CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA

(PRÁCTICA No.2)

Profesora: Catalina Vasco, PhD.

Ayudante: Sr. Carlos Navas C.

Barba, M., Inguillay, S. y Tamayo, P.

(mikhal24@hotmail.es)

Grupo 3 (Martes)

Fecha de realización: Martes 20 de agosto del 2013

Fecha de entrega: Martes 27 de agosto del 2013

RESUMEN EJECUTIVO:

El planteamiento de la práctica posee dos objetivos en la aplicación de cromatografía de

capa fina, primero, la separación de distintos pigmentos vegetales presentes en hojas de espinaca;

para lo que se procedió a la extracción de la muestra por trituración, con mortero, y su disolución

con acetona:éter (1:1); de la que se colocó una alícuota en la placa, previamente preparada, que

luego se introdujo en la cámara de saturación con cloroformo:éter (3:7), durante media hora. Al

cabo de lo que se extrajo la placa y se midieron las distancias recorridas por el eluyente y los

pigmentos, y se calculó sus factores de retención (R f), de 0.750 para el pigmento verde (clorofilas),

y 0.983 para el amarillo (carotenoides). El segundo objetivo era la identificación de sustancias no

coloreadas, para lo que se siguió un proceso similar al anterior, pero sin disolución de las muestras,

y empleando hexano como eluyente, además para medir las distancias en la placa se empleó una

cámara UV, con lo que se concluyó valores R f de 0.283, 0.783, 0.842, 0.858 para los componentes

del diesel, y 0.150 para el naftaleno, mientras para benceno y tolueno, no hubo coloración, y no

pudo calcularse. Con lo que se concluyó, con las limitaciones de la técnica, que los pigmentos

vegetales así como el diésel se componen de variadas sustancias, en el primer caso, de clorofilas y

carotenos, y en el segundo, de alcanos y aromáticos principalmente.

ÍTEM PUNTAJE

Coloquio /3.0

Participación /2.0

Presentación y formato /0.5

Resumen ejecutivo /1.0

Tablas de datos y diagramas

/1.0

Cálculos /0.5

Resultados y discusión /1.5

Conclusiones y recomendaciones

/0.5

Subtotal /10.0

PENALIZACIÓN

Atraso en la entrega del informe

/1.0

TOTAL /10.0

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TABLAS DE DATOS

Tabla 1. Distancias recorridas en la placa de

separación de pigmentos vegetales

Distancia del Eluyente= 12 cmColor de pigmentos Distancia [cm.]

Verde 9.0Amarillo 11.8

Tabla 2. Distancias recorridas en la placa de

separación de sustancias no coloreadas

(Diésel)

Tabla 3. Distancias recorridas en la placa de

separación de sustancias no coloreadas

(Naftaleno)

Tabla 4. Valores de factor de retención de Rf

ideales para pigmentos vegetales. (Harborne,

1998, p. 231; Adds, Larkcom y Miller, 2004,

p. 14).

Pigmentos Rf (ideal)Clorofilas (Tipo a) 0.60

Carotenos (Tipo β) 0.98

Tabla 5. Valores de serie eluotrópica (de

menor a mayor polaridad) de solventes en

Silica Gel 20

(Bidlingmeyer, 1992, p. 190)

CÁLCULOS

La ecuación principal en esta práctica es el

cálculo del factor de retención, mediante:

R f=Distanciarecorrida por el sustratoDistanciarecorrida por el eluyente

Cálculo del Rf para las clorofilas

R f=9[cm .]

12[cm.]=0.750

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Tabla 6. Valores de Rf obtenidos para los

pigmentos vegetales

Color de pigmentos RfVerde 0.750

Amarillo 0.983

Distancia del Eluyente= 12 cmComponente Distancias [cm]

1 3.42 9.43 10.14 10.3

Distancia del Eluyente= 12 cmComponente Valores(cm)

1 1.8

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Tabla 7. Valores de Rf obtenidos para los

componentes del Diésel

Tabla 8. Valores de Rf obtenidos para el

Naftaleno

Los datos calculados de Rf permitieron una

comparación para conocer que compuestos se

encontraron en el extracto de espinaca, al

cotejar con valores de bibliografía, obtenidos

de experiencias similares (Tabla 4.).

Aunque no se pueden considerar los valores Rf

como constantes universales, ya que pequeñas

variaciones en el método o incluso en el

material (estructura) empleado, las modifican,

siendo una debilidad de la técnica, se observó

una relación cercana entre el valor para el

pigmento verde y la clorofila en especial la

tipo A, y entre el pigmento amarillo y lo

carotenoides en especial el β-caroteno, lo que

permitió concluir su equivalencia, al menos

como una buena aproximación.

En el caso del diésel, que se halla formado por

cientos de compuestos de variado tipo, la

comparación de Rf, se hizo más compleja ya

que se tiene una gama tan amplia que fue

difícil e incluso en cierta manera “erróneo”

compararlo con valores de otras experiencias.

Además al ser incoloro y tener que emplearse

una lámpara UV, el espectro de emisión de

ésta, que pudo dejar invisibles o poco

perceptibles parte de las muestras, así como las

erratas de observación, complicaron la

obtención de datos.

Sin embargo, al tomar en cuenta que el

hexano empleado como eluyente es no polar y

la sílica gel polar, a partir de polaridad de las

muestras “serie eluotrópica” (Tabla 5.) se

estableció que las muestras más polares

(benceno y tolueno), difícilmente pudieron ser

disueltas por el eluyente, a diferencia de las

menos polares (naftaleno). Por lo que al

considerar el diésel, se pudo inferir que en su

composición se hallaban especialmente

hidrocarburos saturados alifáticos, así como

aromáticos.

CONCLUSIONES

Se consideró, valores de Rf de bibliografía y

por comparación con los obtenidos (Rf.

verde=0.750, Rf. Amarillo=0983), en el caso

del extracto de espinaca, se pudo concluir que

está formado esencialmente de carotenoides y

clorofilas.

Componente Rf1 0.28332 0.78333 0.84174 0.8583

Componente Rf1 0.15

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Para los compuestos no coloreados, del

naftaleno se pudo concluir que es

prácticamente puro, aunque poco perceptible

(Rf=0.15), en el caso del benceno y tolueno,

muy probablemente porque su espectro de

absorción se hallaba lejano del de emisión de

la lámpara, y por su diferencia de polaridad

con el eluyente su análisis fue imposible, en el

diésel su amplia cantidad de componentes

(Rf1=0.283, Rf2=0.783, Rf3=0.842, Rf4=

0.858) impidió una identificación clara, sin

embargo, por consideraciones de polaridad, se

pudo concluir que en su mayoría se compone

de alcanos alifáticos y aromáticos, que son los

más comunes en el petróleo del que se extrae.

RECOMENDACIONES

Para la aplicación de la cámara UV, se

deberían analizar compuestos que tengan

el mismo espectro de absorción, en el que

emite la lámpara.

Para una mejor observación de los

componentes del extracto vegetal, se

deberían fijar cantidades específicas de

hojas y solvente durante la extracción (p.

ej. 10 g. de hojas con 50 mL. de solvente,

(Ocampo, Ríos, Betancur y Ocampo,

2008, p. 86).

La adición de colorantes, reactivos con las

muestras podrían facilitar el análisis de

los compuestos no coloreados.

BIBLIOGRAFÍA:

Harborne, J. (1998). Phytochemical

Methods A Guide to Modern Techniques

of Plant Analysis. (3ra. Ed.). Londres,

UK: Thomson Science.

Adds, J., Larkcom, E. y Miller, R. (2004).

Genetics, Evolution and Biodiversity).

(1ra. Ed.). Londres, UK: Nelson Thornes

Ltd.

Lee, M. (1981). Analytical Chemistry of

Polycyclic Aromatic Compounds. (1ra.

Ed.). New York, EUA: Academic Press,

Inc.

Bidlingmeyer, B. (1992). Practical

HPLC: Methodology and Applications.

(1ra. Ed.). New York, EUA: John Wiley

& Sons, Inc.

Reichardt, C. (2003). Solvents and

Solvent Effects in Organic Chemistry.

(3ra. Ed.). Weinheim, Alemania: Wiley-

VCH Verlag GmbH & Co.

ANEXOS:

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Informe de Laboratorio de Análisis Instrumental I Período 2013B

Imagen 1. Placas de cromatografía de capa

fina de pigmentos vegetales.

Imagen 2. Placas de cromatografía de capa

fina bajo luz UV, de compuestos no

coloreados