CURSO:

HISTOLOGIA

TEORIA 1:

METODOS DE ESTUDIO DE LAS

CELULAS Y LOS TEJIDOS

UNIVERSIDAD PERUANA CAYETANO HEREDIA

FACULTAD DE ESTOMATOLOGIA

Roberto Beltrn Neira

Departamento Acadmico de Medicina, Ciruga y Patologa Oral

TIPOS DE CELULAS

EUCARIOTICAS

Ncleo delimitado por doble membrana

Histonas asociadas a DNA

PROCARIOTICAS

Ncleo sin envoltura

No histonas

TOMA DE MUESTRA

JSL

PREPARADOS HISTOLOGICOS

FASES:

1 FIJACION

2 INCLUSION

3 CORTE

4 COLORACION

FIJACION

Evita autodestruccin por enzimas

(autolisis) o por bacterias.

Insolubiliza las proteinas

Endurece el tejido para preservar la

morfologa y la composicin

qumica

FIJACION

Fijadores:

Formaldehido 10%(Aldehido

Frmico, Formol )

FIJACION DOBLE. ME

Glutaraldehido (Aldehido

Glutrico) 2%- 6%

Tetraxido de Osmio

INCLUSION

Deshidratacin

Batera de Alcoholes en

grado creciente

70%, 80%, 90% y Alcohol

Absoluto

Formol Deshidratacin Deshidratado

INCLUSION

Diafanizacion (Aclaramiento)

Lquidos usados: Xilol

Necesidad de un liquido miscible en agua y

parafina

Extrae los lpidos

Tejido se torna Translcido

Deshidratado Aclarado

INCLUSION

Inclusin Propiamente

Da consistencia firme a los tejidos

(cortes finos y uniformes)

Sustancias: Parafina (MO)

Resinas Epoxi:

Epon.(ME)

Muestra en parafina fundida (60

grados C)

La temperatura evapora el Xilol

INCLUSION

Inclusin Propiamente

CORTE

MICROTOMO

ESPESOR: MO => 3 -8 um

ME => 0,02 - 0,1 um

CRIOSTATO

Evita pasos antes de

parafina, la

congelacin no

inactiva las enzimas,

no elimina lpidos

JSL

COLORACION

FASES

Lamina

porta Objetos Muestra

A.- Extensin agua (45grados C)

JSL

COLORACION

Desparafinizacin:

Xilol: Disuelve la

parafina.

Hidratacin:

Bateria de Alcholes

de grado decreciente

Coloracin Propiamente

Coloracin propiamente

El tejido es de por s incoloro

Colorantes: son: - cidos

- bases

Forman sales con los radicales

ionizables

Elementos (organelas,

molculas, etc.)

Basfilo: Elemento que se tie

con colorantes bsicos

Acidfilo: Elemento que se tie

con colorantes cidos

COLORANTES

Colorantes Elementos

Bsicos: Hematoxilina Nucleoprotenas

cidas

Ribosomas

Azul de Metileno

Azul de Toluidina Glicoproteinas

Acidos: Eosina Protenas

Fucsina Acida Citoplasmticas

Orange G

TINCIN CON HEMATOXILINA Y EOSINA

La tcnica bsica en el

laboratorio de Histologa

consta de dos etapas de

tincin: pase por

Hematoxilina y pase por

Eosina.

JSL

ACIDO PERYODICO DE SCHIFF (PAS)

Glicgeno, mucina, y

membranas basalesRojo a purpura

Hongos.Rojo a purpura

Ncleo...Azul

JSL

TRICROMICA DE MASSON

NUCLEO..NEGRO

MUSCULO, CITOPLASMA Y

QUERATINAROJO

COLAGENO...AZUL O VERDE

JSL

SUDAN III

Tejido adiposo:

naranja

JSL

METACROMASIA

Colorantes bsicos de

anilina: Azur A, Azul de

toluidina y Azul de metileno.

Se usan para identificar los

Proteoglucanos.

Presentan metacromasia:

mucina, matriz del cartlago,

y los grnulos de las clulas

cebadas Contenido de los grnulos: - Heparina

- Histamina

Azul de Toluidina

Tie los grnulos de color rojo JSL

PROCESAMIENTO DE TEJIDOS DUROS

DIENTE

Descalcifica con Acido Nitrico al 10% DESGASTE

JSL

HUESO

JSL

Deshidratado de las muestras

A continuacin volvemos a deshidratar los

cortes para preservarlos y hacer

duraderas las muestras

JSL

Montaje de las muestras

Finalmente, cubrimos los "portas" con una

delgada lmina de vidrio (cubreobjetos) en

la cual colocamos una gota de medio

adhesivo

JSL

MICROSCOPIO OPTICO

PARTES: - Mecnica y Optica

Optica

Condensador: Proyecta un cono de luz

sobre el objeto

Objetivo: Proyecta imagen aumentada

sobre el ocular

Determina el Lmite de Resolucin

Ocular: Ampla mas

Proyecta la imagen sobre: La

retina, pantalla, placa

fotogrfica

JSL

MICROSCOPIO OPTICO

Lmite de Resolucin

Mnima distancia que deben existir entre dos puntos

para que aparezcan individualmente, es de 0,2 um

Aumento Total

Aumento del X Aumento del = 1200X

Objetivo Ocular

MICROSCOPIO ELECTRONICO

Posee una elevada resolucion 1,0 nm

UNIDAD REPRESENTACION VALOR

Micrmetro1um = 0,001mm

Nanmetro1nm = 0,001um

Basado en el principio de usar un haz de

electrones en vez de rayos luminosos. JSL

Cromatina Indice de Actividad Celular

Ncleo poco teido

DNA poco condensado

> superficie de contacto

Actividad

Ncleo bien teido

DNA muy condensado

< superficie de contacto

< Actividad

INTERPRETACION DE IMAGENES

JSL