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Métodos rápidos alternativos a la ISO 6579 para el análisis de Salmonella
Alfredo Corujo FernándezProject Manager Food SafetyNutreco España
TEMAS• Métodos rápidos: Consideraciones generales
• Sistemas basados en pruebas ELISA:
ELFA
VIAS
DIFUSIÓN
• Sistemas basados en, pH (movilidad)
• Sistemas basados en separación Inmunomagnética
• Sistemas basados en Bacteriófagos
• Sistemas basados en Hibridación
• Sistemas basados en PCR
• Sistema serotipado basado en microarrays
• Sistema serotipado/genotipado por REP-PCR
• Tendencias futuras en la detección de patógenos: Biosensores
Métodos Rápidos: Consideraciones generales“Se puede decir que método rápido es aquel que esmás rápido, sencillo o confiable que lo convencional”.
Clasificación en áreas de acuerdo a lo que se busca:Sistemas para facilitar la toma de muestras
Métodos para ayudar al procesamiento de las muestras
Sistemas de cuantificación microbiológica
Métodos para identificación y cuantificación de microorganismos
Sistemas especiales para análisis de muestras de aguas, ambientales ysuperficies
Sistemas de identificación mediante métodos moleculares
Métodos inmunológicos para detección y/o cuantificación de microorganismos
Otros métodos misceláneos
Métodos Rápidos: Consideraciones generalesCARACTERISTICAS DE UN MÉTODO RÁPIDO IDEAL
Preciso
Rápido y productivo
Económico
Aceptable
Realización simple
Entrenamiento
Reactivos comunes
Reputación de la compañía
Buen servicio técnico
Requerimientos de espacio y utilidad óptimos
Agriculture R&D
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA
Agriculture R&D
Valores para el control negativo: OD 0.030 Valores para el control positivo: OD 0.900-1.700. Se considera la muestra POSITIVA: OD 0,200.
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
ASSURANCE GOLD SALMONELLA EIA
Resultados el día siguiente
Para alimentos procesados. Alimentos crudos& altamente contaminados necesitanincubación adicional de un día al otro.
Dos opciones para lectura de losresultados del test:
Los resultados pueden ser leídos visualmenteo por instrumentos con lectora de microplaca.
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow)
REVEAL (Neogen)
Reveal Reveal SE
Reveal 2.0
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow)
Singlepath (Merck)
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Matrices:
•Ingredientes
•Alimentos
•Muestras ambientales
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (Lateral Flow)VIP (Biocontrol)
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (ELFA)
Sistema VIDAS (Biomerieux)
Salmonella
Matrices:
•Ingredientes
•Alimentos
•Muestras ambientales (Calzas, Heces....)
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS VIA
- +
Sistema TECRA (Biotrace)
Salmonella
Matrices:
•Ingredientes
•Alimentos
•Muestras ambientales L+D
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
SISTEMAS BASADOS EN INMUNOCONCENTRACIÓN + ELISA (ELFA)
Sistema VIDAS (Biomerieux)
Salmonella
Matrices:
•Ingredientes
•Alimentos
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN PRUEBAS ELISA (difusión)
1-2 TEST (Biocontrol)
Salmonellas móviles
Matrices:
•Ingredientes
•Alimentos
•Muestras ambientales
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN, pH (MOVILIDAD)
OSRT (OXOID)
Salmonellas móviles
Matrices:
•Ingredientes
•Alimentos
•Muestras ambientales
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Cada test contiene 2 tubos :Tubo A (Azul) contiene Rappaport- Vassiliadis modificado como medio selectivo, y Lysine Iron Cystine Rojo neutro como medio indicador.Tubo B (Rojo) contiene Lysine Deoxycholate modificado medio selectivo y Brilliant Green modificado como medio indicador.
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN SEPARACION INMUNOMAGNETICA
Sistema DYNAL BIOTECH (Dynabeads)
Salmonella spp+
Matrices:
•Ingredientes
•Alimentos
•Muestras ambientales L+D
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN SEPARACION INMUNOMAGNETICA
Matrices:
•Ingredientes
•Alimentos
•Muestras ambientales L+D
Sistema Pathatrix
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
Métodos alternativos para la detección de SalmonellaSISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS
Matrices:
•Ingredientes
•Alimentos
•Muestras L+D
VIDAS UP SALMONELLA
CONFIRMACIÓN
Agriculture R&D
Métodos alternativos para la detección de SalmonellaSISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS
RapidCheck Select S.enteritidis (SDIX)
Matrices:
•Ingredientes
•Alimentos
•Muestras ambientales
Agriculture R&D
Métodos alternativos para la detección de SalmonellaSISTEMAS BASADOS EN BACTERIOFAGOS
RapidCheck confirmación S.enteritidis (SDIX)
Confirmación de cepas
S. enteritidis
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIÓNMétodos alternativos para la detección de Salmonella
HybriScan Salmonella (Sigma- Aldrich)
Muestras con OD% < 10 son consideradas negativas.
Muestras con OD% > 10 < 20 son consideradas dudosas.
Muestras con OD% ≥ 20 son consideradas positive.
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIÓNMétodos alternativos para la detección de Salmonella
Lumiprobe 24 (EUROPROBE)
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN HIBRIDACIÓNMétodos alternativos para la detección de Salmonella
GeneQuence (NEOGEN)
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN PCRMétodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN Real Time PCR (BAX System)
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN RT- PCR
iQ-CHECK
(BIORAD)
LIGTHCYCLER
(ROCHE)
MX3005P
(STRATAGENE)
ABI PRISM 7900HT
(APPLIED BIOSYSTEMS)
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN PCR (Assurance GDS)
Sistema Multiplex (Biocontrol):
Matrices:
•Ingredientes
•Alimentos
•Muestras ambientales
Combina concentración de muestra y detección de DNA
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
SISTEMAS BASADOS EN PCR (Led Active Blue)
Sistema Fotoactivación ( ib-Applied science):
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
EMA:Ethidium bromide monoazide
PMA: propidium monoazide
Agriculture R&D
SISTEMAS SEROTIPADO BASADO EN MICROARRAYS
PREMITEST SALMONELLA
CHECK- POINTS
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
AT READER
Agriculture R&D
Sistema serotipado/genotipado por REP-PCR
Muestra positiva
REP-PCR
Identificación cepas de Salmonella.
Indentificación de fuentes de contaminación ambiental
Métodos alternativos para la detección de Salmonella
Agriculture R&D
Tendencias futuras en la detección de patógenos
SISTEMAS BASADOS EN BIOSENSORES
•Staphylococcus aureus •Salmonella spp. •E. coli•Yersinia enterocolitica, •Bacillus cereus• Clostridium perfringens •Listeria monocytogenes•Shigella spp. •Vibrio spp. •Campylobacter
Oligonucleotidos específicos de virulenciaE.coli O157:H7 (hly A, eae A)
Salmonella spp (inv A, agf B)
CONCLUSIONES
• Existen diferentes métodos alternativos más rápidos que la ISO.
• La elección del método dependerá de la matriz a analizar.
• El método seleccionado debería estar validado para la matriz
problema.
• Para matrices muy contaminadas se recomiendan protocolos de 48horas.
• Existen pocos métodos alternativos para matrices procedentes de laproducción primaria, se necesitan métodos rápidos para este tipo demuestras.
• Las industrias procesadoras de alimentos deberían implementarmétodos alternativos validados de cara a cumplir la legislación futuraen cuanto al control de Salmonella en producto final.
Agriculture R&D
MUCHAS GRACIAS