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Club de Inmunohistoquímica y Biología Molecular

Mª Dolores Lozano Escario Clínica Universidad de Navarra.

Pamplona.

“Cuando me invitan a dar charlas un poco filosóficas pienso que mi vida profesional está acabada “

Dr. JR Valentí. Especialista en Traumatología y Cirugía Ortopédica. Clínica Universidad de Navarra.

Marzo 1993- Abril 1995

Abril-Mayo 1995

Junio 1995…………………………………………. Departamento de Anatomía Patológica Clínica universidad de Navarra. Pamplona.

HPV en citología ginecológica…….

Desarrollo de la PAAF Técnicas de punción con TAC, ecoendoscopia, broncoscopia, EBUS Bloques celulares, biopsias pequeñas.

Rudolf Virchow (1821-1902)

Teoría general de la enfermedad basada en tres principios:

•Principio de la localización: no hay "enfermedades generales", todo proceso morboso se halla anatómicamente localizado.

•Principio de la lesión celular: si se quiere conocer lo que en la enfermedad es verdaderamente fundamental hay que recurrir al estudio de la célula.

•Principio del peligro: La vida de la célula enferma lleva en sí una cierta idea de "peligro", y esto es lo que básicamente distingue a la enfermedad de la salud en cuanto modos de vida.

Teoría celular:la célula es la unidad elemental de la estructura y formación de todos los seres vivos. Toda célula procede de otra célula

La Anatomía Patológica Humana (AP) es la rama de la Medicina que se ocupa del estudio, por medio de técnicas morfológicas, de las causas, desarrollo y consecuencias de las enfermedades.

El fin último es el diagnóstico correcto de biopsias, piezas quirúrgicas, citologías y autopsias. La Anatomía Patológica es una especialidad médica que posee un cuerpo doctrinal de carácter básico que hace que sea, por una parte, una disciplina académica autónoma y, por otra, una unidad funcional en la asistencia médica.

Completo, de calidad y reproducible

Patología: Estudio (logos) del sufrimiento (pathos)

Ciencia Básica Práctica Clínica

Estudio de cambios estructurales y funcionales en células, tejidos y órganos que subyacen la enfermedad

Técnicas: morfológicas

inmunológicas

microbiológicas

moleculares

Dimensión Asistencial

Investigación Aplicada

11 mm

Desarrollo de lineas celulares

Inmunocitoquímica

FISH

Técnicas complementarias en patología

Estudios moleculares

INTRODUCCIÓN

Tumores morfológicamente iguales

Alteraciones moleculares “diana” diferentes

Necesidad de información molecular

•Desarrollo de técnicas reproducibles para estandarizar las guías terapeúticas

•Diagnóstico AP completo

•Calidad de las muestras diagnósticas

ALK fusion

54-yr-old male never-smoker,

adenoca

Interpatient Heterogeneity in the Molecular Characteristics of NSCLC

Patients With the Same Diagnosis and Clinical Features (Stage IV NSCLC)

In 2012:

Most oncologists would agree that these patients have very different malignancies

Most oncologists would agree that these patients should receive different therapy

39-yr-old female

never-smoker, adenoca

EGFR Mt

65-yr-old male smoker,

squamous

KRAS Mt

Demanda de diagnósticos “precoces”, certeros, rápidos y mediante métodos mínimamente invasivos

Biopsias PAAF

Pacientes metastásicos

Desarrollo de las técnicas de imagen

• provide accurate diagnosis • manage the tissue in a way that immunohistochemical and/or molecular studies can be performed •use and integration of immunohistochemical (i.e. TTF-1/p63), histochemical (i.e. mucin stain), and molecular studies

Enero 2008- Enero 2012. CUN-Departamento de Anatomía Patológica

590 CPNM 441 citología (PAAF); 36 con Bx

149 biopsia / resección; 32 con PAAF previa

Líneas

celulares

Immunocitoquímica FISH

Técnicas complementarias en muestras citológicas y biopsias pequeñas

Estudio mutacional

Estudio Molecular

Citometría

de flujo

CD20

Immunocitoquímica

BCL-2

SAMPLE PROCUREMENT IN PATIENTS WITH SUSPECTED METASTATIC MELANOMA

•FINE NEEDLE ASPIRATION

•Direct FNA

•EUS guided FNA

•Bronchoscopy guided FNA

•SURGICAL SPECIMEN IMPRINTS

•EYE IMPRINTS

CYTOLOGICAL DIAGNOSIS BY PATHOLOGIST

• ACCURATE DIAGNOSIS

• IHQ (Melan A, S100, HMB45)

• Select smear for molecular testing containing more than 40% tumour cells.

DNA EXTRACTION

PCR AMPLIFICATION DIRECT SEQUENCING

• Exon 15 of BRAF gene

• Exons 9,11,13 and 17 of c-Kit gene

S-100

Melan A

FINAL REPORT

V600E mutation in BRAF gene L576P mutation in c-Kit gene

Varon 76 años, fumador 80 paq/año Citologia esputo “positiva para ca. Escamoso” Masas pulmonares bilaterales, adenopatías mediastínicas Mts. Hepáticas, óseas, pleurales y cerebrales PAAF con broncoscopio de adenopatías hiliares

2011C1865

2011C1865

TTF-1

p63

Del E746-S752 Exón 19

Del E746-S752 Exón 19

Respuesta parcial a los 6 meses del incio de TKIs

•Mujer 72 años, no fumadora

•Enfermedad diseminada

(origen desconocido)

•Metástasis cerebrales

•Se le había ofrecido

únicamente tratamiento

paliativo

TTF-1

CK-7

PAAF directa de un nódulo supraclavicular

Ac metastásico de probable origen pulmonar

del L747-E749, A750P Exon 19

Tratamiento con TKI (Tarceva)

“...los nuevos test moleculares no son una amenaza para los patólogos, sino una oportunidad para incorporar las nuevas tecnologías y desarrollarlas. Los citopatólogos juegan un papel primordial puesto que se les pide hacer más con menos muestra.....” Naylor and Ramzy, 2003

a todos ! gracias Muchas