ensayos de las vias de inoculación del huevo fértil
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Ensayos de las vias de
inoculación del huevo
fértil Practica no. 6
Objetivos
Determinar la viabilidad del embrión al ovoscopio .
Dominar las técnicas comúnmente utilizadas para la
inoculación de huevos fértiles de ave.
Diferenciar las estructuras embrionarias observando la
organización de los tejidos fuera de su cutícula.
Se reconoce el embrión que esta vivo porque en la transiluminación se ven
como telaraña
venas que forman la membrana corioalantoidea y se observa que se
desplaza un punto negro intermitente (el ojo).
Al morir, los vasos se desintegran y este
yace fijo al polo superior del huevo.
A medida que aumenta de tamaño
disminuye el volumen de los líquidos
extraembrionarios
Se emplean huevos con 5 a 14 días de incubación,
según la vía de inoculación:
Membrana corioalantoidea
Cavidades alantoidea y amniótica
Saco vitelino
Intracerebral
Endovenosa.
UTILIDAD: Es una fuente de tejido vivo conveniente y fácil de manipular que se
utiliza en la propagación, titulación e identificación de virus, así como en la preparación de algunas vacunas virales.
MIXOVIRUS-Influenza
-Parotiditis
POXVIRUSViruela
HERPESVIRUSHerpes simplex
Huevo fértil
Material
Huevos fértiles de ave de 10 días de
inoculación (+/- 1 día), calidad ALPES.
Ovoscopio y pinzas de disección
Recipiente para recibir desechos
Charola porta embriones
Perforadores, bulbos y lápiz.
Jeringas de insulina
Agujas de 20 x 38 mm.
Colorantes
CONFIRMACIÓN DE LA VIABILIDAD DEL EMBRIÓN
Transluminar cada embrión colocando el
extremo romo en la ventana del ovoscopio.
Un embrión no viable puede reconocerse a
través de:
Desprendimiento de la membrana
corioalantoidea de la parte interna de la
cutícula.
Falta de irrigación.
Falta de movimiento.
Cualquier coloración de verde a negra que
indica por lo general contaminación bacteriana.
VIAS DE INOCULACION
a Transluminar el huevo fértil con
ayuda del ovoscopio.
b Marcar un punto o cruz de 2 a 3
mm. por arriba del límite de la
cámara de aire del lado contrario
al embrión y en una zona
escasamente irrigada.
c Perforar la marca señalada.
d Con una jeringa que porte aguja
de insulina o tuberculina, inocular
en ángulo de 45 grados con
respecto al huevo fértil de ave.
Localizar la parte más alta del embrión
sobre la cámara de aire y marcar con un
punto o cruz.
b Marcar otro punto o guía que indicara
la localización del embrión.
c Perforar la marca señalada
d Introducir una aguja de 20 x 38mm
recta con ligera inclinación opuesta a la
localización del embrión
Localizar la parte más alta de la cámara de aire
y marcar un punto o cruz (*).
b Marcar otro punto en la parte media opuesta
a la localización del embrión en un área con la
menor irrigación posible.
c Perforar ambas marcas.
d Succionar con un bulbo de goma a través del
punto marcado en la primera posición (*),
creando así una cámara de aire falsa en la parte
media del embrión.
e Inocular empleando jeringas con aguja de
insulina o tuberculina en el lugar que se
desarrolló la cámara de aire falsa.
MEMBRANA VIRUS TIPO DE
EMBRIÓN
CANTIDAD DE
INOCULACIÓN
SIGNOS DE
CRECIMIENTO
Saco vitelino Herpes simple
Neumonía y
Rickettsias
Se emplean
embriones de
5 – 8 días
0.2 – 1 ml Muerte
Cariolantoíes Herpes simple
Poxvirus
Sarcoma de Rous
Varicela
Virus de
Laringotraqueitis
aviar
Enfermedad de
Beyer
Se emplean
embriones de 10 –
12 días
0.1 – 0.5 ml Muerte
Pústulas
Pústulas
Focos o pústulas
fácilmente visibles
Alantoides Influenza
New Castle
Virus de la
bronquitis
infecciosa
Se emplean
embriones de
9 – 12 días
0.1 – 0.2 ml Hemoglutinación
Amniótica Parotiditis
Virus de la Gripe
7 – 15 días 0.1 – 0.2 ml Muerte
Intravenosa Virus de la
Leucemia
10 - 15 días 0.02 - 0.05 ml. Pústulas
Intracerebral Virus del herpes
Rabia
8 – 14 días 0.01 – 0.02 ml Alteraciones
cerebrales
VENTAJAS DESVENTAJAS
Control preciso y fino del medio ambiente
(fácil manipulación)
Caracterización y homogeneidad de la
muestra
Economía
No es necesario el espacio ni el cuidado
que requieren los animales.
Mantenimiento de los cultivos celulares.
Se pueden cuantificar aveces al correlacionar el
numero de pustulas con la dilución viral
inoculada. (Herpes y vaccinia).
Se emplea para preparar vacunas (influenza,
fiebre amarilla)
Aislamiento para diagnostico (viruela, herpes,
influenza)
Hacer ensayos de nuevos agentes virales
técnica sensible
calidad y costos
Inestabilidad
Apreciación difícil durante los tres
primeros días de edad del embrión
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