ADN ESTRUCTURA CROMOSOMAS Y GENOMAS

v  Los cromosomas son los portadores de los elementos hereditarios

v  Los cromosomas están compuestos de ADN y proteínas

v  Cada cromosoma está formado por una molécula de ADN

Breve Historia…

Frederick Griffith, 1928

Streptococcus pneumoniae

Cepa R inocua Cepa S letal

S:  cubierta  de  polisacáridos  PRESENTE    R:  cubierta  de  polisacáridos  AUSENTE  

Oswald Avery, Colin MacLeod, and Maclyn McCarty, 1943.

Alfred Hershey & Martha Chase, 1952.

P32 S35

DNA: P32

proteínas: S35

El ADN es la molécula de la herencia La naturaleza hereditaria de cada organismo está definida por su genoma, el cuál consiste de largas secuencias de ácidos nucléicos que proporcionan la información necesaria para construir al organismo.

Las bases nitrogenadas

Los DESOXIRIBONUCLEÓTIDOS

Nucleósido Nucleótido

Reglas de Chargaff • La cantidad de adenina es la misma que la de timina: A=T • La cantidad de guanina equivale a la de citosina: G=C

• La cantidad de bases púricas es la misma que las bases pirimídicas:

A+G=T+C Pero la cantidad de A+T ≠ G+C

Existe complementariedad entre bases nitrogenadas

Rosalind Franklin y Maurice Wilkins

James Watson y Francis Crick

Estructura del ADN

Surco mayor

Surco menor

Surco menor

Surco mayor

5’ PO4-

3’ OH

Complementariedad: A T G C Bases nitrogenadas: interior Fosfatos: exterior

Cadenas anti-paralelas Extremo 5’: PO4

-

Extremo 3’: OH

La estructura del ADN permite responder dos preguntas claves en la Genética:

1.  ¿Cómo se puede determinar la información de una función biológica en una forma química?

2.  ¿Cómo se puede copiar la información a generaciones sucesivas?

Propiedades del ADN

El contenido de GC influye en las propiedades del ADN, especialmente sobre la temperatura de desnaturalización y alineamiento

% GC Tm

Desnaturalización y Re-naturalización

Source Lysis Methods

Bacteria

Lysozyme - degrades polysaccharide cell walls SDS - detergent for cell membranes Freeze/Thaw several times French Press

Organelles Osmotic Sonication Detergent

Animal Cells Osmotic Sonication Detergent

Plant Cells Several enzymes to break down cell walls Mechanical grinding

Purificación de ADN 1. Concentrar células 2. Romper células 3. Eliminar proteínas

4. Precipitar ADN

•  Etanol •  Isopropanol •  Butanol

http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/howto/

Si quieres extraer ADN en casa, consulta:

A260 / A280 Quality

Ratio < 1.8 Contains protein contamination

1.8 < Ratio < 1.9 no contamination Ratio > 2 DNA may contain RNA Absorbance peak or shoulder at 270 nm Phenol contamination

Nucleic Acid Form NA Concentration at 1 A260

Double -stranded DNA 50 µg/ml Single-stranded DNA 37 µg/ml RNA 40 µg/ml

Concentración y calidad del ADN

Separación y visualización de fragmentos de ADN

Bromuro de etidio: Agente intercalante entre las bases nitrogenadas que fluoresce a la luz UV

Gel de Agarosa 0.8% - 2.5%

Bibliografía: Alberts “Molecular Biology of the Cell” 4ª o 5ª Ed. (2002, 2008) Lehninger “Principles of Biochemistry” 3ª, 4ª o 5ª Ed. (2000, 2004, 2008) Lodish “Molecular Cell Biology” 4ª, 5ª o 6ª Ed. (1999, 2003, 2007)

http://learn.genetics.utah.edu/ http://www.youtube.com/watch?v=mHak9EZjySs

Continuará ….