estudio genotóxico de la argentatina b, 1.1

Autora: María Isabel Ramírez Orellana

UNIVERSIDAD TECNICA PARTICULAR DE LOJA

La Universidad Católica de Loja

Escuela de Bioquímica y Farmacia

Directora de Tesis: Dra. Natalia Bailón M.

Asociación Argentina del Cáncer, 2002

Provincia de Loja

Garrido, 2003

Alcohol3%

Fumar30%

Rayos Solares3%

Infección10%

Radiación 1%

Alimentación35%

Contaminación2%

Trabajo 4%

Otras Causas12%

Villalva, 2004

Procesos Quirúrgicos

Radiación

Quimioterapia

Sistémica

ANTINEOPLASICOS

Compuestos de origen natural particularmente drogas y extractos han resultado ser de gran utilidad para desarrollar numerosos fármacos.

Los más estudiados son:

Alcaloides de la vinca Epipodofilotoxinas Taxanos Camptotecinas. (Laza et al. 2003; Balunas, Kinghorn 2005)

Actualmente = Triterpenos (ácido ursólico y oleanólico)

Familia: AsteraceaeSubfamilia: AsteroideaeGenero: PartheniumEspecies: Parthenium argentatum

Desecho resinoso

Argentatina A, B y C

Parra, 2006

•Citotóxico (K562, MCF-7, HCT-15, PC3,U251)•Citostática•Inhibidor del receptor del estradiol •No genotóxico (CBMn)

Parra, 2006

Es una técnica sensible y rápida para el análisis de daño directo al DNA, en células individuales

Daño oxidativo

Entrecruzamientos

Rotura de simple y doblecadena

GENERAL:

Evaluar el efecto genotóxico in vitro de la Argentatina B en cultivo de linfocitos humanos de sangre periférica

   ESPECIFICOS:

Establecer las dosis subtóxicas a probar en el ensayo genotóxico.   Evaluar el efecto genotóxico de la Argentatina B en función al tamaño

de cola de linfocitos humanos tratados in vitro mediante el Ensayo Cometa

Siembra

Obtención – muestra

Incubamos 48 h

Tratamiento Ag B (5, 15, 25uM) EMS 0.1uM, DMSO 0.5%

Preparación de Placas

Electroforesis

Neutralización

Tinción (BrEt)

Análisis

Incubamos 24 h

Materiales y Métodos

Viabilidad

Viabilidad EMS

Grafica No. 3.1 Porcentaje de viabilidad de linfocitos humanos tratados con Etilmetanosulfonato (0.05, 0.075 y 0.1 uM) Cada barra representa la media de tres experimentos por duplicado de tres donadores diferentes. ( ● p < 0.0001)

0102030405060708090

100

DMSO 5 15 25 EMSConcentraciones uM

% d

e V

iab

ilid

ad

♦ ♦

♦ ●

Grafica No. 3.2 Porcentaje de viabilidad de linfocitos humanos tratados con Argentatina B (5, 15 y 25 uM) y EMS a 0.1 uM Cada barra representa la media de tres experimentos por duplicado de tres donadores diferentes. (♦ p < 0.0001; ● p < 0.002)

Grafico No. 3.3 . Efecto de la actividad genotóxica del Etilmetanosulfonato, usando como referencia el largo de cola en linfocitos humanos ( ● p < 0.0001)

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

DMSO 5 15 25 EMS

Concentraciones uM

Larg

o d

e C

ola

♦

♦

♦

♦

Largo de Cola con Argentatina B

Grafica No. 3.5 Efecto genotóxico de diferentes dosis de Argentatina B en Linfocitos humanos. Cada barra representa la media de tres experimentos por duplicado de tres donadores diferentes. ( ● p < 0.0001)

Las concentraciones usadas de Argentatina B (5, 15 y 25uM) no afecta la viabilidad de los linfocitos humanos, ya que presento un supervivencia mayor al 70%.

  Se observo un efecto genotóxico dosis

dependiente de la Argentatina B, ya que a medida que se aumentan las concentraciones de la misma se aumenta la migración del ADN (tamaño de Cola) en los linfocitos.

GRACIAS

ácido ursólico y el ácido oleanólico

Uncaria tomentosa (Uña de Gato)