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GENOTECAS
Genotecas
Colección de Genes ADN cADN
Tipos Genómica Expresión
Vectores Bacteriofagos Plasmidos
Ciclo de Vida de Lambda
Fago Lambda
Ensamblaje del Fago Lambda
Plasmidos
Genoteca de Expresión
Genoteca de Expresión
Purificar mARN maduro (Cromatografia de Afinidad) Sintesis de la Primera Cadena de ADN
Primer oligo dT y Transcriptasa Reversa Sintesis de la Segunda Cadena de ADN
Degradación ARN (Alcali o Enzima) Adicion de poliG Adicion primer poliC ADN polimerasa
Proteger con EcoRI metilasa Adicionar EcoRI linkers (ligadores) Cortar con EcoRI
Purificar mARN
Cromatografía de Afinidad
Síntesis de la Primera Cadena ADN
Primer Oligo dT y Transcriptasa Reversa
Síntesis de la Segunda Cadena de ADN
Degaradación ARN - Adición poliG - Adición del Primer poliC
Síntesis de la Segunda Cadena de ADN
DNA Polimerasa y Metilación
EcoRI Linkers
Clivaje con EcoRI
Enzimas de Restricción
Enzimas de Restricción
Enzimas de Restricción
Corte y Ligación
Ligación a Lambda y Empaquetamiento in vitro
Ligación a Brazos de Lambda
Fosfatasa Alcalina
Brazos de Lambda
Ligasa
cADN
Ligación cADN con brazos de lambda gt11.
Promotor lac
5’ 3’B-Galactosidasa
EcoRI
Digestión con EcoRI
Proteína Fusión
EcoRI
EcoRI
cDNA
Empaquetamiento in-vitro Infección a E. coli
Síntesis del cADN
Corte y Ligación
Infección a E. coli
Tubo que
contiene
fagos y la
bacteria E. coli
Infección a E. coli
Siembra en Agar LB
IPTG + X-gal
Infección a E. coli
Incubación
A 37 °C.
Lambda gt11
Cuestionario
Que es una genoteca de expresión? Por que el material de partida debe ser mARN? Como se sintetiza el cADN:
La primera cadena? La segunda cadena? Que se usa como polimerasa y como primer en cada
reacción de síntesis Además de polimerasa y primer que otras sustancias
cree Ud deben estar en los tubos donde se realizan las síntesis?
Cuestionario
Para que se metila?
Que son los linkers?
Por que se digieren con EcoRI?
Que es un empaquetamiento in vitro?
Clonación en un Vector Plasmídico
Plásmidos en el Extracto Celular
Plasmidos en el Extracto Celular
Características de un Plásmido
Sitio de Restricción
Corte Enzimático
Plásmidos Cortados
Introducción de los Fragmentos
Inserción del Fragmento de ADN
Ligación
Ligación
ADN Recombinante
Plásmidos Recombinantes
Transformación
Tubo que
contiene
Plásmidos y la
Bacteria E. coli
Transformación
Algunas Células Incorporan un Plásmido
Selección
Siembra en
LB-Agar más
Ampicilina
Siembra
Siembra en Caja
Incubación
Incubación a 37°C
Transformación
Selección
Selección
Replicación del Plásmido
Plásmido Replicado
Replicación del Cromosoma Bacteriana
Mitosis de la Célula Bacteriana
Colonias Bacterianas
Clonación
Colonias Celulares
Librería Genómica
Librería Genómica
Librería Genómica en Plásmidos
Corte y Ligación