlación con contenido
flavonoide, fenólico y carotenoide total” realizado por Fidrianny y col, (2015), obtuvieron
valores que van desde 0,84 a 29,46 g ac. Gálico/ 100 g para las cinco variedades de
hojas de achotillo estudiadas.
III.6. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FLAVONOIDES
La Tabla XIII y Figura 7 expresan las concentraciones con respecto a la
absorbancia obtenidos para la curva de calibración con patrón Quercetina, la misma que
sirve para determinar la concentración de Flavonoides. La ecuación que se ajusta a la
curva es y = 0,1774x + 0,0016, con un coeficiente de correlación R² = 0,999.
Tabla XIII. Absorbancia según su concentración para la curva de calibración con
patrón Quercetina.
ALICUOTA ABSORBANCIA CONCENTRACIÓN mg/ml
1 0,0523 0,008
2 0,0912 0,016
3 0,1333 0,024
4 0,1575 0,032
5 0,1984 0,040
10 0,4290 0,080
30 1,3808 0,240
40 1,7719 0,320
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
37
Figura 7. Curva de calibración con patrón Quercetina
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
El contenido de Flavonoides en el extracto alcohólico de Achotillo (Nephelium
lappaceum L.) se determinó mediante la fórmula que se obtuvo en la curva de
calibración; los valores para la muestra de hojas de achotillo dulce oscilan entre los
16,50 μg/g, y para la muestra de hojas de achotillo amarga oscila entre los 20,59 μg/g.
Tabla XIV. Resultados obtenidos de la Absorbancia de Flavonoides
Hojas Achotillo Dulce Hojas Achotillo Amarga
2,9291 3,6539
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
En la determinación de flavonoides se obtuvieron concentraciones de 16,50 µg/g y 20,59
µg/g para las hojas dulces y amargas respectivamente, que en comparación al estudio
titulado “Actividades antioxidantes in vitro de extractos de diferentes hojas de cinco
variedades de Rambután (Nephelium lappaceum) y su correlación con contenido
flavonoide, fenólico y carotenoide total” realizado por Fidrianny y col, (2015), obtuvieron
valores que van desde 1,83 a 9,59 g Quercetina/ 100 g para las cinco variedades de
hojas de achotillo estudiadas.
y = 0,1774x + 0,0016R² = 0,999
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
0 0,5 1 1,5 2
AB
OR
BA
NC
IA
CONCENTRACIÓN
38
III.7. SUSTANCIAS EXTRAÍBLES
III.7. 1. Materia extraíble en etanol hojas dulces
Tabla XV. Resultados obtenidos de Materia Extraíble en Etanol de las Hojas de
Achotillo Dulce
Muestra Peso de la cápsula Cant.
Extracto
Materia extraíble del
extracto
Achotillo
Dulces 44,34 g 20 ml 44,52 g
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
SUSTANCIAS EXTRAÍBLES = 24,06
III.7. 2. Materia extraíble en etanol hojas amargas
Tabla XVI. Resultados obtenidos de Materia Extraíble en Etanol de las Hojas de
Achotillo Amargo
Muestra Peso de la capsula Cant.
Extracto
Materia extraíble del
extracto
Achotillo
Amargas 43,38 g 20 ml 43,56 g
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
SUSTANCIAS EXTRAÍBLES = 24,01
El contenido de materia extraíble fue de 24,06 para las hojas dulces y de 24,01 de
las hojas amargas; al no encontrarse antecedentes de este análisis los resultados que
se exponen se informan por primera vez.
39
II.8. CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
Al realizar la cromatografía en capa fina se logró separar compuestos cromóforos
verificando así que la muestra alcohólica de las Hojas de Achotillo (Nephelium
lappaceum L.) tanto dulce como amarga contiene metabolitos secundarios, pero se
observa que en ambos casos no existe diferencia.
Figura 8.Cromatografía de capa fina de las dos variedades de achotillo
Tabla XVII. Resultados del factor de retención utilizando como revelador el ácido sulfúrico.
Extracto alcohólico Rf
Hojas Dulces 0,9125
Hojas Amargas 0,9062
Elaborado por: Los autores (Cedeño & Ganchozo, 2017)
El trabajo concluyó con el análisis por cromatografía en capa delgada de los
extractos alcohólicos de las hojas de las variedades dulces y amargas. Al observar la
placa cromatográfica al UV, se revelaron en ambos extractos, compuestos con valores
de Rf similares.
40
CONCLUSIONES
Se establecieron los parámetros farmacognósticos de las hojas de dos
variedades de achotillo (Nephelium lappaceum L.), de la Ciudad de Quevedo
Provincia de Los Ríos recolectada entre los meses de junio y agosto del 2017.
El tamizaje fitoquímico logró identificar los principales metabolitos presentes:
compuestos grasos, saponinas, triterpenos y esteroides, antocianidinas, taninos,
flavonoides y azúcares reductores.
Se realizó la cuantificación de flavonoides dando concentraciones diferentes
para ambas especies, y de fenoles totales una concentración similar para las
dos variedades de achotillo.
La cromatografía de capa fina mostró la presencia de manchas atribuidas a
compuestos cromóforos en ambas muestras en la que no hubo diferencia
cualitativa.
RECOMENDACIONES
Profundizar los estudios químicos para determinar los compuestos fenólicos y/o
flavonoides presentes en las hojas de Nephelium lappaceum L.
Evaluar el potencial antioxidante de la especie, considerando los contenidos de
compuestos fenólicos y flavonoides obtenido.
Evaluar un posible suplemento alimenticio y/o medicinal a partir de las hojas de
esta especie.
Clasificar taxonómica y genéticamente las especies, cuando se encuentre en
estado de floración.
41
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45
ANEXOS
LAVADO Y SECADO DE LAS HOJAS DEL ACHOTILLO (Nephelium
lappaceum L.)
Anexo 1. Hojas del achotillo dulce en la hacienda del Sr. Steven Roca en la Cuidad de Quevedo .
Anexo 3. Lavado de Hojas de Achotillo
Anexo 2. Hojas del achotillo amargo en
la hacienda del Sr. Steven Roca en la
Cuidad de Quevedo
Anexo 4. Proceso de secado al ambiente
46
Anexo 5. Proceso de secado en estufa
CLASIFICACIÓN DE LAS HOJAS DEL ACHOTILLO (Nephelium
lappaceum L.)
Anexo 6. Clasificación de hojas
(achotillo dulce)
Anexo 7. Clasificación de hojas
(achotillo amargo)
47
PESADO Y MOLIENDA DE LAS HOJAS DE ACHOTILLO
Anexo 8. Pesado de hojas de achotillo
Anexo 10. Molienda de Hojas Amargas
Anexo 9. Trituración de las hojas
Anexo 11. Molienda de Hojas Dulces
48
DETERMINACION DEL CONTENIDO DE HUMEDAD Y DE CENIZAS
Anexo 13. Muestras colocadas en la
estufa
Anexo 12. Pesado de la muestra para
realizar humedad
Anexo 14. Cenizas de hojas dulces
49
DETERMINACIÓN DE ANÁLISIS QUÍMICO CUALITATIVO
Anexo 15. Extracto etéreo - Ensayo de
Dragendorf
Anexo 17. Extracto etéreo - Ensayo de
Saponinas
Anexo 16. Extracto etéreo - Ensayo de
Fehling
Anexo 18. Extracto etéreo - Ensayo de
Baljet
50
Anexo 19. Extracto etéreo - Ensayo de
Cloruro Férrico
Anexo 21. Extracto etéreo - Ensayo de
Resina
Anexo 23. Extracto etéreo - Ensayo de
Catequinas
Anexo 20. Extracto etéreo - Ensayo de
Catequinas
Anexo 22. Extracto etéreo - Ensayo de
Shinoda
Anexo 24. Extracto etéreo - Ensayo de
Borntrager
51
Anexo 25.Extracto alcohólico- Ensayo
de Dragendorf
Anexo 27. Extracto alcohólico- Ensayo
de Fehling
Anexo 29. Extracto alcohólico- Ensayo
de Borntrager
Anexo 26. Extracto acuoso - Ensayo de
Dragendorf
Anexo 28. Ensayo de Lieberman
52
DETERMINACION DE SUSTANCIAS SOLUBLES
Anexo 30. Peso de la muestra
Anexo 32. Balones en reflujo
Anexo 31. Adición del alcohol etílico
Anexo 33. Extracto alcohólico de las
hojas
53
CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
Anexo 34. cámara con solventes
orgánicos (fase móvil),
Anexo 36. Laboratorio de Productos
Naturales
Anexo 35. Cromatografía de capa
delgada de las dos variedades de flores
del Nephelium lappaceum L. revelada
con ácido sulfúrico.
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