R E P O R T A J E

Transferencia de tecnología sobre ejerciciosinterlaboratorios en fangos activos c0m0 sistemade control de calidad en IaEDARpor: Natividad Fernández, del GBS y SAV-DAM-Pridesa: Laura Isac, del GBS y RNM310 de la universidad de sevilla;

Fernando Estévez, jefe del Departamento de Aguas Residuales de Emasesa; iarlos Grandío, responsable de Laboratorio de

la EDAR de Huelva (Aguas de Huelva); Andres Zornota.responsable de Laboratorio de la EDAR Quart-Benager (UTE

Avsa-Egevasa); Eva Rodríguez, del GBS y Seafsa

Grupo Bioindicación Sevilla (GBS)

Web: www. grupobioindicacionsevilla.com

El posodo 22 deoctubre de 2OO4 iuvo lugor en seüllo

uno iornodo técnico sobre tronlerencir¡ dc ncnologío

sobre eiercicios interloboroüorios en foqOe ocfircs co-

mo sistemo de control de colidod en h EDAR' Orgoni-

zodo por el Grupo Bioindicoción seülh, esüe encuen'

tro reunió o profesionoles del sector Poro conocer,

comporor y conlrostor los resultodos del protocolo de

onólisis microbiolégico del fongo octivo seguido por

este grupo, odemós de poro profundizory difundir es-

to moterio.

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-oc\

l. lnfroducciónI análisis de fangos activosproporciona al exPlotador de

la EDAR una información

muy útil, tanto para el control rutina-rio del proceso, como paralaoptimi-zacióndel mismo.

Este tipo de estudios requiere unpersonal especializado del que no sedispone en la mayoría de los casos.Nos encontramos, Pues, ante unanálisis no estand arizado, comple -

jo, pero que aportaunavisión rápidadel funcionamiento del Proceso dedepuración y que nos Permite Pre-ver alteraciones en el mismo.

Los ejercicios de intercompara-ción entre laboratorios se presentancomo una herramienta básica Paraunificar criterios, sobre todo en aná-lisis microbiológicos. Nos brindan,además,la oportunidad de compararlos resultados y métodos, con losobtenidos sobre la misma muestrapor otros laboratorios, más o menosespecializados en la materia.

TECNOLOGIADELAGUA

Sobre esta base Y con el objetivo

principal de "estandarizar" los aná-

lisis microbiológicos en el fango ac-

tivo. GBS organiza ejercicios inter-

laboratorios abiertos a todos los

profesionales del sector interesados

en iniciarse o profundizar en este ti-

po de estudios. ofreciendo la opor-

tunidad de afrontar un "Problema

real" (muestra) con un Manual de

Trabajo conocido y compararlos re-

sul tados obtenidos con la valora-

ción efectuada, sobre esa misma

muestra. por otros profesionales.

La documentación básica Para la

realización del trabajo, aportada por

GBS. es un protocolo detal lado Ymu)'completo que constituye el pi-

lar para in ic iarse en el estudio de

análisis de fangos activos. Los re-

sultados obtenidos por parte de to-

dos los participantes se recogen en

un informe junto con fotografías,

consultas a expertos y apreciacionesparticulares (dependiendo de los ca-

sos). haciendo de este documento

un material formativo bastante útilpara el aprendizaje de los técnicosmenos expertos, así como un com-plemento para aquellos que Ya hantrabajado en esta materia.

En estas Jornadas de Transferen-cia se pretende resumir los resulta-dos obtenidos en los ejercicios delpasado año y contrastar las dificul-tades surgidas a profesionales quese inician en este tiPo de análisis,profundizar en la identificación deorganismos menos frecuentes, asícomo dar aconocer las conclusio-nés obtenidas Por Parte de GBS conimplicación en el protocolo de tra-bajo.

2. lmportqnciq del confrolmictobiológico poro logestión óprimo de unoEDAR

Después de efectuar un breve re-corrido por 1o que considera los um-brales de 1o que hoY constituYe elcontrol microbiológico en una

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VNCY'IflOYICO'IONJSJ,

'sssoJuetuslrJ serrelJsq ffil epugrJscrJrluenc,{ ugrcecrJlluepl r

'dI Iep olnslgc I

:sopeuude seluernSrs sol ue spEJ-nlcnJlse Bpenb Jelloilssep 3 oruJoJ-q Iop ug]nezrueSro e1 'rrcep sg

'(g1) o8ueg ep ecrpul operu€ilolxru odrl ep ocrpu, un ue opezrleu-eluru 'opecr¡rldrurs ofeqeJl ep etuel-srs un euerluoJ'onrlce o8ue¡ un opsrsrlguz 1a 1er3a1ur €uxoJ ep ueproq?enb ofeqerl ep sufoq orleno ue operu-se1d'opolgru etse ep ollorresep [A'866I apsep opuezrl?er u^oll odnr8else enb ugrcerudruooJelut ep sorcrc-refe so1 elueJnp upurnbpe ercueued-xe .,{ ugrcenlele el u serce¡8 epesrl-er.,{ eperoqele oprs eq selued¡crgudsol e epeeluuld u;8o1opo1eu el 'SgC

rod sopezrueS¡o sorcrc¡efe sol epolerJuoc os33le ug'srsrl9ue Iep sop-e¡edeqns solurlsrp sol uefocer esenb 1e ue ,( opernlcnJlse uerq eluud-rcrued 1e rod reluerurldrunc e sopel-lnser ep eged un oruoc ¡se

'(o[uqur1

ep lunuetu) erelc ofeqe4 ep e;8o¡op-oleru ¿un seluudrcruud sol e euorJ-¡odo¡d rcpezwe?Jo otuslue8ro 1eenb elqefesuoce se sorJoleJoqelJolurorcrc¡efe un ep uglnazrIeeJ ?l ug

' (g'V'E'Z) olsr,re¡d osn Io ered op-erdo-rde se enb uuJlsenuep enb sen-¡tefqo ssrcueprla supe¡ode,( opep-rle^ elueusprqep'?llr^es ugrcBcrp-ulolg odnrg rod opezrleer opol?ruun elue solrruJluocue sou'ugrseco u1-se ug'solrlc? so8ue¡ ep socrSglorq-oJcrru srsrlgue sol ep ossc Io se ol.u-oc'sopezrleruJou sopolgur uos ousopecrlde sopolgur sol opu?nc s9r-olur Iurcadse erqoc ecrlcgrd elsE

' (I) spsnulluoc eurroJ apsopBllnser sol ep pBprl?J el r?rlsolu-ep e-red ours sopot?ru sol J¿prlBAered o¡gs ou'sor¡oluJoqelJelur sol-se ue ugrcedrcrgud e¡ u€pueruoceJ'leuorceuJelur otuoc IeuorJeu olrq-rug Io ue oluel 'ugrcecr¡r1rec ,( ugrc-elrpeJJe ep sorusrueErg 'ocrucgl

ogeduresep Iep errrlefqo BIcuopIAeeun ]s3 reuelqo ,( socrryleue sopolgrueluBrpeu sopruelqo sor(usue ep sop-etlnser sol relorluoc ep pepqrqrsod?l sopsseJelur sorJoleJoqel sol e Jec-er¡o se sorJoleJoqelJelur orcrc¡efeun ep Ipluetuepun¡ onrlefqo 1e'(e¡rn

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srsrlgue e¡ed secruJgl selenu sel epoJrunJ Ie Jeluese enb so1 erqos serel-rd so1 ugJes'sor¡ole¡oqelJalur sorc-rc¡efe sol ep oluerune 1e ,( seuorcec-Iqnd sel ep oluerurnSes 1e'ofeqerlep sodnr8 ep ugrceerc el 'puprlec epseuorJecr¡qnd sel ep olueuoJ Ie'sel-erJoletu sorpou,( ugrceurJoJ u s¿p-BCrpop souorsJo^ur s?l op oluetueJc-ul IE'socrlcgrd elueululuoruepunJours' s osrrrrgpe)e elueruspsrueJlxaJes ueqep ou selsendo¡d,{ secuenesoAenu so[ 'eluetuurlsseJeN

ueJeprsuoc enb sopolgru 'rrcap se',,soAl1n1o¡,e r( so¡,tlueAerd,, solced-se ercer{ ¡ese¡8o¡d eJJoqep es ozeldorpeu e o oturxgrd ornln¡ un ug

'ocr8g¡orq oseco¡d ns ep relncrgudua ,t '¿yqg eun ep opelse Iep 6,soAI1-?rrurJuoc,, sopellnseJ ue usJoqrues-ep enb solceds¿ ue u?suq es eleqerles ,(oq enb so1 uoo seJlpu, soT

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Ie ue seuorJerJe^) ssuJelxo sssn?crod soprcnpord sorqrueo sol uoJugrceleJJoc ,( uorcsleJ ouonJ ?unJeuel uBrJeqep sopol9ru solsg

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. Aniálisis de la comunidad proto-zoaria.

. Valoración general de la calidaddelfangoDentro de cadauno de estos aPar-

tados, se definen los distintos pará-mehos objeto de determinación: ín-dice biótico de fangos (SBI, SludgeBiotic Index), índice de Shannon,cuantificación de bacterias filamen-tosas, etc.

La entrega del manual de trabajoy de los formatos de recogida de re-sultados se efectúa de forma simul-tánea al reparto de la primera mues-tra, con la que cada participante re-cibe un código permanente a lo lar-go de todo el circuito, imprescindi-ble para la identificación de los re-sultados de cada ejercicio.

La intervención en estos ejerci-cios ofrece laposibilidad de asistir alas reuniones, nonnalmente anua-les, en las que se ofrece un intere-sante foro de encuentro de profesio-nales del sectoq en el que se debatenlas particularidades de las muestrasy las incidencias del análisis.

Generalmente, en üchas reunio-nes se propone la sistemática de losejercicios para el siguiente año,abierta a los comentarios y modifi-caciones que puedan ProPoner losparticipantes.

En esta ponencia se mostraron Ydiscutieron los resultados más rele-vantes con relación a los ejerciciosrealizados durante el ci¡cuito 2003-2004; principalmente, se abordaroncuestiones de tipo metodológico, enel gue las muestras analizadas fue-rontres (Figuras 1' 2 Y3).

El análisis de los resultados secentró principalmente en aquellosparámetros más y menos coinciden-tes entre el total de participantes, asícomo en la eficacia del método Paradescribir la muestra adecuadamentey extraerconclusiones sobre el esta-dodel sistema.

Algunos de los Procedimientos otécnicas relacionadas con los pará-mehos más divergentes, fueron tra-tados con mayorprofundidad en Po-nencias posteriores (procedimien-tos de cuantificación de organismos

TECNOLOGIADELAGUA

R E P O R T A J E

Frgiro l. Eiercicio correspondiente o diciembre de 2003.

Noto: Los imogenes fotogróficos oqui moshodos hon sido reolizodos por Grupo Bioindicoción Sevillo

y AndÉs Zornozo.

Frglr! 2. Eiercicio conespondienle o bbrero de 20O4.

Noro: Tobto conespondienb o los resulbdos medios esümodos de lo muesho del segundo eiercicio y olgunos

imoger¡es bbg.oficos (A: Formoción de uno lorvo blohoco; B: Tipo l8ó3 en tinción Grom; C: Orgonismo

perpnec¡enC ál cornple¡o Vorticello infusionum en desequilibrio osmólicof .

Flgro 3- Eiercicio correspondienle o mo¡o de 20O4.

l.lot: Toblo correspondienb o los resulbdos medios estimodos de lo muesho del brcer eiercicio y olgunos

Irtg.n* t"rrg¿ftLt {A: Arcello sp. en vislo orol y de perfrl;.B: Thuricolo kellicottiono en lórigo que olbergo

o dc ¡ndi"¡<lm; C: Tipo02l N de morfiologio celulordiscoidolinvivof-

Res¡Jtados nredios estimadog de la fiuestra

In¿¡oe Oe fango (lF)

Categoria bacleriana

ldentifrcacón de fi lanpnlos(dornhantes)

Ebclos de lo€ flamentos

Densktad mbrofaunaapmxirnada

InO¡<- ¿e Msdmi (SBl,

shrdge bi<ltic index)

Clas€ Madorú

t¡o sp enconra<hs

Gnpodoriliante

73 ("Bueno")3

T 0041, ffalisoomer¡o0ac{srñydrossis

Disgregaciün1.102 x 10o ind L-l

I

Clase I10

Amebae tesláceasbuen furpionambnto

Resultdos rned¡os esllmados de la muesfa

lnO¡e Oe farge (lF)

Categoria baderianakhrfificación de filarentc

(dorninarres)

Ebdc de bs f,larnentm

Densilad r*rofiatnaaproxinada

lnO¡:e Oe lJladon¡ (SBl,slrdge t*¡tic index)

Clase lvtadoni

i.lo sp enconfa<lasCilno dornanante

Rerxtniento segrn Madoñi

55 ('ltegulat")

4

T 1 702J Heri¡wnenoüacbr,UnCro$$is/ T 1863

üisgregac{ún üotr'tlarYturt¡ide¿

3.1sx10t ird L-l

I

Glase I

13

Baderiéfagos sés¡l€s

Muv@

Res¡.üados nEdaos estimadm de la fir¡es&a

In*> Oe f{tgp (lF)

Careggia bacieriana

ktenfi¡caoiln de fibner*os(dorrú|ar[es]

Ehclcde losflarerúos

Demitad n*crofauaaproxinada

lnOC Oe liladoni {SB¡.sfrdge bbtic kxhx)

Cfase lladod

i.lP sp encootradas

Crrpo doc*r¡anb

84 {qümo"}2

T 170r yTú2tN

llo aprecia$es2,9x106 ird L-t

9 ó l 0

Ctaüe It0

Atestáceas/B. ttu¡hs

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filamentosos, repercusión del siste-

ma de conservación de una muestra

de fango activo sobre las caracterís-

ticas macroscópicas, concepto "tur-

bidez" de la muestra' etc.).

4. Descripción de lclsdificultodes surgidos Porolo porficipoción en losinterlqborotorios Porpersonqs inexPerfEs

Carlos Grandío, resPonsable de

Laboratorio de la EDAR de Huelva

(Aguas de Huelva), exPlicó a modo

de resumen que la intervención so-

bre la descripción de las dificultades

surgidas para la participación en los

interlaboratorios por personas inex-

pertas en el emPleo de técnicas de

bioindicación consistió en un breve

detalle sobre el perfil en cuanto a los

conocimientos y grado de formación

del factor humano' Para continuar

con los medios materiales y de equi-

pos con que está dotado el laborato-

rio, al objeto de situar a los partici-

pantes de las jornadas, en el escena-

rio en que se desarrolla la experien-

cia profesional del ponente. A conti-

nuación, indicó la manera en la que

tuvo conocimiento de GBS Y como

entabló contacto con el mismo.

Una vez aPortada esta informa-

ción de carícter general, el ponente

entró de forma Pormenotizada en

los detalles sobre las dif icultades

con que se encontró al afrontar los

interlaboratorios, pasando por la va-

loración de la documentación apor-

tada en cuanto a densidad, compren-

sión y cumplimentación de las hojas

de trabajo; finalizando con una va-

loración personal sobre su partici-

pación en esta intercomParativa.

4.1. DocumenlaciónPara la realización de dichos in-

terlaboratorios se nos apottauna do-

cumentación que consta de:. Manual de trabajo.. Clavesidentificativas.. Índices bióticos.

Concepto bioindicación Y notas

bioindicadoras.Fotos de protozoos en fangos ac-

tivos.

R E P O R T A J E

Dicha documentación es muy

completa ya que aParte de incluir

una guía sobre como hemos de cum-

plimentar las distintas hojas de tra-

bajo, con claves identificativas tan-

to para bacterias filamentosas como

para protozoos. También nos Pro-porciona una amPlia información

del significado que tiene la obten-

ción del índice de Fango, índice de

Shannon y el índice de Madoni.

A continuación se aportan nocio-

nes sobre bioindicación, describien-

do los problemas que Pueden causar

la presencia de diversas bacterias fi-

lamentosas 1' de los parámetros aso-

ciados a la presencia de las mismas.

Asimismo, se hace hincaPié en el Pa-pel bioindicador de los protozoos.

Para finalizar, se adjuntaun com-

pleto mater ia l fotográf ico, sobte

protozoos en fangos activos, que in-

.lu1 . las características taxonómi-

cas. funcionales y ecológicas de los

mismos.En el manual de t rabajo se nos

hace una descriPción, de forma muY

completa. de cómo debemos fratat

las muestras para su posterior obser-

vación microscópica, y los procedi-

mientos operativos a seguir parala

t inción de bacter ias f i lamentosas

sobre frotis f i jo (t inción de Gram,

t inción de Neisser Y t inción de

PHB) .A cont inuación se desarrol la la

metodología a seguir Parala cum-

plimentación de las hojas de trabajo(son cuatro). con las cuales l legare-

mos a una I'aloración final del fango

activado analizado:. En una primera hoja lo que se va-

loran son las características ma-

croscópicas Y microscóPicas del

fan-eo: puntuando en función de

las dist intas característ icas del

mismo (más o menos turbidez,

mejor o peor sedimentabil idad,etc. ). la suma de las distintas pun-

tuaciones nos dará una Puntua-ción f inal que será el Indice de

Fango. que nos ProPorcionaútuna idea aProximada de los Por-centajes de reducción de SS,

DQO 1'DBO' que Podamos tener

en Ia planta.

Comenta el Ponente que el desa-

rrollo de este análisis le resultó

bastante sencillo, aunque en un

principio sí que le surgieron du-

das a la hora de valorar turbidez,

sobre todo en el tramo baja-me-

dia ya que las muestras normal-

mente estaban en el tramo de 15-

20 NTU (medido en turbidíme-

tro) y la maYoría de los Partici-pantes la consideraban como ba-

ja. Lamisma diferencia surgió

con la valoración de los flóculos

en suspensión, en el mismo tra-

mo bajo-medio, atribuYendo co-

mo posible causa el deter ioro

que sufre la muestra al ser trans-

portada. En el resto de caracte-

rísticas del fango a valorar, tanto

macroscóPicas como microscó-

picas no tuvo Problemas' Ya que

las observaciones Y Pruebas que

hay que hacer (medida de flócu-

los, punción de los mismos, etc')

son sencillas.. Evaluación de las bacterias fila-

mentosas: Esta es la hoja de tra-

bajo en la que mayores dificulta-

des encontró este ParticiPante,pues como expuso, al disPoner de

un microscoPio óPtico de camPo

claro pero no con contraste de fa-

ses, la identificación morfoló gica

de algunas bacterias le resultó

muy difícil de determinar, Por no

tener la suficiente definición a la

hora de distinguir sePtos celula-

res, constr icciones en los mis-

mos, el tamaño celular o la mor-

fología.Un ejemPlo de lo anteriormente

comentado es lo que le sucede al

ident i f icar bacter ias con creci-

miento epifítico tales como los

t i p o s 1 8 5 1 , 0 6 7 5 , Y 0 0 4 1 , q u e

son comúnmente Gram ligera-

mente Positivas, Neisser negati-

vas y PHB negat ivas, Y que no

puede distingufu Por su tamaño

celular al no tener la suficiente

cal idad óPt ica. Otro Problemasurgido es la necesidad de con-

tar con contraste de fases Parapoder observar la refringencia

de los gránulos de azufre tras

tinción.

TECNOLOGIADELAGUA

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-rruguox?l sepsprun s?l ue eJslc el-ueueluercrJns epenb ou enb ecr391-oJroru peprlrqerre¡. ue¡E ul ue BcIp-e¡ oldecuoc else op ugro?oqde u¡ uepellncrJrp 3l 's?ec9tsel seqelus sslep osec Ie ug 'selsrlo¡d ep ugIceJIJIl-uepl sl ue I€rcuese olueluele oulocolsendo¡d ?LI es ,,etcedseo¡Jotu,, epoldecuoc Ie eluetueluerce¿ 'elueru

-leuorcrp¿rl eurruoperd ocrEg¡o¡-JOrU OrJelrJc Ie seecglsel seqetue epsercedse ep socrlsguSurp sol uA

'stellqgq soqclp ep seluelrod-rur sgru soozolo¡d sol otuoc seJol-ne sounS¡e rod sepeJeplsuoc opuels

'soe)glsel soqeuo ue socr69¡o¡our socr¡slrelooro3 'y o.rn6r¡

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'seJlseJJel s13uq9q sol ue seunluoc,(nur uos seecglsel seqatue se-I

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u9!tu!ls!P nsue{llrnl enb soilutouoxDl

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',.so1e¡duroc,{nu¡ socr¡grEoloJ sox-eue uoc opeluerue¡druoc olle opol,{ soozolord ep oruoc 'serralceq ep ot-u?l seuorceJrJrluepl ue sopBJluoJueseruelqoJd ¿ seuorcnlos ueelue¡d asenb ou rs 'sopruelqo sopellnsal solap socrlslpqse solep soun Jpuodu ueelueue¡drurs uelslsuoc ou anb'epez-rl?ue uJ]senruepsc ep soprlru¡e seur-JoJul sol ap erldure,( epul¡etap ,{nuugrcsruJoJur eun euellqo es u9lqr.uBl

'seluedrcrlrud sguep sol ep solueltu-rcouoc ep lo^ru I3 Jelse Jsluelulrod'opezrleeJ Iuuosred ozren¡se Iepel¡¿du enb er('opur8ol eq ol o¡,rlef-qo Ie enb oEenl epsop Á (UVOS) ut-ue1d rru ue ?rcuerclJe ror(eu¡ uoc ¡e[-eqer1 repod e¡ed sor¡useoou uglcelu-JoJul e soluelrulcouoc sol rutnbpe

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R E P O R T A J E

Figuro 5. Especies del género Vorticello, identificodos en lo muestro de febrero de2004.

ó. Obietivos y ProPueslospqrs lo reolizoción de loiesión interloborotor¡o2004-2005

Para Eva Rodríguez, resPonsablede Laboratorio EDAR Tablada (Se-afsa) en Sevilla, el estudio del fangobiológico de la EDAR rePercute di-rectamente en un mejor entendi-miento de los procesos de Planta Yde la optimizacióndel Proceso.

Lareallzación de la sesión inter-comparati v a 2003 -2004 ha permitidoaplicarel Manualde Tfabajo de GBS,donde se especifican todos los análisisnecesarios para obtener una descrip-ción biológica de la muestra a estu-diar. Esta aplicación nos ha permitidomejorar distintos apartados del Ma-nual, así como plantear nuevas posibi-lidades y tendencias de estudio.

Estas mejoras se han solventadomediante tres vías.

6.1. Aiuste de pará_me]nosen las hoias de trabaio

En la evaluación del fango se in-cluyen categorías extremas alos valo-res medios de los intervalos. Se consi-dera "macroscopía" igual a cero cuan-do se produce levantamiento de lamanta de fangos. La turbidez no pue-de determinarse con equipo de medi-da (pues incluiría en su determinaciónla valoración de microflóculos, loscuales están recogidos en offo apatta-do distinto en la macroscoPía). Seap ortu án foto grafías orientativ as p a-ra ajustar los rangos de turbidez,ta-maño, estructuray textura (Figura 6).

' Opérculo/pseudostoma: Termi-nal, subterminal.

. Color: Transparente, aglutinada.

. Dimensiones: Diámetro testa,longitud.

. Pseudópodos: Tipo lobópodo, ti-po filópodo.

5,2. Eierciciointerlqborqtorios febrero2OO4 y mqyo 2OO4

La muestra estudiada en el ejerci-cio de Febrero presentaba relativacomplejidad en 1o que a la identifi-cación de protozoos se refiere, dadala presencia de una gran variedad deespecies dentro del grupo de vorti-celas (Figura 5). Este gruPo, bas-tante frecuente en fangos activados,engloba numerosas especies de lascuales algunas son poco habitualesy su identificación entraña cierta di-ficultad, debido a la similitud exis-tente entre ellas, requiriendo, Por

tanto, un determinado nivel de ex-periencia por parte del analista.

Igualmente ocurre en la muestradel ejercicio de mayo, en la que apa-recen especies cuya identificaciónpresenta discrepancias por parte delos analistas debido a su compleji-dad, necesitándose para ello el usode claves que pongan de manifiestosus características morfológicas di-ferenciales.

El autor estudia las característi-cas físicas de cada una de las esPe-cies encontradas en estos ejerciciosy aporta unas claves para su identifi-cación. basándose en:. Forma y disposición del macro-

núcleo del organismo.. Tamaño del zooide.. Número de líneas transversales

para el caso de vorticelas.Caracteriza de la misma forma

especies como Lembadion lucens,Prodoron sp. y Holophrya sP.

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c.v.AQUADULAS C.V,INFUSIONUM

BAJA MEDIA ALTA

Figuro ó. Fotogrofíos orientotivos de lo voloroción de lo turbidez del clorif icodo. Diferencios en lo oprecioción de lo groduoción de lo probeto,

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En la evaluación de microfaunabacteriana hay necesidad de revisarlos apartados de filamentos y proto-zoos tras los recuentos. Es necesariorcalizar un estudio de forma inde-pendiente sobre las bacterias fila-mentosas encontradas en el espaciointerflocular: identificación y cuan-tificación.

En la evaluación de la microfau-na protozoaria no es necesario dis-tinguir géneros de Rotíferos Y Ne-matodos para el cálculo del SBI. Sise distinguen, se incluirán en el cál-culo de H. Los ciliados carnívorossólo contribuyen a la densidad y di-versidad de la microfauna: no se in-cluyen en los "grupos-claves". Vor-ticella microstoma y Vorticella infu-sionum están incluidas en el mismo

t 4 igrupo para el Indice biótico de fan-gos (SBI)' no así para el Indice de

Shannon (H). Es necesario no tener

en cuenta en el cálculo de la densi-

dad total la presencia de coloniasexcesivamente numerosas (reconsi-

derar el recuento del organismo).Como objetivos, Y de cara a una

mejora de los resultados, se propone:. Larealizaciónde lamedidaturbi-

dométrica del clarificado enaquellos laboratorios participan-tes que dispongan de los equiPosadecuados, de forma que se ajus-ten las medidas directas de turbi-dimetría a la calificación previa-

mente definida.t Launificación de resultados me-

diante elmétodo de recuento de fi-lamentos sobre lacámarade Neu-bauer, considerado como un mé-

todo más exacto. Por esta razón se

solicita a los participantes que sehagan con está cámara, a fin de

obtener resultados comparativos.

6,2, Consulta aespeciqlistasiniernacionales en Iamaleriss prufiesor Madani Yprcfesor Mi¡chell

Respecto a las amebas testáceas,deben contabilizarse sólo cuandoestán vivas y se tomarán las testáce-as oscuras como inertes. En el casode un fango activo con abundancia

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Figuro 7. Pruebo de octividod con Roso de Bengolo sobre omebos testóceos. Amebos inoctivos o y b'

Amebosoct ivoscyd.

de testáceas se procederá arcalizarla prueba de actividad con el Rosade Bengala (CrOHrOsT4CnNa2; ca'sa Panreac, código 253893.1606).Este reactivo se absorbe por la su-perficie protoplas mática, coloreán-dose de rosa (FiguraT).

En caso de situaciones anómalasen el SBI, la presencia masiva degrandes flagelados por un lado o denematodos y rotíferos por otro,plantea dificultades a la hora deaplicar el SBI. Si sólo existen estosorganismos anteriormente citadosno se puede aplicar el SBI. Se indi-carían las densidades de tales orga-nismos. Por el contrario, si existenotros organismos que sí están reco-gidos en el SBI se aplicaría el índicea estos grupos de organismos, Pun-tualizando que existen determina-das densidades de organismos no re-cogidos en dicha clasificación.

Otra situación dificultosa es laaparición de Vorticella microstomamás V. infusionum o de Operculariano dominante, pero sí abundantes.En este caso se aplica el SBI nor-malmente y se señala que aparecenestos grupos de organismos a talesdensidades.

Como objetivo, y de caru a unamejora de los resultados, se realiza-rá un estudio en profundidad de lasvariaciones numéricas generadascon la utilización o no del reactivoRosa de Bengala.

6,3. Estudios práciícosEn cuanto al transPorte Y conser-

vación de muestras, el transporte serealizaráen nevera, con el bote, lomás estable posible, manteniendouna temperatura en torno a 13e C.En la medida de 1o posible realizatel transporte mediante envío urgen-te.

Inmediatamente a la recePción delas muestras se tomarán tres alícuo-tas con distintos tratamientos:. Alícuota 1: Destinada ala catac-

terizacióndel fl óculo. Mantenidaa temperatura ambiente Y sin ai-reaf.

. Alícuota 2: Destinada ala carac-terizaciónde la microfauna (Pro-tozoos). Mantenida a temPeratu-ra ambiente, con oxigenaciónmediante piedra porosa de formaque no se modifique el fango Porla agitación.

. Alícuota 3: Destinada alacatac-terización bacteriana. Mantenidaen frigoríficoo sin agitaciín Pre-viarnente se realizarán 5 frotisbacterianos para su tinciónposte-rior.En todos los casos es recomenda-

blerealizar el análisis antes de 5 ho-ras desde la toma de muestras, sobretodo para el caso de los fangosjóve-nes (muy inestables).

Es admisible un periodo de 24horas y en oxidación total incluso de48 horas.

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Respecto a tinciones comPle-mentarias en ciliados, la impregna-ción de nitrato de plata (Klein,I926),pone de manifiesto el cineto-soma y el argiroma de los ciliados,con lo que es más fácil su identifica-ción (Figura 8).

El objetivo propuesto, de cana auna mejora de los resultados, es larealizaciún de dos análisis por partede los componentes de GBS.

El primero será el día de la tomade muestra y el segundo, el día derecepción oficial por parte del últi-mo participante (generalmente eldía después). Se comprobará así sialgunas divergencias de resultadosse deben al análisis tardío de lamuestra y se podrá definir elpará-metro más variable con relación altiempo.

También se realizará un estudioen profundidad de la aplicación delnitrato de plata y su aplicabilidad enlas identificaciones.

7. AgradecimientosNuestro agradecimiento a los

profesores P. Madoni (Universitá diParma) y E. Mitchell (Deparment ofBiological Sciences, University ofAlaska Anchorage) por su colabora-ción inmediata ante nuestras con-sultas.

A los ponentes y participantespor su aportación al desarrollo delasjornadas.

A las empresas y centros a losque pertenecemos por su continuorespaldo.

8. Bibliogrqfiqt1I ISOAEC 17025:1999. "Requisi-

tos generales relativos a la com-petencia de los laboratorios deensayo y calibración". Asocia-ción Española de Normalizacióny Certificación (Aenor), 2000.

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Figuro 8. lmpregnoción con nitroto de ploto.