efecte de les nanopartícules cisplatí i doxorrubicina en cèl·lules tumorals

Efecte de les nanopartícules cisplatí

i doxorrubicina en cèl·lules tumoralsAida Giol Castro, Ignasi Solé Clua, Manel Queral Martínez

Tutors: Julia Lorenzo i Javier García

IBB: Departament d’enginyeria de proteïnes i proteòmica

Programa Argó 2016

1. Introducció 2. Cèl·lules Hela 3. Preparació de portaobjectes per comprovar la

internalització de NPs en cèl·lules Hela 4. Observació de la incorporació de les NPs en microscopi

confocal 5. Proves de citotoxicitat en NPs amb cisplatí i/o doxorrubicina

◦ 5.1 Gràfiques IC50

Sumari

Càncer: Conjunt de patologies relacionades amb la divisió descontrolada de cèl·lules d’un teixit.

Tumor: Massa amorfa de cèl·lules , símptoma del càncer.◦ Benigne◦ Maligne (Metàstasi)

1. Introducció

Una nanopartícula càpsula amb fàrmacs a l’interior d’un tamany que oscil·la entre 80-120nm de diàmetre.

Ddiàmetre més gran que les partícules de fàrmac + elevadaelectronegativitat Aconsegueix superar les defenses i els filtres delcos

NPs contra el càncer

Venes i capil·lars defectuosos en un tumors Coàguls, major concentració de NPs en cèl·lules cancerígenes (menys danys a les cèl·lules no tumorals)

Cisplatí i doxorrubicina fàrmacs per combatre les cèl·lules tumorals.

Objectiu Veure si encapsulant aquests fàrmacs, s’augmenta l’eficiència en vers els fàrmacs lliures.

Pt

O

O

NH3Cl

NH3Cl

OOH

O

O

O

HO

DoxorrubicinaCisplatí

2. Cèl·lules Hela Cèl·lules de cultiu cel·lular utilitzades en investigació científica

Pertanyen a Henrietta Lacks (HeLa) pacient de càncer cèrvix-uterí

Línia de cèl·lules tumorals molt duradora i prolífera

3. Preparació de portaobjectes per comprovar la incorporació de NPs en

cèl·lules Hela

Nivell 2 de seguretat biològica

Bany tèrmic 37ºC Netejar en PBS i tripsinitzar Centrifugar a 1400 rpm

Preparar les càpsules de Petri

amb cobreobjectes

1,5 ml dissolució / càpsula

Tota la nit incubadora 20 μl NPs doxo+cis 2 plaquetes 1 plaqueta control

2 h incubadora

Aspirar medi Posem 1ml PBS, agitem i

aspirem

Posem 500 μl metanol/càpsula fixar les cèl·lules al cobreobjectes

15min. congeladorTraiem metanol

Posem 0,5ml PBS Dissolució 1:500 Dapi+PBS (1,5 ml

total)

Aspirem PBS i afegim 0,5ml

dissolució Dapi+PBS

15min. agitador Traiem Dapi+PBS, netejem amb PBS i ho aspirem

Posar els cobreobjectes del fons de les plaquetes en un portaobjectes

MICROSCOPI DE FLUORESCÈNCIA

CPPs Cis Doxo 6,58 μg/ml

4. Observació de la incorporació de les NPs en microscopi confocal

• NPs cis (50 μg/ml)

•NPs cis + doxo (50μg/ml)

(10 μg/ml)

3h incubadora

Raigs ultraviolats esterilitzar

Posar el marcador Hoescht

MICROSCOPI CONFOCAL

CPPs Cis Doxo 10 μg/ml

NPs Cis Doxo 50 μg/ml

CNT

CNT

5. Proves de citotoxicitat en NPs de doxorrubicina i cisplatí

Cèl·lules sobrants del dia anterior

Netejar en PBS i tripsinitzar Centrifugar a

1400 rpmPreparem una dissolució 1:13

Pipeta multicanal sembrem

les cèl·lules

96 pouets (200μl)60medi+cèl·lules+fàrmac

36 medi

CisplatíCNT150 μg/ml24 h

Doxorrubicina0,5 μg/ml 30 μg/ml

Doxorrubicina0,5 μg/ml 30 μg/ml

NPs Cisplatí125 μg/ml 250 μg/ml

NPs Cisplatí + Doxorrubicina0,5 μg/ml 125 μg/ml

Neuroblastoma cells

0 1 11 27 54 108

188

269

538

0

20

40

60

80

100

120

DOXO-CPPs Concentration (Pt M)

Cell

viab

ility

(%)

Neuroblastoma cells

0 1 11 27 54 108

188

269

538

0

20

40

60

80

100

120

PtIV Concentration (Pt M)

Cel

l via

bilit

y (%

)

IC50 > 500 µM IC50 ~ 7 µM Pt- 175 ng/ml Doxo

5.1 Gràfiques IC50

Gràcies per la vostra atenció