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TEMA 3ORGANIZACIÓN DEL MATERIAL HEREDITARIO EN PROCARIOTAS

GENÓFORO DE LOS VIRUS -Características generales -Virus ADN-fago

GENÓFORO BACTERIANO -Cromosoma bacteriano -ADN extracromosómico: PLÁSMIDOS -clasificación -utilización tecnología ADN recombinante

GENÓFOROS VIRALES

VIRIÓN(diámetro 10-400 nm)

DNA/RNA

nucleocápside

organización simple y acelular

ausencia DNA y RNA en el mismo virión

incapacidad reproducirse de forma independiente y llevar a cabo división celular

GENÓFOROS VIRALES

VIRUS ARN-ADN

Tipo de Molécula

Tipo de Hélice

Tipo de virus según

huésped.Familia de virus

Lineal Sencilla Animal

Retrovirus (Ribodesoxivirus) - Sarcoma de Rous (Pollo)

- Leucemia de Rauscher (ratón) - HIV (virus de inmunodeficiencia

humana causante del SIDA)VIRUS ARN-ADN

Tipo de Molécula

Tipo de Hélice

Tipo de virus según

huésped.Familia de virus

CircularDoble (gap)

Animal Hepatitis B

VIRUS HEP. B

GENÓFOROS VIRALES

FAGO

infecta E. coli

cápside icosaédrica, DNA doble hélice lineal con ~ 48.000 pb

extremos cohesivos: extremos 5’ monocatenarios (12 nucleótidos de secuencia complemenaria)

lisis bacteria ciclo lisogénico

GENÓFORO BACTERIANO

ADN doble hélice circular tamaño variable (0,1 a 8 x109 dalton) E. coli (1.100 m longitud, 3,2 x105 pares

nucleótidos)

Material genético NUCLEOIDE

ADN (60%)

LÍ PI DOS

(1%)

PROTEÍ NA

(5-10%)

ARN (30%)

ADN altamente organizado Plegamiento formando DOMINIOS SUPERENRROLLAMIENTO

GENÓFORO BACTERIANO

Nº dominios en E. coli variable (12 a 80 dominios) Composición: ADN dúplex condensado + proteínas

básicas

GENÓFORO BACTERIANO

PROTEÍNAS BÁSICAS DETECTADAS EN BACTERIAS

Proteína ComposiciónContenido por células

Semejanza con eucariontes

HUDímero

subunidades y de 9.000 d.

40.000 dímeros

Histona H2A

H

Dímero subunidades idénticas de

28.000 d.

30.000 dímero

Histona H2B

IHF

Subunidad de 10.500 d.

Subunidad de 9.500 d.

Desconocido

Desconocida

H1Subunidad de

15.000 d.10.000 copias

Desconocida

HLP1Monómero de

15.000 d.20.000 copias

Desconocida

PSububnidad de

3.000 d.Desconoci

doProtaminas

GENÓFORO BACTERIANO

-Fis-Dan (DNA-binding protein under anaerobic conditions) = YgiP(Nucleic Acids Research, 2010, Vol. 38, No. 11 3605–3618)

ADN EXTRACROMOSÓMICOPLÁSMIDOS

ADN doble y circular

Replicación autónoma; información no vital

Posibilidad de integración en cromosoma principal bacteriano EPISOMA

- secuencias inserción y transposones

Tamaño variable: 2.000 a 100.000 pbADN bacterianoplásmidos

FUNCIÓN PLÁSMIDOS

TRANSFERENCIA FACTOR FERTILIDAD (F) ENTRE BACTERIAS CONJUGACIÓN

F+

F-

FUNCIÓN PLÁSMIDOS

Hfr

factor F integrado en genóforo bacteriano

transferencia de marcadores cromosómicos a F- con elevada frecuencia

transferencia desde punto fijo y en un orden determinado (integración específica factor F)

FUNCIÓN PLÁSMIDOS

plásmido E. coli resistente a ampicilina (ampr) y tetraciclina (tetr)

ESTIRPE A ESTIRPE B

cys+, leu+, thr+ cys-, leu-, thr--

medio mínimo con leucina y treonina

medio mínimo con:

-treonina

-leucina

-sin suplementos

A.- Medio mínimo con leucina y treonina:

-cys+, leu+, thr+

-cys+, leu-, thr-

B.- Medio mínimo con:

- TREONINA: cys+, leu+, thr+ Y cys+, leu+, thr-

- LEUCINA: cys+, leu+, thr+ Y cys+, leu-, thr+

- MEDIO MÍNIMO: cys+, leu+, thr+

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”

-rasgos característicos gen (nº intrones, posición)

-estructura producto proteico gen FUNCIÓN

comparación secuencias ADN de genes evolución

modificación parte de secuencia ADN de un gen y reinserción

CONSTRUCCIÓN ADN RECOMBINANTE

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”

DIGESTIÓN ADN

(enzimas de restricción)

corte ADN en fragmentos para su clonación

cortes escalonados ADN recombinante

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”

clonación gen específico

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”

diseño plásmidos

como vectores

de clonación de ADN

TECNOLOGÍA “ADN RECOMBINANTE”