11:00 a.m. comienza lc/ms triple cuadrupolo: agilent … · agilent 6490 con tecnología...

“ i ” NUEVA TECNOLOGÍA EN“e‐seminar” NUEVA TECNOLOGÍA EN LC/MS TRIPLE CUADRUPOLO:

Í

26 Abril del 2011 11:00 a.m. Comienzaen UN Minuto.

AGILENT 6490 CON TECNOLOGÍA iFUNNEL.

en UN Minuto.

SENSIBILIDAD SIN PRECEDENTES, ZEPTOMOLES.ZEPTOMOLES.

Para recibir el sonido siga las instrucciones de registro recibidas hoy

por e-mail: “FW: eSeminario: INSTRUCCIONES ASISTENCIA ” en enlace:INSTRUCCIONES ASISTENCIA … en enlace:https://eventreg1.conferencing.com/webportal3/r

eg.html?Acc=007778&Conf=178195se le facilitará un teléfono local a dónde llamar

para acceder al sonido.En unos días recibirán un e mail para

Isidro MasanaEspecialista Productos LC/MS

6490 Triple Quad LC/MS JET STREAM iFUNNEL

- En unos días recibirán un e-mail para descargarse la presentación.

Agilent TechnologiesJET STREAM + iFUNNEL

Para Maximizar la Pantalla /Activar Paneles

“Vi /F ll S ” M i i“View/Full Screen”: Maximiza Pantalla Presentación y oculta Paneles (Preguntas / Teléfonos de Contacto/...). En la parte inferior derecha se activará:p

Reduce Tamaño Pantalla Presentación y Muestra Paneles para Preguntas vía “Chat”

Muestra Panel para Preguntas vía “Chat”

Ventana Independiente

Chat

“Reenter Meeting”: si por error cierra la ventana de la presentación permite desde la

Ventana Independiente de la Presentación

ventana de la presentación, permite desde la otra ventana de “internet”, que queda abierta al iniciar la presentación, volver a conectarse

Teléfonos acceso audio: 900 801 890 / 917 889 896 / (00)800 098 018

Página: 4

Para Preguntar Vía Chat

Para preguntar vía “Chat” en cualquier momento de la presentación. Escriba su pregunta y pulse SEND

• Durante las sesiones deCierra el panel Durante las sesiones de preguntas también será posible preguntar vía

pdel chat

teléfono.• En unos días recibirán un e-mail para poder descargarse la presentación.

1

Las preguntas técnicas se responderán durante las sesiones de “Preguntas/Respuestas”

Teléfonos acceso audio: 900 801 890 / 917 889 896 / (00)800 098 018Teléfonos acceso audio: 900 801 890 / 917 889 896 / (00)800 098 018

Página: 5

Agendag1. La Importancia de la Resolución y Velocidad

en UHPLC/MS.

2. Posibilidades del UHPLC Agilent 1290.

3. El Arte de la Emulación.

4. Nueva Tecnología en LC/MS Triple Cuadrupolo:

Agilent 6490 con Tecnología i‐Funnel.Agilent 6490 con Tecnología i Funnel.

5.‐Conclusiones.

En unos días recibirán un e‐mail para poder descargarse l P ió

Página: 6

la Presentación.


en UHPLC/MS.





5.‐Conclusiones


Página: 7

la Presentación.

La Importancia de una Buena Separación incluso con LC/MS Altamente Selectivoscon LC/MS Altamente Selectivos

Ketoprofenom/z 255 10

4.2e5

4.8e5

Intensi

Difenhidraminam/z 256.17

m/z 255.10

3.0e5

3.6e5

ity, cps

1.2e5

1.8e5

2.4e5Difenhidramina

m/z 256.17

4.2e5

4.8e5

Time min

0.0

6.0e4

0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.403.0e5

3.6e5

Inten

1/7 resp esta ( 85%)30:70 agua/metanol, 0.2 % ácido acético

Time, min

1.2e5

1.8e5

2.4e5

nsity, cps

K t f

1/7 respuesta (-85%)

Una buena cromatografía

0.0

6.0e4

0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00Time, min

Ketoprofeno

m/z 255.10

gpuede mejorar

considerablemente la sensibilidad y robustez de

5:95 agua/metanol, 0.2 % ácido acético los resultados por LC/MS

Página: 8

¿Porqué es Importante la Velocidad en UHPLC/MS?El poder de separación de elevadas velocidades linealesEl poder de separación de elevadas velocidades lineales

Columna: ZORBAX RRHD SB-C18 2.1 x 100mm 1.8 µmGradiente: ACN/H2O 30/70 a 100/0 a 40ºC Cromatogr. A: 0.5mL/min en 3.0min // B: 0.833mL/min en 1.8minInyección: 1µL (Uracilo, Fenol, Metil/Etil/Propil/Butil/Heptil-parabens).

P á d A 590b B 905 b K‘ = (87 x F x T ) / ( % x V x S)P máx. grad. A= 590bars. B= 905 bars

A 0.5mL/m gr.. 3.0min

K = (87 x F x Tg) / ( % x V0 x S)

FxTg = 0.5x3 = 0.833x1.8 = 1.5

B 0 833mL/m

3min Si el producto de Flujo x Tgrad se mantiene constante el poder de separación no variará (utlizando la misma columna y sin variar los % solvente orgánico)

B 0.833mL/m

gr. 1.8min

1.8min A 0.5mL/m gr.. 3.0min

↑Flujo: Reduce tiempo análisis y mejora capacidad de separación en gradientes

B 0.833mL/m

gr. 1.8minColumnas RRHD & RRHT permiten subir el flujo SIN reducir resolución para:- Reducir tiempos (subiendo flujo)- Aumentar resolución (sin sacrificar tiempo)

Cromatogramas con escala de tiempo alineada a primer y último picoI.D. & I.M - Waldbronn 5/2009

( p )

Página: 9

1200 Infinity Series: Aumentado los Estándares y Compatibilidad en HPLC y UHPLCCompatibilidad en HPLC y UHPLC

bar1290 Infinity le permitirá la máxima reducción de sus tiempos de análisis y/o aumento de la resolución de sus aplicaciones

1000

1200

1290 Infinity1200

800

Vendor A1.7µm columns

Vendor D

600Agilent RRLC: 1220 & 1260

Infinity Series Vendor B1 9µm columns RRLC

600

200

400

yColumnas 1.8µm

1.9µm columns

Vendor C

HPLC Estándar Agilent 1100 y

0

200

0 1 2 3 4 5 l/ i

Standard LC

52

g y1200

0 1 2 3 4 5 ml/min52

Página: 10


en UHPLC/MS.





5.‐Conclusiones


Página: 11

la Presentación.

Agilent 1290 InfinityEl más Versátil UHPLC:El más Versátil UHPLC:

• Cualquier tipo de columnas:q pUHPLC, LC, Solid Core, Monolitics,…

• Columnas de 1 a 8 mm d.i..• Longitudes hasta 25cm x1.8µm.

• UHPLC & UFLC con CH3OH.• ….• ..••.

El equipo Ideal en UHPLC/MS:El equipo Ideal en UHPLC/MS: Infinitas Posibilidades !!

1290 Infinity – ¿Qué aporta al mundo del UHPLC?

1290 Infinity NO solo es un equipo capaz de proporcionar unos rangos mayores de Flujo y de Presiónunos rangos mayores de Flujo y de Presión…

1290 Infinity es un equipo INNOVADOR1290 Infinity es un equipo INNOVADOR

1290 Infinity incorpora grandes avances en todos sus1290 Infinity incorpora grandes avances en todos sus módulos, que una vez más, marca la diferencia tecnológica.

Bomba Binaria UHPLC‐1290 InfinityLa siguiente generación en Tecnología de Bombas UHPLC

Alta velocidad y resolución

1200 bar @ 2.0 mL/min

Desgasificador Válvula de selección de 4 disolventes

Gradientes binarios

1000bar @ 3.5ml/min

800 bar @ 5.0 mL/min

Volumen muerto: 10 µl / 45 µl

Mezclador“Jet Weaver“

Amortiguador electrónico de pulsos

Procesador de doble nucleodedicado al control de pulsosp

Motores de 300 picolitros porpaso

Largos intervalos de mantenimientoBombas de alta Largos intervalos de mantenimiento

“Automatic Leak-Correction“

> 150 Litros de disolvente

AutomatismoVálvula de

CanalB

CanalPistones de Carburo de

resolución

Automatismo

Purga automática

Válvula dePurga

automáticaA

Carburo de Silicio

1290 Infinity UHPLC: Precisión del Tiempo de Retenciónen modalidad UFLC

RT RSD = 0.005% !!!

Precision Peak 1 Peak 2 Peak 3 Peak 3 Peak 5 Peak 6 Peak 7 Peak 8 Peak 9

% RSD RT 0 016 0 0077 0 0052 0 0058 0 0058 0 0054 0 0059 0 0057 0 0080% RSD RT 0.016 0.0077 0.0052 0.0058 0.0058 0.0054 0.0059 0.0057 0.0080

% RSD Area 0.5 µl

0.40 0.39 0.43 0.47 0.40 0.46 0.44 0.52 0.56Phenone Standard, 10 Consecutive Runs2.1 x 50mm RRHD SB C18, 1.8µm

1.2ml/min, 0.5ul, 40C80Hz, 245/10nm, REF 360/80nm

5 - 95% ACN in 0.5min

Página: 15

1220/1260 “versus” 1290 Infinity Binary Pumps‐ Los más bajos volumen muerto y ruido de mezclaLos más bajos volumen muerto y ruido de mezcla

1220/60 Series

Channel AChannel A

Passive Damper Passive Mixer1220/60 Series

Channel BVery Low Noise

0 - 300 µl 400 µl (opcional 200)Channel B

1290 Inifinity

~ 800 µl

1290 Inifinity

Chanel A

1290 Inifinity1290 Inifinity

Chanel BLowest Noise• min. 50% lower

1290 Infinity

+ =Active Damping

10µl

Jet Weaver Mixer

35µl

Delay Volume• 10µl / 45µl• 80x / 20x lower

Página: 16


en UHPLC/MS.





5.‐Conclusiones


Página: 17

la Presentación.

April 26Confidentialit18

Problema: Reproducción de Analisis en Gradiente con diferentes HPLC´s: ‐ Impacto del volumen muerto y de la calidaddiferentes HPLC s: Impacto del volumen muerto y de la calidad

de la mezclamAU

200

8.9

30

1200 Series LC Quatenary Pump

50

100

150

2.7

47

3.0

49 8

.12

1 8

.32

3

8.7

47

9.5

45 9

.97

5

12

.00

5 1

2.2

15

12

.39

3

2 4 6 8 10 12

0 9

mAU

200

DAD1 C, DAD1B, DAD: Signal B, 275 nm/Bw:4 nm Ref 400 nm/Bw:60 nm (B:\RIC\AGI...A\GV 1PHARMA\HPLC000001.D)

6.0

88

6.8

72

3 93

7

0.2

491290 Infinity LC

50

100

150

2.7

44 2

.88

4

6.3

28

6.6

73

48

0

7.9

2

9.

10

2 4 6 8 10 12

0

7.

Sample: 0.5% impurities in formulation (metoclopramide) El resultado:Xbridge C18, 150x3 mm, 3.5 µm dp, 0.45 ml/min, Eluent: A =0 .25 % AmAc, B = ACN, Gradient: 0-15 min; 5-57 % B

El resultado:• Diferencias en los RT y resolución• ¡Se juntan 2 picos!

Página: 19

¿La Solución?: ISET Intelligent System Emulation TechnologyEmulation Technology ‐ Dos componentes:

1.- El mejor UHPLC del mercado1290 Infinity LCyAmplio rango de potencia, el más bajo volumen muerto, superior sensibilidad, la mejor precisión de flujo -sin precedentes

2.- El revolucionario Algoritmogde Emulación ISET

Completa caracterización del LC a clonargenerando una función de emulación

FA

generando una función de emulación

Página: 20

Tecnología de Emulación Inteligenteb ( )‐ Como trabaja (1290 con un 1200)

400

mAU

350

400

Inyecctión

250

300Inyecctión

Mismas condiciones de gradientepero desplazando el gradiente y

l d l fil d l di t

150

200emulando el perfil del gradiente a clonar

Programa de gradiente

1290 gradiente50

100

1200 gradiente

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

0

50

min

Página: 21

Transferencia de metodos: 1290 Infinity LCl h l‐ System Emulation Technology

Conceptop

E l ió d lF Emulación del Systema A

FA

Seleccionar el equipo que quiere ser emulado con un simple click del ratón:

Agilent 1100 Series

Agilent 1200 Series LC

Agilent 1260Infinity LC

Agilent 1220Infinity LC

Other

Página: 22

PesticidasColumn: 3 x 50 mm, 2.7 µm Poroshell

mAU

800

700

800

n hlor

idaz

one

ne uron

zine

ylaz

ine

Pro

met

ryn

zine

Rs= 1.87

500

600

Met

amitr

on Ch

Sim

azin

Chl

orto

lu

Diu

ron

Pro

paz

Terb

uty P

Cya

niz

1290 Infinity LC with iSET

300

400

1290 Infinity LCRs= 1.15

100

200

Rs= 1.90 1100 Series Binary LC

min1 1.5 2 2.5 3 3.5

0

Página: 23

Transferencia de un método publicado

Instrumentación:1100 Series 1200 Series Alliance1100 Series, 1200 Series, Alliance, Acquity, etc

??

Metodos publicados: Scientific journals, application notes etcapplication notes, etc

Página: 24

Diagrama de Transferencia de Métodos en Entornos Regulados

CRO CMO : LaboratorioCRO

Desarrollo

CMO : Laboratorio

Regulado BPL´s

Control de Calidad

Lab ALaboratorio Regulado BPL´sLaboratorio Regulado BPL s

I+D Control de CalidadDesarrollo

Lab BLaboratorio Regulado BPL´sLaboratorio Regulado BPL s

I+D Desarrollo Control de Calidad

Página: 25

Descanso – Sesión de Preguntas Número 1

P di• Para preguntar en directo,

Marque *1 en su teléfono

o use la “Chat Box”

Cierra el panel del chat

Reduce Tamaño Pantalla Presentación y Muestra Paneles para Preguntas vía “Chat”

1

Muestra Panel para Preguntas vía “Chat”


en UHPLC/MS.





5.‐Conclusiones


Página: 27

la Presentación.

3 Prestaciones Clave de un Triple Cuadrupolo

• Sensibilidad

• Rapidez

• Robustez

Página: 28


• Sensibilidad

• Rapidez

• Robustez

Página 29

E VO LU C I ÓN E S P EC I F I C AC I ON E S D E S EN S I B I L I DAD

T R I P L E C UADRUPO LO S

New Agilent 6490

T R I P L E C UADRUPO LO S

tor

on

se

8000

9000

10000

Co

mp

etit

eR

esp

o

ise) 6000

7000

8000

/Stor

tor

Bes

t

eser

pin

e

gn

al/N

oi

3000

4000

5000 AB/Sciex

Agilent

nt

646

0

430

410

C

om

pet

it

mp

etit

or

Co

mp

eti

Re

(Si

1000

2000

3000

Ag

ilen

Ag

ilen

t 64

Ag

ilen

t 64

Bes

t C

Bes

t C

om

Bes

t

0

2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011

Página: 30

iFunnel Technology Captura x10 veces más Iones

Hexabore Capillary

• Capilar con 6 entradas.

Agilent Jet Stream

• Confinamiento térmico d l l d ESI

Dual Ion Funnel

• Elimina el gas, pero • Muestrea x10 más gas

rico en iones de la fuente.

• Captura la mayor parte del

de la pluma de ESI.• Muy eficiente

desolvatación para crear iones en fase gaseosa

captura los iones

• Elimina el ruido de neutrosCaptura la mayor parte del

gas de la región de la fuente.

iones en fase gaseosa.• Crea una zona rica en

iones.

• Prolonga la vida útil de la bomba turbo

Página 31

Agilent Jet Stream. Thermal Gradient Focusing TechnologyThermal Gradient Focusing Technology

Entrada LC

Elevada mejora en Sensibilidad.

Gas de nebulización

Mejora en la Nebulización.

Mejora en la Desolvatación. nebulizaciónSheath gas calentado (hasta 400ºC)Iones Focalizados en una zona

colimada por contención térmica y

Gas de secado

muy rica en iones.

Mejora en la Eficiencia de la Ionización y Muestreo.Ionización y Muestreo.

Página 32

Agilent Jet Stream: La máxima Sensibilidad en LC/MS

Sin calentar el “Sheath Gas”

Calentando el “Sheath Gas”Calentando el Sheath Gas

Página 33

Hexabore Sampling Capillary: Capilar de Muestreo con 6 Conductos6 Conductos

• El muestreo con un capilar de 6 conductos aumenta la eficiencia de muestreo de iones hasta x10 veces.

• Longitud capilar reducida en un 50%*:

• minimiza la pérdida de iones de alta movilidad.

• aspira más gas rico iones.

La ganancia en muestreo de iones es más dramática con la combinación de

las tecnologías de Agilent Jet Stream y el “Hexabore Capillary”.

Página: 34

Ion Funnel de 2 Etapas Desalineadas

1ª Etapa: 8-12 Torr2ª Etapa: 1-3 Torrp

• Elimina una elevada carga de gas

• Reduce neutros• Transmite iones muy

• Reduce neutros

• Mejora la robustezeficientemente hacia óptica de Q1

2 etapas desalineadas : favorece la transmisión de sólo iones2 etapas desalineadas -----: favorece la transmisión de sólo iones

Página 35

¿Cómo Funciona el Ion Funnel?

The RF Voltage focuses the ions to

the center.

RF Drive

UnfocusedIons and Gas

Enter

FocusedIons Out

The DC Voltage accelerates the ions

to the exit La tecnología iFunnelto the exit.

DC Drivedel 6490 permite una

muy rápida conmutación (30ms) de

polaridad + / -

Página 36

Innovaciones Instrumentales Triple CuadrupolosLC/MS: 6460 vs 6490LC/MS: 6460 vs 6490

6460 LC/MS (Skimmer Configuration)

Skimmer

Ion Detector

C G í d Q1 C ld Q3

AJSSkimmer

Ion Detector

Cap Guía de Q1 Celda Q3Iones Colisión

por RF conAceleración

Lineal

6490 LC/MS (iF l C fi ti )

Q3

Axial

6490 LC/MS (iFunnel Configuration)

Curved Collision cellAJS

con

HB Cap Dual Ion Guía de Q1Funnel Iones

por RF

conAceleración

LinealAxial

Página 37

Nueva celda de colisión Curvada, Cerrada y Convergente con

Aceleración Lineal Axial Efficient Ion Transmission over wide mass range. Reduces

transmission of ionized generated noise

RF & DCVoltages Set

Confinement and Axial Acceleration:

SIN efecto “Cross Talk”

MayorApertura(5 mm) de

MenorApertura

(3.5mm) de

l d(5 mm) de

EntradaAccepta más

Iones

SalidaFocalizamejor los

I d t IonesIonss dentrodeMS2

Página 38

Frecuencia Electrónica Cuadrupolo 6490: 1.4 MHzp

• Una frecuencia más alta produce más ciclos de movimiento de iones en el cuadrupolocuadrupolo

• Más ciclos de movimiento de iones dan una mayor resolucióniones dan una mayor resolución de masas – el 6490 se puede sintonizar automáticamente desde 0 4 m / zdesde 0,4 m / z

• Una frecuencia más alta unidad reduce rango de masas hasta 1400 m / z

Página 39

Límites de Detección Zeptomolares:¿Qué es un Zeptomol?

¿¿¿¿ Zepto ???FACTOR POR EL QUE HAY QUE MULTIPLICAR LA UNIDAD MULTIPLO PREFIJO ABREVIATURA

¿Qué es un Zeptomol?

¿¿¿¿ Zepto ???FACTOR POR EL QUE HAY QUE MULTIPLICAR LA UNIDAD MULTIPLO PREFIJO ABREVIATURA

0,1 mol 10‐1 mol decimol dM

0,01 mol 10‐2 mol centimol cM

0,0001 mol 10‐3 mol milimol mM

0,0000001 mol 10‐6 mol micromol μM

0,0000000001 mol 10‐9 mol nanomol nM0,0000000001 mol 10 mol nanomol nM

0,0000000000001 mol 10‐12 mol picomol pM

0,0000000000000001 mol 10‐15 mol femtomol fM

0 0000000000000000001 mol 10‐18mol attomol aM0,0000000000000000001 mol 10 18 mol attomol aM

0,0000000000000000000001 mol 10‐21 mol zeptomol zM

0,0000000000000000000000001 mol 10‐24 mol yoctomol yMPage 40

602 moleculas

< 1molécula

Página 40

Triple Cuadrupolo 6490 Proporciona Limites Detección Zeptomolares

+ MRM (455.3 -> 164.9)

Limites Detección Zeptomolares

1x10

200 zeptomoles

4.5 90 atogramos

Verapamil

4.4 Injectados en‐columna

4.3

Acquisition Time (min)0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9

4.2

Página 41

6 Órdenes de magnitud de rango dinámico lineal

Y = 65283 x – 0.39041210000000

100 Attogram to 100 Picogram verapamil on column

Y 65283 x 0.390412R2 = 0.9976

e 100000

1000000

esp

on

se

10000

100000

Are

a R

e

100

1000

1

10

Femtograms

1

0,1 1 10 100 1000 10000 100000

Página 42

Ventajas del iFunnel

Skimmer Config. iFunnel Config Gain

A 737 9 4566 5 6 2

Data in table are an average of 10 injections

Area 737.9 4566.5 6.2Height 401.2 2184.2 5.4S/N 1182:1 15183:1 12.8

• Aumenta nº iones

• Reduce ruído

2

+ MRM (309.20001 -> 281.10156) AprazolamCheckout…Noise (RMS) = 0 34; SNR (1 596min) = 1157 2

+ MRM (309.20001 -> 281.10156) AprazDIF-r008.d Smo…Noise (RMS) = 0 19; SNR (1 601min) = 11640 4

12.8 Reduce ruído

Alprazolam

2x10

3

3.5

4

Noise (RMS) = 0.34; SNR (1.596min) = 1157.2

1.5960.030

13x10

1 4

1.6

1.8

2

Noise (RMS) = 0.19; SNR (1.601min) = 11640.4

1.6010.034

1 1x100 x1000

Alprazolam

(C17H13N4Cl)

1pg/uL, 1uL inj.1

1.5

2

2.5

0 4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

pg , j

0

0.5

Counts vs. Acquisition Time (min)0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2

0

0.2

0.4

Counts vs. Acquisition Time (min)0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 2 2.2 2.4

Counts vs acquisition time (min) Counts vs acquisition time (min)

Página 43

PPCPs Límites de Detección de 6490 con InyecciónDirecta de 40 μL Muestra de Agua.Directa de 40 μL Muestra de Agua. Compound in On Column LODWater sample (fg)

Acetaminophen 1000 25 pptAlbuterol 40 1 pptAtenolol 200 5 pptC ff i 2000 50 t

Carbamazepina

Caffeine 2000 50 pptCarbamazepine 40 1 pptCotinine 400 10 pptDehydronifedipine 40 1 ppt

ng/LDehydronifedipine 40 1 pptDiltiazem 200 5 ppt…..…..

Datos generados porE. Michael Thurman and

Albuterol (Bronquidilatador)

/L Imma FerrerDept of Civil, Environmental, and Architectural EngineeringCenter for Environmental Mass Spectrometry (CEMS),University of

5ng/L

Colorado, Boulder, CO, USA

Página 44

Ultra Trazas: ppq’s de Pesticidas en Agua Potable

Triazine herbicides analyzed at 50 parts per quadrillion

Atraton S/N = 819

Simazine S/N = 18

6490 Triple Quad with on-line enrichment

Simetryn S/N = 9

Simazine S/N = 18

y

Secbumeton S/N = 51

Prometon S/N = 40

Atrazine S/N = 28

Página 45

Cuantificación de Péptidos en Plasma mediante UHPLC‐1290/QqQ‐6490 y columna de 2.1mm d.i.UHPLC 1290/QqQ 6490 y columna de 2.1mm d.i.

Cromatograma MRM de:

LVNEVTEFAK

10 pmol/µL

LVNEVTEFAK

100 l

1 pmol/µL0.5% RSD

amolen

columna

5 amol/µL12% RSD

• UHPLC-1290/QqQ-6490

(con iFunnel + AJS)

•Poroshell 120 2 1 x 150 mm

Con la nano-cromatografía: HPLC-Chip/QqQ-6490La sensibilidad aún se podría mejorar

•Poroshell 120 2.1 x 150 mm

a 0.5 mL/min

• Cal curve: 100 amol 25 pmol

considerablemente.

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• Sensibilidad

Herramientas para Mejorar la Cuantificación y Confirmación en Muestras Complejas:

• Dynamic MRM (dMRM)

• Rapidez

• Dynamic MRM (dMRM)

• Triggered MRM (tMRM)

• Robustez

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dMRM: “Dynamic Multiple Reaction Monitoring” Mayor Sensibilidad, Rapidez y Robustez

dMRM

dMRM:

• MRM Dinámico con ventanas de monitorización individuales creadas automáticamente a partir del tiempo de cada compuesto.

• Maximiza la Sensibilidad del proceso de medida en

∆Rt

del proceso de medida en MRM.

x3 x4 x4 x3 x4 x2 x1

Cycle time= nº Concurrent dMRM

RSD% requerido

Ptos./piconecesarios

1% 15<1% 15

1-3% 12

10-12% 8

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Herramientas para Mejorar la Cuantificación y Confirmación en Muestras Complejas: Triggered MRMp j gg

Trigered MRM (tMRM):Una/s transición/es primaria/s de cuantificación/analito ACTIVA (/dispara) hasta 9 transiciones de confirmación/péptido y construye su “espectro de MS/MS en MRM” permite cuantificarde confirmación/péptido y construye su espectro de MS/MS en MRM permite cuantificar y confirmar el analito con la sensibilidad y rapidez de la modalidad MRM.

tMRM permite

tMRM

poptimitzar

CE/transición +sensibilidad

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Triggered MRM (tMRM): Cuantifica y Confirma con la Sensibilidad y Rapidez de la modalidad MRM.

Secundaria

Primaria Cuantificar

Secundaria

Secundaria

Secundaria

Primaria Cuantificar

Secundaria

Composite MRM SpectrumEspectro MS/MSp

específicoEspectro de MS/MScon la sensibilidad y rapidez de MRM

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• Sensibilidad

• Rapidez

• Robustez

Página 51

Test de Robustez: 2000 inyecciones de 20 fg VerapamilPl H d t 4 dí d ti den Plasma Humano durante 4 días de uso continuado

Ab l t A (2000 i j ti / 4 d )

1000

Absolute Area (2000 injections / ~4 days) Area RSD = 5.3% Constant response

1000

•100 µL of human plasma spiked with verapamil precipitated with ACN (300 µL) t i i 1% f f i id d th ISTD i

500

Abu

ndan

ce

containing 1% of formic acid and the ISTD reserpine

• Centrifugation for 15 minutes at 13200 rpm

• Supernatant (200 µL) diluted with 3 parts of water (e.g. 600 µL)

A • 1 µL injected into the LC/MS system, corresponding to approx. 20 fg injected on column

• LC/MS Method using C18, water/acetonitrile.

• LC/MS Run Time = 3 min

0

500 1,000 1,500 2,000

• LC/MS Run Time = 3 min

Number of Injections

Página 52


en UHPLC/MS.





5.‐Conclusiones


Página: 53

la Presentación.

Conclusiones

• La combinación de las tecnologías JetStream e iFunnel convierte• La combinación de las tecnologías JetStream e iFunnel convierte al Triple Cuadrupolo LC/MS – Agilent 6490 en el más sensible del mercado.de e cado.

• La nueva modalidad trigered‐MRM permite cuantificar y confirmar con la sensibilidad y rapidez de la modalidad MRMconfirmar con la sensibilidad y rapidez de la modalidad MRM

mediante un “Espectro MS/MS Especifico” con la Sensibilidad y Rapidez de un MRM para screening y cuantificación masiva de analitos.

• La combinación de Sensibilidad, Rapidez y Robustez , p ydel Triple Cuadrupolo 6490 le permite abordar con éxito los análisis más exigentes.

Página 54

Próximo e-seminar:

• Proteómica Cuantitativa: Aportaciones de las Tecnologías HPLC-Chip y QqQ en la Validación de Biomarcadores. Jaume Morales 27 de Abril 2011 11:00am ECT

• Registro e-seminars:https://agilententerprise.webex.com/agilententerprise/onstage//agilententerprise/onstage/g.php?d=924055614&t=a

Mass Spec/tacular

¿Preguntas?

Estamos a su disposición en:http://www chem agilent com/es

I id M

http://www.chem.agilent.com/[email protected]

Tel. 901.11.6890

Isidre Masana Especialista de Productos LC/MS AGILENT TECHNOLOGIES 901.11.68.90 [email protected]

• Registro e-seminars:https://agilententerprise.webex.com/agilententerprise/onstage/

Mass Spec/tacular

g p gg.php?d=923212946&t=a para e-seminar QqQ-6490

g.php?d=924055614&t=ae-seminar Proteómica Cuantitativa.

11:00 a.m. comienza lc/ms triple cuadrupolo: agilent … · agilent 6490 con tecnología...

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