clase 18 - tejido nervioso

TEJIDO

NERVIOSO UV 2012

El tejido nervioso es un tejido de origen ectodérmico, formado por

corpúsculos bien diferenciados,

de naturaleza estrellada con numerosas prolongaciones,

una mas larga que las demás, y tienen por objeto

establecer relación dinámica con otros elementos

de su misma naturaleza o de tejidos subordinados. (Cajal).

Tipos de muestra

Biopsia cerebral o medular de carácter

diagnóstico

Fragmentos tumorales de resección

neuroquirúrgica

Material de necropsia (cerebro y medula

espinal)

Resecciones transesfenoidales de lesiones

hipofisiarias (sistema neuroendocrino)

•Debe ser retirado lo mas rápido posible

•Colocar en abundante fijador

•Cubrir con gasa para manipular

•Hacer cortes con cuchillo muy afilado

FIJADORES

Formol buffer

Formol salino (NaCl)

Formol-bromuro de amonio

Liquido de Müller (liquido de Orth)

Acido osmico

Fijadores a base de hipnóticos:

Hidrato de cloral

Veronal

MÉTODOS

Cortes en parafina

Cortes por congelación previa fijación

Tinción en bloque

Técnicas Histológicas

para SN

SNC ENCEFALITIS Y MENINGITIS TUBERCULOSA:

ZIEHL-NEELSEN

AMILOIDE: ROJO CONGO

MEORRAGIAS ANTIGUAS: HEMOSIDERINA MEDIANTE REACCION DE PERLS

DEPOSITO DE CALCIO CONSECUENCIA DE CUADORS INFECCIOSOS VIRALES: VON KOSSA

ENFERMEDADES DESMIELINIZANTES: ESCLEROSIS MULTIPLE: TECNICAS PARA LA MIELINA

SNC

ENFERMEDADES DESMIELINIZANTES:

ESCLEROSIS MULTIPLE: TECNICAS PARA LA

MIELINA

SNP

DEGENERACION WALLERIANA DEL AXON:

KLUVER-BARRERA

IDENTIFICACION

COLORACION

1. Coloración para neuronas y cuerpos de

Nissl

2. Coloración para glías

3. Coloración para vainas de mielina

IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA

Corteza cerebelo H - E

1.- Técnica de Nissl

Para neuronas y cuerpos de Nissl: se debe

usar colorantes básicos de anilina que se

unen a los ácidos nucleicos, se precisa un

pH acido, se diferencia con alcohol

etílico se fija la coloración con molibdato

de amonio

Corteza cerebelosa con técnica de Nissl

1.- Técnica del azul de

toluidina

Tanto para el cuerpo neuronal como

para la identificación de sustancia de

Nissl, dan buenos resultados: azul de

metileno, azul de toluidina, tionina, violeta

de cresilo y galocianina

Se deben usar en soluciones tamponadas

Corteza cerebelo

Células piramidales

Azul de metileno

Tejido nervioso en corte semi-fino para M-E, teñido con azul de toluidina

(Profesor Eduardo Couve

Microscopía electrónica

Universidad de Valparaíso)

2.- Glías

PAGF: IHQ (astrocitos fibrosos)

Se conservan: Técnica de Holzer derivado de la parafucsina)

Utiliza violeta de cristal como colorante

Mordentar con acido fosfomolíbdico

Diferenciar con aceite de anilina

Entrega excelentes resultados en solución alcohol-cloroformo

Impregnaciones argénticas

3.- Vaina de mielina: método

de Kluver-Barrera 1º.- Desparafinar e hidratar hasta alcohol de 96ºC.. 2º.- Solución de azul luxol en estufa (37ºC o 60ºC) de 12 a 20 horas.

3º.- Extraer el exceso de colorante con alcohol de 96ºC, 5-10 seg. 4º.- Diferenciar con solución de carbonato de litio, 5-10 seg. 5º.- Pasar varias veces por alcohol de 70ºC bajo control microscópico

hasta que se diferencien bien sustancia blanca y sustancia gris. 6º.- Lavar en AD 7º.- Teñir con solución de violeta de Cresilo 6 minutos como mínimo.

(Nota: antes de usar esta solución se le añaden 15 gotas de acacético,

se filtra y se calienta a 60ºC. 8º.- Diferenciar en alcohol de 96ºC. 9º.- Deshidratar aclarar y montar.

RESULTADOS

Núcleos y grumos de Nissl color rojo-violeta. Vainas de mielina azul oscuro

MÉTODO DE KLUVER-BARRERA PARA

NÚCLEOS, GRUMOS DE NISSL Y

VAINAS DE MIELINA

Depto. Ciencias Biológicas y Reproductivas

Universidad de Valparaíso

IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA

Aplicadas al sistema nervioso tienen un

fundamento empírico, con gran numero

de modificaciones

Dependen del órgano del SN que se

quiera identificar

Preferentemente incluir en celoidina

Cortes entre 10 y 14 µm.

Método de Bielschowsky Impregna células

nerviosas y sus prolongaciones

Utiliza: Nitrato de plata

Nitrato de plata amoniacal (tonalidad marrón)

Formol Agua destilada -

cloruro de Au- Tiosulfato de sodio

NEURONAS

Golgi

Tiene dos métodos:

Impregnación negra: (ML/MR)

Fija con liquido de Müller (sublimado)

Impregnar con nitrato de plata

Coloración gris:

Bicloruro de mercurio

NEURONAS

Golgi 1º.- Piezas muy frescas de menos dc 3 mm. dc espesor.

Se fijan en 250ml. de la Solución de Kopsch-formol-bicromato por 24 horas. 2º.- Pasar las piezas a la Solución de bicromato de potasa al 3,5% por 2-6 días. 3º.- Pasar las piezas a un baño con Solución de nitrato de plata,

se forma un precipitado rojizo inmediatamente,

y se pasa a otro baño de la misma, donde permanecerá de 24 a 36 horas. 4º.- Corte por congelación 75-100 micras. 5º.- Deshidratación prolongada: alcohol de 96% - 15 min.

Alcohol absoluto 3 pases de 10 min. cada uno. 6º.- Aclarar con carboxilol-creosota 2 veces de 15 min.

xilol 3 veces de 10 min. cada una y montar con abundante bálsamo.

RISULTADOS

Somas neuronales, dendritas, espinas dendríticas,

vasos y ocasional mente elementos gliales, en negro sobre fondo amarillo

NEURONAS

Técnica de plata de Golgi

NEURONAS

Nitrato de plata de Cajal 1º.- Fijación de bloques de 2 mm. de espesor

( médula o cerebro de animal adulto en formol al 10%, de 3 a 15 días. 2º.- Retallar los bloques y sumergirlos en la solución de piridina,------ 2 días. 3º,- Lavar en agua corriente ----------------------------------------------------12 horas. 4º.- Inmersión en formol al 10% ------------------------------------------------hasta su corte. 5º.- Corte por congelación (20-30 micras). 6º.- Lavar en agua destilada (AD). 7º.- Introducir en solución de nitrato de plata, más unas gotas de piridina hasta

que los cortes tomen color amarillo.

En frío (2-4 horas). En caliente (unos minutos). 8º.- Reducción en la solución formol-hidroquinona--------------------------3 min 9º.- Lavar en abundante AD 10º.- Deshidratas, aclarar y montar.

Las terminaciones axónicas se tiñen en negro sobre fondo claro.

NEURONAS

MÉTODO DE NITRATO DE PLATA DE CAJAL,

PARA TERMINACIONES NERVIOSAS

NEURONAS

Sublimado de oro de Cajal

para astrocitos Piezas frescas de cerebro de mamífero se fijan de 2 a 15 días

en Solución de formol-bromuro. Corte por congelación . 30-40 micras Lavado breve en AD Baño en Solución de cloruro de oro en una placa de Petri .

Sumergir en ella 4-6 cortes, extendidos en el fondo y sin contactar unos con otros.

La temperatura debe ser 24-26ºC, el tiempo 4-6 horas y en la oscuridad.

Lavado rápido en AD Fijación en Solución Fijadora.-------5-10 min.

Lavado en alcohol de 70ºC. Extensión sobre el porta y secado con papel de filtro. Deshidratar, aclarar con esencia de orégano y xilol, y montar. RESULTADOS Astrocitos de color rojo púrpura. Neuronas en rosa pálido o

violeta.

NEUROGLÍAS

NEUROGLÍAS

MÉTODO DEL CARBONATO DE PLATA DE RÍO-HORTEGA

PARA MICROGLÍA

NEUROGLÍAS

MÉTODO DE GOLGI-HORTEGA,

PARA OLIGODENDROGLIA

NEUROGLÍAS

Neuronas y neuroglia con impregnación argéntica

Nervios periféricos Los nervios

periféricos son haces de fibras nerviosas (axones) rodeados por varias hojas de revestimiento que corresponden a tejido conectivo. Estos haces también se conocen como fascículos

epineuro

Nervios periféricos

NERVIOS PERIFÉRICOS

ENDONEURO

PERINEURO

EPINEURO

Técnica H - E

Nervio

Epineuro

NERVIOS PERIFÉRICOS

Mielina

Se combina con el

tetróxido de osmio

contenida en solución

de acido osmico

Se realiza en cortes por

congelación de 10 a

20µm de grosor

INMUNOFLUORESCENCIA