elisa
Post on 11-Dec-2014
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ELISA (Ensayo por Inmunoabsorcion Ligado a Enzimas)
Daniela MurilloElizabeth PereaNatalia Villegas
Historia
• 1959 Yalow y Berson• Precursores de los ensayos inmunoenzimáticos
que fueron descritos originalmente en 1971 por Engvall y Perlman.
• El uso de material radiactivo ha limitado el uso del radioinmunoensayo, y a la vez a popularizado el empleo del inmunoensayo enzimático (EIA), del que hay dos técnicas principales:
• El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas • El ensayo inmunológico multiplicado por enzimas.
• Reacción antígeno-anticuerpo• El color generado por la interacción de un
sustrato cromogénico y una enzima
ANTICUERPOS CONTRA AGENTES INFECCIOSOS Toxoplasma Cisticerco Amebas
CMV Hepatitis A-B-C Helycobacter pyloriEpstein Barr Rubeola HIV
ANTIGENOS TUMORALESACE (Antigeno Carcinoembrionario)APS (Antigeno prostatico especifico)
CA 125 (Antigeno Carbohidrato)AFP (Alfafetoproteina)
AUTOANTICUERPOSANA (Anticuerpo Antinuclear)
Anticuerpos antitiroideosFR (Factor Reumatoide)
Anticardiolipinas
Determinación de:
Formación de colores por la acción enzimática sobre diferentes cromógenos
Otras Enzimas
• β-galactosidasa• Penicilinasa• Ureasa • Glucosa Oxidasa
Fase Pre-Analítica
Toma de la muestra
Muestra
• Obtención de suero• Tubos de tapa amarilla o de tapa roja• Centrifugación
Condiciones de la muestra
• No hemolizada• No lipemica
Condiciones del Paciente• Ayuno ideal de 10 a 12 horas• No consumo de tabaco ni alcohol
Fase Analítica
Fundamento del ELISA
Pasos Generales
• Tapizado• Lavado• Adición muestra problema• Unión antígeno o anticuerpo• Lavado• Adición de Ac secundario• Lavado• Adición sustrato• Desarrollo del color
Tipos de ELISA
Anticuerpos Marcados:• ELISA directo• ELISA indirecto• ELISA sandwich- DAS (Doble)- HADAS (Heterologo)
Antigenos Marcados• ELISA competitivo
ELISA directo
ELISA Indirecto
ELISA Sandwich “DAS” (Double Antibody Sandwich)
ELISA Sandwich “HADAS”
ELISA Competitivo
Revelación de la actividad enzimática
• Adición de ácidos o bases fuertes para detener la reacción
• Lectura de la densidad óptica (DO) por espectrofotómetro
Fase Post-Analítica
Densidad óptica (DO)
Concentración
Reporte de Resultados
Reporte Cualitativo• Positivo• Negativo
Reporte Cuantitativo• ng o μg/ ml• Unidades Internacionales de ELISA (EIU)
Falsos Positivos
• Reacciones cruzadas entre anticuerpos con especificidades similares
Enfermedades AutoinmunesEmbarazadasPresencias de virus como Epstein Barr, VIH, etc.
• Contaminación cruzada entre muestras• Deterioro de los reactivos• Errores técnicos
Falsos Negativos
• Paciente no ha generado los anticuerpos de estudio
• Los anticuerpos de la muestra no tienen especificidad contra el antígeno de la prueba o viceversa
• Deterioro de los reactivos• Errores técnicos
Ventajas de la prueba ELISA
• Muy sensible• Gran numero de muestras procesadas
simultáneamente• Resultados rápidos• Utilización de Reactivos menos tóxicos• Menor Costo
Gracias
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