EDUCACIN CONTINUADA EN EL LABORATORIO CLNICO

Ed Cont Lab Cln 2007; 10:41-49

MONITORIZACIN DE FRMACOSJacobo Daz PortilloServicio de Anlisis Clnicos, Hospital INGESA de Ceuta.

INTRODUCCION

El objetivo fundamental de la monitorizacin del tratamiento farmacolgico, es el ajuste de la dosis del frmaco en funcin de sus concentraciones plasmticas, y se basa en la relacin proporcional entre dichas concentraciones y la respuesta far-macolgica del frmaco cuando llega a la biofase (Figura 1).

El medicamento llega al plasma, tras ser absorbi-do en el tracto gastrointestinal o directamente por va parenteral, donde puede permanecer libre o unirse a protenas. Cuando llega al lugar de accin puede interaccionar con receptores no efectivos o efectivos, originando su accin farmacolgica solo cuando llega a la biofase (Figura 2).

Figura 1. Relacin entre la dosis del frmaco, la concentracin plasmtica y la respuesta farma-

colgica.

Figura 2. Interaccin del frmaco con los receptores

PRINCIPIOS BASICOS DE FARMACOCINTICA

El principal objetivo de la farmacocintica clnica es la individualizacin posolgica u optimizacin de los tratamientos, a fin de alcanzar la mxima eficacia teraputica con la mnima incidencia de efectos adversos.

Los principales parmetros farmacocinticos son:

Intervalo teraputico

Viene definido por la concentracin plasmtica mnima txica (CmT) y la concentracin mnima efectiva (CmE). Es el rango de concentraciones plasmticas del frmaco que el tratamiento es eficaz y se observa un mnimo de efectos adver-sos no deseados en la mayora de los pacientes. Cuanto ms estrecho sea este intervalo, mayor necesidad de monitorizacin (Figura 3).

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Volumen de distribucin (Vd)

El volumen de distribucin representa el espacio en el que se distribuye el medicamento. Se calcu-la mediante la relacin entre el aclaramiento (Cl) y la constante de eliminacin (K); o por medio de la relacin entre la dosis administrada (D) y la con-centracin plasmtica del frmaco a tiempo cero [F]:

Cuando un frmaco como la ciclosporina o tacro-limus se distribuye no slo por el compartimento vascular, sino tambin por otros compartimentos o es fijado por clulas (eritrocitos, leucocitos) o molculas, se aprecia una dilucin del compar-timento plasmtico por un aparente aumento de volumen, ya que la dosis es constante (Vd=9 L/Kg). La digoxina se fija adems a la musculatura esqueltica y miocrdica, al hgado y al rin, lo que justifica su elevado volumen de distribucin (7-9 L/Kg). Los antidepresivos tricclicos (amitrip-tilina, nortriptilina, imipramina y desimipramina) son muy lipoflicos, y por tanto tambin presentan un gran volumen de distribucin (6-30 L/Kg). El resto de los frmacos frecuentemente monitori-zados (teofilina, lidocana, fenobarbital, fenitona, carbamacepina, cido valproico, aminoglucsi-dos, metotrexate, y litio) presenta un volumen de distribucin ms pequeo.

Figura 3. Intervalo teraputico (IT): rango de concentraciones entre las cuales el tratamiento es eficaz (TE). (Cp = concentracin plasmtica)

Aclaramiento

Mide la eficacia con la que el organismo es capaz de eliminar el frmaco. Se define como la canti-dad de plasma que se encuentra libre del frmaco en una unidad de tiempo.

Cl = v / [F] = Velocidad de eliminacin / con-centracin del frmaco.

Cl = D / ABC = Dosis / ABC

ABC: es el rea bajo la curva que representa la concentracin plasmtica frente al tiempo

La eliminacin de algunos frmacos que saturan los sistemas enzimticos, sigue el modelo de Mi-chaelis-Menten. Es interesante establecer una diferenciacin entre los frmacos que presentan una cintica lineal y los que se ajustan a una ci-ntica no lineal dependiente de la dosis adminis-trada.

La mayora de los frmacos presentan una re-lacin lineal entre las dosis administradas y los niveles plasmticos obtenidos (cintica lineal), es decir, que aunque se modifique la dosis las caractersticas farmacocinticas de absorcin, distribucin, metabolizacin y eliminacin del fr-maco no varan. Sin embargo, existen algunos frmacos como la fenitona (difenilhidantona) que saturan los sistemas enzimticos encargados de su metabolismo a concentraciones prximas a las teraputicas, es decir que al modificar la dosis administrada se alteran dichas caractersticas far-macocinticas, presentando una cintica de tipo NO LINEAL (cintica dependiente de la dosis). La velocidad de eliminacin de estos frmacos es in-dependiente de la concentracin, y su represen-tacin frente a la velocidad es una parbola, por lo que tambin se denomina cintica NO LINEAL o cintica de ORDEN CERO (Figura 4).

El modelo para representar la eliminacin de es-tos frmacos es el de Michaelis-Menten, siendo Vm la velocidad mxima de transformacin, y Km la constante de Michaelis (concentracin de sus-trato a la cual la velocidad enzimtica es la mitad de la velocidad mxima).

La teofilina, digoxina, fenobarbital, carbamacepi-na y cido valproico son frmacos que presentan una cintica lineal, mientras que la fenitona se ajusta a un modelo no lineal dosis-dependiente, y por tanto su eliminacin sigue la cintica de Mi-chaelis-Menten. Sin embargo, si las concentracio-nes alcanzadas son muy altas, como ocurre en la intoxicacin o sobredosificacin por teofilina

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tambin se puede alcanzar una saturacin de las enzimas hepticas encargadas de la biotransfor-macin del frmaco (cintica NO LINEAL-ORDEN CERO).

Figura 4. Diferencias en la concentracin plas-mtica para una misma dosis de frmaco segn siga una cintica lineal (de primer orden) o no

lineal (de orden cero).

La fenitona es el frmaco de eleccin en la epi-lepsia y en las crisis generalizadas tnico-clni-cas (estatus epilptico). Su farmacocintica de eliminacin no se ajusta a una cintica lineal (pri-mer orden), por lo que es necesario conocer en cada paciente la constante de Michaelis-Menten (Km) y la velocidad mxima de metabolizacin (Vmax)(cintica no lineal-orden cero).

Michaelis y Menten formularon la teora del es-tado estacionario para explicar la cintica de reaccin de los enzimas no alostricos. En far-macocintica, se habla de cintica de Michaelis-Menten al conjunto de ecuaciones que describen la velocidad de metabolizacin de un frmaco en un proceso saturable en funcin de dos constan-tes, la velocidad mxima (Vm) y la constante de Michaelis (Km). Esta teora se puede aplicar a la cintica de algunos medicamentos como la teofi-lina, que presenta una cintica de primer orden a dosis teraputicas, y una cintica de saturacin (orden cero) a dosis txicas (intoxicacin aguda). Esta teora supone que cuando un substrato, en este caso un frmaco (F) se transforma en un pro-ducto o metabolito (M) en presencia de un enzima especfico (E), ste se une al frmaco formando un complejo enzima-substrato (E-F), que se des-dobla en E ms metabolito, segn la ecuacin:

La representacin grfica de la velocidad de me-tabolizacin-eliminacin del frmaco (v) frente a la concentracin de sustrato [F] es una curva hiperblica donde se observa como la velocidad mxima de la reaccin (Vmax) se alcanzar cuan-do todo el enzima se encuentre unido al frmaco. Del anlisis matemtico de la curva hiperblica [F] frente a v se deduce una expresin que define el comportamiento farmacocintico de algunos frmacos;

Es la ecuacin de Michaelis-Menten, donde:

Vm = velocidad mxima de metabolizacin y representa el nmero de enzimas metaboli-zadoras

Km = constante de Michaelis Km = K2 + K3 / K1

De igual forma, el aclaramiento de un frmaco se define como el volumen de plasma que es total-mente liberado de frmaco por unidad de tiempo, y se expresa por la ecuacin:

donde Cl es el aclaramiento y v es la velocidad de eliminacin. Utilizando la expresin de la ci-ntica de Michaelis-Menten, podemos expresar el aclaramiento en funcin de la Km y Vm

Si igualamos ambas expresiones, obtenemos una expresin matemtica que define el aclaramiento en trminos generales;

La constante de Michaelis (Km) es una magnitud caracterstica de cada frmaco. Es numricamen-te igual a aquella concentracin de frmaco con la cual la velocidad de reaccin (v) es la mitad de la velocidad mxima (Vm).

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En la prctica, podemos diferenciar dos situacio-nes distintas en funcin de la concentracin de frmaco.

Cuando trabajamos con pequeas concentracio-nes de frmaco ([F] 0), la ecuacin se simplifi-ca, y como el valor de Km es mucho mayor que [F], entonces Km + [F] = Km. En estas circuns-tancias la expresin se reduce a

Es decir, a bajas concentraciones de frmaco la velocidad de la reaccin es directamente propor-cional a su concentracin plasmtica, por tanto el orden de la reaccin ser uno (PRIMER ORDEN) e independiente de su aclaramiento plasmtico (Cl). Es lo que ocurre con la teofilina a dosis tera-puticas.

La cintica de PRIMER ORDEN es un proceso en el cual la cantidad de frmaco metabolizado, excretado o distribuido es directamente propor-cional a la concentracin [F] de dicho frmaco. En una cintica de primer orden la fraccin bio-disponible, el aclaramiento, el volumen de distri-bucin y el tiempo de vida media son constantes e independientes de la dosis administrada o de la concentracin srica del frmaco.

En otras ocasiones la concentracin de frmaco es muy alta, y por tanto el valor de Km es despre-ciable frente a [F]; Km + [F] [F]. Simplificando, la velocidad de reaccin se hace prcticamente constante, e igual a la velocidad mxima de meta-bolizacin (v Vm), por tanto en estas condiciones la velocidad de reaccin se hace independiente de la concentracin de frmaco, es decir se tratara de una reaccin de ORDEN CERO. Por tanto, la cintica de orden cero es un proceso que ocurre con una velocidad constante, independiente de la concentracin plasmtica del frmaco. En este caso, la expresin matemtica del aclaramiento se reduce a Cl = Vm / [F] (Figura 5). Es el caso de la sobredosificacin o intoxicacin por teofilina.

La induccin enzimtica puede condicionar el tipo de cintica. El fenobarbital induce su propio me-tabolismo (enzimas microsomales) de forma que sus niveles de concentracin srica no siguen una cintica de primer orden (orden cero).

Figura 5. Cintica de primer orden y cintica de orden cero. (Vm = velocidad mxima de meta-

bolizacin; Cl = aclaramiento del frmaco; Km = constante de Michaelis; [F] = concentracin del

frmaco).

Tiempo de vida media

Es el tiempo necesario para que la concentracin plasmtica del frmaco se reduzca a la mitad. Viene definida por siguiente expresin matemti-ca en cintica lineal o de primer orden. Se calcula a partir de la constante de eliminacin Ke:

Expresin matemtica que representa la cintica de 1 Orden, para una concentracin C a tiempo t1, siendo C0 la concentracin a t0.

Para una concentracin: C/2, tendremos que

multiplicando por -1 esta ecuacin y restando de la anterior

pero (t2-t1) = t1/2

(vida media) 0,693 = ke x t1/2

de donde t1/2

= 0,693 /Ke (Figura 6).

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Figura 6. Concepto de tiempo de vida media. (C

o = concentracin a tiempo 0; Ct = concentra-

cin a tiempo t; Ke = constante de eliminacin; t

1/2

= tiempo de vida media)

PRINCIPIOS BSICOS DE MONITORIZACIN

La monitorizacin de frmacos, se basa en los principios de farmacocintica, que es el estudio del destino en el tiempo del frmaco y sus me-tabolitos. La determinacin de niveles plasmti-cos de frmacos se realiza en el llamado estado de equilibrio estacionario (ingestin y excrecin constantes), el cual se alcanza una vez transcu-rrido entre 4 y 5 veces el tiempo de semivida de eliminacin o vida media del frmaco (Figura 7). En el caso de la digoxina para un paciente con funcin renal normal la vida media de la digoxina es de unas 36 horas, por tanto ser necesario que transcurran entre 5 y 7 das (36 x 4-5/24=6-7,5 das).

Figura 7. Estado de equilibrio estacionario. Se produce cuando la cantidad de medicamento que se administra durante un intervalo de tiempo es igual a la que se elimina, mantenindose cons-

tantes los niveles plamticos del frmaco.

La respuesta biolgica a un frmaco esta influen-ciada por una serie de factores o circunstancias que pueden ser:

Falta de cumplimiento en el tratamiento

Ante un efecto teraputico insuficiente, con con-centraciones plasmticas inferiores a las terapu-ticas hay que distinguir entre falta de cumplimien-to y la malabsorcin o metabolismo acelerado del frmaco. Para ello se efectuarn determinaciones seriadas del frmaco durante un periodo de tiem-po equivalente a 5 vidas medias. Si se observa un aumento progresivo en la concentracin plasm-tica, descartamos la malabsorcin o aceleracin del metabolismo.

Absorcin

La absorcin de un frmaco en el tracto digestivo est influida por: la forma galnica, la solubilidad, pKa del frmaco, la administracin conjunta de otros frmacos, etc. Cuando se sospecha trastor-nos en la absorcin de un determinado frmaco se deben realizar determinaciones plasmticas seriadas tras una dosis nica de administracin parenteral, y compararlas con las obtenidas cuan-do el frmaco se administra por va oral. El clcu-lo de la concentracin mxima (Cmax) y vida me-dia plasmtica (t

1/2) permiten excluir un problema

de malabsorcin. Esta grfica permite el clculo de la biodisponibilidad, o rea bajo la curva AUC (Figura 8).

Figura 8. Comparacin de la administracin de un frmaco por via oral y por via parenteral para calcular la biodisponibilidad. (Cp = concentracin plasmtica; Cmx = concentracin mxima; tmx = tiempo en el que se consigue la mxima con-

centracin; AUC = rea bajo la curva).

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Fijacin a protenas plasmticas

El frmaco, una vez absorbido pasa al plasma, donde se une en mayor o menor grado a las pro-tenas plasmtica, segn el siguiente equilibrio:

La fraccin no unida a protenas (frmaco libre) es la que puede atravesar la barrera endotelial y alcanzar las clulas diana. La afinidad de los frmacos por las protenas est condicionada por las caractersticas fsico-qumicas tanto del fr-maco como de las protenas plasmticas. As los antidepresivos tricclicos (amitriptilina, nortriptilina y imipramina) son muy lipoflicos, y por tanto po-seen un gran volumen de distribucin aparente. Se unen fuertemente a las protenas plasmticas, sobre todo a la albmina, a los leucocitos, alfa-1-glicoprotenas y lipoprotenas. Mientras que ta-crolimus es altamente liposoluble y se distribuye extensamente en tejidos, como refleja su elevado volumen de distribucin (1300L). El componen-te farmacolgicamente activo del tacrolimus es la fraccin plasmtica no unida a protenas. En plasma, el frmaco se encuentra mayoritariamen-te unido a protenas plasmticas (88 %), princi-palmente albmina y alfa-1-glicoprotena cida. En sangre, tacrolimus se une intensamente a los eritrocitos de tal forma que las concentraciones obtenidas en sangre total son de 10 a 30 veces ms elevadas que en el plasma.

En la farmacocintica de la ciclosporina A juegan un papel fundamental las lipoprotenas plasm-ticas y, probablemente, en el potencial teraputi-co y txico del frmaco. La ciclosporina A no es directamente soluble en sangre por su superficie hidrofbica. En el compartimiento extravascular la ciclosporina A se une a los puntos hidrofbicos de las protenas de la membrana celular y en el compartimiento vascular en un 40 %, aproxima-damente se une a los eritrocitos y leucocitos y el resto, un 60 % circula unido a las lipoprotenas plasmticas (HDL y LDL). Una pequea porcin restante se asocia a la fraccin plasmtica pro-teica (no lipoproteica), y menos de un 5 % de la ciclosporina A se encuentra libre en el plasma acuoso. Contradiciendo un axioma farmacolgico mediante el cual el efecto de un frmaco guarda una relacin directa con el porcentaje del mismo libre en plasma (no unido a protenas), en el caso de la ciclosporina A no parece existir una corre-lacin entre la concentracin libre del frmaco y

los efectos teraputicos o txicos del mismo. Sin embargo, esto tambin sucede para la concentra-cin de ciclosporina A en sangre total o plasma. Por tanto, en humanos la actividad biolgica de la ciclosporina A depende de las concentraciones de lpidos plasmticos y, por tanto, de su unin a las lipoprotenas.

Casi todos los procedimientos analticos utiliza-dos en este momento, miden concentraciones de frmaco total (libre + unido), aunque a veces es necesario determinar las dos fracciones. Esto se consigue con mtodos cromatogrficos, o utili-zando saliva como muestra (fraccin libre).

La fraccin libre de un frmaco se define como la proporcin del total del frmaco en el plasma que no se encuentra unido a protenas. Es decir, es el resultado del cociente entre las concentraciones plasmticas libre y total

Fraccin libre (FL) = [Frmaco libre] / [Frmaco total]

Su valor vara entre cero (todo el frmaco est unido a las protenas), y 1 (no existe frmaco uni-do a las protenas). Hay frmacos muy unidos a las protenas plasmticas, y por tanto con una fraccin libre prxima a 0 como la ciclosporina (FL=0,02), fenitona y cido valproico (FL=0,1), carbamacepina (FL=0,25). Otros apenas unidos como la digoxina (FL=0,75), aminoglucsidos (FL=0,75-1,0), y el litio (FL=1,0).

Los lmites teraputicos de los frmacos en los que se ha demostrado correlacin entre su concentracin plasmtica y la eficacia clnica, se basan en la concentracin plasmtica total. Generalmente la fraccin libre del frmaco (FL) permanece prcticamente constante, justificando la determinacin de la concentracin plasmtica total como gua teraputica. Sin embargo, en de-terminadas situaciones, se puede modificar nota-blemente el grado de unin de los frmacos a las protenas plasmticas transportadoras, aumen-tando su fraccin libre, producindose una rpi-da disociacin entre sus concentraciones total y libre. En estas circunstancias los lmites terapu-ticos establecidos pueden modificarse. Estas cir-cunstancias que afectan a los lmites teraputicos pueden ser: fisiolgicas, farmacolgicas y pato-lgicas.

47J. Daz Portillo. Monitorizacin de frmacos

1.- Fisiolgicas

Descenso de la albmina plasmtica (neonatos, gestantes y ancianos).

Aumentos de los cidos grasos libres (ejercicio fsico, ayuno y embarazo).

2.- Farmacolgicas

Administracin simultnea por va intra-venosa de frmacos que compiten por la unin.

Utilizacin de frmacos cuya unin a pro-tenas es concentracin-dependiente (di-sopiramida, cido valproico, paracetamol, AAS o lidocana).

3.- Patolgicas

Estados que cursan con hipoalbuminemia.

Sndrome nefrtico.

Cirrosis heptica (insuficiencia heptica).

Quemaduras.

Aumento de la alfa-1-glicoprotena cida (infarto agudo de miocardio, neoplasias y enfermedades inflamatorias crnicas).

Aumento de compuestos endgenos (bili-rrubina).

En estas circunstancias est justificada la deter-minacin de la concentracin plasmtica de la fraccin libre en frmacos que se unen con gran afinidad a las protenas plasmticas (fraccin libre inferior al 0,20) es decir que se encuentran unido en ms de un 80 % a las protenas plasmticas.

En algunas situaciones clnicas es fundamental la monitorizacin de la fraccin libre del frmaco, el ejemplo ms evidente aparece con la politerapia cido valproico-fenitona. Estara indicada en los casos siguientes:

1. Cirrosis heptica (hipoalbuminemia)

2. Sndrome nefrtico (hipoalbuminemia)

3. Insuficiencia renal (cambios de afinidad)

4. Administracin simultnea con cido acetil-saliclico (desplazamiento de la unin a prote-nas plasmticas)

Metabolismo del frmaco

Generalmente se metabolizan en hgado y rin, por lo que variaciones fisiopatolgicas en estos sistemas afectan el metabolismo del frmaco. El conocimiento de la metabolizacin de los frma-cos puede ser importante cuando sus metaboli-tos presenta una actividad farmacolgica similar al frmaco original. As, la primidona es un pro-frmaco del fenobarbital. El principal metabolito de la carbamacepina es el 10-11 epxido, que presenta una actividad anticonvulsivante superior a la carbamacepina. La procainamida se meta-boliza a N-acetil-procainamida, metabolito activo que presenta una vida media superior, y por tanto pueden aparecer fenmenos de intoxicacin que no se pueden confirmar analticamente si slo monitorizamos la procainamida. La amitriptilina es un antidepresivo tricclico cuyo principal meta-bolito, la nortriptilina es tambin activo.

Excrecin del frmaco

La ruta ms importante de excrecin es la va re-nal, por tanto una insuficiencia renal tiende a au-mentar la concentracin plasmtica del frmaco. Otra va de excrecin que puede variar la con-centracin plasmtica es la va biliar (circulacin enteroheptica) (Figura 9).

Figura 9. Absorcin, biotransformacin y excre-cin de los frmacos.

48 J. Daz Portillo. Monitorizacin de frmacos

INDICACIONES PARA LA MONITORIZACIN

La monitorizacin de frmacos no es aconsejable ni factible para todos los frmacos. Los criterios a emplear para monitorizar las concentraciones plasmticas de un frmaco deben basarse en las propiedades intrnsecas del principio activo y del estado clnico del paciente. La monitorizacin de las concentraciones plasmticas de un frmaco es de gran utilidad para valorar la efectividad cl-nica en los siguientes casos:

1. Elevada variabilidad interindividual.

2. Estrecho margen teraputico (como ocurre con la digoxina)

3. Ausencia de correlacin dosis-eficacia te-raputica.

4. Relacin entre las concentraciones de fr-maco en fluidos biolgicos y su eficacia-toxi-cidad.

5. Factores patolgicos. Entre ellos los ms importantes por su importancia en el metabo-lismo y excrecin de los medicamentos estn las enfermedades hepticas y renales.

6. Vigilancia teraputica del tratamiento pres-crito. Sospecha de incumplimiento de la pres-cripcin.

7. Interacciones farmacolgicas producidas en la politerapia.

8. Sospecha de alteraciones en la biodisponi-bilidad de la forma farmacutica.

Sin embargo, si los datos suministrados por el la-boratorio no se contemplan bajo una adecuada perspectiva clnica, la monitorizacin de los nive-les plasmticos de los frmacos pueden introdu-cir ms confusin que claridad y llevar a tomar decisiones arriesgadas sobre la dosificacin.

Toma de Muestra

1. La toma de muestra debe hacerse siem-pre en el valle (inmediatamente antes de la prxima dosis).

2. El paciente debe de haber alcanzado el es-tado estacionario (5 vidas medias)

3. Las muestras obtenidas durante la perfusin IV se deben obtener del miembro opuesto.

4. Para los frmacos de distribucin lenta (am-plio volumen de distribucin), hay que espe-

rar una completa distribucin del frmaco (las muestras para la determinacin de digoxina deben obtenerse despus de al menos 12 ho-ras tras la ltima dosis oral).

TCNICAS ANALTICAS PARA LA MONITORI-ZACIN DE FRMACOS

Tcnicas inmunoqumicas

1. EMIT (Enzyme Multiplied Inmunoassay Technique)

Es un ensayo donde se establece una competen-cia entre el frmaco marcado con enzima (F-E) exgeno o trazador y el frmaco libre F (presen-te en el suero), por su unin con un anticuerpo especfico (unin competitiva). La concentracin del frmaco se determina midiendo la cantidad del complejo F-E libre, sin unir al anticuerpo, que queda en el medio de reaccin. La medida se realiza por espectrofotometra visible, ya que el complejo F-E libre reacciona con un sustrato especfico coloreado cuya absorbancia es direc-tamente proporcional a la concentracin del fr-maco en la muestra.

2. Inmunoensayo de polarizacin de fluores-cencia FPIA

Se incuban anticuerpos especficos (Ac), con fr-maco del suero F y con el trazador T (frmaco unido a la fluorescena). Esta mezcla de reaccin se excita con luz polarizada. Se usa un sistema emisor que emite luz polarizada vertical para excitar el fluorforo, el cual emitir una fluores-cencia con longitud de onda diferente de la ori-ginal. El sistema ptico de deteccin solo mide luz polarizada que retorna verticalmente que es la que procede nicamente de la unin trazador-anticuerpo (T-Ac), que por su elevado volumen molecular, rota lentamente. El trazador libre T rota tan deprisa que emite fluorescencia en todas las direcciones y no se capta. Al ser un ensayo competitivo, existe una relacin inversa entre la cantidad de frmaco en la muestra del paciente F y la intensidad de la luz polarizada recibida por el detector ptico del instrumento.

Tcnicas cromatogrficas

1. HPLC (High presin liquid cromatography)

El especimen se inyecta en columnas de diferen-

49J. Daz Portillo. Monitorizacin de frmacos

tes materiales que aportan una gran superficie de absorcin, y se hace circular por la columna apli-cando presin constante, que aumenta el flujo. Las molculas del especimen, atraviesan la co-lumna a diferente velocidad segn sus caracters-ticas de solubilidad y polaridad. Posteriormente, mediante un detector (fluorescente, UV, electro-qumico o incluso espectrometra de masas) uni-do a un ordenador, se mide el tiempo de retorno, que es caracterstico de cada molcula en las mismas condiciones de presin y temperatura. La identificacin se realiza comparando el tiempo de retorno obtenido con estndares internos. La concentracin del analito se relaciona con el ta-mao del pico de actividad que mide el detector.

2. Cromatografa de gases - espectroscopia de masas

Implica dos tcnicas: cromatografa lquida de ga-ses y espectroscopia de masas. En la primera, los

compuestos se calientan a fase de gas. Despus se pasan por una columna que contenga la fase estacionaria (hidrocarburo, silicona). La separa-cin se basa en la capacidad de cada compuesto para absorberse sobre la fase estacionaria, que depender de sus caractersticas fsico-qumi-cas. Como sistema de deteccin se usa la es-pectroscopia de masas, en que la molcula se bombardea con una corriente de electrones de alta intensidad capaz de fragmentar la molcula. El patrn de fragmentacin es caracterstico de cada molcula y puede ser comparado con los patrones de fragmentacin almacenados en un ordenador.

BIBLIOGRAFIA

David S. Jacobs, Dwight K. Oxley y Wayne R. Demott. Laboratory test Handbook. Hudson. Lexi-comp, inc. 2001

Daz J, Fernndez MT, Paredes F. 770 Pregun-tas y respuestas: determinaciones bioqumicas. Unidad y valoracin clnica. Ed. Masson. 2004

Fuentes X, Queralt JM. Bioqumica clnica: Aspectos semiolgicos. Barcelona. Ed. Mayo 1993.

Jacobs DS, Oxley DK, Demott WR. Laboratory test Handbook. Hudson. Lexi-comp, inc. 2001.

Henry JB. Diagnstico y tratamiento clnicos por el laboratorio. Barcelona. Ed Salvat. 1998.

Kaplan M, Pesce A. Qumica clnica. Buenos Ai-res. Panamericana. 1990.

Wallach J. Interpretacin clnica de las pruebas de laboratorio. Ed Masson. 2002.

EDUCACIN CONTINUADA EN EL LABORATORIO CLNICO

COMIT DE EDUCACIN

M.C. Vill (presidenta), D. Balsells, M. Gass, J.A. Lillo, A. Merino, A. Moreno, M. Rodrguez

Marzo 2007