genÉtica molecular · la principal función del adn es almacenar y transmitir la información...
Post on 05-Feb-2020
6 Views
Preview:
TRANSCRIPT
GENÉTICA MOLECULAR
MARIA PILAR GARCIA MADRUGA
GENÉTICA MOLECULAR
◦ADN MOLÉCULA PORTADORA Y TRANSMISORA DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA
◦REPLICACIÓN◦TRANSCRIPCIÓN ◦TRADUCCIÓN◦REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA◦GENES Y CARACTERES◦CONCEPTO ACTUAL DE GEN◦ORGANIZACIÓN DEL GENOMA EN LOS SERES VIVOS
El ADN es el portador y el transmisor de la información genética
◦ A principios del siglo XX se sabía que los genes se encontraban físicamente en los cromosomas y además que estos estaban formados por proteínas y ácidos nucleicos, pero se desconocía cuál de los dos componentes constituían los genes
◦ El genotipo era todavía un concepto abstracto, que necesitaba un soporte físico para poder ser estudiado (la estructura determina la función)
◦ A partir de tres experimentos distintos se llegó a la conclusión de que se trataba del ADN
EXPERIMENTO GRIFFITH
Se llevó a cabo con una bacteria Streptococcus pneumoniae
◦ Si se inyectan estas bacterias a los ratones se mueren◦ Pero hay dos cepas bacterianas: las S son letales y tienen
cápsida de polisacáridos y las R mutantes sin cápsida que no consiguen matar a los ratones
◦ Si se inyectan bacterias S muertas a los ratones, estos viven (luego la cápsida no es la causa de la muerte de los ratones)
◦ Si se inyectan bacterias S muertas + R vivas, los ratones mueren y se obtienen bacterias S vivas (no resucitan las S se transforman las R)
◦ Existe un principio transformador en S: ¿el ADN?
El ADN como material genético
Experimento de Griffith
Cepas S vivas Cepas R vivasCepas R muertas
Mezcla de cepas S muertas y cepas R vivas
Cepas S vivas
Streptococcus pneumoniae
EXPERIMENTOAVERY MacLEOD Y McCARTY
También con S. pneumoniae
◦ Sólo conseguían transformar bacterias R cuando añadían extractos de ADN de S
◦ La molécula capaz de transformar las bacterias es el ADN, portador de la información genética necesaria para sintetizar la cápsida
◦ Se pensaba que esto era así sólo en bacterias ¿cómo se iba a almacenar la información genética en ácidos nucleicos formados por cuatro bases? ¿no sería mejor en proteínas formadas por veinte aa?
EXPERIMENTOHERSHEY - CHASE
Llevado a cabo con bacteriófagos: virus que infectan bacterias
◦ Se cultivaron fagos con *S 35 y *P 32 para incorporar el marcaje radioactivo a las proteínas (S) y a los ácidos nucleicos (P)
◦ Infectaron Escherichia coli con estos fagos◦ Demostraron que era el *P marcado el que se transmitía de
generación en generación
EXPERIMENTOHERSHEY - CHASE
Bacteriófago
Por cierto ¿cómo te imaginas a GRIFFITH, AVERY, McLEOT, McCARTY, HERSHEY y a CHASE?
Frederick Griffith Oswald Avery Maclyn Mccarty
Alfred Hershey Martha Chase
Watson, Crick, Wilkins y Franklin
DUPLICACIÓN O REPLICACIÓNNecesidad
◦ La principal función del ADN es almacenar y transmitir la información genética ¿cómo?
◦ El objetivo es la perpetuación de las especies, no de los individuos; para ello es necesario que previamente a la reproducción se produzca una copia del material genético, que se transmita a la descendencia. Además esta copia debe ser idéntica para mantener las características específicas
◦ Definimos REPLICACIÓN como el proceso de copia exacta del ADN de una célula antes de producirse la división celular por mitosis o por meiosis
5´ATGCCATC3´3´TACGGTAG5´
5´ATGCCATC3´3´TACGGTAG5´
5´ATGCCATC3´3´TACGGTAG5´
Características:
◦ Debe ser un proceso que garantice la perpetuación de las especies: ◦ sólo se produce una vez en cada célula, más copias
generarían problemas ◦ y con mecanismos de reparación de errores que garanticen la
fidelidad del proceso
◦ Aunque debe permitir cierto dinamismo, si no se mantienen ciertos errores no habría ni diversidad, ni evolución, aunque esto pueda causar problemas a los individuos (enfermedades como el cáncer)
◦ El mecanismo de duplicación es semiconservativo. La estructura de Watson y Crick ya permitía vislumbrar el mecanismo, pero se pueden obtener copias de tres maneras distintas:
La duplicación puede ser conservativa:
La duplicación puede ser semiconservativa:
La duplicación puede ser dispersiva:
“Una gallina es el medio que usa un huevo para hacer otro huevo” Samuel Butler
ADN pesado
ADN híbridoADN ligero
ADN híbrido
EXPERIMENTO DE MESSELSON Y STAHL
Llevado a cabo con E. coli:- Primero cultivaron E. coli con N 15 (pesado)
- Luego cultivaron E. coli con N 14 (ligero)- Purificaron el ADN obtenido después de varias generaciones, al centrifugar obtenían sólo ADN híbrido (pesado+ligero) y ADN ligero, lo cual demostraba la hipótesis semiconservativa
La duplicación del ADN
Hipótesis semiconservativa
Hipótesis conservativa
Hipótesis dispersiva
Cadena antigua Cadena nueva
Medio N15 Medio N14
ADN inicial ADN después de la 1.ª
duplicación
Experimento de Meselson y Stahl
ADN después de la 2.ª
duplicación
ADN después de la 3.ª
duplicación
ADN N15
ADN N14-15
ADN N14
El mecanismo de duplicación es semiconservativo
◦ Comienza en sitios específicos: Ori u Orígenes de replicación (en procariotas sólo hay uno en eucariotas hay más de uno). Son sitios de reconocimiento específico de proteínas
◦ Es direccional: 5´ 3´: La ADN polimerasa fabrica una cadena antiparalela y complementaria a partir de d-nucleótidos. Se trata de un proceso bidireccional en procariotas y eucariotas y unidireccional en plásmidos
5´ATGCCATTACCG3 ´3´TACGGTAATGGC5´
5´ATGCCAT3´TACGGTA
TACCG3 ´
ATGGC5´
ATGGC5´
Formas observadas Interpretación
A los 5 minutos A los 12 minutos
A los 28 minutos A los 48 minutos
1.ª generación 2.ª generación
Punto de crecimiento Hélice de la 2.ª
generación
Punto de crecimiento
Origen
Hélice de la 1.ª generación
◦Es semidiscontinua: La ADN polimerasa actúa sólo en dirección 5´ 3´ ¿cómo se sintetiza en la otra hebra? De forma discontinua, en pequeños fragmentos denominados, fragmentos de Okazaki
◦Necesita un cebador: Una pequeña cadena de ARN en la que se enlaza el primer nucleótido de la cadena a sintetizar
3´5´ 3´
3´5´
5´
5´3´
Ori5´
5´3´
3´
Fragmento de Okazaki
Polimerización de nucleótidos por la ADN-polimerasa
ADN patrón Nucleótidos
Mg2+
ADN polimerasa
ADN cebador
Horquillas observadas
3’
5’
3’
5’
3’
5’
5’
3’
5’
3’
5’
3’
Punto de inicioNinguna polimerasa añade nucleótidos en estos puntos
5’5’3’ 3’
Origen de replicación Crecimiento
discontinuoCrecimiento
continuo
Fragmentos de Okazaki
Mecanismo en ProcariotasSe produce en tres fases: INICIACIÓN ◦ El Ori es la señal de iniciación desde donde se va a formar la
horquilla de replicación gracias a la intervención de tres tipos de proteínas:
◦ (1) la helicasa que rompe la estructura tridimensional del ADN, los puentes de H entre las bases
◦ (2) las topoisomerasas que eliminan las tensiones debidas a los giros
◦ (3) las proteínas ssB que se unen a la cadena sencilla (single strand bounder) del ADN para estabilizarla
1
23
•La ARN polimerasa o primasa (4), sintetiza un corto fragmento de ARN de unos diez nucleótidos que actúa como cebador
34
Ori
•Al conjunto de las proteínas que intervienen en iniciación (1+2+3+4) se les llama primosoma (P )
PP
ELONGACIÓN La ADN polimerasa III (5) sintetiza en dirección 5´- 3´tanto en la
hebra de crecimiento continuo, hebra conductora o líder, como en la hebra de crecimiento discontinuo o hebra retardada. Se necesitan d-nucleótidos y aporte de energía por lo que estos se aportan en forma de d-nucleótidostrifosfato
5
P
P P
Además los fragmentos de Okazaki necesitan otra ADN polimerasa I y una ligasa para eliminar los cebadores y unir los fragmentos
Los fragmentos de Okazaki se sintetizan realmente utilizando la
misma polimerasa (formada por dos subunidades que actúan en tándem) que la que sintetiza la hebra continua, para ello simplemente generan un bucle que permite el crecimiento de las dos
TERMINACIÓN
Existe un sitio específico de terminación: ter, reconocido por una proteína específica: tus, que impide el avance de la horquilla (aunque no es esencial ya que aquellos mutantes para la proteína tus pueden terminar)
IniciaciónOrigen de
la replicación
Elongación
Burbuja de replicación
ADN pol III Proteínas estabilizadoras
Horquilla de replicación
Helicasa
Primasa
ADN pol III
Hebra retardada
ADN pol I ADN-ligasa
Hebra conductora
Dirección general de la replicación
Origen de la replicación
Horquilla de replicación
Hebra retardada
Hebra conductora Origen de la replicación
Burbujas de replicación
Hebra conductora
Nucleosomas
Nuevos nucleosomas
Hebra retardada
Mecanismo en EucariotasEl proceso es muy similar aunque existen algunas
diferencias:
◦Las histonas se quedan en la hebra conductora◦El proceso es más largo y más lento, tiene más oris que se activan de forma coordinada
◦Los fragmentos de Okazaki son más pequeños◦Se produce en la fase S de la interfase del ciclo celular, su control y su regulación están relacionados con los procesos de desarrollo embrionario y con algunas enfermedades como el cáncer
ADN de E. coli
ADN de Drosophila
LA EXPRESIÓN DEL MENSAJE GENÉTICO. EL DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGÍA
◦ La información genética se perpetúa generación tras generación ◦ La información genética está codificada ◦ La información genética determina las características de los seres
vivos, porque se expresa en forma de proteínas que se encargan de ejecutar funciones
ADN PROTEÍNASARNReplicación(en el núcleo de c- eucariotas)
Transcripción(en el núcleo de c- eucariotas)
Traducción(en el citoplasma)
Actividad celular
Las secuencias de ADN que pueden moverse a diferentes partes del genoma de una célulase conocen como transposones o «genes saltarines». Fueron descubiertos por Bárbara McClintock, por lo que recibió el premio Nobel en 1983.
◦Existen varias excepciones al dogma central de la biología
ADN PROTEÍNAS
Replicación + Mutación
Transcripción Traducción
ADNmutado
ARNtransferente, interferente…
ARNm
Actividad celular
Transcripción inversaModificaciones postranscripcionales
Actividad celular
TRANSCRIPCIÓN◦Definimos TRANSCRIPCIÓN como el proceso por el que la información genética contenida en el ADN se convierte en información contenida en ARN para permitir la síntesis de proteínas. Así el ADN se conserva intacto ya que si se utilizara aumentaría el riesgo de pérdida o variación
5´AGTTCCATCG3´3´TCAAGGTAGC5´
5´AGUUCCAUCG3´
Características:◦ Se transcriben unidades de transcripción, entre una señal de inicio: el
promotor y otra de terminación. No todo el ADN se transcribe aunque si se replica todo
◦ Es un proceso direccional, la síntesis tiene lugar en dirección 5´ 3´, se copia la hebra 3´ 5´ del ADN (hebra molde). A veces puede aparecer la secuencia de iniciación en la hebra complementaria, pero el proceso tiene lugar siempre en el mismo sentido
5´3´5´ 3´
PROMOTOR
◦Existen numerosos factores de regulación que permiten que el proceso tenga o no lugar, de tal forma que así es como se produce la diferenciación celular (cada tipo de célula transcribe unos genes concretos)
◦En células eucariotas se obtienen transcritos primarios que deben sufrir modificaciones postranscripcionales antes de la síntesis de proteínas
Mecanismo en Procariotas
Se produce en tres fases:
INICIACIÓN
◦La ARN polimerasa es un enzima que necesita unirse a un cofactor (es una holoenzima) el cofactor σ, el cual se va a unir específicamente a una secuencia del ADN: el promotor que se sitúa en la posición -10 y -35 por delante del primer nucleótido situado en la posición 0. Se trata de secuencias consenso comunes y muy similares en todos los genes (muy conservadas) . Pueden estar situadas sobre la hebra 3´-5´o sobre la 5´-3´, y determinan el inicio de la transcripción. Las más conocidas son la caja TATAAT (box) y la caja TTGACA
◦Pueden existir interacciones entre proteínas represoras o activadoras de la transcripción: con la ARN polimerasa, con el promotor o con secuencias distintas del promotor que determinarán cuándo, cómo y dónde se transcribe, o no, un gen
◦No necesita cebador ◦La unión de la ARN pol y el factor σ hace que se produzca un cambio conformacional en el enzima y este desenrolla el ADN para obtener la hebra molde
Promotor
Factor σ
Hebra molde
Hebra con sentido
ELONGACIÓN ◦Se añaden r-nucleótidos complementarios a la hebra molde y se forman enlaces fosfoester de tal manera que localmente se forma un híbrido ADN-ARN
◦La subunidad σ se recicla◦La toxina α amanitina de la Amanita phalloides inhibe la ARNpolimerasa y hay antibióticos que son inhibidores específicos de la ARNpolimerasa bacteriana
TERMINACIÓN ◦La ARNpolimerasa localiza señales de terminación que pueden ser de distintos tipos y se libera del ADN, terminando el proceso
◦Una de estas secuencias de terminación es rica en G y C de tal forma que el ARN recién sintetizado forma una horquilla que impide el avance del enzima
◦Otra de estas secuencias es un sitio de reconocimiento específico de un cofactor: el cofactor ρ que facilita la terminación
Factor ρ
EL PROCESO DE TRANSCRIPCIÓN
Promotor
5’3’
5’3’
5’3’
5’3’
ARN-polimerasa
ARN
Iniciación
Elongación
Finalización
ARN transcrito completo
3’5’
3’5’
3’5’
3’5’
Mecanismo en Eucariotas
◦La transcripción y la traducción están desacopladas ya que el ADN es más inaccesible al estar situado en el núcleo. En procariotas tienen lugar en el mismo compartimento celular y en ocasiones se dan de forma simultánea en eucariotas no
◦En eucariotas existe una enorme variedad de ARN´s transcritos (primarios, pequeños, catalíticos, transferentes, ribosómicos, interferentes,…). También hay una mayor variedad de enzimas que intervienen en el proceso y de factores de regulación
◦Además del promotor en eucariotas existen secuencias reguladoras de la transcripción por delante del gen (upstream), dentro del gen o por detrás del gen (downstream) como los enhancers y los elementos de respuesta a las hormonas tiroideas
◦En eucariotas los ARNm no se transcriben directamente sino que deben sufrir primero una serie de modificaciones postranscripcionales: splicing, e inserción del cap y del poliA
Existen diferencias entre el ARNm eucariota del procariota
ARNm eucariota
◦ Contiene zonas con estructura secundaria similares a una doble hélice que forman lazos en herradura
◦ Se asocia a proteínas◦ Presenta intrones (secuencias que no tienen significado durante la
traducción)◦ Es monocistrónico: una secuencia de ARNm codifica para una
proteína◦ No se forman directamente por transcripción, además deben sufrir
una serie de modificaciones postranscripcionales:Splicing o maduración: cortar y pegar exonesAdición del cap y del poliA
Región reguladora IntrónExón TRANSCRIPCIÓN
MADURACIÓN(SPLICING o “empalme” de exones)
ARN TRANSCRITO PRIMARIO
ARN “empalmado”
5´
3´
5´3´
5´3´
N C
FORMACIÓN DEL CAP (caperuza) y DEL POLIA
TRADUCCIÓN
INTRONES
METILGpppAAAAAA El poliA estabiliza el ARNm
El metilguanosintrifosfato marca el inicio de la síntesis de la proteína y estabiliza el ARNm
ARNm
GEN eucariota (ADN)
PROTEÍNA
ARNm eucariota
ARNm procariota
◦No presenta estructura secundaria
◦No se asocia a proteínas
◦Sin intrones
◦Sin cap ni poliA
◦Es policistrónico: una secuencia de ARNm codifica para más de una proteína
GEN 1
TRANSCRIPCIÓN
ARNm5´
3´
PROTEÍNA 1
TRADUCCIÓN
ADN
PROTEÍNA 2
ARNm procariota
GEN 3GEN 2
PROTEÍNA 3
TRANSCRIPCIÓN EUCARIOTA
Promotor
5’3’
5’
3’
5’
3’
ARN
Unidad de transcripción
Iniciación3’5’
3’
5’
3’
5’
m7-Gppp
Capucha 5'Elongación
m7-Gppp
ARN-polimerasa
5’
3’
3’
5’Finalización
PoliA-polimerasa
m7-Gppp
Capucha 5' OH
ARN heterogéneo nuclear
Cola de poli-AOHm7-Gppp
Capucha 5'
5’ 3’Maduración
3’5’
Exón 1 Intrón Exón 2
RNPpn
Proteína
Espliceosoma
5’ 3’
Intrón
ARNmExón 1 Exón 2
El código genético. Definición de Traducción y características
◦ El código genético constituye la interpretación de la clave genética, es decir, la relación entre la secuencia de nucleótidos y la secuencia de aminoácidos. ¿Cómo se manifiesta la información contenida en los genes? A partir de la secuencia de nucleótidos la célula es capaz de fabricar proteínas que ejecutan las funciones celulares
◦ En su descubrimiento intervino entre otros investigadores Severo Ochoa: Médico asturiano 1905-1993, premio Nobel de Medicina en 1959 por su descubrimiento más importante: la ARNpolimerasa con la que se consiguió descifrar el código genético ya que se podía sintetizar ARN en el laboratorio. Fue un bioquímico excepcional que trabajó también en el descubrimiento de numerosas rutas metabólicas de ácidos grasos, glúcidos, fosforilación, fotosíntesis y C. de Krebs
◦ A partir de distintos polinucleótidos sintéticos se sintetizaban distintos polipéptidos: PoliU sintetizaba polipéptidos de Phe, PoliA de Lys, PoliC de Pro y PoliG no sintetizaba ningún polipéptido
◦ Sólo hay 4 nucleótidos y 20 aa si 1 nucleótido codificara información para 1 aa sólo podrían sintetizarse 4 aa, si fueran 2 nucleótidos los que codificaran para 1 aa tendríamos 42=16 combinaciones distintas luego se sintetizarían sólo 16 aa. Por lo que son 3 los nucleótidos que codifican la información para cada aa, así tenemos 43=64 combinaciones distintas suficientes para sintetizar los 20 aa y que además se constituyan señales de inicio y de terminación
◦ El código genético establece que un triplete de nucleótidos del ARNm (tres nucleótidos) codifican un aa (por ejemplo AAA: Lys)
https://elpais.com/elpais/2019/11/07/ciencia/1573124363_991474.html
MARGARITA SALAS FALGUERAS
Nunca recibió el premio nobel a pesar de su gran descubrimiento
EL CÓDIGO GENÉTICO1ª
Base2ª base 3ª
BaseU C A G
U
UUUPhe
UCUSer
UAUTyr
UGUCys
UUUC UCC UAC UGC CUUA
LeuUCA
SerUAA
StopUGA Stop A
UUG UCG UAG UGG Trp G
C
CUULeu
CCUPro
CAUHis
CGUArg
UCUC CCC CAC CGC CCUA
LeuCCA
ProCAA
GlnCGA
ArgA
CUG CCG CAG CGG G
A
AUUIle
ACUThr
AAUAsn
AGUSer
UAUC ACC AAC AGC CAUA Ile ACA
ThrAAA
LysAGA
ArgA
AUG Metinicio ACG AAG AGG G
G
GUUVal
GCUAla
GAUAsp
GGUGly
U
GUC GCC GAC GGC C
GUAVal
GCAAla
GAAGlu
GGAGly
A
GUG GCG GAG GGG G
El código genético
Características del código genético:
◦ Los tripletes de ARNm se denominan codones (a los tripletes de ADN se les denomina codógenos). Son unidades codificantes sin espacios
◦ Existen codones que no tienen traducción. AUG: Inicio, UAA, UAG y
UGA: Terminación
◦ Para algunos aa hay varios codones (codones sinónimos) que suelen diferir en un solo nucleótido, el último. A esta característica se le denomina degeneración del código genético y proporciona una ventaja ante errores durante la copia
◦ El código genético es universal incluso para virus, es una prueba más de la evolución de los seres vivos desde nuestro ancestro común (hace 3500 m.a.) se utiliza el mismo lenguaje genético. Aunque existen algunas excepciones como las mitocondrias, los protistas ciliados o los micoplasmas (lo cual nos indica lo antiguos que son)
Excepciones a la Universalidad del Código
Organismo Codón Significado en Código Nuclear
Significado en Código Mitocondrial
Todos UGA FIN TrpLevadura CUX Leu ThrDrosophila AGA Arg SerHumano, bovino AGA, AGC Arg FINHumano, bovino AUA Ile Met (iniciación)Ratón AUU, AUC, AUA Ile Met (iniciación)
TRADUCCIÓN
◦La TRADUCCIÓN se puede definir como el proceso por el que la información genética del ARNm se transforma en información contenida en una cadena polipeptídica con una función determinada por su estructura, determinada por su secuencia
5´AUG/UAU/UGC/UAA3´ Inicio Stop N-Met–Tyr-Cys-C
Características◦Es un proceso direccional tiene lugar en dirección
N C
◦Un mismo ARNm puede ser leído por varios ribosomas a la vez si es lo suficientemente largo
◦En procariotas el proceso de traducción está acoplado al de transcripción
◦En eucariotas y procariotas, el proceso es muy similar, varían los tipos de enzimas y cofactores implicados en su regulación
Mecanismo Consta de tres fases: ACTIVACIÓN DE LOS AA◦ De este proceso se encargan las aaARNsintetasas: son 20 distintas,
específicas para cada aa, reconocen el brazo D del ARNt y el brazo anticodón y en presencia de ATP une el aa de forma covalente a su ARNt formando un aaARNt
◦ El aa se une específicamente al ARNt cuya secuencia en el brazo es antiparalela y complementaria a la del codón correspondiente en el ARNm
TRADUCCIÓN◦ Iniciación
◦Unión del ARNm a la subunidad pequeña del ribosoma, a la secuencia líder o de inicio que no se traduce
AUG5´ 3´
Secuencia líder
◦Unión del aaARNt al primer codón AUG: El anticodón y el codón son secuencias antiparalelas y complementarias AUG-UAC y el primer aa que se une es un aa modificado (formil-metionina)
AUG5´ 3´
3´
UAC
5´
◦Unión de la subunidad mayor, formando el complejo ribosomal o complejo activo, se genera un sitio P donde se une el primer aa y un sitio A donde se unirá el siguiente
AUG5´ 3´
3´
UAC
5´
AP
AGU
◦ Elongación◦ Unión del segundo aaARNt al sitio A con el aa2
◦ Formación del primer enlace peptídico entre el aa1 y el aa2. La peptidiltransferasa une el COOH del primer aa con el NH2 del segundo. El sitio P se queda sólo con el ARNt y éste se libera
AUG5´ 3´UAC
AP
AGUUCA
AUG5´ 3´UAC
AP
AGUUCA
N
◦Se produce la translocación ribosomal, el dipéptido unido al ARNt pasa a ocupar el sitio P. Y se repite el proceso de elongación tantas veces como codones con sentido tenga el ARNm
AUG5´ 3´UAC
AP
AGUUCA
N
◦Terminación
◦Cuando el ribosoma encuentra un codón sin sentido UAA, UAG o UGA, ningún ARNt los reconoce y se unen factores de liberación FR que al unirse al sitio A provoca la rotura del péptido del ARNt y la liberación del ARNm y las dos subunidades del ribosoma
AAC5´ 3´P A
UAGUUG
FR
N C
FORMACIÓN DE LA ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DE LA PROTEÍNA
◦Una vez sintetizada la secuencia de aa se debe adquirir su estructura tridimensional para que pueda llevar a cabo sus funciones
1º Se elimina el primer aa: la formilmetionina2º Se pliega en el espacio, a veces requiere de otras
proteínas que colaboren: chaperoninas3º Asociación de varias cadenas y Asociación de grupos
prostéticos
U C G
COOH
NH2
CH2
OH
H C Aminoácido(serina)
Anticodón
ARNt
Aminoácido
ARNt
Anticodón
ARNt iniciador
Subunidad menor
3’
5’
UA C
5’
3’A
U G
5’
3’
EA
Metionina
5’
3’
GTPGDP
Iniciación de la síntesis
Subunidad menor
Subunidad mayorAminoacil-ARNt
ARNt
Cadena polipeptídica en formación
Anticodón
3’
5’
ARNm
Aminoácido
Elongación de la cadena polipeptídica
Anticodón
Complementariedad entre codón y anticodón
GTPGDP
5’
3’ 3’
5’ 5’ 5’3’
3’GTPGDP
Enlace peptídico
El aminoácido se traslada al otro ARNt
ARNt
AminoácidoSe libera el ARNt que ha
cedido el aminoácido
Finalización de la síntesis
El codón de finalización puede ser UAA, UAG o UGA
Último ARNt
Factor de liberación
Polipéptido libre
Separación del ARNm y las subunidades ribosómicas
3’
5’
3’
5’
RIBOSOMA
Una determinada secuencia de bases de DNA(ADN) se transcribe al siguiente fragmento de m-RNA (ARN-m):AUGAAGGCGAUUGCUGUGAACGAUCAG¿Qué secuencia de bases tendrá la hebra de DNA que ha servido como molde? ¿y su complementaria?Teniendo en cuenta que todos los codones tienen traducción, y que el primero es el de la metionina¿cuántosaminoácidos podrían traducirse a partir de esta secuencia? Razona la respuesta de estas dos preguntas:¿Puedenlos aminoácidos reconocer directamente los codones? ¿a qué molécula deben unirse primero los aminoácidos paraque pueda tener lugar la traducción?
AUGAAGCGAUUGCUGUGAAACGAUCAG5´ 3´ARNm
5´3´ TACTTCGCTAACGACACTTTGCTAGTC Hebra molde ADN
5´3´TACTTCGCTAACGACACTTTGCTAGTC Hebra
molde ADN
3´5´ATGAAGCGATTGCTGTGAAACGATCAG
Hebra con sentido ADN
N Met-Lys-Ala-Ile-Ala-Val-Asn-Asp-Glu CProteína con 8 aa además de la Met: aa señal de inicio
Los aa no pueden reconocer directamente la secuencia del codón no se establece ningún enlace débil, ni ninguna complementariedad entre la moléculasPor eso necesitan unirse previamente a una molécula de ARN-t específica para cada aa, establecida según el código genéticoLos aa necesitan una molécula adaptadora (ARN-t) para reconocer los codones: El ARN-t reconoce especificamente cada triplete del ARN-m a través de una secuencia complementaria o anticodón situada en el brazo del mismo nombre
Regulación de la expresión génica◦ Se necesitan sistemas que controlen la transcripción y la
traducción para evitar el caos metabólico que supondría tener todas las reacciones químicas funcionando a la vez porque todas las proteínas se han sintetizado en todas las células al mismo tiempo. Además de para permitir la diferenciación celular y la especialización, cada célula de cada tejido sintetiza las proteínas que se necesitan para desempeñar una función vital concreta
◦ Normalmente el control se realiza a nivel de transcripción, llevándose a cabo mediante un gran número de mecanismos (en nuestra especie la mayor parte de ellos son todavía desconocidos)
◦ Un ejemplo muy sencillo para entender qué tipo de mecanismos permiten regular la expresión génica es el ejemplo del operón de la lactosa de Escherichia coli, descubierto por J. Monod en los años 40
◦ Intervienen tres enzimas la β-Galactosidasa (gen 1), la β-Galactosido-permeasa (gen 2) y la β-Galactosido-transacetilasa (gen 3)
◦ Monod propuso un modelo explicativo de la regulación de la
expresión de estos genes el Operón. De tal forma que existen dos tipos de genes: genes estructurales o funcionales que serían las tres enzimas y genes reguladores que se encargan del control de los genes estructurales mediante proteínas represoras
LACTOSA GLUCOSA+GALACTOSA
β-Galactosidasa
GLUCOSA
- Síntesis
Gen regulador Gen 1 Gen 2 Gen 3OP
R
R
Transcripción
Traducción
O Lugar de unión del represor
P Lugar de unión de la ARNpol
En presencia de glucosa el represor se sintetiza y se inhibe la síntesis de las enzimas encargadas de la degradación de la lactosa
En presencia de lactosa la proteína represora ( R ) se vuelve inactiva, la lactosa es un inductor, ya que induce la síntesis de proteínas
Gen regulador Gen 1 Gen 2 Gen 3OP
R
Transcripción
Traducción
1 2
3LACTOSA
ARNpol
◦ Este sistema de regulación del operón lac se conoce como inducción enzimática. Hay otros, por ejemplo: el operón de la histidina o del triptófano son sistemas de represión enzimática por producto final (retroinhibición)
Gen regulador del operón
Zona promotora
Zona operadora
Gen estructural de la galactosidasa
Gen estructural de la permeasa
Gen estructural de la transacetilasa
En estado normal
En presencia de lactosa
ARN-polimerasaEl represor controla los
genes estructurales
ARNmRepresor
Los genes estructurales pueden codificar proteínas
ARNmInductor asociado
al represor
Inductor que bloquea al represor
ARNm
Galactosidasa Permeasa Transacetilasa
◦ El AMP cíclico es un compuesto químico que interviene en numerosas vías de regulación
◦ En eucariotas las Hormonas desarrollan un papel muy importante en la regulación:
Una hormona es una sustancia química producida por una glándula endocrina o de secreción interna que viaja por la sangre y cuya función es la de transportar información entre células (son mensajeros químicos). Químicamente son:◦ Proteínas que mediante segundos mensajeros internos provocan respuestas
celulares◦ Esteroides que activan la transcripción génica ya que se unen a secuencias
específicas en el ADN
Sus funciones son muy diversas e intervienen entre otras en la estimulación de la síntesis de sustancias, en la regulación del metabolismo, en la estimulación del crecimiento celular y en los procesos de diferenciación celular
Gen reguladorAMPc
ARN-polimerasa
P O
CAP Promotor Operador
Gen 1 Gen 2 Gen 3
Los genes y los caracteres del organismo
◦ TEORÍA UN GEN=UNA ENZIMA
Esta teoría propuesta por Beadle y Tatum en 1941, exponía la relación existente entre los genes y las enzimas
Según esta teoría un gen es un fragmento de ADN que contiene la información necesaria para un carácter determinado por la actividad de un enzima
Un alelo es cada uno de los genes situados en el mismo locus de ambos cromosomas homólogos
El estudio del metabolismo permitió establecer la relación que existía entre los genes y las enzimas, de tal forma que si se alteraba la secuencia de un gen faltaba un enzima. La regulación del metabolismo y las características propias de cada célula podrían explicarse así, según la expresión de los genes. Esta idea marcó el inicio de la genética molecular
Gen 1
Gen 2
Gen 3
A B C DE 1 E2 E 3
ADN
Enzimas
Ruta metabólica
Expresión génica
Gen 2*
Gen 3
Gen 1
E 1 E 3A B
ADN
Expresión génica alterada
Enzimas deficientes
Ruta metabólica alterada (posible causa de enfermedad metabólica)
a) Esquema de la producción de melanina, pigmento responsable de la coloración de la piel
b) Persona con albinismo, producido por inactivación del gen responsable de la producción de melanina.
◦ Hoy se sabe que no siempre es así, sobre todo en eucariotas, sino algo más complejo. Hay caracteres que requieren más de un enzima y hay enzimas que participan en distintos caracteres. Hay genes que no se traducen sino que sólo se transcriben. Hay proteínas que están formadas por subunidades codificadas por distintos genes
◦ El ser humano puede tener aproximadamente 23000 genes y sin embargo se estima que pueden existir 108000 proteínas que surgen:
Por splicing alternativoPor cambios postranscripcionales (así se explica la presencia de distintas proteínas en distintas etapas vitales)Por genes polimórficos
(así se explica la presencia de proteínas diferentes que realizan las mismas funciones en distintos seres vivos)
◦ La proteómica es la ciencia que estudia el proteoma o conjunto de todas las proteínas del organismo
Concepto actual de genEl concepto de gen ha variado a lo largo de la historia de la ciencia
◦ A principios del s. XX el gen era una unidad de función, encargada de controlar los caracteres hereditarios, tal y como los describió Mendel
◦ En los años 40 el gen además de unidad funcional se consideraba ya
unidad estructural y se definía como la parte más pequeña, capaz de recombinar y mutar, según la teoría cromosómica de la herencia
◦ En los años 60 el descubrimiento del ADN como portador del material
genético hizo que el gen se siguiera manteniendo como una unidad funcional de los caracteres hereditarios pero se pasó a considerar como unidad estructural al nucleótido, estableciéndose el dogma central de la biología
◦En la actualidad el concepto de gen se ha modificado, gracias a los avances conseguidos en genética molecular. Hoy se define de la siguiente forma: Un gen es un conjunto de secuencias de ADN que codifican para una cadena polipeptídica, ARNt, ARNr u otro tipo de ARN; está formado por secuencias codificantes que en eucariotas son discontinuas: exones + intrones (secuencias intergénicas sin sentido) y por secuencias reguladoras que no se transcriben pero que modifican la expresión génica
◦ Hay que tener en cuenta que el ADN es dinámico (mutación), flexible (estructura) y móvil (transposición)
◦ La revisión del dogma central de la biología ha hecho que surjan muchas excepciones
◦ El ARN tiene un importante papel como regulador de la expresión génica. A medida que se profundiza en el estudio del genoma humano aumenta el grado de complejidad. No sólo hay pocos genes en todo nuestro genoma (1,5% del ADN total) es que hay muchas otras partes del ADN que son funcionalmente importantes y que no se consideran genes, se transcriben a ARN ¿qué funciona como regulador de la expresión génica? o ¿qué posee otro tipo de funciones aun no muy bien conocidas? o ¿qué simplemente es ruido de fondo de la transcripción?
◦ Existen genes solapados con distinta fase de lectura según donde se empiece a leer, y además los promotores pueden iniciar la transcripción en una u otra cadena. La misma zona del genoma puede codificar por muchas proteínas y hay proteínas formadas a partir de la información de varios genes
◦ El genoma de algunos organismos no es ADN por lo que ciertos genes no se pueden considerar fragmentos de ADN ¿o sí, puesto que necesitan de una célula que trabaja en modo ADN?
◦Podemos seguir considerando al gen como una unidad funcional de información genética, que se transmite de generación en generación, pero está claro que todavía no sabemos todo acerca de cómo funcionan, porque ni siquiera conocemos aún todos nuestros genes
◦ En Wikipedia se define Gen de la siguiente manera:
Un gen es la unidad básica de herencia de los seres vivos. Desde el punto de vista molecular, un gen es una secuencia lineal de nucleótidos en la molécula de ADN (o ARN en el caso de algunos virus), que contiene la información necesaria para la síntesis de una macromolécula con función celular específica. Por ejemplo: Proteínas, ARNm, ARN ribosómico, ARN de transferencia y ARN pequeños. Esta función puede estar vinculada al desarrollo o funcionamiento de una función fisiológica normal. El gen es considerado como la unidad de almacenamiento de información y unidad de herencia al transmitir esa información a la descendencia. Los genes se disponen, pues, a lo largo de cada uno de los cromosomas. Cada gen ocupa en el cromosoma una posición determinada llamada locus. El conjunto de cromosomas de una especie se denomina genoma.
Algunas enfermedades como la anemia drepanocítica (o anemia falciforme) pueden ser ocasionadas por un cambio en un solo gen (uno de los 30.000 genes que constituyen el plan para todo el cuerpo humano).
Los organismos diploides (entre ellos, casi todos los animales y plantas) disponen de dos juegos de cromosomas homólogos, cada uno de ellos proveniente de uno de los padres. Cada par de cromosomas tiene, pues, un par de copias de cada gen, una procedente de la madre y otra del padre.
Los genes pueden aparecer en versiones diferentes, con variaciones pequeñas en su secuencia, denominadas alelos. Los alelos pueden ser dominantes o recesivos. Cuando una sola copia del alelo hace que se manifieste el rasgo fenotípico, el alelo es dominante. Cuando son precisas dos copias del alelo (una en cada cromosoma del par), el alelo es recesivo.
Tipos de genes
La mayoría de los genes codifican proteínas, responsables de la mayor parte de las propiedades de un organismo. Para ello, la transcripción genera una molécula de ARN que posteriormente sufrirá traducción en los ribosomas, proceso por el cual se genera una proteína. Muchos genes se encuentran constituidos por regiones codificantes (exones) interrumpidas por regiones no codificantes (intrones) que son eliminadas en el procesamiento del ARN. En células procariontes esto no ocurre. La secuencia de bases presente en el ARN determina la secuencia de aminoácidos de la proteína por medio del código genético.
Otros genes no son traducidos a proteína, sino que cumplen su función en forma de ARN. Entre éstos, encontramos genes de ARN transferente, ARN ribosómico, ribozimas y otros ARN pequeños de funciones diversas.
Algunos genes han sufrido procesos de mutación u otros fenómenos de reorganización y han dejado de ser funcionales, pero persisten en los genomas de los seres vivos. Al dejar de tener función, se denominan pseudogenes, y pueden ser muy parecidos a otros genes del mismo organismo que sean funcionales.
Organización del genoma de los seres vivos
◦Número de genes en algunos organismos
ORGANISMO Nº DE GENES PARES DE BASES
Plantas <50000 <1011
Humanos 23000 3 × 109
Moscas 12000 1,6 × 108
Hongos 6000 1,3 × 107
Bacterias 500-6000 5 × 105 - 107
Mycoplasma genitalium 500 580.000
Virus DNA 10-300 5.000 - 800.000Virus RNA 1-25 1.000 - 23.000Viroides 0-1 ~500Priones 0 0
GENOMA
ARN
PROCARIOTAS VIRUSEUCARIOTAS
ADN
GENES
ds
l c
ssds ds
cl
>1 cadena
HISTONAS
PLÁSMIDOS
1 cadena
PROTEÍNAS NO HISTONAS
ADN SILENCIOSO
CROMATINA CROMOSOMA EUCARIOTA
Intrones y secuencias intergénicas
CROMOSOMA BACTERIANO
Formado por
en
Pueden ser
en
concon
en
sin
con con
Para formar
con
con
Para formar
como
y y o
o
El genoma eucariota◦ Está formado por una gran cantidad de ADN (mil veces más que
el procariota), del cual sólo un porcentaje muy pequeño es génico, aproximadamente un 10% (en humanos puede que sólo sea un 1,5%)
◦ El ADN es de cadena doble, lineal y hay un gran número de cadenas. Además se asocia a proteínas de tipo Histonas para formar la cromatina y los cromosomas
◦ Presenta intrones
◦ Tiene una gran cantidad de ADN silencioso que no se transcribe y cuya función se desconoce, quizás confiera protección mecánica contra posibles roturas o quizás amortigüe mutaciones
◦ Hay distintos tipos de ADN
◦ tipos de ADN eucariota:
◦ ADN satélite o egoísta (se puede multiplicar muchas veces sin provocar mutaciones), formado por secuencias cortas muy repetitivas y localizadas sobre todo en los telómeros y los centrómeros de los cromosomas. Son zonas genéticamente inactivas, no se transcriben, suponen entre el 15 y el 50% del ADN total (se supone además que es el origen de los virus y de los transposones
◦ ADN moderadamente repetitivo, que está formado por los genes de las histonas, de los ARNt, de los ARNr y secuencias desconocidas. Suponen un 20% del ADN total
◦ ADN no repetitivo, formado por los genes de los ARNm y el ADN espaciador, a veces pueden aparecer duplicados, y si aparecen pequeñas variaciones entre ellos pueden aparecer los pseudogenes que no se transcriben. En ocasiones es a partir de varias secuencias de dónde se obtiene un solo producto, como en el caso de los Ab
Cromosoma de 1,5.108p.n. (¿3000 genes?)
0,01% del cromosoma con 4 genes
ADN silencioso
Gen con 105p.n.
Región reguladora IntrónExón TRANSCRIPCIÓN
MADURACIÓN(SPLICING)
ARN PRIMARIO
ARNm
5´
3´
5´3´
ORGANIZACIÓN DEL GENOMA EUCARIOTA
El genoma procariota◦Está formado por una cadena doble de ADN circular que se asocia a proteínas no Histonas
◦No tiene intrones (salvo las arqueobacterias) ◦Tiene muy poco ADN silencioso
El genoma de los virus◦Está formado por ADN o ARN, de cadena doble o simple, lineal o circular; presentando una enorme variedad de genomas que comparten una característica común, todos utilizan la maquinaria celular para su reproducción
top related