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Evaluacin del efecto de la Gentiana lutea en ratas con lesiones en las microvellosidades del epitelio intestinal
EVALUACIN DELOS EFECTOS DE LA Gentiana lutea L. EN RATAS CON LESIONES EN LAS MICROVELLOSIDADES DEL EPITELIO INTESTINAL.
Flores Ongay Juan Alejandro
Ramos Blancas Guillermo Alberto
El proceso de nutricin va mas all del hecho de ingerir los alimentos, si no que tambin hay que absorberlos, es decir, transportarlos al interior del organismo a travs de la mucosa del tubo digestivo La digestin y la absorcin de los nutrientes tienen lugar en el intestino delgado el cual es un tubo de unos 6 m de largo y de dimetro progresivamente decreciente que va desde el piloro hasta la vlvula ilecoidal, la cual lo separa del intestino grueso. Esta dividido en tres porciones:
Duodeno: (es una estructura retroperitoneal) que tiene 25 cm de longitud
Yeyuno: Mide entre 2 y 2.5 m
Ileon: mide entre 3 y 3.5 m
Las funciones del intestino delgado son de 3 tipos:
Conduccin de los alimentos desde l estomago hasta el intestino grueso.
Digestin de los alimentos.
Absorcin de los alimentos que deben atravesar la mucosa intestinal y pasar al torrente sanguneo.
(Robinson 1987)
Cuando alguna de las capas de microvellosidades del intestino ha sufrido algn tipo de lesin el dao es de consideraciones graves, pues la capacidad de absorcin es menor, y por tanto se sufre de una desnutricin a gran nivel. (Harrison 2001)
Estas lesiones se encuentran generalizados bajo el nombre de Sndrome de mala absorcin (SMA), que es el dficit de aprovechamiento de nutrientes debido a una disminucin del rea de absorcin en el intestino delgado. (Harrison 2001)
En la actualidad, la medicina aloptica no ha buscado la manera de mejorar la absorcin de nutrientes; mas bien, ha combatido la enfermedad dndole al cuerpo nutrientes en exceso para que estos sean absorbidos en cantidades mnimas requeridas. Por ello, la herbolaria ha empezado a entrar en accin contra este tipo de enfermedades con el uso de plantas que se sabe tienen efectos regenerativos sobre algunas clulas, como en el caso de la planta Gentiana lutea
Evaluacin del efecto de la Gentiana lutea en ratas con lesiones en las microvellosidades del epitelio intestinal
El proceso de nutricin va mas all del hecho de ingerir los alimentos, si no que tambin hay que absorberlos, es decir, transportarlos al interior del organismo a travs de la mucosa del tubo digestivo; por otro lado, la digestin es un proceso continuo desde la boca, hasta el final del intestino delgado, que se basa en la fragmentacin progresiva del alimento hasta que este de un tamao que pueda ser transportado a travs de la membrana epitelial hasta el torrente sanguneo. (Escuredo 1993). Esto es realizado gracias al aparato digestivo que es el sistema encargado de incorporar los alimentos desde el exterior hasta el torrente sanguneo, el cual los distribuye por todo el organismo.
Pero el aparato digestivo es una estructura exterior que presenta defensa contra la invasin de microorganismos, pero al mismo tiempo no debe tener una superficie tan impermeable como para que los alimentos no puedan entrar en el cuerpo. Esto se soluciona con la presencia de una sustancia espesa que acta como una barrera, que varia de composicin en las diferentes porciones del tubo digestivo (moco) y que es secretada por las membranas digestivas (Escuredo 1993).
La digestin y la absorcin de los nutrientes tienen lugar en el intestino delgado el cual es un tubo de unos 6 m de largo y de dimetro progresivamente decreciente que va desde el piloro hasta la vlvula ilecoidal, la cual lo separa del intestino grueso. Esta dividido en tres porciones:
Duodeno: (es una estructura retroperitoneal) que tiene 25 cm de longitud
Yeyuno: Mide entre 2 y 2.5 m
Ileon: mide entre 3 y 3.5 mEn el intestino delgado se pueden reconocer 4 capas caractersticas ( mucosa, submucosa, muscular y serosa)
Las funciones del intestino delgado son de 3 tipos:
Conduccin de los alimentos desde l estomago hasta el intestino grueso.
Digestin de los alimentos.
Absorcin de los alimentos que deben atravesar la mucosa intestinal y pasar al torrente sanguneo.
(Robinson 1987)
Cuando alguna de estas capas de microvellosidades del intestino ha sufrido algn tipo de lesin el dao es de consideraciones graves, pues la capacidad de absorcin es menor, y por tanto se sufre de una desnutricin a gran nivel. (Harrison 2001)
Estas lesiones se encuentran generalizados bajo el nombre de Sndrome de mala absorcin (SMA), que es el dficit de aprovechamiento de nutrientes debido a una disminucin del rea de absorcin en el intestino delgado. (Harrison 2001)
En la actualidad, la medicina aloptica no ha buscado la manera de mejorar la absorcin de nutrientes; mas bien, ha combatido la enfermedad dndole al cuerpo nutrientes en exceso para que estos sean absorbidos en cantidades mnimas requeridas. Por ello, la herbolaria ha empezado a entrar en accin contra este tipo de enfermedades con el uso de plantas que se sabe tienen efectos regenerativos sobre algunas clulas, como en el caso de la planta Gentiana lutea (Ver apndice 1).
Tomando en cuenta que la regeneracin se debe a varios factores como son:
La diferenciacin de sus clulas: cuando mayor es la diferenciacin celular menor es la capacidad de regeneracin.
La vida media de la clula: si la vida media de la clula es corta, entonces poseen una gran capacidad de multiplicacin regeneracin.
Capacidad de divisin celular: cuando la vida media celular es corta existe una gran capacidad de multiplicacin y se produce un pool de clulas indiferenciadas.
(Matthew 2 ed.)
Se podrn regenerar las microvellosidades del intestino? Tambin surge la pregunta la raz de la Gentiana lutea, que tiene propiedades regenerativas, tiene realmente la capacidad de regenerar las clulas epiteliales del ileon?
La metodologa se llev a cabo como se muestra a continuacin:
OBJETIVO GENERAL
Tratar de regenerar el tejido epitelial del intestino delgado de una rata Wistar con extractos de Gentiana lutea.OBJETIVOS PARTICULARES
Corroborar que los extractos de Gentiana lutea tienen alguna actividad teraputica a nivel del intestino delgado.
Observar si el tratamiento provoca efectos secundarios.
CONCLUSIONES
Apndice 1: Gentiana lutea L. (Genciana Mayor)
Nombres vulgares:
Gengiba
Xenz
Gentiane
Enzin
Genciana
Descripcin
Planta herbacea, vivaz, con un tallo de 0.50 a 1.30 m, no ramificado, erecto, redondo, de 1 a 2 cm de grosor, hueco, de color verde glauco. Las hojas son abrazadoras, opuestas, elpticas, de hasta 30 cm de altitud por 15 cm de anchura. La raz es larga, de hasta 1 m, ramificada y gruesa, de 2 a 5 cm de dimetro, azurcadas longitudinalmente, arrugadas transversalmente, de color parduzco exteriormente y amarillento en su interior, con olor fuerte y sabor muy margo.
Parte til: Las races.
Hbitat: En montaa, pastizales y laderas.
Altitud: Desde 300 a 2500 m.
Clima: Mediterrneo, atlntico, hmedo y clima de alta montaa.
Suelo: Tierras pardas hmedas con un pH no superior a 6.5.
Rendimiento
Con una densidad de 100,000 pl/ha, el rendimiento en raz varia de 24 a 40 tm/ha, que se reducen de 6 a 10 tm de raz seca. La raz seca, no fermentada contiene de un 33 a un 45% de materia extractiva hidrosoluble.
Composicin qumica
La raz contiene Hetersidos amargos como funcin lactona, l ms abundante es el genciopicrsido, tambin llamado genciopicrina y genciamarina, que supone del 1 al 3% de la droga fresca; Le acompaan otros glucsidos muy prximos, como el amarogentiosido, que a pesar de su baja concentracin, 0.1% confiere a la raz su intenso amargor.
Es rica en nutrientes, como el trisacrido gencianosa y los disacridos genciobiosa y sacarosa, que en la fermentacin se hidrolizan parcialmente a glucosa y fructosa.
Contiene pectina, grasas, trazas de aceite esencial y del 5 al 6% de elementos minerales.
Propiedades y aplicaciones.
Tiene propiedades tnicas, euppticas, aperitivas, estimulantes de las secreciones gstrica y biliar, as como sus regeneraciones. Tambin tiene propiedades hemostticas (pectina), antipirticas, antinflamatorias, y cicatrizantes.
Usadas por la industria farmacutica y la herboristera.
Por su carcter tnico y aperitivo, se usa principalmente, su raz fermentada, en las industrias de bebidas alcohlicas y aperitivas. Se usa en locin, como tnico capilar, y ampliamente en veterinaria. Se emplea en infusin en polvo y en las tres formas genricas: Tintura, extracto fluido y extracto blando.
Apndice 2: Preparaciones histolgicas.
Las preparaciones histolgicas se prepararn con la finalidad de llevar a cabo estudios sobre el epitelio intestinal, enfocndonos principalmente en las microvellosidades.
Primero, se fijar la muestra de tejido en formol salino amortiguado en un bao que durar de 24 a 72 horas. Despus, se lavara en agua para llevar a cabo la deshidratacin en alcohol etlico de una forma gradual, empezando por alcohol al 10%, luego al 20%, al 40%, al 80% y al 100%, dejando la muestra sumergida durante 2 horas en cada concentracin.
Ya deshidratada la muestra, se aclara en xilol (xileno) dando a la muestra 2 baos de 15 minutos en el xilol.
Se infiltra en 3 cambios de parafina de 90 minutos cada uno y se incluye finalmente en parafina en 3 baos que duren de a hora. El bloque de parafina se afina para dejar la capa alrededor de la muestra lo ms delgada posible, y se corta en micrtomo a un espesor de 5 micras.
A la muestra se le retira la parafina colocndola en una platina a 60 y se retira a la parafina lquida, para despus sumergir la muestra en hematoxilina de Groat y se le da un lavado con agua corriente.
Posteriormente, se sumerge en Eosina al 1% durante 2 a 5 minutos; se sumerge en picrofucsina durante 5 minutos; se deshidrata y se monta en resina
Apndice 3: Glucosa (mtodo Trinder (GOD- PAP))
Fundamento: la glucosa es oxidada por la glucosa oxidasa (GOD) liberando peroxido de Hidrgeno; este reacciona con e fenol y 4- aminofenazona en presencia de peroxidasa (POD), dando un colorante rojo- violeta de antipirilquinonimina en cantidad proporcional a la glucosa presente en la muestra.
GLUCOSA + O2 + H2O Ac. Glucnico + H2O2
2 H2O2 + 4- Aminofenazona + Fenol Quinonimina + 4H2O
REACTIVOS:
Reactivos de color- enzimas.
Amortiguador de fosfatos 0.1 Mol/L, pH 7.5
4- Aminofenazona 0.25 mmol/L
Fenol 0.75 mmol/L
GOD ( 7.5 kU/L
POD ( 1.5 kU/L
Mutarrotasa ( 1.5 kU/L
Estabilizadores
Solucin patrn de glucosa: glucosa 100 mg/dL.
MTODO:
Mezclar en tubos 13 x 100
AdicinProblemaPatrn
Suero o plasma20 mL___________
Solucin patrn___________20 mL
Reactivo de color2mL2 mL
Mezclar bien. Incubar a 25C durante 30 minutos o bien a 37C durante 10 minutos. Leer la absorbancia del problema y del patrn a 546 NM contra blanco de agua. El color es estable 1 hora.
CLCULO:
Glucosa mg % = (Aprod. /Apatron) x 100
CIFRA DE REFERENCIA.
Suero o plasma: 75- 115 mg %
Apndice 4: Lpidos totales (mtodo Merckotest)
INTRODUCCIN.
Debido a que las grasas son insolubles en agua, se define a los lpidos totales cricos como la masa de material que puede ser extrada del suero como los solventes orgnicos tradicionales.
Los lpidos totales estn constituidos por los siguientes elementos: triglicridos, colesterol libre, steres de colesterol, fosfolpidos, glucolpidos (cerebrosidos), lipoprotenas de baja y muy baja densidad, as como lipoprotenas de alta densidad. Los lpidos desempean dos funciones principales:
1.- Son componentes estructurales de la membrana nuclear mitocondrial y celular.
2.- Sirven como deposito de reserva de combustible metablico
3.- Los lpidos circulan en la sangre perifrica unidos a protenas derivndose en protenas; como ejemplos el colesterol y los triglicridos, que constituyen las lipoprotenas de baja y alta densidad.
Se ha estimado una cifra media de los lpidos totales presentes en el torrente sanguneo que oscilan entre los 500 y 600 mg %. De encontrarse un excedente de la cifra normal, se conoce como hiperlipemia o estado quiloso.
FUNDAMENTO.
Los lpidos del suero sin desproteinizar reaccionan con cido sulfrico concentrado, en bao Mara hirviendo, para formar iones carbonio que reaccionan con el grupo carbonilo del cido fosfrico- vainilla produciendo un complejo de color rosa, cuya intensidad es directamente proporcional a la cantidad de lpidos presentes en la muestra problema.
REACTIVOS.
cido sulfrico concentrado (95-97 %)
Reactivo de coloracin (cido fosfrico- vainillina)
Patrn de lpidos totales (1000 mg %)
APARATOS Y MATERIAL.
1. Centrfuga clnica
2. Espectrofotmetro
3. Tubos de ensaye de 13 x 100 mm
4. Tubos de ensaye de 16 x 150 mm
5. Pipetor automtico conteniendo el cido sulfrico concentrado
6. Pipetas graduadas de 5 mL
7. Pipeta para 50 microL.
TCNICA
1. Etiquetar dos tubos de 16 x 150 como ST (estndar) y P (problema) y proceder como sigue para obtener cada una de las correspondientes mezclas reactivas:
METODO BIOXON:
ADICINTUBO PROBLEMA (MEZCLA REACTIVA P)TUBO ST (MEZCLA REACTIVA ST)
Suero50 L
Sol. Patrn de lpidos tot.50 L
Ac. Sulfrico concentrado1 mL1 mm
Mezclar bien e incubar en bao Maria 10 min. Enfriar en bao Mara fri 5 min.
2. Etiquetar 3 tubos de 13 x 100 como problema, ST y Blanco y proceder como sigue:
ADICINTUBO PROBLEMA TUBO ST TUBO BLANCO
Mezcla reactiva correspondiente100 L100 L
Ac. Sulfrico concentrado100 L
Reactivo de color2.5 mL2.5 mL2.5 mL
Mezclar bien e incubar a 37 C durante 15 min. Medir la absorbencia A de los tubos problema y ST a 540 nm calibrando el espectrofotmetro en el blanco.
CLCULO.
Lpido tot. del problema igual (CONC.Patron/ D.O.Patron) x D. O.Problema.
CIFRAS DE REFERENCIA.
450- 1000 mg %
ADICINMUESTRAPATRON
Suero 50 L
Patron50 L
Reactivo de color2.5 mL2.5 mL
Mezclar bien e incubar a 37 C durante 10 min. Leer la absorbencia a 625 nm contra blanco de agua. El color es estable 10 min.
CALCULOS.
Colesterol total mg/ 100 mL igual (Amuestra / Apatron) x 200
CIFRAS DE REFERENCIA.
Colesterol total hasta 239 mg %.
Apndice 5: Protenas totales (mtodo Biuret).
FUNDAMENTO
La reaccin de Biuret se basa en la adicin del reactivo alcalino de cobre (el biuret) que reacciona con los enlaces peptdicos de las protenas, produciendo un color azul violeta debido al in que forma entre el in cuprico y dos enlaces peptdicos adyacentes.
REACTIVOS
1. Reactivo de biuret (concentrado)
2. Reactivo de referencia para protenas totales (concentrado)
3. Solucin patrn de protenas totales.
SOLUCIONES
Reactivo de Biuret para protenas totales
Reactivo de referencia para protenas totales
Solucin patron: concentracin 4 g%
TCNICA
Pipetear en tubos de ensaye de 13 x 100
ADICINBLANCOPATRONPROBLEMA
Suero50 microlitros
Patrn50 microlitros
Reactivo de Biuret2.5 mL2.5 mL2.5 mL
Mezclar bien e incubar en bao mara a 37 C durante 15 minutos. Medir la bsorbancia de los tubos a 545 nm calibrando a cero de absorbancia con el blanco. El color es estable durante 6 horas.
CLCULO
Protenas totales (g%)= (Conc patron/ D. O. Patrn) x D. O. ProblemaCIFRAS DE REFERENCIA
Adultos y nios a partir de los 3 aos6.7 a 8.7 g%
Nios menores de 3 aos5.4 a 8.7 g%
Recin nacidos5.2 a 9.0 g%
BIBLIOGRAFA
Robins, S. L. (1987) Patologa estructural y funcional. Editorial Interamericana Pgs. 816 - 817, Mxico, D. F.
RB27R62
Matthew, J. ; Lynch et al Mtodos de laboratorio 2 edicin. Editorial Interamericana. Mxico D. F. Pgs. 695 883
Fauci, Longo. (2001) Harrisons principles of internal medicine. 15 edicin. Editorial McGraw- Hill. Nueva York, EUA.
Paniagua C. Gloria (2003) manual de anlisis clnicos. 1 edicin. UNAM. Tlalnepantla, Mxico.
Luna (1968) Histologist staining methods. The armed forces institute of pathology. EUA.
Muoz, Fernando (1993) Plantas medicinales y aromticas (estudio, cultivo y procesado). 2 edicin. Ediciones Mundi- Prensa. Bilbao, Espaa.
Al termino del experimento se sacrificaron 2 ratas para realizar cortes histolgicos en el ileon (intestino delgado.)
Grupo control neomicina: al finalizar las dosis de neomicina, no se le aplico tratamiento posterior
Se les realiz pruebas hematolgicas para estandarizar las concentracioes de los nutrientes
Grupo genciana: al termino del tratamiento de neomicina se le sometio a un tratamiento contgenciana (250 gramos en 1 litro de agua diluido a una concentracin al 75% en agua)
Una vez a la semana se sacrific a un individuo de cada grupo para extraer el intestino delgado y realizarle cortes histolgicos al leon.
Grupo 1: 15 individuos; llevaron un tratamiento con neomicina (100 mg al dia en 2 tomas) durante 2 semanas. Y al termino de estas semanas se subdividi este grupo de la siguiente forma:
Grupo control: 5 individuos
Se realizarn pruebas hematolgicas a estos individuos 40 minutos despus de la ingesta de alimentos y bromatolgicas cada 24 horas.
Se obtuvieron 20 ratas Wistar macho de con peso promedio de 300 a 400 gramos, sin tratamiento anterior y separarlas en grupos como se muestra a continuacin:
GOD
POD
_1136642081.xlsGrfico2
0.2340.2230.23
0.2340.4050.3975
0.23450.3040.234
0.23480.1040.098
control
gpo 1
gpo 2
semanas de tratamiento
porcentajes encontrados
proteinas totales en escreta
Hoja1
pruebade lipidosen sangrede rata mg/ciento
tiempo 0
grupo controlgrupo 1grupo 2
215.01214214.6
210212.8.214.8
211216219.2
suma636.01642.8433.8contgpo 1gpo 2
promedio21.221.4214.460212214.2237.2
1212.8144.6
1 semanade aplicacinde neomicina100ml/Kg/24 hrs1.515.2663.2
grupo1grpo 227.4535.435
213.5212.8367.5899
211.46200470.5105
213.5290
suma638.46702.8
promedio21.2823.72
1 1/2 semde tratamiento
grupo 1grupo2
0.0590.3
0.090.34
suma0.1490.64
promedio0.07450.32
2 semanade tratamiento
grupo 1grupo 2
0.2180.34335
0.5450.3706
3.8150.35
suma4.5781.06395
promedio1.5260.35435
3 semana
gpo 1gpo 2
0.67580.99
4 semana
gpo 1gpo 2
0.691.01
0.721.2
1.412.21
0.7051.105
Hoja1
000
000
000
000
000
000
control
gpo 1
gpo 2
semanas de tratamiento
ml/%
lipidos en suero
Hoja4
semanasgpo controlgpo 1gpo 2
01515.516.5
11211.412
257.26
378.16.5
4810.513
Hoja4
000
000
000
000
000
gpo control
gpo 1
gpo 2
semanas de tratamiento
mg/ %
proteinas en suero
Hoja5
lipidos totalesButchenr
1 semanagpo controlgpo 1gpo 2
contgpo 1gpo 2
02.122.142.3
12.121.44
1.51.521.2
20.7450.85
2 semana33.73.99
434.5
3 semana
Hoja5
000
000
000
000
000
000
cont
gpo 1
gpo 2
semanas de tratamiento
mg/ml
lipidos en heces
Hoja3
proteinas totales (metodo kjendall)
semanasgpo controlgpo 1gpo 2
123.40%22.30%23.00%
223.40%40.50%39.75%
323.45%30.40%23.40%
423.48%10.40%9.80%
Hoja3
000
000
000
000
control
gpo 1
gpo 2
semanas de tratamiento
porcentajes encontrados
proteinas totales en escreta
Hoja2
peso de ratas
1 semana
grupo controlgrupo 1grupo 2grupo controlgpo 1gpo 2
442.5433413.41424.025597.9587.5
462.3371.5344.52435394.75396.25
379441.5437.23447.5383.5398.25
412.3365.6389.14448.5395424
361366
419400
suma1696.12391.62350.2
promedio424.025597.9587.5
desv est
2 semana
gpo controlgpo 1gpo 2
444366.5390
470390352
434410480
400412.5363
suma174815791585
promedio435394.75396.25
3 semana
gpo controlgpo 1gpo 2
450368400
490366398
420390395
430410400
suma179015341593
promedio447.5383.5398.25
4 semana
gpo controlgpo 1gpo 2
458400420
480390412
410410414
446380450
auma179415801696
promedio448.5395424
Hoja2
000
000
000
000
grupo control
gpo 1
gpo 2
SEMANAS DE TRATAMIENTO
PESO (gr)
PESO EN RATAS
_1136646119.xlsGrfico4
1515.516.5
1211.412
57.26
78.16.5
810.513
gpo control
gpo 1
gpo 2
semanas de tratamiento
mg/ %
proteinas en suero
Hoja1
pruebade lipidosen sangrede rata mg/ciento
tiempo 0
grupo controlgrupo 1grupo 2
215.01214214.6
210212.8.214.8
211216219.2
suma636.01642.8433.8contgpo 1gpo 2
promedio21.221.4214.460212214.2237.2
1212.8144.6
1 semanade aplicacinde neomicina100ml/Kg/24 hrs1.515.2663.2
grupo1grpo 227.4535.435
213.5212.8367.5899
211.46200470.5105
213.5290
suma638.46702.8
promedio21.2823.72
1 1/2 semde tratamiento
grupo 1grupo2
0.0590.3
0.090.34
suma0.1490.64
promedio0.07450.32
2 semanade tratamiento
grupo 1grupo 2
0.2180.34335
0.5450.3706
3.8150.35
suma4.5781.06395
promedio1.5260.35435
3 semana
gpo 1gpo 2
0.67580.99
4 semana
gpo 1gpo 2
0.691.01
0.721.2
1.412.21
0.7051.105
Hoja1
000
000
000
000
000
000
control
gpo 1
gpo 2
semanas de tratamiento
ml/%
lipidos en suero
Hoja4
semanasgpo controlgpo 1gpo 2
01515.516.5
11211.412
257.26
378.16.5
4810.513
Hoja4
000
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000
000
000
gpo control
gpo 1
gpo 2
semanas de tratamiento
mg/ %
proteinas en suero
Hoja5
lipidos totalesButchenr
1 semanagpo controlgpo 1gpo 2
contgpo 1gpo 2
02.122.142.3
12.121.44
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20.7450.85
2 semana33.73.99
434.5
3 semana
Hoja5
000
000
000
000
000
000
cont
gpo 1
gpo 2
semanas de tratamiento
mg/ml
lipidos en heces
Hoja3
proteinas totales (metodo kjendall)
semanasgpo controlgpo 1gpo 2
123.40%22.30%23.00%
223.40%40.50%39.75%
323.45%30.40%23.40%
423.48%10.40%9.80%
Hoja3
000
000
000
000
control
gpo 1
gpo 2
semanas de tratamiento
porcentajes encontrados
proteinas totales en escreta
Hoja2
peso de ratas
1 semana
grupo controlgrupo 1grupo 2grupo controlgpo 1gpo 2
442.5433413.41424.025597.9587.5
462.3371.5344.52435394.75396.25
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control
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Hoja1
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grupo 1grupo 2
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Hoja1
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000
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control
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Hoja4
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Hoja4
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Hoja5
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Hoja5
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cont
gpo 1
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Hoja3
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Hoja3
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control
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semanas de tratamiento
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Hoja2
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suma174815791585
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gpo controlgpo 1gpo 2
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suma179015341593
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4 semana
gpo controlgpo 1gpo 2
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480390412
410410414
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promedio448.5395424
Hoja2
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SEMANAS DE TRATAMIENTO
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Hoja1
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gpo 1gpo 2
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Hoja1
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Hoja4
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Hoja4
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000
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Hoja5
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Hoja5
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Hoja3
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control
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Hoja2
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gpo controlgpo 1gpo 2
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480390412
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SEMANAS DE TRATAMIENTO
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grupo control
gpo 1
gpo 2
SEMANAS DE TRATAMIENTO
PESO (gr)
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Hoja1
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SEMANAS DE TRATAMIENTO
PESO (gr)
PESO EN RATAS
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