tiempo de tromboplastina activada
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SIGNIFICACION CLINICA
El tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT) es una
prueba sensible a la deciencia de factores procoagulantes
del plasma as como a la presencia de ciertos inhibidores
de la coagulacin. Sirve para detectar anormalidades en
la va intrnseca de la coagulacin, como son los factores
necesarios para la formacin del activador intrnseco de
la protrombina, o sea los factores VIII, IX, XI y XII. Tam-
bin detecta deciencias severas de los factores II, V, X y
bringeno, no siendo as con los trastornos plaquetarios,
las deciencias de los factores VII y XIII ni los problemas
vasculares. La rapidez, sencillez y reproducibilidad de la
prueba la hacen muy adecuada para el control de la tera-putica anticoagulante por heparina. Tambin permite la
identicacin rpida de hemoflicos en potencia, a n de
poder someterlos a tratamientos preventivos prequirrgicos
y evitar problemas hemorrgicos.
FUNDAMENTOS DEL METODO
El ensayo se basa en la medida del tiempo que tarda en coa-
gular un plasma descalcicado, colocado en un bao a 37oC
y en presencia de un exceso de cefalina, activador y calcio.
REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A:viales conteniendo cefalina bovina con cido
ellgico como activador soluble.B. Reactivo B:solucin de cloruro de calcio estable 0,025 mol/l.
INSTRUCCIONES PARA SU USO
Reactivo A:listo para usar. Homogeneizar antes de usar.
Reactivo B:listo para usar.
PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro".
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
de trabajo en el laboratorio de anlisis clnicos.
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
acuerdo a la normativa local vigente.
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
ALMACENAMIENTO
Los Reactivos Provistos son estables en refrigerador (2-
10oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
No congelar.
MUESTRA
Plasma
a) Recoleccin:obtener sangre cuidadosamente (evitando
estasis o trauma) y colocar en un tubo con anticoagulant
proporcin 9 + 1 exacta (ejemplo: 4,5 ml de sangre + 0,de Anticoagulante TP de Wiener lab.). Mezclar suaveme
Centrifugar y separar el plasma antes de los 30 minutosrecomendable efectuar la extraccin con jeringas plstib) Aditivos:para obtener el plasma debe emplearse A
coagulante TP de Wiener lab. o citrato de sodio 130 mm(3,8%) o 109 mmol/l (3,2%).c) Sustancias interferentes conocidas:
- Las contaminaciones, visibles o no, son causa de tiemfalsamente prolongados.
- No debe emplearse EDTA o heparina para obtener plas
- Hemlisis visibles dicultan la medicin foto-ptica deresultados.
Referirse a la bibliografa de Young para los efectos dedrogas en el presente mtodo.d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento
plasma debe mantenerse en refrigerador (2-10oC) hel momento de efectuar la prueba. Este perodo no d
prolongarse ms de 4 horas. En caso de no poder prsarse en este lapso, el plasma debe congelarse a -2Este procedimiento, al igual que el descongelado, d
realizarse con rapidez (sumergiendo en bao a 37oC) pra la determinacin.La muestra debe conservarse hasta el momento de
anlisis en tubos plsticos para minimizar los efectoactivacin por contacto que pueden ocurrir con los tude vidrio.
MATERIAL REQUERIDO(no provisto)
- Tubos de hemlisis.- Pipetas y micropipetas para medirlosvolmenesindica- Bao de agua a 37oC.
- Cronmetro.- Fuente luminosa, para la observacin del cogulo.
PROCEDIMIENTO
Precalentar el Reactivo B antes de realizar la prueba bao de agua a 37oC.En un tubo de hemlisis colocar:
Muestra (plasma desconocido o control) 100
Reactivo A 100
Mezclar e incubar 3 minutos a 37oC, luego agregar:
Reactivo B(a 37oC) 100
Disparar simultneamente un cronmetro. Agitar brev
APTTes
Reactivos para la determinacin del Tiemp
Tromboplastina Parcial Activ
ellgiC
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mente para homogeneizar el contenido, mantener en el
bao unos 25 segundos. Luego sacar el tubo del bao,
inclinar suavemente una vez por segundo y detener el
cronmetro en el momento de la formacin del cogulo.
Pueden emplearse para la lectura de los resultados
aparatos automticos o semiautomticos que detecten
la formacin de cogulos de brina, por mtodos foto-
pticos o mecnicos.
Tomar nota del tiempo de coagulacin.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
Los resultados pueden expresarse de distinta forma:
1) como tiempo de tromboplastina parcial activada en
segundos;
2)como relacin entre el tiempo obtenido con el desconocido
y el de un plasma control.
METODO DE CONTROL DE CALIDAD
Plasma Control normal - patolgico de Wiener lab..
VALORES DE REFERENCIA
El intervalo de valores de referencia observados en indivi-duos normales, empleando la tcnica manual mencionada,
oscila entre 30-43 segundos.
Se consideran fuera de lo normal valores que dieran en ms
de 6 segundos de un pool de plasmas normales.
Es recomendable que cada laboratorio procese un pool de
plasmas normales con cada lote de reactivos empleado y
que correlacione los valores obtenidos para los pacientes
con el de dicho plasma, haciendo constar estos resultados
en el informe.
Cada laboratorio debe establecer sus propios valores de
referencia a partir de las tcnicas e instrumental empleado,
ya que los valores de APTT de individuos sanos varan en
funcin del laboratorio, dependiendo de la tcnica empleada.
CURVA DE CALIBRACION
Este mtodo es til como control de la respuesta a la hepa-
rina en pacientes tratados con este anticoagulante.
La tcnica empleada es la siguiente:
Preparar una Solucin de Trabajo de heparina en solucin
siolgica cuya concentracin sea 10 unidades/ml. Debe
emplearse la misma heparina que se suministra al paciente.
Preparar diluciones de esta Solucin de Trabajo utilizando
un pool de plasmas frescos normales o Plasma Control
normalcomo diluyente. Se debern obtener diluciones de
0,8; 0,6; 0,4; 0,2 y 0,1 unidades/ml.
Determinar el tiempo de tromboplastina parcial para cadauna de estas soluciones as como para el pool de plasmas
y gracar en papel semilogartmico APTT vs. concentracin
de heparina.
El valor obtenido para el paciente debe correlacionarse con
los valores de la grca para obtener la concentracin actual
de heparina circulante.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Ver Sustancias interferentes conocidas y Estabilidad e ins-
trucciones de almacenamiento en MUESTRA.
El mecanismo de la coagulacin involucra una serie
reacciones enzimticas que pueden ser inuenciadas
toda condicin que afecte a los sistemas enzimtico
general, razn por la cual se deben observar las mis
precauciones metodolgicas.
Debe tenerse en cuenta que variaciones en la relacin
coagulante/muestra o en la concentracin de citrato utiliz
afectan los tiempos de tromboplastina parcial activada
lo que se recomienda controlar la dosis de anticoagul
empleada al tomar la muestra.
PERFORMANCE
Reproducibilidad:los estudios de precisin se realiz
siguiendo una modicacin del protocolo EP5-A del NC
(National Committee on Clinical Laboratory Standards
obtuvieron los siguientes resultados:
Precisin intraensayo
Muestra Nivel D.S. C.
Plasma Control normal 34,1 seg 0,49 seg 1,4
Plasma Control patolgico 87,9 seg
0,49 seg 0,5Pool de plasmas normales 29,3 seg 0,35 seg 1,1
Precisin total
Muestra Nivel D.S. C.
Plasma Control normal 34,1 seg 1,00 seg 2,9
Plasma Control patolgico 87,9 seg 3,66 seg 4,1
Pool de plasmas normales 29,3 seg 0,51 seg 1,7
PRESENTACION
- 150 determinaciones (6 x 2,5 ml). (Cd 1705004).
BIBLIOGRAFIA
- Bell, W.N.; Alton, H.G. - Nature 174:880 (1954).
- Dacie, J.B.; Lewis, S.M. - Hematologa Prctica - Edicio
Toray, 2aEdicin (1970).
- Wintrobe, M.M. - Hematologa Clnica, 3a. Edicin I
mdica (1969).
- Bragos, I.; Rodrguez Pcora, S.; Lorenzo, L.; Cap
G. - 53 Triduo Bioqumico Cientco Anual, Baha Bla
(1988).
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Te
AACC Press, 4thed., 2001.
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2000 Rosario - Arge
M
Wiener Laboratorios S.A.I.C.Riobamba 29442000 - Rosario - Argentinahttp://www.wiener-lab.com.arDir. Tc.: Viviana E. CtolaBioqumicaProducto Autorizado A.N.M.A.T.Cert. N: 1225/95
UR1
Wiener la
SmbolosLos siguientes smbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnstico de Wiener lab.
CEste producto cumple con los requerimientos
previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
productos sanitarios para el diagnstico "in vitro"
V Uso diagnstico "in vitro"
X Contenido suciente para ensayos
H Fecha de caducidad
l Lmite de temperatura (conservar a)
No congelar
F Riesgo biolgico
Volumen despus de la reconstitucin
Contenido
g Nmero de lote h Nmero de catlogo
Calibrador
b Control
b Control Positivo
c Control Negativo
i Consultar instrucciones de uso
M Elaborado por:
Xn
Nocivo
Corrosivo / Castico
Irritante
Xi
P Representante autorizado en la ComunidadEuropea
Cont.
Calibr.
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