reporte final del proyecto: “estudio quimico y
Post on 23-Jan-2022
1 Views
Preview:
TRANSCRIPT
1
REPORTE FINAL DEL PROYECTO: “ESTUDIO QUIMICO Y FARMACOLOGICO DE OEDOGONIUM CAPILLARE”
PRESENTADO POR:
Rosa Martha Pérez Gutiérrez Sergio Hernández Garrido
José María Mota Flores
2
ESTUDIO QUIMICO Y FARMACOLOGICO DE OEDOGONIUM CAPILLARE
CLAVE: 20060144
RESUMEN En este programa de investigación se determinó la actividad antiespasmodica y
antimicrobiana del alga Oedogonium capillare, así como también se obtuvieron los
compuestos responsables de estas actividades. Se evaluó la actividad
antimicrobiana de los extractos hexánico, cloroformico y metanólico de las hojas
de Oedogonium capillare sobre 8 microorganismos (Staphylococcus aureus,
Staphylococcus epidermidis, Bacillus subtilis, Bacillus cereus , Escherichia coli, Vibrio
cholerae, Salmonella typhi y Klebsiella pneumoniae). Dos diterpenos con propiedades
antimicrobianas se aislaros a partir del extracto de cloroformo usando para ello
un fraccionamiento bio-guiado. Las estructuras de los compuestos resultaron ser
Labdan-8,13-diol y Labdan-8,ol-15-acetoxi. En otro ensayo se determinó la
actividad antiespasmodica sobre ileum de rata de los extractos de hexano,
cloroformo y metanol. A partir del extracto de metanol se aisló una δ-lactona
denominada oedogonolide con propiedades relajantes. La estructura también se
determinó por métodos espectroscopicos.
INTRODUCCION
Estudios en plantas medicinales han demostrado que la mayoría de ellas contienen
substancias que pueden ser utilizadas para propósitos terapéuticos. En los estudios
realizados en las algas se encontraron compuestos con diferentes efectos
farmacológicos, como son: analgésico, antiinflamatorios, relajantes musculares
entre otros (1). Actualmente se sabe que más del 15% de las algas ofrecen una
3
novedad curativa en relación del 1% de las especies terrestres. Oedogonium
capillare (Linn) Kuetz es un alga, conocida comúnmente como “lama” o “natas
flotantes”. Pertenece a la familia Oedogoniaceae de la División Clorophyta (2,3,4)
Vive en agua dulce, se caracteriza por formar filamentos simples, uniseriados, las
células son largas y angostas, posee cloroplastos reticulados; presenta una forma
de crecimiento basada en el desarrollo de masas flotantes que llegan a cubrir todo
el cuerpo de agua. Esta alga sirve de alimento y protección a los renacuajos y a
otros organismos acuáticos. En la medicina tradicional se ha usado esta alga para
aliviar trastornos gastrointestinales. O. capillare tiene oosporas globosas con
paredes lisas y células cilíndricas de 36 m de diámetro, con una longitud de 210
m, con ogonium solitarios, cilíndricos casi del mismo diámetro que de las células
vegetativas abiertas con un poro superior de 30-50 m de diámetro y 45-75 m de
longitud (5,6).
Las enfermedades infecciosas son de origen muy antiguo, el uso de los extractos de
plantas han sido reportadas para la terapia de tales infecciones. Algunos de estos
agentes perduran hasta nuestros días tales como la quinina, emetina y
sanguinarina. La utilización de la fermentación para la obtención de antibióticos
ha disminuido enormemente el uso de otros métodos alternativos (7).
Actualmente en el campo de los antibióticos los agentes antibacterianos obtenidos
de plantas superiores, particularmente los relacionados con las plantas usadas en
la medicina folklórica para el tratamiento de infecciones presentan una
significativa potencia contra bacterias y hongos patógenos (8). Esto conduce a que
el uso en la medicina folklórica pueda ser racionalizado en base a sus
constituyentes activos que pueden ser aislados empleando técnicas de bioensayo-
directas (9).
4
En un estudio Etnobotánico realizado en Xochimilco se encontró que las partes
aéreas de O. capillare son usadas en la medicina tradicional como antiséptico en el
tratamiento de heridas, úlceras, disentería, diarrea e infecciones de la piel. No
existen antecedentes que documenten la realización de estudios acerca de la
actividad antimicrobiana de esta especie. En el presente trabajo se reporta la
actividad antimicrobiana producida por los extractos hexánico, clorofórmico y
metanólico de las hojas de Oedogonium capillare así como también se pretende
establecer las bases científicas del uso en medicina popular del alga O. capillare en
el tratamiento antiséptico de heridas y úlceras. También se determinó el efecto
antiespasmódico del alga O. capillare, empleando diferentes extractos (metanólico,
hexánico y clorofórmico) sobre un bioensayo realizado en órgano aislado de íleon
de rata Wistar.
Material y Métodos
Material biológico Oedogonium capillare (L.) Kutzing perteneciente a la familia de las Oedogoniaceae
(Chlorophycophyta) se recolectó en el Centro de Investigaciones Biológicas
Acuícolas (CIBAC) en Xochimilco Estado de México, en un criadero de ranas
donde crece abundantemente en excelentes condiciones. Taxonómicamente fue
identificado por la Dra. Guadalupe Figueroa del Departamento del Hombre y su
Ambiente de la Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco. Un ejemplar
se colocó en formalina al 4% para formar parte de la colección de ficología como
referencia (núm. 4892).
Limpieza del alga
2 kg de O. capillare se recolectaron de los estanques por medio de una red.
Posteriormente se separaron manualmente los ejemplares más saludables de las
5
hojas muertas y otros residuos orgánicos que caen a la superficie del agua Para
eliminar totalmente los elementos extraños se centrifugó tres veces a 1500 rpm
durante 5 minutos (rendimiento húmedo 181 g). El material se observó al
microscopio para determinar si efectivamente estaba limpio. Inmediatamente
después se secó a la sombra (rendimiento seco 69 g) y se molió hasta obtener un
polvo fino (10).
Preparación de los extractos
300 g de las hojas molidas de O. capillare se empacaron en cartuchos de papel filtro
que se colocaron en un soxhlet y se extrajeron con hexano a reflujo durante cinco
horas continuas (11). Siguiendo un procedimiento similar al planteado para la
obtención del extracto hexánico se realizaron, sobre la misma muestra extracciones
sucesivas con cloroformo y metanol absoluto. Posteriormente se filtró y el
disolvente se secó con Na2SO4 anhidro y se destiló en un rotavapor al vacío
quedando un residuo viscoso de color verde oscuro, con un rendimiento para los
extractos hexánico, cloroformico y metanólico de 4.5, 3.1 y 5.6 % respectivamente
(12).
Organismos
Las bacterias Gram-positivos empleados en este estudio son: Staphylococcus aureus,
Staphylococcus epidermidis, Bacillus subtilis y Bacillus cereus y las Gram-negativos:
Escherichia coli, Vibrio cholerae, Salmonella typhi y Klebsiella pneumoniae. Los
microorganismos fueron proporcionados por el Departamento de Microbiología de
la Escuela Superior de Ciencias Biológicas, IPN y por el Departamento del
Hombre y su Ambiente de la Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco.
Todos los medios de cultivo se adquirieron en Difco.
6
Preparación de los cultivos de microorganismos
Para la determinación del efecto antibacteriano se empleó el método de difusión de
disco (13). Se aplicó 0.1 mL de una dilución 1 en 100 del cultivo de cada bacteria
equivalente a 106-107 células/mL. en la superficie de platos de Mueller-Hinton (14).
preparados previamente con el medio estéril caldo Soya tripticaseina (TSB). Para
cuantificar el número o de microorganismos se siguió el método tradicional de
conteo en placa a partir de las diluciones cuantitativas (15). En cada plato se
adicionó una solución que contenía 200 g/ml de cada extracto disuelto en DMSO.
Las placas se incubaron a 37 ˚C durante 24 h, al finalizar este periodo se midieron
los diámetros de las zonas de inhibición alrededor de cada disco. Se usó como
control positivo los antibióticos gentamicina y kanamicina y como control negativo
se utilizaron discos de papel esteril (Difco) impregnados con DMSO (dimetil
sulfóxido).
Concentración mínima inhibitoria. La CMI (concentración mínima inhibitoria) de
los extractos se determinó por el método de dilución de agar (16). Alrededor de
105 células, se inocularon en cada tubo posteriormente se añadió cada extracto en
una concentración de 125, 250, 500 y 1000 g/mL. Los cultivos fueron incubados
durante 24 h a 37˚C, sobre un agitador rotatorio, posteriormente el crecimiento
bacteriano se examinó espectrofotométricamente. El tubo que no presentó turbidez
o sea que se produce un crecimiento no visible fue tomada como la CMI de la
sustancia para el microorganismo utilizado. Cada experimento se realizó por
duplicado.
Animales
Se utilizaron ratas machos Wistar, de un peso de 200-250 g. Se mantuvieron con
periodos de luz-oscuridad de 12:12 y humedad relativa de 50%; agua y comida ad
limitum.
7
Preparación del tejido
Los animales se sacrificaron por dislocación cervical, se abrió la cavidad abdominal
y se extrajo el íleon que se cortó en segmentos de 1.5 cm; cada uno de los anillos se
fijó a un transductor F-60 conectado a un fisiógrafo Narco-BioSystems y el otro
extremo a una cámara para órgano aislado, con 10 ml de solución fisiológica Krebs-
Hansseleit, con burbujeo constante de una mezcla de oxígeno al 5 % y bióxido de
carbono al 95 % (carbógeno), a temperatura constante de 37 ºC y pH de 7.2. El
tejido se dejó estabilizar durante 30 minutos, la solución fisiológica fue cambiada
cada 10 minutos. Para probar cada uno de los extractos se hizo un registro control
durante 5 minutos y después el extracto se le agregó al baño que permaneció en
contacto con el músculo durante 5 minutos periodo durante el cual se hizo el
registro experimental, terminado éste se lavó el tejido y se volvió a realizar otro
registro para evaluar las condiciones fisiológicas del músculo. Para cada uno de los
extractos se utilizaron tejidos recién obtenidos. Se probaron los extractos de
cloroformo, hexano y metanol para determinar cual de ellos tenía efecto sobre el
íleon (17).
Con el extracto activo se hizo una curva dosis respuesta con adición acumulativa al
baño y las concentraciones usadas fueron de 0.5, 1, 2, 4, 8 y en algunos casos 16
mg/ml. Para evaluar la actividad antiespasmódica se utilizó KC1 60 mM para
producir una contracción sostenida y posteriormente aplicar el extracto activo. Se
utilizó acetilconina (2µg/ml) la cual se aplica después de la incubación del tejido
con el extracto durante 10 minutos y se comparó con el registro control
previamente realizado. Los resultados se normalizaron como porcentaje a partir de
los obtenidos al inicio de las pruebas.
8
Análisis estadístico
Los resultados se presentan como la media ± desviación estándar, con el número
de los experimentos (n). La comparación de los datos se hizo mediante un análisis
de varianza ANOVA. Se estableció la diferencia significativa para una p< 0.05.
Extracción y Aislamiento
Labdan-8,13-diol y Labdan-8,ol-15-acetoxi
1.5 kg de O. capillare seca y molida se extrajeron con cloroformo a temperatura de
reflujo durante 4 h. El solvente se elimino por medio de un rotavapor al vació, el
residuo se cromatografió en columna sobre sílica gel con cloroformo. Las
fracciones más activas fueron la A y B. La A se recromatografió con
cloroformo/acetato de etilo/hexano 10:1:0.5 , la B con acetato de etilo/éter
etílico/hexano 1:1:2. Las fracciones obtenidas con actividad antibacteriana se
cromatografiaron en columna con Sephadex LH-20 con
ciclohexano/diclorometano/metanol 7:4:1. Los compuestos se purificaron en
placas preparativas con cloroformo/acetona 85:15. Se obtuvieron 1 (41 mg), 2 (62
mg).
Oedogonolide
1.5 kg de O. capillare seca y molida se extrajeron con metanol a temperatura de
reflujo durante 4 h. El solvente se elimino por medio de un rotavapor al vació, el
residuo se cromatografió en columna sobre sílica gel con CH2Cl2/MeOH 10:1
como eluente, se colectaron 8 fracciones. De acuerdo con las pruebas
farmacológicas las fracciones F-1ª y F-2ª presentaron efecto antiespasmodico. Las
fracciones se combinaron y se recromatografiaron en sílica gel con acetona/hexano
6:1 para producir 8 fracciones. La fracción F-5B se cromatografió con
Cloroformo/metanol/hexano 10:1.5:2 para producir 6 fracciones. La F-2C se
9
cromatografio en Sephadex L-20 con cloroformo para producir la δ-lactona, la cual
se purifico en cromatografía preparativa con cloroformo. Se obtuvieron 80 mg de
este compuesto (3).
Labdan-8,13-diol (1) Coulourless oil; C20H38O2; IR vmax cm-1: 3560 (OH), 3090,
1240, 995; ElMS 70 eV m/z (rel. Int.) 310 [M]+ (4), 295 (M-Me) (4), 209 (35), 192 (16),
177 (14), 137 (20), 109 (100), 43 (60). 1HNMR δ 1.52 (m, H-1), 1.32 (m, H-2), 1.35 (m,
H-3), 1.93 (s, br, J = 2.4 Hz, H-5), 0.78 (dd, J = 4.4, 2.5 Hz, H-9), 2.23 (dddd, J = 15.1,
10.1, 5.1, 1.1 Hz, H-12), 1.19 (s, H-16), 1.15 (s, Me-17), 1.0 (s, Me-18), 0.96 (s, Me-19),
1.18 (s, Me-20); 13CNMR δ 39.7 (C-1), 18.2 (C-2), 42.6 (C-3), 33.6 (C-4), 56.4 (C-5),
21.0 (C-6), 38.9 (C-7), 72.8 (C-8), 58.4 (C-9), 36.6 (C-10). 23.1 (C-11), 36.9(C-12), 75.5
(C-13), 33.3(C-14). 15.0 (C-15). 19.8 (C-16), 23.7 (C-17), 33.9 (C-18). 22.1 (C-19), 14.9
(C-20).
Labdan-8,ol-15-acetoxi (2) Los datos espectrales están acorde a la literatura
(18,19,20).
Oedogonolide (3). Compound I. IR (KBr) vm"x: 3452 (OH), 2924,2854,1740 (lactona),
1437, 1375, 1235 (δ-lactona), 1126 (alcohol secundario), 1017,940, 800,602 cm-l; alta-
resolución MS m/z 256.2021 (C15H28O3); 1HNMR (300MHz, CDCl333) δ 0.88 (m), 1.28
(s, H-15), 1.81 (d, J=6.4Hz, H-14), 1.82--2.15 (m), 3.76 (ddq, J=6.3. 6.3, 6.4Hz, H-13).
13CNMR (300MHz, CDCl3) δ 170.5 (C-l), 39.8 {C-2), 31.6 (C-3), 29.4 (C-4), 73.3 (C-5).
34.5 (C-6), 22.6 (C-7), 31.6 (C-8), 29.8 (C-9), 32.6 {C-10), 23.4 (C-11), 41.4 (C-12), 69.6
(C-13), 20.2 (C-14), 26.3 (C-15). EIMS: m/z {rel. int.) 256 [M), [C15H28O3), 241 {2), [M-
15, C14H25O3), 167 {16), 149 (100) [C10H13O), 139 {4), 125 {14), 113 (8) [C6H4O2], 111
(26), 99 (11),98 (2) [C6H10O), 97 (40), 89 (42), 85 {27) [C5H9O], 84 (22) [C6H12], 83 (32)
[C5H7O], 71 {52), 70 (12) [C5H10], 69 (32), 57 {84), 56 [C4H8] 55 (50) [C4H7], 69 (44), 70
(18), 85 (34), 43 (60) [CH3CO+), 42 (3), [C2H2O), 41 (28), [C3H5].
10
RESULTADOS Y DISCUSION
Actividad antimicrobiana
La tabla 1 presenta la zona de inhibición en cada uno de los microorganismos
susceptibles a la concentración de 200 µg/mL del extracto hexánico de O. capillare
ya que los extractos metanólico y clorofórmico no muestran efecto
antimicrobiano en estas condiciones. Las cepas más susceptibles fueron
Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Salmonella Typha con una zona
de inhibición de 18-21 mm. En contraste, Escherichia coli, Vibrio cholerae y
Klebsiella pneumoniae fue de 6-8 mm.
Aquellos microorganismos que resultaron sensibles en la prueba de difusión por
disco se les determinaron la concentración mínima inhibitoria. La Tabla 2 muestra
los resultados de la determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) de
la actividad antibacteriana producida por el extracto hexánico. Las bacterias
Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus y Salmonella typha son más
sensibles a los compuestos antibacterianos presentes en el extracto hexánico de la
O. capillare que los demás microorganismos probados (CMI 250 g/mL), en cambio
los microorganismos Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Vibrio cholerae fueron
los más resistentes (CMI 1000 g/ml). La actividad se comparó con la producida
por la gentamicina y kanamicina, los valores se encuentran en el rango reportado
en la literatura (15).
El extracto hexánico fue más activo que los extractos cloroformico y metanólico
probablemente porque contiene una alta concentración de los compuestos activos
los cuales se encuentran ausentes en los otros extractos o en muy baja
concentración. En las condiciones de prueba el extracto hexánico mostró actividad
antibacteriana por disco ensayada para las bacterias. La actividad antibacteriana
11
estaría relacionada a los componentes menos polares presentes en los extractos
dado que la sensibilidad se obtuvo en el extracto de hexano y no en los otros dos.
La actividad antimicrobiana de Labdan-8,13-diol y Labdan-8,ol-15-acetoxi del
Oedogonolide se presenta en la Tabla 3.
Actividad antiespasmodica
Efecto relajante del extracto metanólico de O. Caplillare sobre el tono basal del íleon de rata.
El extracto metanólico de Oedogonium capillare presentó un efecto relajante, los
extractos clorofórmico y hexánico no tuvieron efecto sobre la amplitud de las
contracciones ni sobre el tono del músculo del íleon de la rata Wistar.
La adición acumulativa del extracto metabólico (0.5 – 8 mg/ml) produjo una
relajación progresiva de la amplitud de las contracciones del íleon con IC50 0.6
mg/ml, n= 27, ( figura 1 ). Se observó con el extracto es capaz de inhibir la
actividad contráctil del íleon en una forma significativa, esto se presentó en todas
las preparaciones estudiadas.
Para conocer la actividad del extracto sobre el tono del músculo se probaron
diferentes concentraciones del extracto metabólico (0.5 a 8 mg/ml) sobre el íleon y
se obtuvo una relajación máxima de 180 ± 51.2 % (n = 27) por debajo del tono basal
(figura 2); con un IC50 = 2.2 mg/ml; se puede ver que este efecto es completamente
reversible porque cuando el extracto se eliminaba de la preparación el tejido se
recuperaba totalmente; esto puede apoyar las bases fisiológicas para el uso que se
le da en la medicina tradicional para el tratamiento de los trastornos
gastrointestinales.
12
Efecto antiespasmódico del extracto metabólico de O. Capillare sobre íleon de rata
Se indujo la contracción sostenida del íleon con KC1 60 mM (estímulo
despolarizante) y se observó una relajación de 5.6 ± 15.3 %, n = 45 por debajo del
tono basal, al aplicar concentraciones acumulativas del extracto metabólico (0.5 a
16 mg/ml); con un IC50 = 0.74 mg/ml (figura 3).
La preparación se preincubó con el extracto metabólico (0.5 a 8 mg/ml) durante 10
minutos y se le agregó acetilcolina (2 g/ml) se obtuvo una reducción de la
contracción producida por el neurotransmisor de 96.5 ± 3.6 %, n = 27 con la dosis
mayor del extracto, comparada con el registro control y con relación dosis
dependiente, con un IC50 = 1.8 mg/ml (Figura 4).
El extracto metabólico tiene componentes polares dosis dependientes, relajantes,
reversibles y antiespasmódicos sobre el íleon de rata ya que es capaz de inhibir la
respuesta de un amplio rango de estímulos contráctiles así como de una alta
concentración de potasio y del neurotransmisor acetilcolina, aunque mostró mayor
selectividad por el KC1 puesto que su IC50 fue menor que para la acetilcolina, sin
embargo son mas semejantes comparados con el extracto metabólico (8,9) La
actividad antiespasmódica apoyaría el uso que se le da en la herbolaria para el
tratamiento de trastornos intestinales.
El KC1 inhibe la entrada de calcio por los canales de membrana L operadas por
voltaje. La acetilcolina se une a su receptor serpentina acoplados a través de una
proteínas G a una fosfolipasa C de la membrana plasmática, fosfatidilinositol 4.5
bifosfato, que cataliza la formación de 1,4,5 trifosfato de inositol y diacilglicerol, los
cuales actúan como segundos mensajeros. La primera substancia actúa liberando
calcio intracelular del retículo endoplásmico y la segunda, es decir, el diacilglicerol,
activa la proteína quinasa C dependiente de fosfolípidos capaz de fosforilar ciertas
proteínas específicas. Por lo que se sugiere que la relajación producida por el
13
extracto algal podría ser debida a inhibición de la liberación del calcio intracelular
del retículo y/o inhibición de la entrada de calcio a través de la membrana (10,11).
La actividad antiespasmodica del Oedogonolide se presenta en las graficas (5,6,7).
Elucidación de las estructuras Labdan-8,13-diol (1). El espectro de IR indica un grupo alcohol (3560 cm-1). El
espectro de 13CDEPT revela la presencia de 6 metilos, 8 metilenos, 2 metinos y 4
carbonos cuaternarios. El espectro de 1HNMR muestra cinco grupos metil
terciarios a δ 1.19, 1.15, 1.0, 0.96 y 1.18, dos oxígenos que forman grupos OH. El
espectro de 13CNMR presenta señales para un carbinol cuaternario a δ 72.8 (C-8), y
δ 75.5 (C-13), tres metilos terciarios a δ 33.9, 22.1 y 14.9 para C-18, 19 y 20
respectivamente. Estas señales son características para los diterpenos de la serie de
Labdanos. Este compuesto presenta un ion molecular a m/z 310 (C20H38O2)
correspondiente a un diterpeno biciclo con dos grupos hidroxilo. El ion m/z 209 se
forma por la perdida de la cadena lateral. Ese rompimiento corresponde a una
decalina conteniendo cuatro metilos y un grupo OH. El espectro de masas muestra
un patrón de fragmentación característico de los Labdanos. Un pico a m/z 191
corresponde a el fragmento [a3]-H2O. El pico base a m/z 109 es típico de
compuestos con un grupo presente en el anillo A.
Diterpenos aislados de O. capillare
Estructuras Fig. 8. Correlación observada en el espectro de HMBC del compuesto 1.
14
Fig. 9. Correlación observada en el espectro de HMBC del compuesto 2.
Oedogonolide (3). La presencia de un grupo OH (3452 cm-1) y δ-lactona (1740 y 1235
cm-1) se observaron en el espectro de IR. El espectro de 13CNMR muestra 15
señales incluyendo un grupo éster (δ 170.5), 2 carbonos enlazados a un oxígeno, un
metino (δ 69.6), un carbono cuaternario (δ 73.3), dos grupos metil (δ 26.3 y 20.2),
los otros 10 carbonos son metilenos (DEPT espectro). El espectro de 1HNMR revela
la presencia de un doblete a δ 1.81 de un grupo metilo acoplado a un protón de un
metino a δ 3.76, un singulete (δ 1.28) de un grupo metilo atacando a un carbón
cuaternario. La señal del metino cambio a campos bajos a δ 4.89 por acetilación,
este se encuentra cerca de un grupo OH. El centro asimétrico C-13 se asigno por
medio de NOE; irradación del H-13 (δ 3.76) realza la señal H-4 a δ 1.81. H-13 debe
de ser trans basado en los patrones de acoplamiento entre H-13ª y H-14b (δ 1.81, d,
J = 6.4 Hz), la configuración de C-13 es R. El espectro de masas presenta los picos a
m/z 85 y 89 un pico a m/z 70 y 71 unido a una señal a m/z 43 característicos para δ-
lactona. Los picos m/z 70 y 71 se forman a partir del fragmento m/z 99 por
expulsión de CO. Consecuentemente este compuesto se denomino Oedogonolide.
Oedogonolide
15
BIBLIOGRAFIA 1.Muñoz A. Drogas del Mar. Substancias Biomédicas de algas arinas.1992.Universidad de Santiago de Compostella. 1992, p 188. 2. Hirn, K.E. Monographie der Oedogoniaceen. H.R. Engelmann (J. Cramer) and Wihildon & Wesley, New York. 1960. 52, 112-114. 3. Gauthier-Liérre, L. Oedogoniacées Africaines. J. Cramer, Germany, 1964, 305-306. 165. 4.Tyffany L.H. The Oedogoniaceae. Ohio State University Columbus, Ohio 1930 p.53, 80, pl XVIII, figs. 16 y 18. 5. Gauthier-Lievre L. 1963. Oedogoniacees Africaines. Journal Cramer Germany, 55: 104-108. 6. Rin K.T. 1960. Monographie der Oedogoniaceen. H.R. Engelmann (J. Cramer) and Wihildon & Wesley, New York, pp. 394-396. 7. Moyosoluwa O., Glenn W K., Simon G. 2004. Antibacterial and resistance modifying activity of Rosmarinus officinalis. Phytochemistry. 65, 3249. 8. Yoshiki K., Aya K., Nagai R., Watanabe M., Kawashima T., Onizawa T., Teraaka T., Watanab M., Kashina H., Uzawa J, Suzuki Y., Sakurai A. 2004. Antibacterial diterpenes and their fatty acid conjugates from rice leaves. Phytochemistry. 65, 1291. 9. Rabe T., Mullholland D., Van Staden J. 2002. Isolation and identification of antibacterial compounds from Vernonia colorata leaves. J. Ethnopharm. 80, 91 10. Domínguez X.A. 1979. Métodos de investigación fitoquímica. Limusa, México, p. 245-247. 11. Harborne J.B. 1991. Phytochemical methods: A guide to modern techniques of plants analysis . Chapman and Hall, London, p. 84-88 12. Murriay P., Kobayashi G., Pfaller M., Rosenthal K. 1997. Microbiología Médica. Segunda Edición. Harcourt Brace, España, cap 27, p. 258-259. 13. Kitchen I. 1984. Texbook of In vitro practical pharmacology. Primera Edición , Blackwell Scientific Publications, England p. 33-39. 14. Bakshu L.M., Ram A. J. Raju, R.R.V. 2001. Antimicrobial activity of Securingea leucopyros. Fitoterapia. 72: 930-933. 15. Kitchen I. 1984. Texbook of In vitro practical pharmacology. Primera Edición , Blackwell Scientific Publications, England p. 33-39. 16. Xu H., y Lee, S.F. 2004. The antibacterial principle of Caesalpina sappan. Phytotherapy Research. 18: 647-651. 17. Vargas S. R., Pérez G. S., Zavala S. M. A., Chimal H. A. 1998, Inhibitory effect of Salix taxifolia extract on rat ileum contraction. Phytother. Res. 12:S51-S52. 18. Budzikiewicz H, Ojerassi C, Williams OH. (1964). Structure Elucidation of Natural Products by Mass Spectrometry. 12, pp. 155-164, Holden-Oay, San Francisco. 19. Singh M, Pal M, Sharma RP. 1999. Biological activity of the labdane diterpenes. Planta Med. 65, 2-8. 20. Hernrick CA, Jefferies PR, Rosich RS. 1964. Enantiomers of labdanolic acid and
16
13-epi-labdanolic acid. Tet. Lett. 3475-3480. Tabla 1. Actividad antibacteriana del extracto hexánico de Oedogonium capillare
Microorganismos Extracto de Hexano Estándar (30 g/disco) 200 g/ml Gantamicina Kanamicina Zona de inhibición en mm
Bacillus subtilis (B) NCTC 542
15± 0.89 28±1.01 14±0.57
Bacillus cereus (B) ATCC 17689
13± 1.34 26±2.51 14±1.78
Staphylococcus aureus
(B) NCTC 8531
19±3.06 21±0.71 24±4.10
Staphylococcus epidermidis
(A) ATCC 55654
21±3.90 18±2.54 20±3.86
Escherichia coli (B) ATCC 25922
6±2.80 22±1.15 18±2.16
Vibrio cholerae (B) ATCC 17689
8±1.68 16±2.4 18± 1.87
Salmonella typhi (A) ATCC 13310
18±2.05 24±3.01 20±3.64
Kiebsiella pneumoniae
(A) ATCC 14786
7±0.97 19±0.98 16±1.08
(A) Departamento de Microbiología de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, IPN. (B) Departamento del Hombre y su Ambiente de la Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco. Antibióticos estándar: Gentamicina y kanamicina. Como testigo se emplearon discos de papel impregnados con DMSO, no se presentó actividad antimicrobiana en ningún caso.
17
Tabla 2. Actividad antibacteriana del extracto hexánico de Oedogonium capillare
Microorganismos Extracto hexánico CMI ( g/ml)
Bacillus subtilis (C) NCTC 542
500
Bacillus cereus (B) ATCC 17689
500
Staphylococcus aureus (B) NCTC 8531
250
Staphylococcus epidermidis (B) ATCC 55654
250
Escherichia coli (C) ATCC 25922
1000
Vibrio cholerae (B) ATCC 17689
1000
Salmonella typhi (A) ATCC 13310
250
Kiebsiella pneumoniae (A) ATCC 14786
1000
(A) Departamento de Microbiología de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, IPN. (B) Departamento del Hombre y su Ambiente de la Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco. Antibióticos estándar: Gentamicina y kanamicina. Como testigo se emplearon discos impregnados con DMSO, no se presentó actividad antimicrobiana en ningún caso.
18
Tabla 3. Concentración mínima inhibitoria (MIC) de Labdan-8,13-diol (1) y Labdan-8,ol-15-acetoxi (2) aislados del alga Oedogonium capillare
Microorganismos MIC ( g/ml) 1 2
Bacillus subtilis (C)NCTC 542
>25 25
Bacillus cereus (B) ATCC 17689
>50 50
Escherichia coli (D) ATCC 25922
- -
Kiebsiella pneumoniae (A) ATCC 14786
>12.5 12.5
Salmonella typhi (B) ATCC 13310
- -
Staphylococcus aureus (B) NCTC 8531
>12.5 12.5
19
Figura 1. Efecto relajante del extracto metabólico de O. Capillare sobre las concentraciones de ileon aislado de rata. Las barras verticales representan la desviación media de las concentraciones. p> 0.05.
Figura 2. Efecto relajante de O capillare sobre el íleon aislado de la rata Wistar. Las barras
20
corresponden a la desviación media estándar. p< 0.05.
Figura 3. Efecto antiespasmódico dosis-dependiente del extracto de O. capillare sobre íleon aislado, previamente despolarizado con KC1 (60 mM). Las barras corresponden a la desviación media estándar. P< 0.05.
Figura 4. Curva de relajación dosis-dependiente después de la edición del extracto de O. capillare al íleon de rata previamente estimulado con acetilcolina. Las barras corresponden a la desviación media estándar. p< 0.05
21
Figura 5. Efecto del extracto de methanol (400, 200 and l00 µgmL) y oedogonolide (10-4, 10-5, 5 x 10-5 M) sobre la contracción inducida en ileum de rata por acetilcolina. Resultados son expresados en SEM. *p < 0-05, **p < 0.01, ***p < 0.001 (n=6) .
Figura 6. Efecto del extracto de methanol (400, 200 and l00 µgmL) y oedogonolide (10-4, 10-5, 5 x 10-5 M) sobre la contracción inducida por cloruro de bario (10-4) in ileum. Resultados son expresados en SEM. *p < 0-05, **p < 0.01, ***p < 0.001 (n=6) .
top related