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El desafío de identificar correctamente Enterobacterias.

María Emilia Suárez

Bioq.Bacterióloga

CARACTERÍSTICAS

• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm

• GRAM NEGATIVOS

• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS

FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES

• FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA

POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS

TAXONOMÍA

• SECCIÓN 5, 2da EDICIÓN BERGEY

• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES

• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS

• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS: HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN ADN Y ARNr 16S

Familia Enterobacteriaceae

8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas

Tribu I: ESCHERICHIEAE: Género I: Escherichia / Género II: Shigella

Tribu II: EDWARSIELLEAE : Género I: Edwarsiella

Tribu III: SALMONELLEAE: Género I : Salmonella

Tribu IV: CITROBACTEREAE : Género I : Citrobacter

Tribu V: KLEBSIELLEAE: Género I: Klebsiella / Género II: Enterobacter

Género III: Hafnia/ Género IV: Serratia

Tribu VI: PROTEEAE: Género I: Proteus / Género II: Morganella

Género III: Providencia

Tribu VII: YERSINIEAE : Género I : Yersinia

Tribu VIII: ERWINIEAE : Género I: Erwinia

PODER PATÓGENO

• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLÍNICA

• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLÍNICOS

• PATÓGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS

• PATÓGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES

TIPIFICACIÓN

• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES BIOQUÍMICOS

• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O (SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES)

SEROGRUPOS Y SEROTIPOS

TIPIFICACIÓN

• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli

• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS

• GENOTIPIFICACIÓN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.

Antígenos de Enterobacteriaceae

K Ag

Enterobacterias frecuentes con significación

clínica

Citrobacter freundii, Citrobacter koserí

Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae

Escheríchia coli

Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca

Morganella morganii

Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgarís

Salmonella entérica

Serratia marcescens

Shigella sonnei, Shigella flexneri

Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia

pseudotuberculosis

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MEDIOS COMUNES

• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES

• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTÉRICAS

• CITRATO SÓDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES(sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio)

Medios enriquecidos/ CromogénicosAgar Mac Conkey, EMB.

• MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferencialesEnriquecimiento previo

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

Oxidasa

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

1- Shigella

2- Grupo KES

3- E.coli

TSI

TRIBU I : ESCHERICHIEAE

Mac Conkey Sorbitol Mac Conkey

¿Cómo diferenciamos Shigella de E.coli ?

Pruebas E.coli Shigella

Indol + (96,3) - ó + (37,8)

Lisina decarboxilasa

D (80,6) - (0)

Ornitinadecarbox.

D (57,8) - ó + (20)

Lactosa + (91,6) - (0,3)

Acetato de sodio + (83,3) - (0)

Gas de glucosa + (92) - (2,1)

Motilidad + ó – (62,1) - (0)

RM VP

Diferenciación de Shigella

E.coliShigella

LIATSI

Acetato

ONPGMIO

Clasificación Serológica

Especie Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae A 1- 12

S. flexneri B 1- 6

S. boydii C 1- 18

S. sonnei D 1

TRIBU II: EDWARDSIELLEAE

Hombre y animalesHabitad

+Movilidad a 37ºC

-Malonato (utilización)

-/+Arabinosa (fermentación)

-Manitol, sacarosa (ferm)

-Trehalosa (fermentación)

+Indol

+SH2

-Lactosa (fermentación)

E.tardaPrueba bioquímica

TRIBU III:SALMONELLEAE

GÉNERO I: SalmonellaSalmonella entérica

Salmonella bongori

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Prueba bioquímica Sal.subesp.(I)

Lactosa (fermentación)*** -

ONPG -

SH2 +

Glucosa (fermentación)*** +/ con gas

Rojo de Metilo* +

Voges – Proskauer* -

Lisina decarboxilasa** +

Ornitina decarboxilasa** +

Arginina dehidrolasa** +

Urea (hidrólisis)** -

Malonato (utilización)* -

Citrato Simmons** +

*Lectura a los 2días

**Lectura hasta los 4 días

***Lectura hasta los 7 días

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis

Prueba bioquímica Salmonella entérica

subesp.enterica(I)Proteus mirabilis

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - +

Fenilalaninadeaminasa - +

Lisina decarboxilasa + -

Ornitina decarboxilasa + +

Lactosa (fermentación) - -

Dulcita (fermentación) + -

ONPG - -

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Salm entérica

subesp.enterica(I)Citrobacter freundii

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - d

Lisina decarboxilasa + -

Ornitina decarboxilasa + d

Lactosa (fermentación) - d

Sacarosa (fermentación) - d

Dulcita (fermentación) + d

Malonato (utilización) - d

ONPG - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Pruebas bioquímicas Salmonella entérica

subesp. enterica(I)E.Tarda E.coli SH2+

Indol - + +

Citrato Simmosns + - -

Lisina decarboxilasa + + +

Arginina dehidrolasa + - -/+

Manita (fermentación) + - +

Dulcita (fermentación) + - +/-

Ramnosa (fermentación) + - +

Xylosa (fermentación) + - +

ONPG - - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

AGAR SS

LIA de Salmonella

TSI de Salmonella

AGAR RAMBACH

S.Paratyphi A

S. Typhi

AGAR XLD

TRIBU IV: CITROBACTEREAE

Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Citrobacter spp

Movilidad +

Manitol (fermentación) +

Lisina decarboxilasa -

ONPG +

Citrato de Simmons +

Rojo de Metilo +

Voges- Proskauer -

Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:

� H2S

� Indol

� Malonato (fermentación)

� ODC

� Adonitol (fermentación)

� Melibiosa (fermentación)

� Sacarosa

� Dulcitol

En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atípicas como:

ONPG: - ( diferenciar con Salmonella)

O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres:

SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos

También hay cepas SH2:- y Citrato: -

TRIBU V: KLEBSIELLEAE

Klebsiella

GRUPO KES

Brock Biología de los Microorganismos 10ª edic.

Enterobacter aerogenes

Pantoea agglomerans

-+ Arginina dehidrolasa

+-Lisina decarboxilasa

+ +Movilidad

E. aerogenesE. cloacaePrueba bioquímica

Serratia marcescens

D-xylosa(-)

D-manosa (+)

DNAsa

(+)

(-)

-dPigmento rojo

+-Rafinosa (fermentación)

+-Melibiosa (fermentación)

+-Xilosa (fermentación)

+-Arabinosa (fermentación)

Serratia liquefaciensSerratia marcescensPrueba bioquímica

Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atípicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +,

nitrato reductasa -, mucosas y V P -

Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,

Lactosa :-

Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:-

Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar

con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-

TRIBU VI: PROTEEAE

Proteus

Test Bioquímicos Proteusa Providenciaa Morganellaa

Citrato V + -

Ferm de D- Manosa - + +

Liquefacción de gelatina 22ºC + - -

H2S en TSI + - V

Ferm myo-inositol - V -

Ornitina decarboxilasa V - (+)

Swarmming + - -

Hidrólisis de urea + V +

a reacciones dentro de las 48 hs

+: 90 – 100% de positivo

(+): 75 – 89,9% de positivo

(-) 10,1 a 25 5 de positivo

-: 0 – 10% de positivo

O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

Diferenciación entre los géneros Proteus, Providencia y Morganella

Proteus

TRIBU VI: YERSINIEAEGénero: Yersinia

+VP (22º-25ºC)

-Rammonsa (fermentación a 25ºC)

-Fenil alanita deaminasa

-Lactosa (fermentación)

+Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días)

K/A sin gas SH2 -TSI

Y.enterocoliticaPrueba bioquímica

Medios cromogénicos- BD CHROMagarOrientation Medium

Grupo KES

Grupo PMP/ Pae

E.coli

CPSID3

E.coli

VITEK

María Emilia Suárez

Bioq.Bacterióloga

El desafío de identificar correctamente Enterobacterias.

María Emilia Suárez

Bioq.Bacterióloga

CARACTERÍSTICAS

• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm

• GRAM NEGATIVOS

• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS

FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES

• FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA

POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS

TAXONOMÍA

• SECCIÓN 5, 2da EDICIÓN BERGEY

• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES

• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS

• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS: HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN ADN Y ARNr 16S

Familia Enterobacteriaceae

8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas

Tribu I: ESCHERICHIEAE: Género I: Escherichia / Género II: Shigella

Tribu II: EDWARSIELLEAE : Género I: Edwarsiella

Tribu III: SALMONELLEAE: Género I : Salmonella

Tribu IV: CITROBACTEREAE : Género I : Citrobacter

Tribu V: KLEBSIELLEAE: Género I: Klebsiella / Género II: Enterobacter

Género III: Hafnia/ Género IV: Serratia

Tribu VI: PROTEEAE: Género I: Proteus / Género II: Morganella

Género III: Providencia

Tribu VII: YERSINIEAE : Género I : Yersinia

Tribu VIII: ERWINIEAE : Género I: Erwinia

PODER PATÓGENO

• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLÍNICA

• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLÍNICOS

• PATÓGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS

• PATÓGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES

TIPIFICACIÓN

• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES BIOQUÍMICOS

• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O (SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES)

SEROGRUPOS Y SEROTIPOS

TIPIFICACIÓN

• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli

• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS

• GENOTIPIFICACIÓN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.

Antígenos de Enterobacteriaceae

K Ag

Enterobacterias frecuentes con significación

clínica

Citrobacter freundii, Citrobacter koserí

Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae

Escheríchia coli

Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca

Morganella morganii

Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgarís

Salmonella entérica

Serratia marcescens

Shigella sonnei, Shigella flexneri

Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia

pseudotuberculosis

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MEDIOS COMUNES

• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES

• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTÉRICAS

• CITRATO SÓDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES(sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio)

Medios enriquecidos/ CromogénicosAgar Mac Conkey, EMB.

• MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferencialesEnriquecimiento previo

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

Oxidasa

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

1- Shigella

2- Grupo KES

3- E.coli

TSI

TRIBU I : ESCHERICHIEAE

Mac Conkey Sorbitol Mac Conkey

¿Cómo diferenciamos Shigella de E.coli ?

Pruebas E.coli Shigella

Indol + (96,3) - ó + (37,8)

Lisina decarboxilasa

D (80,6) - (0)

Ornitinadecarbox.

D (57,8) - ó + (20)

Lactosa + (91,6) - (0,3)

Acetato de sodio + (83,3) - (0)

Gas de glucosa + (92) - (2,1)

Motilidad + ó – (62,1) - (0)

RM VP

Diferenciación de Shigella

E.coliShigella

LIATSI

Acetato

ONPGMIO

Clasificación Serológica

Especie Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae A 1- 12

S. flexneri B 1- 6

S. boydii C 1- 18

S. sonnei D 1

TRIBU II: EDWARDSIELLEAE

Hombre y animalesHabitad

+Movilidad a 37ºC

-Malonato (utilización)

-/+Arabinosa (fermentación)

-Manitol, sacarosa (ferm)

-Trehalosa (fermentación)

+Indol

+SH2

-Lactosa (fermentación)

E.tardaPrueba bioquímica

TRIBU III:SALMONELLEAE

GÉNERO I: SalmonellaSalmonella entérica

Salmonella bongori

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Prueba bioquímica Sal.subesp.(I)

Lactosa (fermentación)*** -

ONPG -

SH2 +

Glucosa (fermentación)*** +/ con gas

Rojo de Metilo* +

Voges – Proskauer* -

Lisina decarboxilasa** +

Ornitina decarboxilasa** +

Arginina dehidrolasa** +

Urea (hidrólisis)** -

Malonato (utilización)* -

Citrato Simmons** +

*Lectura a los 2días

**Lectura hasta los 4 días

***Lectura hasta los 7 días

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis

Prueba bioquímica Salmonella entérica

subesp.enterica(I)Proteus mirabilis

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - +

Fenilalaninadeaminasa - +

Lisina decarboxilasa + -

Ornitina decarboxilasa + +

Lactosa (fermentación) - -

Dulcita (fermentación) + -

ONPG - -

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Salm entérica

subesp.enterica(I)Citrobacter freundii

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - d

Lisina decarboxilasa + -

Ornitina decarboxilasa + d

Lactosa (fermentación) - d

Sacarosa (fermentación) - d

Dulcita (fermentación) + d

Malonato (utilización) - d

ONPG - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Pruebas bioquímicas Salmonella entérica

subesp. enterica(I)E.Tarda E.coli SH2+

Indol - + +

Citrato Simmosns + - -

Lisina decarboxilasa + + +

Arginina dehidrolasa + - -/+

Manita (fermentación) + - +

Dulcita (fermentación) + - +/-

Ramnosa (fermentación) + - +

Xylosa (fermentación) + - +

ONPG - - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

AGAR SS

LIA de Salmonella

TSI de Salmonella

AGAR RAMBACH

S.Paratyphi A

S. Typhi

AGAR XLD

TRIBU IV: CITROBACTEREAE

Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Citrobacter spp

Movilidad +

Manitol (fermentación) +

Lisina decarboxilasa -

ONPG +

Citrato de Simmons +

Rojo de Metilo +

Voges- Proskauer -

Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:

� H2S

� Indol

� Malonato (fermentación)

� ODC

� Adonitol (fermentación)

� Melibiosa (fermentación)

� Sacarosa

� Dulcitol

En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atípicas como:

ONPG: - ( diferenciar con Salmonella)

O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres:

SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos

También hay cepas SH2:- y Citrato: -

TRIBU V: KLEBSIELLEAE

Klebsiella

GRUPO KES

Brock Biología de los Microorganismos 10ª edic.

Enterobacter aerogenes

Pantoea agglomerans

-+ Arginina dehidrolasa

+-Lisina decarboxilasa

+ +Movilidad

E. aerogenesE. cloacaePrueba bioquímica

Serratia marcescens

D-xylosa(-)

D-manosa (+)

DNAsa

(+)

(-)

-dPigmento rojo

+-Rafinosa (fermentación)

+-Melibiosa (fermentación)

+-Xilosa (fermentación)

+-Arabinosa (fermentación)

Serratia liquefaciensSerratia marcescensPrueba bioquímica

Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atípicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +,

nitrato reductasa -, mucosas y V P -

Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,

Lactosa :-

Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:-

Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar

con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-

TRIBU VI: PROTEEAE

Proteus

Test Bioquímicos Proteusa Providenciaa Morganellaa

Citrato V + -

Ferm de D- Manosa - + +

Liquefacción de gelatina 22ºC + - -

H2S en TSI + - V

Ferm myo-inositol - V -

Ornitina decarboxilasa V - (+)

Swarmming + - -

Hidrólisis de urea + V +

a reacciones dentro de las 48 hs

+: 90 – 100% de positivo

(+): 75 – 89,9% de positivo

(-) 10,1 a 25 5 de positivo

-: 0 – 10% de positivo

O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

Diferenciación entre los géneros Proteus, Providencia y Morganella

Proteus

TRIBU VI: YERSINIEAEGénero: Yersinia

+VP (22º-25ºC)

-Rammonsa (fermentación a 25ºC)

-Fenil alanita deaminasa

-Lactosa (fermentación)

+Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días)

K/A sin gas SH2 -TSI

Y.enterocoliticaPrueba bioquímica

Medios cromogénicos- BD CHROMagarOrientation Medium

Grupo KES

Grupo PMP/ Pae

E.coli

CPSID3

E.coli

VITEK

María Emilia Suárez

Bioq.Bacterióloga

El desafío de identificar correctamente Enterobacterias.

María Emilia Suárez

Bioq.Bacterióloga

CARACTERÍSTICAS

• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm

• GRAM NEGATIVOS

• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS

FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES

• FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA

POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS

TAXONOMÍA

• SECCIÓN 5, 2da EDICIÓN BERGEY

• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES

• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS

• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS: HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN ADN Y ARNr 16S

Familia Enterobacteriaceae

8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas

Tribu I: ESCHERICHIEAE: Género I: Escherichia / Género II: Shigella

Tribu II: EDWARSIELLEAE : Género I: Edwarsiella

Tribu III: SALMONELLEAE: Género I : Salmonella

Tribu IV: CITROBACTEREAE : Género I : Citrobacter

Tribu V: KLEBSIELLEAE: Género I: Klebsiella / Género II: Enterobacter

Género III: Hafnia/ Género IV: Serratia

Tribu VI: PROTEEAE: Género I: Proteus / Género II: Morganella

Género III: Providencia

Tribu VII: YERSINIEAE : Género I : Yersinia

Tribu VIII: ERWINIEAE : Género I: Erwinia

PODER PATÓGENO

• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLÍNICA

• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLÍNICOS

• PATÓGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS

• PATÓGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES

TIPIFICACIÓN

• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES BIOQUÍMICOS

• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O (SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES)

SEROGRUPOS Y SEROTIPOS

TIPIFICACIÓN

• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli

• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS

• GENOTIPIFICACIÓN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.

Antígenos de Enterobacteriaceae

K Ag

Enterobacterias frecuentes con significación

clínica

Citrobacter freundii, Citrobacter koserí

Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae

Escheríchia coli

Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca

Morganella morganii

Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgarís

Salmonella entérica

Serratia marcescens

Shigella sonnei, Shigella flexneri

Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia

pseudotuberculosis

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MEDIOS COMUNES

• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES

• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTÉRICAS

• CITRATO SÓDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES(sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio)

Medios enriquecidos/ CromogénicosAgar Mac Conkey, EMB.

• MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferencialesEnriquecimiento previo

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

Oxidasa

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

1- Shigella

2- Grupo KES

3- E.coli

TSI

TRIBU I : ESCHERICHIEAE

Mac Conkey Sorbitol Mac Conkey

¿Cómo diferenciamos Shigella de E.coli ?

Pruebas E.coli Shigella

Indol + (96,3) - ó + (37,8)

Lisina decarboxilasa

D (80,6) - (0)

Ornitinadecarbox.

D (57,8) - ó + (20)

Lactosa + (91,6) - (0,3)

Acetato de sodio + (83,3) - (0)

Gas de glucosa + (92) - (2,1)

Motilidad + ó – (62,1) - (0)

RM VP

Diferenciación de Shigella

E.coliShigella

LIATSI

Acetato

ONPGMIO

Clasificación Serológica

Especie Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae A 1- 12

S. flexneri B 1- 6

S. boydii C 1- 18

S. sonnei D 1

TRIBU II: EDWARDSIELLEAE

Hombre y animalesHabitad

+Movilidad a 37ºC

-Malonato (utilización)

-/+Arabinosa (fermentación)

-Manitol, sacarosa (ferm)

-Trehalosa (fermentación)

+Indol

+SH2

-Lactosa (fermentación)

E.tardaPrueba bioquímica

TRIBU III:SALMONELLEAE

GÉNERO I: SalmonellaSalmonella entérica

Salmonella bongori

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Prueba bioquímica Sal.subesp.(I)

Lactosa (fermentación)*** -

ONPG -

SH2 +

Glucosa (fermentación)*** +/ con gas

Rojo de Metilo* +

Voges – Proskauer* -

Lisina decarboxilasa** +

Ornitina decarboxilasa** +

Arginina dehidrolasa** +

Urea (hidrólisis)** -

Malonato (utilización)* -

Citrato Simmons** +

*Lectura a los 2días

**Lectura hasta los 4 días

***Lectura hasta los 7 días

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis

Prueba bioquímica Salmonella entérica

subesp.enterica(I)Proteus mirabilis

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - +

Fenilalaninadeaminasa - +

Lisina decarboxilasa + -

Ornitina decarboxilasa + +

Lactosa (fermentación) - -

Dulcita (fermentación) + -

ONPG - -

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Salm entérica

subesp.enterica(I)Citrobacter freundii

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - d

Lisina decarboxilasa + -

Ornitina decarboxilasa + d

Lactosa (fermentación) - d

Sacarosa (fermentación) - d

Dulcita (fermentación) + d

Malonato (utilización) - d

ONPG - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Pruebas bioquímicas Salmonella entérica

subesp. enterica(I)E.Tarda E.coli SH2+

Indol - + +

Citrato Simmosns + - -

Lisina decarboxilasa + + +

Arginina dehidrolasa + - -/+

Manita (fermentación) + - +

Dulcita (fermentación) + - +/-

Ramnosa (fermentación) + - +

Xylosa (fermentación) + - +

ONPG - - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

AGAR SS

LIA de Salmonella

TSI de Salmonella

AGAR RAMBACH

S.Paratyphi A

S. Typhi

AGAR XLD

TRIBU IV: CITROBACTEREAE

Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Citrobacter spp

Movilidad +

Manitol (fermentación) +

Lisina decarboxilasa -

ONPG +

Citrato de Simmons +

Rojo de Metilo +

Voges- Proskauer -

Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:

� H2S

� Indol

� Malonato (fermentación)

� ODC

� Adonitol (fermentación)

� Melibiosa (fermentación)

� Sacarosa

� Dulcitol

En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atípicas como:

ONPG: - ( diferenciar con Salmonella)

O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres:

SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos

También hay cepas SH2:- y Citrato: -

TRIBU V: KLEBSIELLEAE

Klebsiella

GRUPO KES

Brock Biología de los Microorganismos 10ª edic.

Enterobacter aerogenes

Pantoea agglomerans

-+ Arginina dehidrolasa

+-Lisina decarboxilasa

+ +Movilidad

E. aerogenesE. cloacaePrueba bioquímica

Serratia marcescens

D-xylosa(-)

D-manosa (+)

DNAsa

(+)

(-)

-dPigmento rojo

+-Rafinosa (fermentación)

+-Melibiosa (fermentación)

+-Xilosa (fermentación)

+-Arabinosa (fermentación)

Serratia liquefaciensSerratia marcescensPrueba bioquímica

Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atípicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +,

nitrato reductasa -, mucosas y V P -

Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,

Lactosa :-

Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:-

Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar

con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-

TRIBU VI: PROTEEAE

Proteus

Test Bioquímicos Proteusa Providenciaa Morganellaa

Citrato V + -

Ferm de D- Manosa - + +

Liquefacción de gelatina 22ºC + - -

H2S en TSI + - V

Ferm myo-inositol - V -

Ornitina decarboxilasa V - (+)

Swarmming + - -

Hidrólisis de urea + V +

a reacciones dentro de las 48 hs

+: 90 – 100% de positivo

(+): 75 – 89,9% de positivo

(-) 10,1 a 25 5 de positivo

-: 0 – 10% de positivo

O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

Diferenciación entre los géneros Proteus, Providencia y Morganella

Proteus

TRIBU VII: YERSINIEAEGénero: Yersinia

+VP (22º-25ºC)

-Rammonsa (fermentación a 25ºC)

-Fenil alanita deaminasa

-Lactosa (fermentación)

+Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días)

K/A sin gas SH2 -TSI

Y.enterocoliticaPrueba bioquímica

Medios cromogénicos- BD CHROMagarOrientation Medium

Grupo KES

Grupo PMP/ Pae

E.coli

CPSID3

E.coli

VITEK

María Emilia Suárez

Bioq.Bacterióloga

El desafío de identificar correctamente Enterobacterias.

María Emilia Suárez

Bioq.Bacterióloga

CARACTERÍSTICAS

• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm

• GRAM NEGATIVOS

• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS

FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES

• FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA

POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS

TAXONOMÍA

• SECCIÓN 5, 2da EDICIÓN BERGEY

• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES

• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS

• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS: HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN ADN Y ARNr 16S

Familia Enterobacteriaceae

8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas

Tribu I: ESCHERICHIEAE: Género I: Escherichia / Género II: Shigella

Tribu II: EDWARSIELLEAE : Género I: Edwarsiella

Tribu III: SALMONELLEAE: Género I : Salmonella

Tribu IV: CITROBACTEREAE : Género I : Citrobacter

Tribu V: KLEBSIELLEAE: Género I: Klebsiella / Género II: Enterobacter

Género III: Hafnia/ Género IV: Serratia

Tribu VI: PROTEEAE: Género I: Proteus / Género II: Morganella

Género III: Providencia

Tribu VII: YERSINIEAE : Género I : Yersinia

Tribu VIII: ERWINIEAE : Género I: Erwinia

PODER PATÓGENO

• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLÍNICA

• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLÍNICOS

• PATÓGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS

• PATÓGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES

TIPIFICACIÓN

• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES BIOQUÍMICOS

• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O (SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES)

SEROGRUPOS Y SEROTIPOS

TIPIFICACIÓN

• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli

• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS

• GENOTIPIFICACIÓN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.

Antígenos de Enterobacteriaceae

K Ag

Enterobacterias frecuentes con significación

clínica

Citrobacter freundii, Citrobacter koserí

Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae

Escheríchia coli

Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca

Morganella morganii

Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgarís

Salmonella entérica

Serratia marcescens

Shigella sonnei, Shigella flexneri

Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia

pseudotuberculosis

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MEDIOS COMUNES

• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES

• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTÉRICAS

• CITRATO SÓDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES(sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio)

Medios enriquecidos/ CromogénicosAgar Mac Conkey, EMB.

• MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferencialesEnriquecimiento previo

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

Oxidasa

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

1- Shigella

2- Grupo KES

3- E.coli

TSI

TRIBU I : ESCHERICHIEAE

Mac Conkey Sorbitol Mac Conkey

¿Cómo diferenciamos Shigella de E.coli ?

Pruebas E.coli Shigella

Indol + (96,3) - ó + (37,8)

Lisina decarboxilasa

D (80,6) - (0)

Ornitinadecarbox.

D (57,8) - ó + (20)

Lactosa + (91,6) - (0,3)

Acetato de sodio + (83,3) - (0)

Gas de glucosa + (92) - (2,1)

Motilidad + ó – (62,1) - (0)

RM VP

Diferenciación de Shigella

E.coliShigella

LIATSI

Acetato

ONPGMIO

Clasificación Serológica

Especie Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae A 1- 12

S. flexneri B 1- 6

S. boydii C 1- 18

S. sonnei D 1

TRIBU II: EDWARDSIELLEAE

Hombre y animalesHabitad

+Movilidad a 37ºC

-Malonato (utilización)

-/+Arabinosa (fermentación)

-Manitol, sacarosa (ferm)

-Trehalosa (fermentación)

+Indol

+SH2

-Lactosa (fermentación)

E.tardaPrueba bioquímica

TRIBU III:SALMONELLEAE

GÉNERO I: SalmonellaSalmonella entérica

Salmonella bongori

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Prueba bioquímica Sal.subesp.(I)

Lactosa (fermentación)*** -

ONPG -

SH2 +

Glucosa (fermentación)*** +/ con gas

Rojo de Metilo* +

Voges – Proskauer* -

Lisina decarboxilasa** +

Ornitina decarboxilasa** +

Arginina dehidrolasa** +

Urea (hidrólisis)** -

Malonato (utilización)* -

Citrato Simmons** +

*Lectura a los 2días

**Lectura hasta los 4 días

***Lectura hasta los 7 días

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis

Prueba bioquímica Salmonella entérica

subesp.enterica(I)Proteus mirabilis

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - +

Fenilalaninadeaminasa - +

Lisina decarboxilasa + -

Ornitina decarboxilasa + +

Lactosa (fermentación) - -

Dulcita (fermentación) + -

ONPG - -

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Salm entérica

subesp.enterica(I)Citrobacter freundii

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - d

Lisina decarboxilasa + -

Ornitina decarboxilasa + d

Lactosa (fermentación) - d

Sacarosa (fermentación) - d

Dulcita (fermentación) + d

Malonato (utilización) - d

ONPG - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Pruebas bioquímicas Salmonella entérica

subesp. enterica(I)E.Tarda E.coli SH2+

Indol - + +

Citrato Simmosns + - -

Lisina decarboxilasa + + +

Arginina dehidrolasa + - -/+

Manita (fermentación) + - +

Dulcita (fermentación) + - +/-

Ramnosa (fermentación) + - +

Xylosa (fermentación) + - +

ONPG - - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

AGAR SS

LIA de Salmonella

TSI de Salmonella

AGAR RAMBACH

S.Paratyphi A

S. Typhi

AGAR XLD

TRIBU IV: CITROBACTEREAE

Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Citrobacter spp

Movilidad +

Manitol (fermentación) +

Lisina decarboxilasa -

ONPG +

Citrato de Simmons +

Rojo de Metilo +

Voges- Proskauer -

Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:

� H2S

� Indol

� Malonato (fermentación)

� ODC

� Adonitol (fermentación)

� Melibiosa (fermentación)

� Sacarosa

� Dulcitol

En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atípicas como:

ONPG: - ( diferenciar con Salmonella)

O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres:

SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos

También hay cepas SH2:- y Citrato: -

TRIBU V: KLEBSIELLEAE

Klebsiella

GRUPO KES

Brock Biología de los Microorganismos 10ª edic.

Enterobacter aerogenes

Pantoea agglomerans

-+ Arginina dehidrolasa

+-Lisina decarboxilasa

+ +Movilidad

E. aerogenesE. cloacaePrueba bioquímica

Serratia marcescens

D-xylosa(-)

D-manosa (+)

DNAsa

(+)

(-)

-dPigmento rojo

+-Rafinosa (fermentación)

+-Melibiosa (fermentación)

+-Xilosa (fermentación)

+-Arabinosa (fermentación)

Serratia liquefaciensSerratia marcescensPrueba bioquímica

Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atípicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +,

nitrato reductasa -, mucosas y V P -

Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,

Lactosa :-

Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:-

Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar

con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-

TRIBU VI: PROTEEAE

Proteus

Test Bioquímicos Proteusa Providenciaa Morganellaa

Citrato V + -

Ferm de D- Manosa - + +

Liquefacción de gelatina 22ºC + - -

H2S en TSI + - V

Ferm myo-inositol - V -

Ornitina decarboxilasa V - (+)

Swarmming + - -

Hidrólisis de urea + V +

a reacciones dentro de las 48 hs

+: 90 – 100% de positivo

(+): 75 – 89,9% de positivo

(-) 10,1 a 25 5 de positivo

-: 0 – 10% de positivo

O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

Diferenciación entre los géneros Proteus, Providencia y Morganella

Proteus

TRIBU VII: YERSINIEAEGénero: Yersinia

+VP (22º-25ºC)

-Rammonsa (fermentación a 25ºC)

-Fenil alanita deaminasa

-Lactosa (fermentación)

+Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días)

K/A sin gas SH2 -TSI

Y.enterocoliticaPrueba bioquímica

Medios cromogénicos- BD CHROMagarOrientation Medium

Grupo KES

Grupo PMP/ Pae

E.coli

CPSID3

E.coli

VITEK

María Emilia Suárez

Bioq.Bacterióloga

El desafío de identificar correctamente Enterobacterias

María Emilia Suárez

Bioq.Bacterióloga

CARACTERÍSTICAS

• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm

• GRAM NEGATIVOS

• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS

FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES

• FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA

POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS

TAXONOMÍA

• SECCIÓN 5, 2da EDICIÓN BERGEY

• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES

• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS

• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS: HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN ADN Y ARNr 16S

Familia Enterobacteriaceae

8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas

Tribu I: ESCHERICHIEAE: Género I: Escherichia / Género II: Shigella

Tribu II: EDWARSIELLEAE : Género I: Edwarsiella

Tribu III: SALMONELLEAE: Género I : Salmonella

Tribu IV: CITROBACTEREAE : Género I : Citrobacter

Tribu V: KLEBSIELLEAE: Género I: Klebsiella / Género II: Enterobacter

Género III: Hafnia/ Género IV: Serratia

Tribu VI: PROTEEAE: Género I: Proteus / Género II: Morganella

Género III: Providencia

Tribu VII: YERSINIEAE : Género I : Yersinia

Tribu VIII: ERWINIEAE : Género I: Erwinia

PODER PATÓGENO

• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLÍNICA

• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLÍNICOS

• PATÓGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS

• PATÓGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES

Enterobacterias frecuentes con significación

clínica

Citrobacter freundii, Citrobacter koserí

Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae

Escheríchia coli

Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca

Morganella morganii

Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgarís

Salmonella entérica

Serratia marcescens

Shigella sonnei, Shigella flexneri

Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia

pseudotuberculosis

TIPIFICACIÓN

• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES BIOQUÍMICOS

• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O (SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES)

SEROGRUPOS Y SEROTIPOS

TIPIFICACIÓN

• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli

• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS

• GENOTIPIFICACIÓN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.

Antígenos de Enterobacteriaceae

K Ag

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MEDIOS COMUNES

• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES

• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTÉRICAS

• CITRATO SÓDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES(sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio)

Medios enriquecidos/ CromogénicosAgar Mac Conkey, EMB.

• MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferencialesEnriquecimiento previo

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

Oxidasa

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

1- Shigella

2- Grupo KES

3- E.coli

TSI

TRIBU I : ESCHERICHIEAE

Mac Conkey Sorbitol Mac Conkey

¿Cómo diferenciamos Shigella de E.coli ?

Pruebas E.coli Shigella

Indol + (96,3) - ó + (37,8)

Lisina decarboxilasa

D (80,6) - (0)

Ornitina decarbox.

D (57,8) - ó + (20)

Lactosa + (91,6) - (0,3)

Acetato de sodio + (83,3) - (0)

Gas de glucosa + (92) - (2,1)

Motilidad + ó – (62,1) - (0)

RM VP

Diferenciación de Shigella

E.coliShigella

LIATSI

Acetato

ONPGMIO

Clasificación Serológica

Especie Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae A 1- 12

S. flexneri B 1- 6

S. boydii C 1- 18

S. sonnei D 1

TRIBU II: EDWARDSIELLEAE

Prueba bioquímica E.tarda

Lactosa (fermentación) -

SH2

+

Indol +

Trehalosa (fermentación) -

Manitol, sacarosa (ferm) -

Arabinosa (fermentación) -/+

Malonato (utilización) -

Movilidad a 37ºC +

Habitad Hombre y animales

TRIBU III:SALMONELLEAE

GÉNERO I: SalmonellaSalmonella entérica

Salmonella bongori

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Prueba bioquímica Sal.subesp.(I)

Lactosa (fermentación)*** -

ONPG -

SH2 +

Glucosa (fermentación)*** +/ con gas

Rojo de Metilo* +

Voges – Proskauer* -

Lisina decarboxilasa** +

Ornitina decarboxilasa** +

Arginina dehidrolasa** +

Urea (hidrólisis)** -

Malonato (utilización)* -

Citrato Simmons** +

*Lectura a los 2días

**Lectura hasta los 4 días

***Lectura hasta los 7 días

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis

Prueba bioquímica Salmonella entérica

subesp.enterica(I)Proteus mirabilis

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - +

Fenilalaninadeaminasa - +

Lisina decarboxilasa + -

Ornitina decarboxilasa + +

Lactosa (fermentación) - -

Dulcita (fermentación) + -

ONPG - -

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Salm entérica

subesp.enterica(I)Citrobacter freundii

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - d

Lisina decarboxilasa + -

Ornitina decarboxilasa + d

Lactosa (fermentación) - d

Sacarosa (fermentación) - d

Dulcita (fermentación) + d

Malonato (utilización) - d

ONPG - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Pruebas bioquímicas Salmonella entérica

subesp. enterica(I)E.tarda E.coli SH2+

Indol - + +

Citrato Simmosns + - -

Lisina decarboxilasa + + +

Arginina dehidrolasa + - -/+

Manita (fermentación) + - +

Dulcita (fermentación) + - +/-

Ramnosa (fermentación) + - +

Xylosa (fermentación) + - +

ONPG - - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

AGAR SS

LIA de Salmonella

TSI de Salmonella

AGAR RAMBACH

S.Paratyphi A

ODC + LIA -

S. Typhi

ODC -LIA +

AGAR XLD

TRIBU IV: CITROBACTEREAE

Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Citrobacter spp

Movilidad +

Manitol (fermentación) +

Lisina decarboxilasa -

ONPG +

Citrato de Simmons +

Rojo de Metilo +

Voges- Proskauer -

Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:

� H2S

� Indol

� Malonato (fermentación)

� ODC

� Adonitol (fermentación)

� Melibiosa (fermentación)

� Sacarosa

� Dulcitol

En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atípicas como:

ONPG: - ( diferenciar con Salmonella)

O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres:

SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos

También hay cepas SH2:- y Citrato: -

TRIBU V: KLEBSIELLEAEGéneros: KES y Hafnia

Klebsiella

GRUPO KES

Brock Biología de los Microorganismos 10ª edic.

Enterobacter aerogenes

Pantoea agglomerans

Prueba bioquímica E. cloacae E. aerogenes

Movilidad + +

Lisina decarboxilasa - +

Arginina dehidrolasa + -

Serratia marcescens

D-xylosa(-)

D-manosa (+)

DNAsa

(+)

(-)

Prueba bioquímica Serratia marcescens Serratia liquefaciens

Arabinosa (fermentación) - +

Xilosa (fermentación) - +

Melibiosa (fermentación) - +

Rafinosa (fermentación) - +

Pigmento rojo d -

Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atípicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +,

nitrato reductasa -, mucosas y V P -

Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,

Lactosa :-

Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:-

Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar

con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-

TRIBU VI: PROTEEAEGéneros: Proteus,

Morganella y Providencia

Proteus

Test Bioquímicos Proteusa Providenciaa Morganellaa

Citrato V + -

Ferm de D- Manosa - + +

Liquefacción de gelatina 22ºC + - -

H2S en TSI + - V

Ferm myo-inositol - V -

Ornitina decarboxilasa V - (+)

Swarmming + - -

Hidrólisis de urea + V +

a reacciones dentro de las 48 hs

+: 90 – 100% de positivo

(+): 75 – 89,9% de positivo

(-) 10,1 a 25 5 de positivo

-: 0 – 10% de positivo

O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

Diferenciación entre los géneros Proteus, Providencia y Morganella

Proteus

TRIBU VII: YERSINIEAEGénero: Yersinia

Prueba bioquímica Y.enterocolitica

TSI K/A sin gas SH2 -

Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días) +

Lactosa (fermentación) -

Fenil alanita deaminasa -

Rammonsa (fermentación a 25ºC) -

VP (22º-25ºC) +

Medios cromogénicos- BD CHROMagar Orientation Medium

Grupo KES

Grupo PMP/ Pae

E.coli

CPSID3

E.coli

VITEK

María Emilia Suárez

Bioq.Bacterióloga

Para consultas y derivaciones

Laboratorio Central de la Provincia de Córdoba

Tránsito Cáceres de Allende 421- 5000 Córdoba

Te: 0351- 4342452

Biología Molecular

María Emilia Suárez

mevsuarez@yahoo.com.ar

Cel: 0351-156347704

El desafío de identificar correctamente Enterobacterias

María Emilia Suárez

Bioq.Bacterióloga

CARACTERÍSTICAS

• COCOBACILOS : 0,4-0,6 µm x 2-3 µm

• GRAM NEGATIVOS

• NO ESPORULADOS, ANAEROBIOS

FACULTATIVOS, MÓVILES O INMÓVILES

• FERMENTAN GLUCOSA, CATALASA

POSITIVOS, OXIDASA NEGATIVOS

TAXONOMÍA

• SECCIÓN 5, 2da EDICIÓN BERGEY

• 41 GÉNEROS Y CIENTOS DE ESPECIES

• CLASIFICACIÓN POR CRITERIOS BIOQUÍMICOS Y ANTIGÉNICOS

• ACTUALMENTE CRITERIOS GENÉTICOS: HIBRIDACIÓN ADN, SECUENCIACIÓN ADN Y ARNr 16S

Familia Enterobacteriaceae

8 Tribus con los correspondientes géneros en cada una de ellas

Tribu I: ESCHERICHIEAE: Género I: Escherichia / Género II: Shigella

Tribu II: EDWARSIELLEAE : Género I: Edwarsiella

Tribu III: SALMONELLEAE: Género I : Salmonella

Tribu IV: CITROBACTEREAE : Género I : Citrobacter

Tribu V: KLEBSIELLEAE: Género I: Klebsiella / Género II: Enterobacter

Género III: Hafnia/ Género IV: Serratia

Tribu VI: PROTEEAE: Género I: Proteus / Género II: Morganella

Género III: Providencia

Tribu VII: YERSINIEAE : Género I : Yersinia

Tribu VIII: ERWINIEAE : Género I: Erwinia

PODER PATÓGENO

• ALREDEDOR DE 28 ESPECIES TIENEN IMPORTANCIA CLÍNICA

• CAUSANTES DE DIVERSOS CUADROS CLÍNICOS

• PATÓGENAS VERDADERAS O PRIMARIAS

• PATÓGENAS OPORTUNISTAS O POTENCIALES

Enterobacterias frecuentes con significación

clínica

Citrobacter freundii, Citrobacter koserí

Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae

Escheríchia coli

Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca

Morganella morganii

Proteus mirabilis, Complejo Proteus vulgarís

Salmonella entérica

Serratia marcescens

Shigella sonnei, Shigella flexneri

Yersinia pestis, Yersinia enterocolitica, Yersinia

pseudotuberculosis

TIPIFICACIÓN

• BIOTIPIFICACIÓN: CARACTERES BIOQUÍMICOS

• SEROTIPIFICACIÓN: ANTÍGENOS O (SOMÁTICOS), K ó Vi (CAPSULARES) y H (FLAGELARES)

SEROGRUPOS Y SEROTIPOS

TIPIFICACIÓN

• FAGOTIPIFICACIÓN: DE VALOR EN Salmonella y E. coli

• PATRÓN DE RESISTENCIA A LOS ANTIMICROBIANOS

• GENOTIPIFICACIÓN MOLECULAR: GRUPOS CLONALES, etc.

Antígenos de Enterobacteriaceae

K Ag

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MEDIOS COMUNES

• MEDIOS SELECTIVOS/DIFERENCIALES

• INHIBEN CRECIMIENTO DE GRAM POSITIVAS Y OTRAS GRAM NEGATIVAS NO ENTÉRICAS

• CITRATO SÓDICO, EOSINA, SALES BILIARES, CRISTAL VIOLETA, etc.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

• MUESTRAS EXTRAINTESTINALES(sangre, orina, material de abscesos y heridas,tracto respiratorio)

Medios enriquecidos/ CromogénicosAgar Mac Conkey, EMB.

• MUESTRAS INTESTINALES: Selectivos- diferencialesEnriquecimiento previo

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

Oxidasa

¿Qué medios usamos y que aspecto presentan las colonias?

1- Shigella

2- Grupo KES

3- E.coli

TSI

TRIBU I : ESCHERICHIEAE

Mac Conkey Sorbitol Mac Conkey

¿Cómo diferenciamos Shigella de E.coli ?

Pruebas E.coli Shigella

Indol + (96,3) - ó + (37,8)

Lisina decarboxilasa

D (80,6) - (0)

Ornitina decarbox.

D (57,8) - ó + (20)

Lactosa + (91,6) - (0,3)

Acetato de sodio + (83,3) - (0)

Gas de glucosa + (92) - (2,1)

Motilidad + ó – (62,1) - (0)

RM VP

Diferenciación de Shigella

E.coliShigella

LIATSI

Acetato

ONPGMIO

Clasificación Serológica

Especie Serogrupo Serotipo

S. dysenteriae A 1- 12

S. flexneri B 1- 6

S. boydii C 1- 18

S. sonnei D 1

TRIBU II: EDWARDSIELLEAE

Prueba bioquímica E.tarda

Lactosa (fermentación) -

SH2

+

Indol +

Trehalosa (fermentación) -

Manitol, sacarosa (ferm) -

Arabinosa (fermentación) -/+

Malonato (utilización) -

Movilidad a 37ºC +

Habitad Hombre y animales

TRIBU III:SALMONELLEAE

GÉNERO I: SalmonellaSalmonella entérica

Salmonella bongori

Salmonella enterica subesp. enterica (I)

Prueba bioquímica Sal.subesp.(I)

Lactosa (fermentación)*** -

ONPG -

SH2 +

Glucosa (fermentación)*** +/ con gas

Rojo de Metilo* +

Voges – Proskauer* -

Lisina decarboxilasa** +

Ornitina decarboxilasa** +

Arginina dehidrolasa** +

Urea (hidrólisis)** -

Malonato (utilización)* -

Citrato Simmons** +

*Lectura a los 2días

**Lectura hasta los 4 días

***Lectura hasta los 7 días

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Proteus mirabilis

Prueba bioquímica Salmonella entérica

subesp.enterica(I)Proteus mirabilis

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - +

Fenilalaninadeaminasa - +

Lisina decarboxilasa + -

Ornitina decarboxilasa + +

Lactosa (fermentación) - -

Dulcita (fermentación) + -

ONPG - -

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella subesp.enterica (I) y Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Salm entérica

subesp.enterica(I)Citrobacter freundii

SH2 + +

Urea (hidrólisis) - d

Lisina decarboxilasa + -

Ornitina decarboxilasa + d

Lactosa (fermentación) - d

Sacarosa (fermentación) - d

Dulcita (fermentación) + d

Malonato (utilización) - d

ONPG - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Pruebas bioquímicas Salmonella entérica

subesp. enterica(I)E.tarda E.coli SH2+

Indol - + +

Citrato Simmosns + - -

Lisina decarboxilasa + + +

Arginina dehidrolasa + - -/+

Manita (fermentación) + - +

Dulcita (fermentación) + - +/-

Ramnosa (fermentación) + - +

Xylosa (fermentación) + - +

ONPG - - +

+ 90% o más de los resultados positivos, - 90% o más de los resultados negativos, d: diferentes reacciones

Servicio Enterobacterias. ANLIS.INEI. Carlos G.Malbrán 2008

Diferencias entre Salmonella enterica subesp.enterica (I), Edwarsiella tarda y Escherichia coli SH2 +

AGAR SS

LIA de Salmonella

TSI de Salmonella

AGAR RAMBACH

S.Paratyphi A

ODC + LIA -

S. Typhi

ODC -LIA +

AGAR XLD

TRIBU IV: CITROBACTEREAE

Citrobacter freundii

Prueba bioquímica Citrobacter spp

Movilidad +

Manitol (fermentación) +

Lisina decarboxilasa -

ONPG +

Citrato de Simmons +

Rojo de Metilo +

Voges- Proskauer -

Para diferenciar especies, recurrir a las siguientes pruebas:

� H2S

� Indol

� Malonato (fermentación)

� ODC

� Adonitol (fermentación)

� Melibiosa (fermentación)

� Sacarosa

� Dulcitol

En cepas de Citrobacter freundii pueden ocurrir reacciones atípicas como:

ONPG: - ( diferenciar con Salmonella)

O clasificadas como S. arizonae por compartir los siguientes caracteres:

SH2 +/ ONPG +/ y un perfil de H de carbono muy parecidos

También hay cepas SH2:- y Citrato: -

TRIBU V: KLEBSIELLEAEGéneros: KES y Hafnia

Klebsiella

GRUPO KES

Brock Biología de los Microorganismos 10ª edic.

Enterobacter aerogenes

Pantoea agglomerans

Prueba bioquímica E. cloacae E. aerogenes

Movilidad + +

Lisina decarboxilasa - +

Arginina dehidrolasa + -

Serratia marcescens

D-xylosa(-)

D-manosa (+)

DNAsa

(+)

(-)

Prueba bioquímica Serratia marcescens Serratia liquefaciens

Arabinosa (fermentación) - +

Xilosa (fermentación) - +

Melibiosa (fermentación) - +

Rafinosa (fermentación) - +

Pigmento rojo d -

Se han descripto cepas de S.marcescens excepcionalmente atípicas: lactosa +,o lactosa y rafinosa +,

nitrato reductasa -, mucosas y V P -

Hafnia alvei

ONPG:+, Movilidad:- (37ºC) y +(22ºC), Lisina decarboxilasa:+, ODC:+,ADH:-,

Lactosa :-

Hay cepas ONPG:- se pueden confundir con Salmonella: Citrato:-, SH2:-

Cepas Urea+ (5%) se pueden confundir con Yersinia enteroclotica: diferenciar

con LIA:+, Sorbitol:-, Sacarosa:-

TRIBU VI: PROTEEAEGéneros: Proteus,

Morganella y Providencia

Proteus

Test Bioquímicos Proteusa Providenciaa Morganellaa

Citrato V + -

Ferm de D- Manosa - + +

Liquefacción de gelatina 22ºC + - -

H2S en TSI + - V

Ferm myo-inositol - V -

Ornitina decarboxilasa V - (+)

Swarmming + - -

Hidrólisis de urea + V +

a reacciones dentro de las 48 hs

+: 90 – 100% de positivo

(+): 75 – 89,9% de positivo

(-) 10,1 a 25 5 de positivo

-: 0 – 10% de positivo

O’Hara y col Clin Microb Rev.2004.534-546

Diferenciación entre los géneros Proteus, Providencia y Morganella

Proteus

TRIBU VII: YERSINIEAEGénero: Yersinia

Prueba bioquímica Y.enterocolitica

TSI K/A sin gas SH2 -

Urea (hidrólisis a 35ºC,1-4 días) +

Lactosa (fermentación) -

Fenil alanita deaminasa -

Rammonsa (fermentación a 25ºC) -

VP (22º-25ºC) +

Medios cromogénicos- BD CHROMagar Orientation Medium

Grupo KES

Grupo PMP/ Pae

E.coli

CPSID3

E.coli

VITEK

María Emilia Suárez

Bioq.Bacterióloga

Para consultas y derivaciones

Laboratorio Central de la Provincia de Córdoba

Tránsito Cáceres de Allende 421- 5000 Córdoba

Te: 0351- 4342452

Biología Molecular

María Emilia Suárez

mevsuarez@yahoo.com.ar

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