diagnÓstico virolÓgico · 2020. 8. 11. · diagnostico de hiv en el recién nacido. diagnÓstico...
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DIAGNÓSTICO VIROLÓGICO
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¿Para qué sirve el diagnóstico virológico?
Define una intervención terapéutica
Orienta un pronóstico
Monitorea la respuesta a la terapéutica
Vigilancia epidemiológica
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Diagnóstico de Certeza:Estudio Virológico
Clínica:Signos y síntomas
Epidemiología:TiempoLugar
Persona
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Métodos directos vs. indirectos
Métodos Procedimiento/Técnica Detección de:
Directos 1) Aislamiento en: Huevos embrionados, animales o cultivos celulares
Lesiones y/o muerteAcción citopática directa (ACP)
2) Identificación del virus (aislado o no) mediante:Inmunomarcación (IF, IP, ELISA), neutralización, FC, IHA, etc.Microscopía electrónicaHibridación, PCR, PCR en tiempo real, RFLP, secuenciación nucleotídica
Antígenos virales
Partículas viralesGenomas virales
Indirectos NeutralizaciónELISA, IFI, FC, IHA, etc.ELISA, IFI
Anticuerpos específicos:- Conversión serológica en
dos muestras pareadas- IgM específica: en muestra
única de período agudo o convalescencia temprana
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Métodos de diagnóstico virológico
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Obtención de las muestras
• Es necesario conocer la patogenia de cadainfección viral, las características del virus y elestadio de la enfermedad.
• Tener en cuenta normas de bioseguridad:guantes, barbijo, antiparras, camisolín, usarrecipiente estéril con tapa hermética.
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Tipos de muestras
• Hisopados Nasales, faríngeos, aspirados nasofaríngeos, lavados bronquialveolares, etc.
• Hisopados de la base de las vesículas o fluido de las vesículas (lesiones de piel y mucosas).
• Sangre y suero• Orina• Materia fecal e hisopados rectales• Hisopado o biopsias de cérvix• Hisopado conjuntival o corneal• LCR• Biopsias de tejidos
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Conservación y transporte• Siempre bajo normas de bioseguridad!!
• Muestras para aislamiento viral: Enviadasinmediatamente a 4°C. Las muestras de secrecionescutáneo-mucosas se deben colocar en medio detransporte Hanks.
• Muestras para diagnóstico rápido: Es recomendablela conservación y transporte a 4°C aunque no esestricto.
• Muestras para estudios serológicos: A 4°C por 1-2días y luego a -20 o -70°C.
• Muestras para estudios de biología molecular:Especial cuidado para virus con genoma de ARN ypara evitar falsos positivos o negativos.
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Métodos indirectos
El fundamento del método consiste en demostrar en el suerodel paciente, la presencia de anticuerpos específicosantivirales inducidos por la infección.
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• Infección pasada:
Diagnóstico del estado inmune
• Infección reciente:
Conversión serológica
IgM específica
Métodos indirectos
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CONVERSIÓN SEROLÓGICA
Se define como la aparición de anticuerpos específicos contra un virus, o el aumentode su título en cuatro o más veces en dos muestras pareadas de suero, la primeraobtenida durante el período agudo (suero de fase aguda) y la segunda en laconvalecencia a los 14-21 días de la primera.
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Técnicas de diagnóstico serológico
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AGLUTINACIÓN DE PARTÍCULAS
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NEUTRALIZACIÓN
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FIJACIÓN DEL COMPLEMENTO
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RIBA
WESTERN BLOTPRUEBAS
CONFIRMATORIAS
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Métodos directos
Se denominan métodos directos de diagnóstico virológico a aquellos que detectan la presencia de un virus ( o alguno de sus componentes) en muestras clínicas.
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Acción Citopática (ACP)
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HISTOPATOLOGÍA
RABIACORPÚSCULO DE NEGRI
HPVCOILOCITOS
CMVOJO DE BUHO
SARAMPIÓNSINCICIO
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HISTOPATOLOGÍA
DEL HSV
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Aislamiento viral + Identificación
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Aislamiento viral + Identificación
Para la identificación se puede utilizar:
1) hemadsorción,
2) hemaglutinación,
3) neutralización o
4) interferencia
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Hemadsorción
• Para mixovirus y paramixovirus.
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Interferencia
• Para Rubéola
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Hemaglutinación
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Neutralización
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Detección de antígenos virales
INMUNOFLUORESCENCIA
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ELISA Y RIA
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Inmunoperoxidasa
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Partículas virales
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Genomas virales
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Detección de ácidos nucleicos
Con hibridación
Con amplificación
Southern blot
Northern blot
NASBA, b-DNA
FISH
Microarray
PCR
LCR
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Caracterización de los ácidos
nucleicos
Secuenciación
RFLP
EMSA
Footprinting
Fingerprinting
SSCP
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PCR PARA DETECCIÓN DEL GENOMA VIRAL
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RFLP PARA GENOTIPIFICACIÓN DE HBV
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FILOGENIA PARA GENOTIPIFICACION
DE HCV
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REAL TIME PARA DETERMINAR CARGA VIRAL
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DIAGNÓSTICO DE HIV
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DIAGNÓSTICO DE HIV
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Diagnóstico de HIV
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Diagnostico de HIV en el recién nacido
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DIAGNÓSTICO DE HBV
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DIAGNÓSTICO DE HCV
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DIAGNÓSTICO DE EBV
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