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GENOTECAS

Genotecas

Colección de Genes ADN cADN

Tipos Genómica Expresión

Vectores Bacteriofagos Plasmidos

Ciclo de Vida de Lambda

Fago Lambda

Ensamblaje del Fago Lambda

Plasmidos

Genoteca de Expresión

Genoteca de Expresión

Purificar mARN maduro (Cromatografia de Afinidad) Sintesis de la Primera Cadena de ADN

Primer oligo dT y Transcriptasa Reversa Sintesis de la Segunda Cadena de ADN

Degradación ARN (Alcali o Enzima) Adicion de poliG Adicion primer poliC ADN polimerasa

Proteger con EcoRI metilasa Adicionar EcoRI linkers (ligadores) Cortar con EcoRI

Purificar mARN

Cromatografía de Afinidad

Síntesis de la Primera Cadena ADN

Primer Oligo dT y Transcriptasa Reversa

Síntesis de la Segunda Cadena de ADN

Degaradación ARN - Adición poliG - Adición del Primer poliC

Síntesis de la Segunda Cadena de ADN

DNA Polimerasa y Metilación

EcoRI Linkers

Clivaje con EcoRI

Enzimas de Restricción

Enzimas de Restricción

Enzimas de Restricción

Corte y Ligación

Ligación a Lambda y Empaquetamiento in vitro

Ligación a Brazos de Lambda

Fosfatasa Alcalina

Brazos de Lambda

Ligasa

cADN

Ligación cADN con brazos de lambda gt11.

Promotor lac

5’ 3’B-Galactosidasa

EcoRI

Digestión con EcoRI

Proteína Fusión

EcoRI

EcoRI

cDNA

Empaquetamiento in-vitro Infección a E. coli

Síntesis del cADN

Corte y Ligación

Infección a E. coli

Tubo que

contiene

fagos y la

bacteria E. coli

Infección a E. coli

Siembra en Agar LB

IPTG + X-gal

Infección a E. coli

Incubación

A 37 °C.

Lambda gt11

Cuestionario

Que es una genoteca de expresión? Por que el material de partida debe ser mARN? Como se sintetiza el cADN:

La primera cadena? La segunda cadena? Que se usa como polimerasa y como primer en cada

reacción de síntesis Además de polimerasa y primer que otras sustancias

cree Ud deben estar en los tubos donde se realizan las síntesis?

Cuestionario

Para que se metila?

Que son los linkers?

Por que se digieren con EcoRI?

Que es un empaquetamiento in vitro?

Clonación en un Vector Plasmídico

Plásmidos en el Extracto Celular

Plasmidos en el Extracto Celular

Características de un Plásmido

Sitio de Restricción

Corte Enzimático

Plásmidos Cortados

Introducción de los Fragmentos

Inserción del Fragmento de ADN

Ligación

Ligación

ADN Recombinante

Plásmidos Recombinantes

Transformación

Tubo que

contiene

Plásmidos y la

Bacteria E. coli

Transformación

Algunas Células Incorporan un Plásmido

Selección

Siembra en

LB-Agar más

Ampicilina

Siembra

Siembra en Caja

Incubación

Incubación a 37°C

Transformación

Selección

Selección

Replicación del Plásmido

Plásmido Replicado

Replicación del Cromosoma Bacteriana

Mitosis de la Célula Bacteriana

Colonias Bacterianas

Clonación

Colonias Celulares

Librería Genómica

Librería Genómica

Librería Genómica en Plásmidos

Corte y Ligación