TEJIDO TEJIDO

NERVIOSO

UV 2013ALONDRA DONOSO

JIMENA LE ROY

El tejido nervioso es un tejido de origen ectodrmicoorigen ectodrmicoorigen ectodrmicoorigen ectodrmico,

formado por corpsculos bien diferenciados,

de naturaleza estrelladanaturaleza estrelladanaturaleza estrelladanaturaleza estrellada con numerosas

prolongaciones, una mas larga que las dems, prolongaciones, una mas larga que las dems,

y tienen por objeto establecer relacin dinmicarelacin dinmicarelacin dinmicarelacin dinmica

con otros elementosde su misma naturaleza

o de tejidos subordinados. (Cajal).

Tipos de muestra

Biopsia cerebral o medular de carcter diagnstico

Fragmentos tumorales de reseccin neuroquirrgicaneuroquirrgica

Material de necropsia (cerebro y medula espinal)

Resecciones transesfenoidales de lesiones hipofisiarias (sistema neuroendocrino)

MTODOS

Cortes en parafina

Cortes por congelacin previa fijacin

Tincin en bloque

Debe ser retirado lo mas rpido posible

Colocar en abundante fijador

Cubrir con gasa para manipularCubrir con gasa para manipular

Hacer cortes con cuchillo muy afilado

FIJADORES

Formol buffer

Formol salino (NaCl)

Formol-bromuro de amonio

Liquido de Mller (lquido de Orth) Liquido de Mller (lquido de Orth)

Acido smico

Fijadores a base de hipnticos: Hidrato de cloral

Veronal

IDENTIFICACIN

COLORACIN

1. Coloracin para neuronas y cuerpos de Nissl

2. Coloracin para glas

3. Coloracin para vainas de mielina3. Coloracin para vainas de mielina

IMPREGNACIN ARGNTICA

Patologas en SNC

ENCEFALITIS Y MENINGITIS TUBERCULOSA: ZIEHL-NEELSEN

AMILOIDE: ROJO CONGO

MEORRAGIAS ANTIGUAS: HEMOSIDERINA MEDIANTE REACCION DE PERLS

MEORRAGIAS ANTIGUAS: HEMOSIDERINA MEDIANTE REACCION DE PERLS

DEPOSITO DE CALCIO CONSECUENCIA DE CUADORS INFECCIOSOS VIRALES: VON KOSSA

ENFERMEDADES DESMIELINIZANTES: ESCLEROSIS MULTIPLE: TECNICAS PARA LA MIELINA

Cuerpos neuronales y sustancia de NisslColorantes :azul de metileno, azul de toluidina, tionina, violeta de cresilo galocianina

Cuerpos neuronales y prolongacionesMtodo de Golgi para somas y prolongaciones nerviosas. Mtodo de Kluver-Barrera para ncleos, grumos de Nissl y vainas de mielina. Mtodo del nitrato de plata de Cajal para terminaciones axnicas.

RESUMEN DE ALGUNAS TCNICAS PARA TEJIDO NERVIOSO

Mtodo del nitrato de plata de Cajal para terminaciones axnicas. Mtodo de Bielschowsky cilindros ejes y dendritas

Neuroglas:

Mtodo del sublimado de oro de Cajal para astrogla. Mtodo del carbonato de plata de Rio-Hortega para microglia.Mtodo de Golgi-Hortega para oligodendroglia.Tcnica de Holzer para astrogla

Sistema nervioso perifricoTerxido de osmio vainas de mielinaAzul de toluidina vainas de mielina y cuerpos neuronalesIdentificacin enzimtica Acetilcolina esterasa.

TCNICAS HISTOLGICAS TCNICAS HISTOLGICAS TCNICAS HISTOLGICAS TCNICAS HISTOLGICAS PARA SN PARA SN PARA SN PARA SN

Corteza cerebelo H - E

1.- Tcnica de Nissl

Para neuronas y cuerpos de Nissl:

usa colorantes bsicos de anilina que se unen a los cidos nucleicos,unen a los cidos nucleicos,

se precisa un pH cido, se diferencia con alcohol etlico

se fija la coloracin con molibdato de amonio

medicina-uba.blogspot.com/2009/05/tecnicas-de-tincion-del-sistema.html

www.wesapiens.org/es/.

Sustancia gris mdula espinal

Tcnica de Nissl

Corteza cerebelosa

con tcnica de Nissl

Tcnica del azul de toluidina

Tanto para el cuerpo neuronal como para la identificacin de sustancia de Nissl:

Dan buenos resultados adems:

azul de metileno,azul de metileno,

azul de toluidina, tionina,

violeta de cresilo y galocianina

Se recomienda usar en soluciones tamponadas

Corteza cerebelo Clulas piramidalesAzul de metileno

Conducto del epndimo H-E

TCNICAS TCNICAS TCNICAS TCNICAS NEUROHISTOLGICASNEUROHISTOLGICASNEUROHISTOLGICASNEUROHISTOLGICAS

l Neuronas y elementos l Neuronas y elementos l Neuronas y elementos l Neuronas y elementos

-Mtodo de Golgi para somas y prolongaciones nerviosas.

- Mtodo de Kluver-Barrera para ncleos, grumos de Nissl y vainas de mielina.

- Mtodo del nitrato de plata de Cajal para terminaciones axnicas.

3. IMPREGNACINES ARGNTICAS

Aplicadas al sistema nervioso tienen un fundamento emprico, con gran nmero de modificaciones

Dependen del rgano del SN que se quiera Dependen del rgano del SN que se quiera identificar

Preferentemente incluir en celoidina

Cortes entre 10 y 14 m.

Santiago Ramon y Cajal(1853-1934)

Camillo Golgi(1843-1926)

Les neurones forment un rseau Les neurones ne sont pas lis

Prix Nobel conjoint de science de 1906Prix Nobel conjoint de science de 1906

Les neurones forment un rseau continu; leurs membranes sont lies (ils partagent le mme cytoplasme) : thorie rticulariste

Les neurones ne sont pas lis physiquement les uns aux autres; ce sont des cellules indpendantes : thorie neuroniste

MTODO DE NITRATO DE PLATA DE CAJAL,PARA TERMINACIONES NERVIOSAS

NEURONAS

Nitrato de plata de CajalMTODOS PARA NEURONAS

1. Fijacin de bloques de 2 mm. de espesor (mdula o cerebro de animal adulto en formol al 10%, de 3 a 15 das.

2. Retallar los bloques y sumergirlos en la solucin de piridina,------ 2 das.3. Lavar en agua corriente ----------------------------------------------------12 horas.4. Inmersin en formol al 10% ------------------------------------------------hasta su corte.5. Corte por congelacin (20-30 micras).6. Lavar en agua destilada (AD).7. Introducir en solucin de nitrato de plata, ms unas gotas de piridina hasta 7. Introducir en solucin de nitrato de plata, ms unas gotas de piridina hasta

que los cortes tomen color amarillo. En fro :2-4 horas. En caliente: unos minutos.

8. Reduccin en la solucin formol-hidroquinona--------------------------3 min9. Lavar en abundante AD

10. Deshidratas, aclarar y montar.

Las terminaciones axnicas se tien en negro sobre fondo claro.

Depto Ciencias Biolgicas y Reproductivas Universidad de Valparaso

MTODO DE NITRATO DE PLATA DE CAJAL,PARA TERMINACIONES NERVIOSAS

1.- Fijacin de blotques de 2 mm. de espesor ( mdula o cerebro de animal adulto en formol al 10%, de 3 a 15 das.2.- Retallar los bloques y sumergirlos en la solucin de piridina,------ 2 das.3,- Lavar en agua corriente ----------------------------------------------------12 horas.4.- Inmersin en formol al 10% ------------------------------------------------hasta su corte.5.- Corte por congelacin (20-30 micras).

MTODOS PARA NEURONAS

5.- Corte por congelacin (20-30 micras).6.- Lavar en agua destilada (AD).7.- Introducir en solucion de nitrato de plata, ms unas gotas de piridina hasta

que los cortes tomen color amarillo. En fro (2-4 horas). En caliente (unos minutos).

8.- Reduccin en la solucin formol-hidroquinona--------------------------3 min9.- Lavar en abundante AD 10.- Deshidratas, aclarar y montar.

Las terminaciones axnicas ulares etc. se tien en negro sobre fondo claro.

Mtodo de BielschowskyMTODOS PARA NEURONAS

Impregna clulas nerviosas y sus prolongaciones

Utiliza: Utiliza: Nitrato de plata Nitrato de plata

amoniacal (tonalidad marrn)

Formol Agua destilada -

cloruro de Au-Tiosulfato de sodio

GolgiMTODOS PARA NEURONAS

Tiene dos mtodos:

Impregnacin negra:

Fija con lquido de Mller (sublimado Hg)

Impregnar con nitrato de plata Impregnar con nitrato de plata

Coloracin gris:

Bicloruro de mercurio

1. Piezas muy frescas de menos dc 3 mm. dc espesor.Se fijan en 250ml. de la Solucin de Kopsch-formol-bicromato por 24 horas.

2. Pasar las piezas a la Solucin de bicromato de potasa al 3,5% por 2-6 das.3. Pasar las piezas a un bao con Solucin de nitrato de plata,

se forma un precipitado rojizo inmediatamente, y se pasa a otro bao de la misma, donde permanecer de 24 a 36 horas.

4. Corte por congelacin 75-100 micras.5. Deshidratacin prolongada: alcohol de 96% - 15 min.

GolgiMTODOS PARA NEURONAS

5. Deshidratacin prolongada: alcohol de 96% - 15 min. Alcohol absoluto 3 pases de 10 min. cada uno.

6. Aclarar con carboxilol-creosota 2 veces de 15 min. xilol 3 veces de 10 min. cada una y montar con abundante blsamo.

RESULTADOS Somas neuronales, dendritas, espinas dendrticas,

vasos y ocasional mente elementos gliales, en negro sobre fondo amarillo

METODO DE GOLGI-KOPSCH PARA SOMAS, DENDRITAS Y ESPINAS NEURONALES.

Bielchowsky

Corte en parafina

para cilindros ejes y dendritas etc.

Corte en parafina

Vaina de mielina:mtodo de Kluver-Barrera

1. Desparafinar e hidratar hasta alcohol de 96C..2. Solucin de azul luxol en estufa (37C o 60C) de 12 a 20 horas. 3. Extraer el exceso de colorante con alcohol de 96C, 5-10 seg. 4. Diferenciar con solucin de carbonato de litio, 5-10 seg. 5. Pasar varias veces por alcohol de 70C bajo control microscpico

hasta que se diferencien bien sustancia blanca y sustancia gris. 6. Lavar en AD .6. Lavar en AD .7. Teir con solucin de violeta de Cresilo 6 minutos como mnimo.

(Nota: antes de usar esta solucin se le aaden 15 gotas de ac. actico, se filtra y se calienta a 60C.

8. Diferenciar en alcohol de 96C. 9. Deshidratar aclarar y montar.

RESULTADOSRESULTADOSRESULTADOSRESULTADOS Ncleos y grumos de Nissl color rojo-violeta. Vainas de mielina azul oscuro

MTODO DE KLUVER-BARRERA PARA NCLEOS, GRUMOS DE NISSL Y VAINAS DE MIELINA

ll Neurogla:

-Mtodo del sublimado de oro de Cajal para astrogla.

- Mtodo del carbonato de plata de Rio-Hortega para microglia.- Mtodo del carbonato de plata de Rio-Hortega para microglia.

- Mtodo de Golgi-Hortega para oligodendroglia.

Sublimado de oro de Cajal para astrocitos

NEUROGLAS

Piezas frescas de cerebro de mamfero se fijan de 2 a 15 das en Solucin de formol-bromuro.

Corte por congelacin . 30-40 micras Lavado breve en AD Bao en Solucin de cloruro de oro en una placa de Petri . Bao en Solucin de cloruro de oro en una placa de Petri .

Sumergir en ella 4-6 cortes, extendidos en el fondo y sin contactar unos con otros.

La temperatura debe ser 24-26C, el tiempo 4-6 horas y en la oscuridad.

Lavado rpido en AD Fijacin en Solucin Fijadora.-------5-10 min. Lavado en alcohol de 70C. Extensin sobre el porta y secado con papel de filtro. Deshidratar, aclarar con esencia de organo y xilol, y montar. RESULTADOS Astrocitos de color rojo prpura. Neuronas en rosa plido o violeta.

MTODO DEL SUBLIMADO DE ORO DE CAJAL PARA ASTROGLA1. Piezas frescas de cerebro de mamfero se fijan de 2 a 15 das

en Solucin de formol-bromuro.2. Corte por congelacin . 30-40 micras.3. Lavado breve en AD4. Bao en Solucin de cloruro de oro en una placa de Petri .

Sumergir en ella 4-6 cortes, extendidos en el fondo y sin contactar unos con otros. La temperatura debe ser 24-26C, el tiempo 4-6 horas y en la oscuridad.

5. Lavado rpido en AD6. Fijacin en Solucin Fijadora.-------5-10 min.6. Fijacin en Solucin Fijadora.-------5-10 min.7. Lavado en alcohol de 70C.8. Extensin sobre el porta y secado con papel de filtro.9. Deshidratar, aclarar con esencia de organo y xilol, y montar.

RESULTADOS

Astrocitos de color rojo prpura. Neuronas en rosa plido o violeta.

NEUROGLAS

MTODO DEL SUBLIMADO DE ORO DE CAJAL PARA ASTROGLA

GANGLIO SIMPTICO(MOTOR)Tincin argntica virada cloruro de oro y

Contrastada con azul de metilo

NEUROGLAS

MTODO DE GOLGI-HORTEGA, PARA OLIGODENDROGLIA

MTODO DEL CARBONATO DE PLATA DE ROMTODO DEL CARBONATO DE PLATA DE ROMTODO DEL CARBONATO DE PLATA DE ROMTODO DEL CARBONATO DE PLATA DE RO----HORTEGA HORTEGA HORTEGA HORTEGA PARA MICROGLAPARA MICROGLAPARA MICROGLAPARA MICROGLA

Otros mtodos Glas

Anticuerpo PAGF: IHQ (astrocitos fibrosos)

Tcnica de Holzer derivado de la parafucsina)

Utiliza violeta de cristal como colorante

Mordentar con acido fosfomolbdico Mordentar con acido fosfomolbdico

Diferenciar con aceite de anilina

Entrega excelentes resultados en solucin alcohol-cloroformo

Impregnaciones argnticas

astroglia

Tcnica de Holzer

anatpat.unicamp.br

Los nervios perifricos son haces de fibras nerviosas (axones) rodeados por varias

NERVIOS PERIFRICOSNERVIOS PERIFRICOS

rodeados por varias hojas de revestimiento que corresponden a tejido conectivo. Estos haces tambin se conocen como fascculos

Axon

Vaina de mielina

Endoneuro

Perineuro

NERVIOS PERIFRICOSNERVIOS PERIFRICOS

epineuro

Vasos sanguneos

SNP

DEGENERACION WALLERIANA DEL AXON: mtoido de KLUVER-BARRERA

epineuro

NERVIOS PERIFRICOSNERVIOS PERIFRICOS

epineuro

Nervios perifricos

ENDONEURO: F. RETICULARES.ENDONEURO: F. RETICULARES. PERINEURO: HAZ NERVIOSOPERINEURO: HAZ NERVIOSO-- TCDTCD EPINEURO: TCD Y TCLEPINEURO: TCD Y TCL ..

Nervio

Epineuro

NERVIOS PERIFRICOSNERVIOS PERIFRICOS

Tcnica H - E

Epineuro

endoneuro

Clulas de Schwan

conganat.uninet.edu

Tetrxido de osmio

Vaina retculo endoneural

Tejido nervioso en corte semi-fino para M-E, teido con azul de toluidina(Profesor Eduardo. Couve Microscopa electrnica

Universidad de Valparaso)

Ganglios simpticos clulas ganglionares en intestinos

Reaccin Ez. para acetilcolina

INMUNOFLUORESCENCIA

Mtodo de DEOXIGLUCOSA RADIACTIVA 14 CMtodo de DEOXIGLUCOSA RADIACTIVA 14 C

Cada animal se mantiene en ayunas 12 horas.una hora antes de realizar el experimento, se la inyecta intraperitonealmente 25 mCi. de 2-DG, 2(14C (U))

Trascurrido el experimento, se procede a:

1.- Sacrificio por decapitacin y extraccin inmediata del cerebro 2.- Congelacin en N2 lquido, corte en cristato a 50 micras,

secado instantneo en placa caliente y colocacin sobre placa autorradiogrfica(Kodak XOMAT)

3.- Mantener en congelador de -80 C durante 15 das y revelado. 4.- Captura y anlisis de imagen (Image 8a). 5.- Comparacin de imgenes homologas procedentes de animales experimentales

y animales testigos respectivos.

RESULTADO