ESPECTROFOTOMETRADefinicin Mtodo de anlisis ptico ms usado en las investigaciones biolgicas.

El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia

ESPECTROFOTMETROUn espectrofotmetro tpico posee cuatro componentes bsicos: una fuente de radiacin que tiene intensidad constante en el rango de longitud de onda que cubre ( usualmente es lmpara de tungsteno para luz visible,y deuterio para ultravioleta),un compartimiento para la muestra, un monocromador que separa la banda de longitud de onda deseada del resto del espectro y la dispersa al compartimiento de la muestra, y un fotodetector, que mide cuantitativamente la radiacin que pasa por la muestra.

ESPECTROFOTMETRO

LUZ VISIBLEEs una regin muy estrecha pero la ms importante, ya que nuestra retina es sensible a las radiaciones de estas frecuencias. A su vez, se subdivide en seis intervalos que definen los colores bsicos (rojo, naranja, amarillo, verde, azul y violeta).

Espectrofotmetro La luz monocromtica atraviesa la muestra, y llega al detector. Las mediciones fotomtricas se hacen en base a la relacin entre la potencia de luz que alcanza al detector cuando est interpuesta la muestra (P) y cuando no lo est (P0) o cuando est interpuesto un blanco.

Espectro de absorcin caracterstico

Espectro de emisin caracterstico

Se acostumbra a llamar cuerpo negro al cuerpo ideal que absorbe todas las longitudes de onda y, por consiguiente, emite radiacin tambin a todas las longitudes de onda. Sera, en definitiva, un emisor perfecto de radiacin. A cada temperatura emitira una cantidad definida de energa por cada longitud de onda.

Transmitancia y absorbanciaLa transmitancia se define como T = P / P0 y la absorbancia como A = - log T = - log P / P0

Espectrofotmetro puede registrar la luz en el rango de UV o del visibleAl campo de luz UV de 200 a 400 nm se le conoce tambin como rango de UV cercano , la espectrofotometra visible solamente usa el rango del campo electromagntico de la luz visible , de 400 a 800 nm.

Ley de Lambert - BeerRelaciona la absorcin de luz con las propiedades del material atravesado.

LEY DE LAMBERT Y BEERLa ley explica que hay una relacin exponencial entre la transmisin de luz a travs de una sustancia y la concentracin de la sustancia, as como tambin entre la transmisin y la longitud del cuerpo que la luz atraviesa. Si conocemos l y A, la concentracin de la sustancia puede ser deducida a partir de la cantidad de luz transmitida.A = cl Donde: A = absorbencia = Coeficiente de extincin molar. l = longitud de la celda.

COEFICIENTE DE EXTINCIN MOLAREs una medida de la cantidad de luz absorbida por unidad de concentracin.

Un compuesto con un alto valor de coeficiente de extincin molar es muy eficiente en la absorcin de luz de la longitud de onda adecuada y, por lo tanto, puede detectarse por medidas de absorcin cuando se encuentra en disolucin a concentraciones muy BAJAS.

CURVA PATRN BLANCOLa absorbancia de una solucin es la resultante de la absorbancia del soluto cuya concentracin se desea conocer y la de otros componentes del sistema (solventes, reactivos) que absorben tambin a esa longitud de onda.

Se debe descartar la absorbancia de las interferencias, para ello es necesario hacer siempre una muestra que contenga todas los componentes del sistema menos aquel que se desea medir. Esta muestra se llama blanco y la absorbancia de ste debe restarse a las muestras problema y a los patrones, o bien, con el blanco se calibra el instrumento a absorbancia igual a 0, o sea 100% de transmitancia.

CURVA PATRN

************