ac bio espe 047124 polimorfismo

7/23/2019 AC BIO ESPE 047124 Polimorfismo

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1

ANÁLISIS DE FRECUENCIA DE LOS POLIMORFISMOS GENÉTICOS Ile-58Thr y

Ala-9Val EN EL GEN MnSOD, Ala-73Thr EN EL GEN CST3 y Ala-224Val EN EL

GEN CTSD y SU ASOCIACIÓN CON LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER EN

PACIENTES DEL HOSPITAL ANDRADE MARÍN EN ECUADOR

Carla Rodríguez Proaño1, Marcos Serrano

3, César Paz-y-Miño

2, Paola Párraga

1 &

Marcelo Grial!a1"

1#scuela Poli$écnica del #érci$o" %ngeniería en io$ecnología" '!" #l Progreso, Sangol(uí" geo!anna)1*+o$ail"co

2%ns$i$u$o de %n!es$igaciones ioédicas" ni!ersidad de las 'éricas" '!" Granados #12-1. y Colies es(", /ui$o"

ii0-udla*udla"edu"ec

3Ser!icio de eurología, osi$al de la Seguridad Social 4Carlos 'ndrade Marín5" /ui$o"



2

RESUMEN

6a en7eredad de 'lz+eier 8#'9 es una en7eredad rogresi!a irre!ersi0le del cere0ro, de a$ogenia

colea" 6a en7eredad se carac$eriza desde el un$o de !is$a ana$:ico, or érdida de neuronas y sinasis,

resencia de lacas seniles, o!illos neuro7i0rilares y de degeneraci:n neuro7i0rilar" #n es$e es$udio, se

analizaron las 7recuencias de los olior7isos de Ala-73Thr 8G;'9 en el gen CS<3 y Ala-224Val 8C;<9 en el gen

C<S= edian$e PCR-R>6P e Ile-58Thr 8<;C9 y Ala-9Val 8<;C9 en el gen MnS?= edian$e secuenciaci:n

au$oá$ica, y su asociaci:n con la en7eredad de 'lz+eier en acien$es del osi$al 'ndrade Marín 8C'M9

en #cuador" Se analizaron ues$ras de sangre de @A indi!iduos a7ec$os de #' del Ser!icio de eurología del

C'M y @@ indi!iduos con$roles asin$oá$icos" 6os resul$ados de los geno$ios o0$enidos edian$e la $écnica

PCR-R>6P y secuenciaci:n au$oá$ica 7ueron analizados con el rograa SSPS !"1)" #l olior7iso 8<;C9 de

Ile-58Thr no resen$: relaci:n con la en7eredad ya (ue no se encon$raron !arian$es oli:r7icas" 'l realizar

el cálculo de ardy Bein0erg y el análisis de C+i-cuadrado se os$r: (ue al coarar la o0laci:n a7ec$a con

los con$roles ara Ala-73Thr 8G;'9 eis$ieron di7erencias es$adís$icaen$e signi7ica$i!as y adicionalen$e (ue

es$a o0laci:n no es$a0a en e(uili0rio" Para Ala-9Val 8<;C9 no eis$ieron di7erencias es$adís$icas signi7ica$i!as y

la o0laci:n os$ra0a e(uili0rio" #s$as dos !arian$es no os$raron relaci:n con la en7eredad, lo (ue 7ue

coro0ado $a0ién con el análisis de Odds ra$io" Por o$ro lado, el olior7iso Ala-224Val 8C;<9 os$r: ser

ior$an$e en los $res análisisD el +oocigo$o raro << resen$: un !alor signi7ica$i!o ?R de E, es decir, (ue un

or$ador (ue osea el geno$io << $iene E !eces ás riesgo de desarrollar la en7eredad de 'lz+eier (ue un

or$ador +oocigo$o CC noral"

Palabra !la"#$ olior7isos gené$icos, en7eredad de 'lz+eier, PCR-R>6P, secuenciaci:n cailar"



3

A%STRACT

'lz+eierFs disease is a rogressi!e irre!ersi0le 0rain illness o7 cole a$+ogenesis +ic+ is soe$ies

+eredi$ary" >ro $+e ana$oical oin$ o7 !ie, i$s 7indings include loss o7 neurons and synases, resence o7

senile la(ues, neuro7i0rillar $angles and neuro7i0rillar degenera$ion" %n $+is s$udy, e analyzed $+e 7re(uencies

o7 $+e 'la-)3<+r olyor+iss 8G;'9 in $+e CS<3 gene and 'la-22.Hal 8C;<9 in $+e C<S= gene 0y PCR-R>6P

and %le-@I<+r 8<;C9 and 'la-EHal 8<;C9 in $+e MnS?= gene 0y caillary se(uencing" <+e associa$ion o7 $+e

a0o!e !arian$s i$+ 'lz+eierFs disease in a$ien$s 7ro $+e Carlos 'ndrade Marín osi$al 8C'M9 in #cuador

as $+en s$udied" lood sales ere o0$ained 7ro @A a77ec$ed indi!iduals 7ro $+e eurology =ear$en$

o7 C'M, and @@ con$rol su0ec$s" <+e resul$s o7 geno$yes o0$ained 0y PCR-R>6P and caillary se(uencing

ere analyzed 0y using $+e SSPS !" 1)" Polyor+is 8<;C9 o7 %le-@I<+r +as no rela$ions+i i$+ $+e disease

since no olyor+ic !arian$ as 7ound" '7$er calcula$ing $+e ardy Bein0erg and C+i-s(uare analysis i$ as

s+oed $+a$, +en coaring $+e 7re(uency o7 'la-)3<+r 8G;'9 in $+e a77ec$ed oula$ion !ersus $+e con$rol

grou, $+ere as a s$a$is$ically signi7ican$ di77erence +ile no e(uili0riu as deons$ra$ed" >or 'la-EHal

8<;C9, $+ere ere no s$a$is$ically signi7ican$ di77erences and $+e oula$ion as in e(uili0riu" <+ese $o

!aria$ions ere unrela$ed $o $+e disease, +ic+ as also 7ound in $+e Odds ra$io analysis" %n con$ras$, 'la-

22.Hal olyor+is 8C;<9 as s+on $o 0e ior$an$ in $+e $+ree analysesD rare +oozygo$e << s+oed a

signi7ican$ !alue o7 ?R i$+ E, i$ eans, +en a carrier +as $+e geno$ye <<, i$ +as E $ies +ig+er risJ o7

de!eloing 'lz+eierFs disease $+an $+e +oozygous CC noral carrier"

&#y '(r)$ Gene$ic olyor+iss, 'lz+eierKs disease, PCR-R>6P, caillary se(uencing"



.

INTRODUCCIÓN

'lz+eier es una en7eredad rogresi!a e irre!ersi0le del cere0ro, de a$ogenia colea, a !eces

+eredi$aria, (ue se carac$eriza desde el un$o de !is$a ana$:ico, or érdida de neuronas, resencia de

lacas seniles, o!illos neuro7i0rilares y degeneraci:n neuro7i0rilar1" 6os o!illos neuro7i0rilares son

coleen$os de la ro$eína icro$u0ular <'" #s$os se ueden o0ser!ar edian$e icroscoía elec$r:nica y

$ienen 7ora de 7ilaen$os +elicoidales areados" 6as lacas seniles o neurí$icas es$án cons$i$uidas or la

sus$ancia L-ailoide resul$ado de una acuulaci:n de !arias ro$eínas en una reacci:n in7laa$oria2" Gran

ar$e de los casos es$udiados son esorádicos y un @ $iene un a$r:n de +erencia au$os:ica doinan$e3"

Se considera (ue la en7eredad de 'lz+eier in$er!iene del AN al )N en los casos de de$erioro

cogni$i!o en ancianos, $iene un grado de a7ec$aci:n del 1N en indi!iduos ayores a A@ años y un .N ara

ancianos ayores a los I@ años." Mundialen$e, casi 3@"A illones de ersonas adecen es$a deencia" Se

esera (ue ara el año 2N3N se increen$e es$e !alor a A@") illones y se $rili(ue ara el año 2N@N@" Se

reor$an )") illones de casos de deencia cada año, de$erinando un nue!o caso en cual(uier ar$e del

undo cada . segundosA" 6a en7eredad de 'lz+eier causa or0ilidad y or$alidad rea$ura en casi 2 de

cada 3 indi!iduos duran$e su !ida)"

#n el #cuador, segOn el %#C, en el año 2NN) el $o$al de de7unciones 7ue de @I,N1A ersonas de las

cuales 1A1 indi!iduos 7allecieron de deencia y en7eredad de 'lz+eier lo (ue corresonde al N"2)" #n el

año 2NNI el nOero de 7allecidos 7ue de AN,N23D 1)) 7allecieron or es$a causa corresondiendo al N"2E" #n el

año 2N1N increen$: el $o$al de 7allecidos a A1,AI1 or lo $an$o eis$e un increen$o en la or$alidad general

y or$alidad or deencia y en7eredad de 'lz+eier"

Gracias al desarrollo de la gené$ica olecular se +an odido realizar es$udios so0re las en7eredades

neurodegenera$i!as, lo (ue +a eri$ido en$ender las 0ases gené$icas de es$os rocesos ara oder encon$rar,

con ás in!es$igaci:n, un eor $ra$aien$o o cura ara es$as a7ecciones" no de los 7ac$ores gené$icos (ue

odría in7luir en el desarrollo de la en7eredad es el gen MnS?=, (ue ro!iene de la 7ailia +ieroanganeso

suer:ido disu$asa y codi7ica una ro$eína or el '= nuclear ero su ac$i!idad 0iol:gica es$á localizada en



@

la i$ocondria +acia donde es $ransor$ada edian$e un roceso de $raslaci:nI" #s$a enzia con!ier$e los

radicales sueroido 8R?S9 en oígeno olecular y 2?2,, el iso (ue uede ser luego neu$ralizado or la

glu$a$i:n eroidasa, eroiredoin reduc$asa y ca$alasa, adeás se une a los su0roduc$os de suer:ido de

la 7os7orilaci:n oida$i!a y los con!ier$e en er:ido de +idr:geno y oígeno dia$:ico" 6as u$aciones de es$e

gen se +an asociado con iocardioa$ía idioá$ica 8%=C9, en!eeciien$o rea$uro, en7eredades

esorádicas de las neuronas o$oras y el cáncerE"

SegOn e!idencias os$radas an$erioren$e, MnS?= sugiere ser crí$ico ara (ue las neuronas

so0re!i!an al daño oida$i!o1N" Qa (ue S?= uega un ael ior$an$e en$re las enzias an$ioidan$es, ro$ege

al cere0ro con$ra R?S y si es (ue eis$e un ca0io en la ac$i!idad de es$a enzia en la i$ocondria, eis$irán

dis7unciones en los ecanisos de los cuales es resonsa0le11"

Por o$ro lado, la cis$a$ina es una 7ailia de ro$eínas, con7orada or $res gruos cis$a$inas $io 1 y

2 y los (uinin:genos" 6as ro$eínas cis$a$inas de $io 2 son una clase de in+i0idores de la ro$easa cis$eína,

encon$rada en 7luidos y secreciones donde arece $ener 7unciones ro$ec$oras" #l gen CS<3 se encuen$ra en el

locus cis$a$ina del croosoa 2N y codi7ica la ayor ar$e de in+i0idores e$racelulares de las ro$easas

cis$eínas" na u$aci:n en es$e gen +a sido relacionada con angioa$ía ailoide" 6a eresi:n de es$a ro$eína

en las células !asculares del Osculo liso de las aredes es uy reducida en lesiones a$eroscler:$icas y

aneurisa a:r$ico, es$a0leciendo su rol en la en7eredad !ascular12"

6a asar$il ro$easa lisosoal ca$esina = es$á ilicada en la a$ogénesis de !arias en7eredades

neurodegenera$i!as coo 'lz+eier, ParJinson y Creu$z7eld$-aJo013" 6a ca$esina = es una ro$easa acídica

in$racelular (ue $iene relaci:n con el desarrollo de la en7eredad de 'lz+eier, ya (ue genera 7ragen$os de

0e$a-ailoide 8'L9 a ar$ir de la di!isi:n de la ro$eína recursora ailoide 'PP y la degradaci:n de la ro$eína

<' en !arios 7ragen$os1."

6a !arian$e Ile58Thr a7ec$a la es$a0ilidad de la in$er7ace de la ro$eína $e$raérica y reduce la

ac$i!idad 0iol:gica de MnS?=" #n es$e olior7iso se sus$i$uye < C 8d0SP %= T rs)I@@9 ro!ocando un

ca0io de una %soleucina or una <reonina, en el cod:n @I del e:n A en la regi:n A(2@1@" ' su !ez, el



A

olior7iso Ala-9Val es el roduc$o de una sus$i$uci:n de < C 8dsSP %= T rs.IIN9 en el cod:n E del e:n 2

en la regi:n A(2@, roduciendo un ca0io de Halina a 'lanina" #s$a sus$i$uci:n induce ca0ios de

con7oraci:n en la secuencia i$ocondrial de orien$aci:n 8M<S9 de la es$ruc$ura +oas legadas L a +élice-U y

de0ido a es$o no se uede realizar correc$aen$e el $ransor$e +acia la i$ocondria1A"

Qa (ue la cis$a$ina C es un in+i0idor de la ro$easa cis$eína lisosoal in$er!iene en el en!eeciien$o

neuronal o en la uer$e celular de la en7eredad de 'lz+eier" #l olior7iso (ue causa es$e roceso

corresonde al gen CS<3 localizado en la osici:n )3 del e:n 1, resul$ando en un ca0io de G ' 8ds SP %=

T rs1NA.N3E9, lo (ue lle!a a una sus$i$uci:n de 'lanina or <reonina1)"

#l gen C<S= se encuen$ra en el croosoa 11 en la regi:n 1@"@ y el olior7iso Ala-224Val se u0ica

en el e:n 2 en la osici:n 22." #s$e resul$a en un ca0io de C < 8ds SP %= T rs1)@)19, (ue consis$e en una

sus$i$uci:n de un residuo de 'lanina or Halina" #s$e olior7iso causa un auen$o de la secreci:n ro-C<S=

y la aduraci:n in$racelular1I"

#l o0e$i!o de es$e $ra0ao 7ue analizar las 7recuencias oli:r7icas de Ala-73Thr en el gen CS<3 y Ala-

224Val en el gen C<S= edian$e PCR-R>6P e Ile-58Thr y Ala-9Val en el gen MnS?= edian$e secuenciaci:n,

ara de$erinar su asociaci:n con la en7eredad de 'lz+eier en acien$es del osi$al 'ndrade Marín en

#cuador"



)

MATERIALES * MÉTODOS

#n es$e es$udio caso con$rol re$rosec$i!o se u$ilizaron ues$ras de sangre eri7érica de acien$es con

osi0le diagn:s$ico de 'lz+eier" 6os con$roles u$ilizados 7oran ar$e del 0anco de '=s del %ns$i$u$o de

%n!es$igaciones ioédicas de la =6'" Se analizaron @@ casos con$roles y @A casos a7ec$os" #n a0os gruos

se con$: con in7oraci:n de edad, seo, un +is$orial clínico con su consen$iien$o in7orado y el gruo de

indi!iduos a7ec$os con$: con el diagn:s$ico con7irado de la en7eredad de 'lz+eier" #s$e es$udio 7ue

aro0ado or el coi$é de ioé$ica de la =6'" #n a0os gruos se con$: con in7oraci:n de edad, seo, un

+is$orial clínico con su consen$iien$o in7orado y el gruo de indi!iduos a7ec$os con$: con el diagn:s$ico

con7irado de la en7eredad de 'lz+eier1E"

G#n(+-a.#

6a e$racci:n de '= se realiz: a ar$ir de ues$ras de sangre eri7érica edian$e el Ji$ Pure 6inJ<M

Genoic =' Mini de %n!i$rogen seguida de la cuan$i7icaci:n u$ilizando el /u0i$V ds=' S 'ssay Wi$"

#n cuan$o al olior7iso Ile-58Thr del gen MnS?= se ali7ic: un 7ragen$o de 2A. ares de 0ases

809, los riers u$ilizados 7ueron >B @K-<CC'GGGG''G<'C<G<<<G-3K y RH @K-GC'G'CC<C<<<G'<GG<<G-

3K"Con resec$o al olior7iso Ala-9Val del gen MnS?=se ali7ic: un 7ragen$o de 21)0 con la u$ilizaci:n

de los riers >B @K-GC<G<GC<<<C<CG<C<<C'-3K y RH @K-C''CGCC<CC<GG<'C<<C<-3K"Para el gen CS<3 se

o0$u!o un 7ragen$o de 2A20, los riers u$ilizados 7ueron >B @K-<'<C<'GC<CC'GCC<C<CG-3K y RH @K-

<'C'<G<CG<<GC<GGC<<<-3K" Por Ol$io, ara el gen C<S= se ali7ic: un 7ragen$o de 3N30 con la

u$ilizaci:n de los riers >B @K-G<CC'<G<'G<<C<<G'GC'-3K y RH @K-GG<G'CC'C<<C<<'GG'C<-3K"<odas las

reacciones de PCR se lle!aron a ca0o en un !oluen de @NX6, ara cada olior7iso se u$iliz: una !ariaci:n

de en$re N"@-2"@M de MgYY, las concen$raciones de d<Ps 7ueron de en$re N"1-N"3M, las concen$raci:n de

rier 7ue de N"2M ece$o en el olior7iso del gen C<S= en el cual se u$iliz: N".M de rier >B y RHD

se u$iliz: 2"@ de Pla$inuV <a( '= olierasa de %n!i$rogen, 1Z de PCR 0u77er 1NZ y se a7or: con 2? Mili/"



I

#l rograa de ali7icaci:n ara los olior7isos Ile-58Thr y Ala-9Val del gen MnS?= consis$i: en

1N in de desna$uralizaci:n a E@[C, .@ segundos de desna$uralizaci:n a E@[C, 1 in de anillaien$o a AN"3 y

A2[C, resec$i!aen$e, .@ segundos de elongaci:n a )2[C or 3@ ciclos y 3 in de elongaci:n 7inal a )2[C"

Para el gen CS<3 el rograa de ali7icaci:n consis$i: en 1N in de desna$uralizaci:n a E@[C, 3N

segundos de desna$uralizaci:n a E@[C, 3N segundos de anillaien$o a @3[C, .@ segundos de elongaci:n a )2[C

or 3@ ciclos y 3 in de elongaci:n 7inal a )2[C" Por Ol$io, ara el gen C<S= rograa consis$i: en 1N in de

desna$uralizaci:n a E@[C, 3N segundos de desna$uralizaci:n a E@[C, .@ segundos de anillaien$o a AN[C, .@

segundos de elongaci:n a )2[C or 3@ ciclos y 3 in de elongaci:n 7inal a )2[C" 6a !eri7icaci:n de los

aliconesse realiz: edian$e elec$ro7oresis en un gel de agarosa al 2 y se los o0ser!: en un $ransiluinador

H"

Para el análisis de los olior7isos de los genes CS<3 y C<S= se u$iliz: la $écnica PCR-R>6P" 6as

enzias de res$ricci:n u$ilizadas ara digerir los 7ragen$os 7ueron EagI y AciI 8e #ngland iola0s9

resec$i!aen$e" ' 3N\6 de roduc$o de PCR se agreg: N".\6 de #nzia 81N,NNN 69, @\6 de #u77er 1NZ y

1."A\6 de 2? Mili/ dando así un !oluen 7inal de @N\6" Se incu0: or 3 +oras a 3)[C"

6os 7ragen$os o0$enidos a ar$ir de la PCR de los olior7isos del gen MnS?= se los secuenci: con

la u$ilizaci:n de ig=yeV <erina$or !3"1 y !1"1 Cycle Se(uencing Wi$ de 'lied iosys$es<M ara el

olior7iso Ile-58Thr y Ala-9Val resec$i!aen$e en el analizador gené$ico 313N de 'lied iosys$es" 6os

resul$ados de los di7eren$es geno$ios ara Ile-58Thr, se los uede o0ser!ar en la 7igura 1D ara Ala-9Val en la

7igura 2 y 7igura 3"

6os 7ragen$os, de acuerdo al geno$io, de los indi!iduos analizados luego de la diges$i:n con

enzias de res$ricci:n del gen CS<3 se ues$ran en la 7igura . 'la'la T 1320 y 13N0, HalHal T 2A20 y

'laHal T 2A20, 1320 y 13N0D y los roduc$os de la diges$i:n del gen CS<= 7ueron la'la T )A0 y ))0,

HalHal T 1@30 y 'laHal T 1@30, ))0 y )A0 87igura @9" 6a de$erinaci:n de los 7ragen$os se realiz:

edian$e elec$ro7oresis en geles de agarosa al . y re!elados en un $ransiluinador H"



E

An/l #+a)0+!(

Se ele: un análisis es$adís$ico de $io descri$i!o (ue incluye el cálculo de 7recuencias alélicas de los

olior7isos es$udiados, $an$o en los geno$ios de los indi!iduos con$roles y a7ec$os, y se realiz: el cálculo de

la 7recuencia de ardy-Bein0erg" Para es$a0lecer si eis$en di7erencias signi7ica$i!as en$re los dos gruos y los

olior7isos es$udiados se realiz: la rue0a c+i-cuadrado de Pearson con un grado de li0er$ad y la rue0a de

?dds Ra$io con una $a0la de con$ingencia 8229 ara de$erinar el riesgo de desarrollar la en7eredad de

'lz+eier en resencia de los olior7isos en los gruos es$udiados edian$e el rograa SPSS !"1) 8SPSS,

C+icago, %llinois9"



1N

RESULTADOS

#n la tabla 1 se agru: los resul$ados de los geno$ios o0ser!ados, os$rando la dis$ri0uci:n $o$al de la

o0laci:n en es$udio" #n cuan$o al olior7iso CS<3 8'la-)3Hal9 8G;'9, se uede cons$a$ar (ue el ayor

orcen$ae de indi!iduos oseen el alelo noral G" =e igual anera en el olior7iso C<S= 8'la-22.Hal9 8C;<9

eis$e un ayor orcen$ae del alelo C noral en la o0laci:n" Por su ar$e, en el olior7iso MnS?= 8%le-

@I<+r9 8<;C9 se encon$r: solaen$e el alelo G noral en $oda la o0laci:n, or lo (ue no se realiz: ningOn

cálculo es$adís$ico adicional" >inalen$e, los da$os o0$enidos ara el olior7iso MnS?= 8'la-EHal9 8<;C9

re!elan al alelo C raro con un ayor orcen$ae (ue el noral en la o0laci:n"

#n la tabla 2 se ues$ra el análisis de ardy-Being0erg, se descri0e la dis$ri0uci:n de las 7recuencias

7eno$íicas y alélicas" Para el olior7iso Ala-9Val se udo o0ser!ar en la o0laci:n a7ec$a 13 indi!iduos

+oocigo$os norales 8<<9, 2. indi!iduos +e$erocigo$os 8<C9 y 1E indi!iduos +oocigo$os raros 8CC9" Por

o$ro lado, en el gruo con$rol se de$erin: I indi!iduos +oocigo$os norales 8<<9, 2A indi!iduos

+e$erocigo$os 8<C9 y 21 indi!iduos +oocigo$os raros 8CC9" Resec$o a la 7recuencia del alelo <, ara el gruo

a7ec$os 7ue de N".@ y ara el gruo con$rol 7ue de N"3I, ien$ras (ue la 7recuencia del alelo C en gruo a7ec$os

7ue de N"@@ y en el gruo con$rol 7ue de N"A2" 'l realizar el análisis de c+i cuadrado ara cada o0laci:n se

es$a0leci: (ue los dos gruos es$án en e(uili0rio de ardy-Bein0erg y no eis$en di7erencias signi7ica$i!as en

cada uno de ellos" #n el gruo de indi!iduos a7ec$os del gen CS<3 se encon$r: .2 indi!iduos +oocigo$os

norales 8GG9, A indi!iduos +e$erocigo$os 8G'9 y I indi!iduos +oocigo$os raros 8''9" Por o$ro lado, en el

gruo con$rol se de$erin: .I indi!iduos +oocigo$os norales 8GG9, 3 indi!iduos +e$erocigo$os 8G'9 y .

indi!iduos +oocigo$os raros 8''9" Resec$o a la 7recuencia del alelo G, ara el gruo a7ec$os 7ue de N"I y

ara el gruo con$rol 7ue de N"E, ien$ras (ue la 7recuencia del alelo ' en gruo a7ec$os 7ue de N"2 y en el

gruo con$rol 7ue de N"1" 'l realizar el análisis de c+i cuadrado ara cada o0laci:n se es$a0leci: (ue los dos

gruos no es$án en e(uili0rio ardy-Bein0erg y eis$en di7erencias signi7ica$i!as en cada uno de ellos" #n

ca0io, ara el gen C<S=, en la o0laci:n de gruo a7ec$os se encon$r: 2N indi!iduos +oocigo$os norales

8CC9, 32 indi!iduos +e$erocigo$os 8C<9 y . indi!iduos +oocigo$os raros 8<<9" Por o$ro lado, en el gruo



11

con$rol se de$erin: .@ indi!iduos +oocigo$os norales 8CC9, E indi!iduos +e$erocigo$os 8C<9 y 1 indi!iduo

+oocigo$o raro 8<<9" Resec$o a la 7recuencia del alelo C, ara el gruo a7ec$os 7ue de N"A. y ara el gruo

con$rol 7ue de N"E, ien$ras (ue la 7recuencia del alelo < en gruo a7ec$os 7ue de N"3A y en el gruo con$rol 7ue

de N"1" 'l realizar el análisis de c+i cuadrado ara cada o0laci:n se es$a0leci: (ue los dos gruos es$án en

e(uili0rio ardy-Bein0erg y no eis$en di7erencias signi7ica$i!as en cada uno de ellos"

=e igual anera se realiz: una congruencia de da$os de los dos gruos de cada olior7iso, ara

de$erinar la asociaci:n (ue $ienen las !arian$es gené$icas en cada gen y es$a0lecer su ni!el de signi7icancia" #l

olior7iso G)3' del gen CS<3 resen$a un !alor de Z2 de @1"2)]] 8^N"NNN19" Por su ar$e, MnS?= <EC

o0$u!o un !alor de _2 de N"@) con 8;N".@9 y C<S= C22.< os$ro un !alor de Z2 de N"21 con 8;N"A@9, los cuales

no indican signi7icancia ero indican una rele!ancia en$re el gruo a7ec$o con el gruo con$rol os$rada en la

tabla 3"

Q or Ol$io, edian$e la rue0a de ?dds ra$io, (ue se descri0e en la tabla 4, se logr: de$erinar

(ue geno$io o alelo esecí7ico genera un riesgo rela$i!o en el desarrollo de la en7eredad de 'lz+eier,

adeás se o0ser!an los resul$ados de los di7eren$es olior7isos con sus riesgos rela$i!os resec$i!os" 6os

olior7isos de MnS?= <EC y CS<3 G)3' no resen$an un !alor rele!an$e de ?dds ra$io, sin e0argo C<S=

C22.< resen$a un !alor rele!an$e ara el +e$erocigo$o C< y ara el gruo con7orado or el +e$erocigo$o y

+oocigo$o raro C< Y <<, es$o (uiere decir (ue un indi!iduo (ue resen$e el alelo < $endrá I"1 !eces ás

riesgo en desarrollar la en7eredad de 'lz+eier (ue uno noral"



12

DISCUSIÓN

Mundialen$e, el desorden neurodegenera$i!o, en7eredad de 'lz+eier, cada !ez $iene ayor

re!alencia en o0laciones ancianas, de0ido a (ue las ersonas !i!en ás $ieo y el en!eecer se con!ier$e

en un 7ac$or de riesgo ayor y las ci7ras de incidencia se increen$an cada !ez ás2N"

#s$a en7eredad es$á carac$erizada or deencia, érdida de eoria rogresi!a, acuulaci:n de

lacas de ailoide y 7oraci:n de o!illos neuro7i0rilares en el encé7alo, rincialen$e en la cor$eza cere0ral y

el +iocao" 6a 7oraci:n de los o!illos neuro7i0rilares y las lacas generan una érdida neuronal rogresi!a

y la uer$e se roduce alrededor de los ) a 1N años desde el inicio de los sín$oas de la en7eredad" 'deás,

se +a !is$o (ue la en7eredad de 'lz+eier es un $ras$orno gené$icaen$e +e$erogéneo ya (ue es$a

en7eredad $iene un a$r:n de +erencia ul$i7ac$orial, deende de in$eracciones coleas en$re !arios

7ac$ores gené$icos y a0ien$ales." 6a agregaci:n y acuulaci:n de la ro$eína 0e$a-ailoide 8'L9 en el cere0ro,

uede de0erse a una ayor roducci:n neuronal de 8'L9, la disinuci:n de la ac$i!idad de las enzias

degradan$es de 8'L9 o al$eraciones en los rocesos de $ransor$e (ue circula 8'L9 a $ra!és de la 0arrera sangre-

cere0ro" 6os olig:eros 8'L9 a7ec$an las 7unciones siná$icas, ien$ras (ue las lacas ailoides 7i0rilares

deslazan y dis$orsionan los rocesos neuronales" =e igual anera es$os olig:eros in$erac$Oan con las

e0ranas y rece$ores de la suer7icie celular, al$erando las cascadas de $ransducci:n de señales, ca0iando

las ac$i!idades neuronales y ac$i!ando la li0eraci:n de ediadores neuro$:icos or la icroglia 8células

inunes residen$es9" 6as ro$eínas <au y U-sinucleína ueden au$o-ensa0larse ara 7orar olig:eros de

a$:genos y así 7orar grandes agregados in$raneuronales, deslazando organelos !i$ales in$racelulares2N"

'sí, la suer:ido disu$asa 8S?=9 es una ior$an$e enzia an$ioidan$e (ue in$er!iene en la

desin$oicaci:n de los radicales suer:idos21" #l daño de los radicales de oigeno li0res uede a7ec$ar a

neuronas a $ra!és de la !ía de eroidaci:n liídica del '= i$ocondrial, la cadena resira$oria y la ro$eína

de re$iculaci:n de los neuro7ilaen$os" =e igual anera se +a encon$rado relaciones del olior7iso Ala-9Val

del gen S?=2 en desordenes neurodegenera$i!osD así coo del olior7iso Ile-58Thr , de0ido a (ue

deses$a0iliza la in$er7ace $e$raérica de MnS?= y reduce su ac$i!idad enziá$ica" 'deás de osi0les



13

relaciones con en7eredades neurodegenera$i!as, es$e es$udio lo relacion: con neuroa$ía dia0é$ica en la

dia0e$es elli$us $io 1, en el cual encon$r: Onicaen$e asociaci:n con el olior7iso Ala-9Val con la

en7eredad" #s$udios realizados en la en7eredad de ParJinson22 y en desordenes deresi!os1N, ues$ran

osi0les asociaciones con la !arian$e Ala-9Val y ninguna asociaci:n con Ile-58Thr " #s$e olior7iso se +a

encon$rado enos del 1 en $oda la o0laci:n y en el es$udio de desordenes deresi!os no se o0ser!: en

ninguno de sus acien$es" #n el resen$e $ra0ao, ara Ile-58Thr no se o0ser!: el geno$io +oocigo$o raro CC

en ninguno de los gruos en es$udio, or lo cual no se realiz: ningOn análisis es$adís$ico y es$e no resen$a

ninguna relaci:n con la en7eredad de 'lz+eier" #l olior7iso Ala-9Val $iene una 7recuencia del alelo C

raro de N"A2 en la o0laci:n con$rol ayor (ue en la o0laci:n a7ec$a con N"@@, siguiendo el e(uili0rio ardy-

Bein0erg en los dos gruosD y al o0$ener los !alores de ?R se de$erin: (ue es$a !arian$e no resen$a

asociaci:n con la en7eredad de 'lz+eier de0ido a (ue los resul$ados 7ueron no signi7ica$i!os"

'l realizar el análisis del olior7iso Ala-73Val del gen CS<3 en un es$udio de la o0laci:n i$aliana23,

no encon$r: una asociaci:n signi7ica$i!a en$re la !arian$e y la en7eredad de 'lz+eier, así iso no se

encon$r: di7erencias es$adís$icas de las 7recuencias alélicas en los dos gruos es$udiados" #n o$ros es$udios se

+a o0ser!ado (ue el gen CS<3 (ue con$iene es$e olior7iso +a sido asociado con un ele!ado riesgo a la

susce$i0ilidad ara la en7eredad de 'lz+eier en o0laciones caucásicas" Sin e0argo, al igual (ue en el

es$udio de o0laci:n i$aliana, los resul$ados no ues$ran incidencia con el desarrollo de la en7eredad en

a:n2., 'leania2@ y olanda2A" #n es$e es$udio se udo o0ser!ar (ue $an$o en indi!iduos a7ec$os y con$roles,

eis$e una ayor 7recuencia del geno$io noral GG" 'l realizar e cálculo de la 7recuencia de ardy-Being0erg

se es$a0leci: (ue es$os gruos no se encon$ra0an en e(uili0rio, es$o uede de0erse a (ue eis$en ás

geno$ios norales (ue raros, or lo (ue se o0$ienen esos resul$ados" =e igual anera, al analizar el riesgo de

es$a !arian$e se o0$u!ieron !alores no signi7ica$i!os, (uiere decir (ue es$e olior7iso no osee un riesgo en

el desarrollo de la en7eredad de 'lz+eier, or lo (ue concuerda con los resul$ados (ue resen$aron en

o$ros es$udios"



1.

#n indi!iduos (ue +an 7allecido or la en7eredad de 'lz+eier se +a !is$o (ue oseen una gran

acuulaci:n de lacas seniles, (ue es$án con7oradas or la ro$eína L-ailoide" Genes coo C<S= (ue

sin$e$iza la ro$eína ca$esina =, la cual in$er!iene en la sín$esis de 'L, de:si$o y eliinaci:n" #s$a ro$eína se

+a !is$o ilicada en el roceso de degradaci:n de 'PP y la ro$eína <'" Por es$a raz:n uede ser (ue los

olior7isos generados en C<S= in$er!engan en la acuulaci:n de la ro$eína <' y o!illos neuro7i0rilares,

generando así la en7eredad de 'lz+eier1I" #n una u0licaci:n so0re deencia !ascular, de$erinaron (ue

el olior7iso del gen C<S= no $enía relaci:n con la en7eredad en la o0laci:n Woreana, a di7erencia de

o$ros es$udios realizados en o0laciones aleanas 8P T N"NNE912, 0ri$ánicas 8P ^ N"NN1913 o aericanas 8P ^

N"NN192)" #n el 2NNA se sugiri:, (ue la !arian$e oli:r7ica Ala-224Val del gen C<S= increen$a el riesgo

rela$i!o en la en7eredad de 'lz+eier1I" #n es$e es$udio caso-con$rol realizado en la o0laci:n ecua$oriana,

se es$a0leci: con el análisis de ardy-Bein0erg (ue los gruos se encon$ra0an en e(uili0rio" =e los da$os

o0$enidos el geno$io +e$erocigo$o C< es ás coOn en la o0laci:n de indi!iduos a7ec$os (ue en con$roles"

Siguiendo el a$r:n de análisis es$adís$icos, al de$erinar el riesgo rela$i!o del geno$io +e$erocigo$o C< 7ue

al$aen$e signi7ica$i!o, con un ?R de I 8%C T 3"2 - 1E"I9" Para el geno$io +oocigo$o raro <<, se o0$u!o

resul$ados signi7ica$i!os, con un ?R de E 8%C T N"E - I@")9 en los gruos analizados" #l iso análisis se realiz:

conun$aen$e con los geno$ios +e$erocigo$o C< y +oocigo$o raro <<, o0$eniendo un ?R de I"1 8%C T 3". -

1E"@9 al$aen$e signi7ica$i!o 8^N"NNN19D sugiriendo (ue ersonas (ue osean el alelo < $endrán I"1 !eces ás

riesgo en desarrollar la en7eredad de 'lz+eier (ue una noral" Por lo (ue es$a !arian$e oli:r7ica uede

deseeñar un ior$an$e rol 0iol:gico en la a$ogenia de la en7eredad de 'lz+eier"

=e0ido al iac$o (ue $iene en la sociedad es uy ior$an$e la in!es$igaci:n (ue se realiza ara

de$erinar la e$ioa$ogenia, diagnos$ico y $ra$aien$o de la #'" #s$os resul$ados odrán ser de gran ayuda

ara 7u$uras in!es$igaciones y es$a in!es$igaci:n eri$irá o0$ener un ayor en$endiien$o de la gené$ica de

la en7eredad de 'lz+eier y las osi0les in$eracciones en$re los di7eren$es 7ac$ores de la a$ogenia de la

en7eredad"



1@

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1I

<a0la 1" Resuen de los resul$ados o0$enidos de los $res di7eren$es geno$ios de cada olior7iso y la

dis$ri0uci:n de los alelos de la o0laci:n

G#n 1-(l2(r2(4 G#n(+-( 5 )# !a( 6 #n la -(bla!7n Al#l( 6

CST3 1G83A4a

G9G EN I1"NI G I@"1.

G9A E I"11 A 1."IA

A9A 12 1N"I1

CTSD 1C::;T4a

C9C A@ @I"@A C ))"N3

C9T .1 3A"E. T 22"E)

T9T @ ."@

MnSOD 1T<=C4a

T9T 111 1NN T 1NN

C9T - - C -

C9C - -

MnSOD 1T>C4a

T9T 21 1I"E2 T .1"..

C9T @N .@"NA C @I"@A

C9C .N 3A"N2



1E

<a0la 2" 'nálisis ardy-Bein0erg ara los olior7isos es$udiados

Gen Po0laci:n Geno$ioo" =e

indi!iduos

>recuencia

Geno$íica

>recuencia

eserada

>recue

aléli

MnS?=

<EC

'7ec$os

<< 13 23"21 N"23 N"2N N".@

<C 2. .2"IA N".3 N".E

CC 1E 33"E3 N"3. N"31 N"@@

<o$al @A

Con$roles

<< I 1."@@ N"1@ N"1@ N"3I

<C 2A .)"2) N".) N".)

CC 21 3I"1I N"3I N"3I N"A

<o$al @@

CS<3 G)3'

'7ec$os

GG .2 )@"NN N")@ N"A@ N"IN

G' A 1N")1 N"11 N"32

'' I 1."2E N"1. N"N. N"2N

<o$al @A

Con$roles

GG .I I)"2) N"I) N"I1 N"EN

G' 3 @".@ N"N@ N"1I

'' . )"2) N"N) N"N1 N"1N

<o$al @@

C<S=

C22.<

'7ec$os

CC 2N 3@")1 N"3A N".1 N"A.

C< 32 @)"1. N"@) N".A

<< . )"1. N"N) N"13 N"3A

<o$al @A

Con$roles

CC .@ I1"I2 N"I2 N"I1 N"ENC< E 1A"3A N"1A N"1I

<< 1 1"I2 N"N2 N"N1 N"1N

<o$al @@



2N

<a0la 3" 'nálisis de c+i-cuadrado ara los di7eren$es genes es$udiados con sus resec$i!os olior7isos"

Gen X² ρ

MnSOD T9C

Genotipo T/T T/C C/C

0.57NS

0.45Afectos 13 24 19

Controles 8 26 21

CST3 G73A

Genotipo G/G G/A A/A

51.27* 0.00001Afectos 42 6 8

Controles 48 3 4

CTSD C224T

Genotipo C/C C/T T/T

0.21NS

0.65Afectos 20 32 4

Controles 45 9 1

Halores calculados con 1 grado de li0er$ad, ] signi7ica$i!o, S no signi7ica$i!o



AN

<a0la ." 'nálisis de ?dds ra$io ara los $res olior7isos

G#n G#n(+-( A#!+( N164C(n+r(l#

N164

ORa ><6 IC

b P

MnS?= <EC

<< 13 823"29 I 81."@9 1r

<C 2. 8.2"E9 2A 8.)"39 N"A N"2 - 1"A N".2S

CC 1E 833"E9 21 83I"29 N"A N"2 - 1"A N".2S

<C Y CC .3 8)A"I9 .) 8I@"@9 N"A N"2 - 1"@ N"3AS

CS<3 G)3'

GG .2 8)@"N9 .I 8I)"39 1r

G' A 81N")9 3 8@"@9 2"3 N"@ - E") N".3S

'' I 81."39 . 8)"39 2"3 N"A - I"1 N"32S

G' Y '' 1. 82@"N9 ) 812"I9 2"3 N"I - A"2 N"1AS

C<S= C22.<

CC 2N 83@")9 .@ 8I1"I9 1r

C< 32 8@)"19 E 81A".9 I"N 3"2 - 1E"I N"NNN1]

<< . 8)"19 1 81"I9 E"N N"E - I@") N"N2@]

C< Y << 3A 8A."29 1N 81I"29 I"1 3". - 1E"@ N"NNN1]

] signi7ica$i!o,S

no signi7ica$i!o,a odds ra$io,

0 in$er!alos de con7ianza,

r re7erencia



AN

F?@ra B R#@l+a)( )# la #!@#n!a!7n !a-lar )#l -(l2(r2( Ile-58Thr )#l ?#n MnSOD

>igura1" Reresen$aci:n del geno$io +oocigo$o noral << de la !arian$e oli:r7ica en la secuencia de '="

F?@ra :B R#@l+a)( )# la #!@#n!a!7n !a-lar )#l -(l2(r2( Ala-9Val )#l ?#n MnSOD

a9 09



AN

c9

>igura 2" Reresen$aci:n grá7ica de a9 geno$io noral <<, 09 geno$io +e$erocigo$o <C y c9 geno$io noral

CC de la secuenciaci:n cailar de MnS?= 8'la-EHal9"



2.

F,?@ra 3B A?r@-a2,#n+( )# 2@#+ra #!@#n!,a)a )#l -(l,2(r,2( Ala-9Val )#l ?#n MnSOD !(n la #!@#

#l so7$are Se(Scae, ues$ra de una anera ás ráida la u0icaci:n del olior7iso en análisis, conun$a

MnS?= u0icada en la ar$e suerior" Se ueden realizar !arios análisis al iso $ieo y de$erinar así el geno$io



2@

F?@ra ;B R#@l+a)( )# la r#+r!!7n !(n la #n2a EagI

>igura ." Resul$ados de la res$ricci:n con la enzia EagI" Re!elaci:n en gel de agarosa al ., corresondien$e

al gen CS<3" #l rier y Ol$io ocillo corresonde a ladders de 1NN y @N ares de 0ases resec$i!aen$e" 6as

0andas del segundo ocillo ues$ran ser del geno$io +e$erocigo$o G', del cuar$o ocillo al geno$io

+oocigo$o raro '' y el sé$io ocillo al geno$io +oocigo$o noral GG"

F?@ra <B R#@l+a)( )# la r#+r!!7n !(n la #n2a AciI

>igura @" Resul$ados de la res$ricci:n con la enzia AciI" Re!elaci:n en gel de agarosa al ., corresondien$e al

gen C<S=" #l rier y Ol$io ocillo corresonde a los arcadores de eso olecular de 1NN y @N ares de

0ases resec$i!aen$e" 6as 0andas del sé$io ocillo ues$ran ser del geno$io +e$erocigo$o C<, del oncea!o

ocillo al geno$io +oocigo$o raro << y el decio(uin$o ocillo al geno$io +oocigo$o noral CC"

ac bio espe 047124 polimorfismo

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