UNIVERSIDAD AUTóNOMA METROPOLITANA

UNIDAD IZTAPALAPA

D I V I S I ~ N DE C.B.S.

Y U R I ~ A S T R O RIQUELME MATRICULA: 90336199

INGENIERÍA BIOQUÍMICA INDUSTRIAL

PROYECTO DE INVESTIGACI~N

Desarrollo de un manual de análisis de muestras orgánicas por espectrofotometría de

infrarrojo

Agradecimientos

Deseo expresar mi más sincero agradecimiento a Perkin Elmer de México por la fácilidad otorgada para tomar los cursos de espectroscopía de infrarrojo. Tanto parte de este reporte como los manuales de uso son una síntesis de los manuales proporcionados por Perkin Elmer de México con el instrumento.

Windows y MS-DOS son marcas registradas por bficrosoft, IRDM es marca registrada de Perkin Elmer.

h D K E

I 11 111

lndice Indice de tablas lndice de figuras

I

I1

111

..

...

I N T R O D U C C I ~ N 1 i

1.

Radiación electromagnética. 1 Vibraciones fundamentales de las moléculas. 4 Fundamentos teóricos de la espectroscopia Infrarroja por transformada de 4 Fourier. Principales componentes de un espectrofotómetro de Infrarrojo por 5 transformada de Fourier. Espectroscopia de Infrarrojo por medio de un microscopio. 7

1 1.1. 1.2. I .3.

! Y

I .4.

1 s .

OBJETIVOS 11 2.

ACTIVIDADES 1 1 3.

MATERIALES I2 4.

Equipo. Accesorios. Nitrógeno liquido. Equipo de seguridad. Material de laboratorio. Reactivos Muestras

12 12 12 13 13 13 13

4.1. 4.2. 4.3. 4.4. 4.5. 4.6. 4.7.

METODOLOGIA 15 S.

Arranque del aparato. Condiciones de análisis de las muestras en el microscopio. Tratamiento de las muestras.

15 15 17

5.1. 5.2. 5.3.

RESULTADOS Y D I S C U S I ~ N 17 6.

6.1. 6.2. 6.3.

Poliestireno Polietileno Quitina

17 18 19

CONCLUSIONES 27 7.

BIBLIOGRAFíA 28 8.

APÉNDICES Apéndice A

MANUAL DE USO SIMPLIFICADO PARA EL USO DEL 29 ESPECTROFOTÓMETRO DE INFRARROJO POR TRANSFORMADA DE FOURIER

9.1. Uso del espectrofotómetro 9.2. Uso de la fibra óptica 9.3. Uso del microscopio.

Apéndice B

IO. MANUAL DE REFERENCIA RÁPIDA PARA EL USO DEL ESPECTROFOTÓM ETRO.

30 38 43

51

íNDICE; DE TABLAS

Tabla 1. Aplicaciones espectroscópicas en diferentes regiones del espectro

Tabla t. Principales regiones del Infrarrojo. Tabla 3. Número de onda de los principales picos de polietileno y grupos

Tabla 4. Número de onda de los principales picos de quitina y correspondientes

Tabla 5. Número de onda de los principales picos de poliestireno y grupo

electromagnético.

funcionales correspondientes.

grupos funcionales.

funcional correspondiente.

INDICE DE FIGURAS

Figura 1. Figura 2. Figura 3. Figura 4. Figura S. Figura 6. Figura 7. Figura 8. Figura 9. Figura 10. Figura 11. Figura 12. Figura 13. Figura 14. Figura 15.

Longitud de onda. Espectro electromagnético. Vibraciones moleculares. Interferómetro de Michelson. Diagrama de bloques de un espectrofotómetro de 1R Uso del microscopio en transmitancia. Uso del microscopio en reflactancia. Espectroscopía en transmitancia. Espectroscopía en reflactancia, Espectro de Infrarrojo de una muestra de poliestireno. Espectro de Infrarrojo de polietileno sin ningún tratamiento fisico. Espectro de Infrarrojo de polietileno con tratamiento térmico. Espectro de Infrarrojo de polietileno tratado con rayos gama. Espectro de Infrarrojo de polietileno tratado con rayos UV. Espectro de Infrarrojo de una muestra de quítina.

2

3 18

20

17

1 1 4 5 5 8 9 9 10 21 22 23 24 25 26

... 111

Los 111ctodos cspcctroscópicos dc análisis sc basan cn la mdda cn quc la ra&ación clcctromagnctica cs cnlitida o absorbida p o r la nlatcma. Los métodos dc cmisión cuantifican la radación cnliticla cuando una rnolccula es cscitada por alguna forma de cncrgia. >a sca tdrmica, clcctrica o radantc. Los n~ctodos dc absorción por cl contrario csdn basados cn la dmlinución dc la intcnsidad dc la radación clcctromagnctica cuando csta sc absorbc por una mol&:ula.

I. I. RudiucGn electrornugnktk-a

Ida ralcación electronlagnética es encrgia trasmitida a trabés del espacio cn forma dc ondas y fotoncs. Cada t i p o de radiación elcclromagnética (ondas de ra&o. ultraviolcta, infrarroja. visible. ctc.) se caractcrim por su longtud de onda (I) (figura 1). quc es la distancia cntre la crcsla de una onda y la cresta de la onda 111á.s prósinla. Ciertos tipos de radiación electromagnctica se caracterizan por cncontrarsc cn un rango de longitud de onda.

Longitud de onda

Figura I . Longitud dc onda.

lo6 5

70

4 10

1300 100

10

La rcgión dcl espcctro en la cual sc pucdcn captar con cl ojo las absorcioncs y cnlisioncs dc radiación electromagnética se extiende entre J(M) y 750 nm ( I nm = I O " m ó I O " cm ); sin cmbargo. la región visiblc constituyc una pcquciia fracción d c l cspcctro total dc radiación clcctromagnctica. Las longitudcs dc onda algo cortas quc l a s dc la zona visiblc dan lugar a la llamada rcgión ultra\iolcta. rnicnlras quc las longitudcs dc onda algo mis largas cjonstituycn la rcgión infrarroja (figura 2).

Rwos gamma

Rayos X

IJltziwGieta vacio ". -

Ult-anoleta cercano

VlSlblG!

lnfrano,~ cercano

!nfrarro.o m-nedlo

Infrarrolo lejano

O r d w r b r.?dln

Figura 2. Espectro clectromagnético.

Adanis dc caractcrilarsc por su longitud dc onda. las radacioncs pucdcn caractcriLarsc tambicn p o r su frccucncia (\*). quc x dcfinc como cl núnlcro dc ciclos complctos por scgundo (cps). su unidad dc ~uc&da es cl Hcru (k), La radación dc mayor frccucncia ticnc ut1 numcro tnds clctado dc ondas por scgundo. por lo cual su longtud dc onda scrá mcnor. Por sus dchicioncs. longtud dc onda > frccucncia 5011 inkcrsanlcntc proporcionalcs. E s t ~ rclación pucdc csprcsarsc nutematicamcntc:

1' = frecuencia en Hem.

c= 3 .y I O IC' cdseg . (velocidad de la l u z ) y

i, = longitud de onda en cm

En cspeclroscopia infrarroja. la frecuencia se esprcsa nwbante cl núnlcro de onda. cs dccir, cl núnlero de ciclos completos por centimetro. El número de onda se mide en invcrsa de cenlínlctros (I/cm ó cm." ). La unidad infrarroja cs cl micrómetro, pm (o micra p), donde 1 .O pm = 10 m ó I O " cm. El .nilmero de onda la longitud dc onda pueden interconvertirsc mediante la siguiente ccuación:

La radiación electromagnética se trasmite mediante paquetes corpusculares de energía denominados fotones o cuantos. La energía de un fotón es inversamente proporcional a la longitud dc onda, lo que se esprcsa por la ecuacibn E = hc/h. donde 11 = constanle de planck. La racbación de nlenor longitud de onda ticnc ma>or energía. por lo cual un fotón de l u r . ultravioleta tiene mayor energía que un fotón de ondas de racbo.

A la inversa, la energía de un fotón es directamente proporcional a la frccuencia (un mayor nunwo de onda y por lo consiguiente nuyor numero de ondas producen malor encrgia).

Dcpendcndo del tipo dc átomos ) de sus uniones x producirán difcrentcs nikclcs de intcracción entre los átomos y la radiación clectronugnnClica. También cambiara el tipo de absorción xgún el tipo cic radiacion clcctromagnética con la que interactuc la molécula (Tabla 1).

Tabla 1. Aplicaciones espxtrosdpicas en cbferenles regiones d e l espectro electromagnético

Región del espectro

Isótopos Mosbaucr Nuclear Ra!os ganlma (y) clcctromagnctico

Aplicaciones Nombre Nivel de interacción

RaFos X Electrones internos Rayos x Estructura Cristalina I!V-\'IS Moléculas orginicas c UV-Visible Electrones de Valencia

ioncs metálicos complcjos.

Infrarrojo inorginicos Conlpucstos orginicos c Infrarrojo Elcctroncs dc cnlacc

ondas cle Ra&o Spin "_

El Infrarrojo sc di\ idc para su cstudio cn trcs rcgioncs. las cuales prduccn dfcrcntcs cfcclos en las molcculas a nitcl nlolccular (Tabla 2).

Tabla 2. Pnncipalcs rcgioncs dcl Infrarrojo

I.R. Prósinio Produce armónicos dc las \ibracioncs de lcnsión dcl Hidrógcno. Su nunlcro dc onda va dc I3300 a J 000 cm"

1.R. Mcdio Produce tibracioncs dcl csquclcto. Produce vibracioncs I.R. Lcjano

Tambicn sc produccn \ ibracioncs fundanlcntalcs dc la nlolécula

Su numcro dc oncia va de JOM a Su númcro dc onda va dc 400 a 20 JOO cm" cm"

dc compuestos inorg5nicos.

Las moléculas que ticncn ritonios CnlaLadolj por uniones covalcnlcs. prcscntan vibracioncs u oscilacioncs conlo si sc tratara dc dos pelotas unidas par un rcsortc. Euas vibracioncs u oscilacioncs pu&n

dc torsión, flcsión, rotación y vibración. Cuando cslas moléculas absorbcn radación infrarroja la cncrgía dc csta radación produce un aurncnto cn la energía vibracional dc la molécula, lo cual se Lraducc cn un aurncnto cn la amplitud dc las vibracioncs de los átomos cnhados: la molécula sc sitúa cn un cstado tibracional cscitado. Para quc sc produLca csta absorción dc radiaCiÓn lnliarroja 5011 IlCcCSiriaS dos condicioncs:

0 La cncrgía dc la radiación dcbc coincidr con la ciifcrcncia de cncrgía quc csistc cnlrc los cstados dc cscitación y basal dc la molécula.

o El cambio dc cncrgía en la moldcula debc producir ¡ u n cambio cn el momcnto &polar dc la molécula

Dc lo antcrior sc dcriva quc para producir absorción en el infrarrojo cs nccesario un cnlacc covalcntc un canlbio cn cl momcnto dipolar. Por lo consiguicntc l o s cristalcs con cnlaccs iónicos como NaCl. I;Br ) ZnSc prcxntan las caractcrística dc no absorbcr la rabc ión infrarroja. csta propicdad nos pcrnutc utilkarlos para las celdas, asegurando así quc solo la mucstra absorberá la radiacion.

El vidrio tipo Qres y otros tipos dc vidrios si prcscntan absorción cn cl Infrarrojo por lo consiguicntc no x usan ni para ccldas ni cn la óptica dcl aparato. En la Ó p t m dcl cspcctrofolómclro x usan cspcjos para cvitar problcnlas dc absorción.

El nunlcro dc cstados dc vibración cn una molécula poliatómica sc conoce cn basc a lo siguicntc. En una nlolécula poliatómica cada átonlo ticne lrcs grados dc libcrtad quc corrcspondcn a las coordenadas ncccsarias para I o c a l i L a r u11 punto en cl cspacio (s.y.z) y dcfinir la posición dc un átomo cn rclación con los otros átomos dc la moldcula. Por lo cunsiguicntc una molécula dc n álomos tcndrá -3n grados dc libcrtad.

El mot imicnto dc la nloldcula cstá dado por

1 ) El mo\ imicnto dc translación dc su centro dc gravcdad cl cual t i ~ ~ l ~ ucs grados dc libcrtad 2 ) El mo\inlicnto dc rotación dc toda la molécula alrcdcdor de su an t ro dc gratcdad cstc mot inlicnto tambitn sc cncucnlra dcfinido por trcs grados dc iibcrtdd. 3 ) El nio\imicnto clc cada uno dc sus átomos con relación a los otros átomos ( \ ibracioncs in&\ l i i ~ l c s ) . Estas \ ibracioncs corrcspondcn al nunicro dc grados d'c libcrtad restantes (3114).

3

En las n1olcculas lincalcs todos los ritomos sc cncucnlran cn urn sola linca rccta 110 cs posiblc la rotacih alrcdcdor dcl cjc dc cnlacc. dc csta forma dos grados dc libcmd bastan para dcscribir cl mo\ imicnto rotatorio. Por lo consiguicntc cl núrncro dc \ibracioncs en una molccula lineal csd dado por (3n-5).

1.2. K3rucwne.s findunaentules de Ius mol2culus.

Existen dos tipos dc vibracioncs fundamen~les cn las niolésulas: 1 . "Strclching" o esliramiento (alargamiento, tcnsión y extensión) 2. "Bcndmg" o &formación (flesión).

H I t

Figura 3. Diferentes vibraciones que se presentan en una molécula. l . "Stretching" o estiramiento. Estas vibracioncs se caracterizan por un cambio en la &stancia interatómica a lo largo d e l enlace entre dos átomos. En el estiramiento sinlétrico no hay cambio en el momento &polar ya que los dos atornos se numen distancias igualcs en tlireccioncs opuestas. con respecto al álomo al cual se encuentran unidos, y por lo consiguienle no se produce absorción en el espectro Infrarrojo. En el estiramiento asinlctrico dado que cuando un átomo de hidrógeno se acerca al átomo de carbono el otro átomo de hidrógeno se aleja se produce una dferencia de cargas y un cambio en el momento dipolar. Por todo lo anterior se doduce que esta vibración si produce absorción en el Infrarrojo.

2. 'Ben&ng" o &formación. Esta vibración se caracteri/.a por un canlbio en el ángulo de enlacc de tres átomos. Se conocen cuatro tipos básicos de \. ibraciones:

a ) De tijera. Dos álomos unidos a un rito1110 coniun se mueven cn un nusmo plano accrcandosc: alcjindox uno de otro.

b) De oscilación. Los átomos unidos a un átomo comim de mueven de manera alterna dc un lado hacia otro en el plano de sin~etria de la molécula.

c) De sacud~da. Los átomos unidos a un átomo común sc mueven simultAneamcnte hacia afuera del plano dc la molkula.

d) De torsión. Los itonlos unidos a un átomo común !x rnuC\.cn de manera alterna hacia afuera del plano de la molécula.

El cspcctrofot6mctro infrarrojo dc transformadas dc Fouricr ticnc su basc cn quc cstc no dspcrsa la lw. sino quc uti1il.a un intcrfcrónlctro gcncrando una wial Ilanlada intcrfcrograma. a cstc intcrfcrograma sc IC somctc a u n tralamicnto nlatcmático por mcdio QC transformadas dc Fouricr para producir así un cspcctrograma. Los cálculos dc con\crsión x rcalkan por mcdio dc una computadora.

El principio dc runcionamicnto d c l cspcctrofcdomctro cs cl intcrfcromctro dc Michclson. cstc ticnc una fucntc luminosa dc l u infrarroja policromátia, CSU luz llcga a un divisor dc h u dc Bromuro dc Potasio (Kbr) quc SL' cncucntra colocado formando un ángulo de 45" y con un tcnuc rccubrinucnto dc Gcrmanio cn la pant poslcrior. Su función xrá ditidir cl haz que se genera en la fucnlc cn dos partcs igualcs: Una dc cllas quc rcflc-ja cn cl cristal. dcbido a su inclinación y rccubrinucnto dc Gcrmanio hacia un cspcjo fijo. c o l o c a d o cn [a partc supcrior cuya f'unción es devolver cl ha^ lacia cl divisor. El segundo h u no x rcflcja sino quc pasa a lravcs dcl divisor dc ha^ hacia un cspcjo quc ticnc un rnovimicnto lincal cl cual scnirá para introducir una variablc llamada chficrcncia dc paso óptico. Por liltimo los dos llaccs sc con~binan nucvamcntc cn cl &visor dc ha y los cspejos. La radiación así rccombinada llcga a la mucstra y por último al dctcctor.

I,

Figura J. Principalcs partcs dc un intcrfcrón~tro dc NIichclson. r

Durantc cl trayccto d c l ha^ dc infrarrojo tarre paralclamcntc un rayo Iiscr dc hclio-ncón quc "

proporciona cl valor dc la frccucncia dc rtlancra csacta. "

\ .

Esla tdcnica pcrnlitc aislar d c l ruido ambicnlal scñalcs sumamcntc dkbilcs quc sc dcn cn fucnlcs .,

Icjanas. Su primcra aplicacion fuc cn la rcgión dcl Icjamo infrarrojo.

1.4. Principules componentes de un espectrofottcimetro de Infrurrojo por trunsformudu de Fourier

Un cspcctrofotórnctro sc cncucntra compuesto de las siguicntcs partes:

Figura 5 . Diagrama dc bloqucs dc u n cspcirofolómcl.ro dc Infrarrojo.

La fucntc dc infrarrojo gcncra la radacibn quc \ a a scr usada. csta radación sc Ilcva al in~crfcrólnctro. & &on& cs ~ncdda por un &tutor. cl cual gcncra una xdal clictrica quc c5 transportada a 1111 s i s t c n ~ dc proccsamicnto dc datos. Cada una dc csus partcs ticnc las siguicntcs caractcristicas:

a ) Fucntc dc radiación infrarroja

La fucntc dc radación infrarroja pucdc s c r dc trcs tipos:

0 Linlpara dc Ncrnst (Zirconio. Itrio. Torlo)

o Lámpara dc Globar (Carburo dc Silicio)

o Bobina dc Nicromcl (Cromo y Niqucl)

b) Intcrfcrómctro dc Michclson

Ticnc un divisor dc h a z dc radación (transmitc un 50% y rcflcja otro 50 '%) cuando sc rccombinan los haccs sc pucdc obtener un patrón dc intcrfcrcncia ,adornlc sc varia la drfcrcncia de la trayectoria.

c) Dctcctorcs:

Pucdcn scr dc dos tipos:

o Dc sulfato dc Triglicina-Dcutcrado (DTGS). cl cual ticnc una rcspucsla nlris rápida quc cl tcrnlopar.

0 Dc Mcrcurio Cadmio Tclurio (MCT) cl cual cs un fotodctcclor quc opera con nitrógcno líquido, ticnc mcjor rcspucsta quc cl DTCS, cs rccomcndablc para mucstras opacas.

0 Dc Tantalato dc Litio (LiTaO) cs menos scnsiblc quc cl DTGS j dc bajo costo.

d) Sistcma dc proccsarnicnto de dalos

Una computadora caw dc rcaliar l a s opcracioncs rnatcmiticas dc transfomlada dc Fouricr.

Manejo y prcparación dc muestras.

a) Sólidos

Las mucstras s ó l i d a s sc nlcLclan C Q ~ Kbr cn una proporción 100/1, despuis sc comprinlcn cn una prensa hidráulica formando asi una pastilla. Si cl sólido ticnc un bajo punto dc fusión sc pucdc fundr sobrc pastillas dc KRr . una liltima opción cs disolvcr cl s ó l i d o ya disuclto IC pucdo dar dos tralanlicntos : el primcro consiste cn formar una pclicula cn algún material rransparcntc al infrarrojo. para postcriormcntc cuporar cl solvente. El segundo traianucnto consistc cn colocarlo cn ccidas para liquidos.

b) Líquidos

Los líquidos x puedcn clasificar en dos tipos:

Puros.- Estos pucdcn scr \olátilcs o no volátilcs. los primcros sc dcbcn trabajar cn celdas para líquidos. Los scgundos sc pucdcn aplicar conlo una Frlicula cntrc dos cristales dc Kbr.

Diluidos.- ESOS sc trabajan cn ccldas cspccialcs para líquidos

1.5. Espctroscopiu de IR por medio de un microscopio

Con cl advenimiento de la espectroscopia de Infrarrojo por transformada de Fouricr > de detectores I ~ U ) scnsiblcs co~no cl MCT (Mercurio Cadtlnio Telurio) surgieron l a s posibilidades de analbar muestras orgrinicas mu) pequeiias. Para muestras sólidas esiste el problenla de que es cfifcil lograr un ajuste en la configuración óplica para cada tamafio de muestra. Si a esto agregamos los requerimicntos de posicionar > aislar espacialmente la muestra en el foco d e l llar. surge La necesidad de usar un microscopio para rcalilar csm urca.

La i d a de acoplar un microscopio a un espectxofotómetro de IR no es nueva. Sir Harold Thompson. un renombrado cspectroscopista Britlinico. parece hírber sido el primero en unir un microscopio a un cspectrofotómclro de I R , cbmo se reportó en 1949. En 1953 se desarrolló el primer microscopio de IR comercial, el modelo 85 fabricado por Perkin Elmer

Dcscripción d e l sistenla

Cada microscopio contiene dos sistemas ópticos - un sistema de microscopio óptico y un sistema Ck: microespectroscopia de Infrarrojo por transformada de Fourier-. Estos dos sistemas x interceptan en la apertura remota.

Sistema de nlicroscopía óplica

El microscopio de Infrarrojo emplea un estereomicroscopio para su opción visual. Los estereomicroscopios ofrecen muchas ventajas para los microscopios de Infrarrojo. Las imágenes que se obtienen de los estereomicroscopios tienen un profundo campo visual . permitiendo así el estudto de irrcgularidadces en l a s superficies de l a s mueslras. También es necesario un estereomicroscopio para la preparación h muestras para la microscopia de Infrarrojo. Para propósitos de preparación la muestra se C O ~ O C ~ en la posición de la apcrtura remota la cual permite ver la muestra. Para \cr la nlucstra con mayor amplificación y para análisis microespectroscópico. la muestra se colma en la platina. El grado dc amplificación es variable. para la posición de preparación de la muestra la amplificación \.aria de 120 a I40 X . para la platina es de 180 a 600 X. El microscopio también tiene acoplada una crinura de video conectada a un monitor.

Sistema de nlicroscopía por Infrarrojo

El requcriniento esencial para el microespectroscopio de IR es transfcrir eficientemente Ia radtación modulada d e l espectrofotometro a la micromuestra y finainlente a un deteclor de IR. El cspcxtrograma p u d e obtenerse de dos maneras. en transmitancia o en reflactancia. La modalidad de transnutancia sine para muestras delgadas las cudes pueden ser atra\esadas ficilmente por un ha/

infrarrojo. la modalidad de reflactancia s ine para muestras opacas. l a s cuales tienen una superficie mu! pulida que puede reflejar la IUL infrarroja.

Visión en transmitancia

Cuando cl microscopio se usa en esta modalidad ocurre lo siguiente.

El espejo M 3 recibe la lu d e l iluminador y la dirige a través d e l espejo conca\o C 1.

7

El cspcjo cónca\o C2 colecta la l u z dc la ntucslra > la cnvia hacia arriba a m \ - & dc la apcrtura rcmota. La lur. pasa d c l cspcjo dncavo C2 al nlicroscopio óptico.

Para protcgcr los ojos, cl I ax r y la radación IR sc bloquean para quc no I

luminador

Dltusor

alcanccn la mucstra (Figura

Base del mcruscupio

Figura 6. Uso dcl microscopio cn transmitancia

Visión cn rcflactancia

Cuando cl microscopio dc IR sc usa para visión cn rcflactancia se da cstc proceso.

0 La l u z dcl iluminador pasa a travds d c l rctrorcflcctor C1 y sc cnfoca cn la mucstra.

Un rctrorcflcctor c o l c c t a la lur. quc cs rcflcjada de l a muestra ! rctrdrigida a la supcrficie dc la muestra.

Ef cspcjo cÓnca~.o C2 c o l c c t a la l u r dc la rnucstra y la cnvia cn dirección supcrior hacia la apcnura rcmota. La luz pasa dcl cspcjo C2 al nucroscopio ópico.

Para protcgcr los ojos. cl láxr la radiación Infrarroja son bloqueadas para quc no alcancen la lllucstra Figura 7).

8

c 4 w

Base del nicroscopio

Figura 7. Uso del nlicroscopio cn reflaclanica

Cuando x usa el microscopio para obicncr un cspcctro ya sca en transnulancia o rcflaclancia sc sigucn vías sinularcs. Vcr fig. 8 y 9.

Figura 8. Espcctroscopía en transnhncid

Espep del

c-\ c1

muestra

u A A

Basa del miaoscopio

Figura 9. Espcctroscopía cn reflaclancia

OBJETIVOS Y ACTIVIDADES

a) Conoccr cl uso dc un cspcctrofotónxAro dc Infrarrojo

b) R c a l k r la inlcrprctación dc los c s p t r o s dc Infrarrojo quc x oblcngan duranlc cl uso d c l mismo.

c) Dcsarrollar un nlanual dc análisis dc nlucstras orgánicas por muho dc cspcctromctria dc Infrarrojo.

d) Desarrollar un nlanual dc rcfcrcncia rápida para cl uso & I cspcctrofotómctro dc Infrarrojo.

3. Actividades

Acordc a los objctivos planteados antcriornlcntc sc realizaron las siguicntcs actividadcs:

0 Se tonlaron dos cursos impartidos por la conlpaiíía para conocer cl nlancjo d c l quip. uno iuc un curso dc anilisis cualitativa por Infrarrojo cl 27 dc Mano dc 1996 y cl otro un curso básico quc sc rcalko d c l 25 al 26 dc Abril dc 1996.

0 Sc lcycron los manuales dc uso d c l aparato y sc cc~nsuItó toda la bibliografia quc sc usa como rcfcrcncia cn cslc rcportc.

0 Sc obtucicron ccrca dc 220 cspcctros dc mucstras t i c polictilcno. las cualcs habían sido sonlctidas tanto a tratarnicnto físico como biológico.

0 Los cspcctros quc sc obtuvicron antcriormcntc fucron analkados y sc caractcrhron los principalcs picos dc intcrcs.

Sc calcularon l a s á r a s dc cstos picos.

Sc analbaron muestras dc quitina y policstireno ot&niCndosc sus cspcctros.

0 Sc caractcrhon los principalcs picos dc intcrcs d: atas nlucstras

11

222422

MATERIALES

4. Materiales

0 Dos fucntcs dc IR tanto para cl nvdo como para cl ccrcano Infrarrojo.

o Un dctcctor dc tipo TGS

0 Como intcgrador usa una conlputadora 80386 con un coproccsador 80387 y 4 MB dc nlcnloria RAM.

Pantalla a colorcs VGA y disco duro. pucrto paralclo para concctar una imprcsora.

o Una imprcsora dc inyccción dc tinta.

4.2. Accesorios

Con cl nlicroscopio sc incluyc un jucgo dc hcnamicntas y matcrialcs contcnicndo:

0 Un disco dc 13 m111 dc dirimctro dc Sclcnuro dc Zinc

Un soportc para los mscos dc 13 nun dc dimctro

Una platina para prcparación dc muestras.

0 Un soportc rotatorio para &scos.

o Un soportc grande para ~nucstras.

0 Unas p i m s dc 4 1/2”

0 Una navaja con un rodillo

Una aguja dc disccción hccha dc acero.

0 Un cspcjo para sacar los Backgrounds cn rcflactancia

Una caja con cicn portllobictos

4.3. Nitrógeno líquido

12

Para der opcrar el microscopio es ncccsario cnfriar el dctcctor. cstc dctcctor x: enfría con nitrógcno liquido. el cual cs suministrado p o r la coorBrlación dc raursos nukrialcs dc la L‘ni\crsidad. Para nlancjar cl nitrógeno liquido es ncccsario u n tcrmo de ;mpolla dc \idrio !a que cstc sc c\apora rripidamcntc.

4.4. Equipo de squridad.

Par& nuncjar cl nitr6gcno líquido sc adquiricron guantes dc asbesto una careta dc scguridad cs indspcnsablc cl uso dc bata.

4.5. Material de laboratorio

El material dc vidrio quc sc usó Tuc b;iSiamcntc:

o Matraccs dc Vidrio dc 125 y 250 ml

o Pipclas dc difcrcntc capacidad

También sc usaron csp;itdas mdlicas

4.6. Reactivos

Los principalcs rcactivos quc x usaron fueron solvcntcs:

0 Tolucno

o Éter

cctona

4.7. Muestras

Las nlucstras que sc analkuon fueron las siguicntcs:

Sc amliL6 policstircno el cual sc suministratu junto con cl aparato como cstindar. este policstircno sc encontraba puro y no contenía plastificanlcs. kt finalidad dc anaikar cstc nlatcrial consistia cn rcalkar los prinlcros anrilisis \. nlancjo d c l aparato cn un rrtatcrial puro > bien caractcriLado. para p o d c r rcaliLar postcriornlcntc estos análisis en materiales n k cotnplcjos.

El polictilcno que x anal&ó cra polictilcno puro sin ningún aditiL.0. cstc polictilcno habia sido tratado dc la siguicntc mancra:

Polictilcno sin tratamiento fisico

Pol~c~~lcno con tratanucnto fisico 1

Polictilcno somctido a radación gama.

Polictilcno somctido a radiación UV durantc 76 días (X00 pm /cm')

0 Polictilcno sometido a radiación 1JV durantc I5 dias ( I200 /cm")

o Polictilcno calentado a 1 SO " C durantc 8 horas.

0 Polictilcno calcntado a 150 o C durantc 5 días.

Polictilcno calcntado a 150 '' C durantc 15 días.

La finalidad dc analizar cl polictilcno consistia cn dctcctar grupos carbonilo dcspucs d c l tratanlicnto fisico. la prcscncia dc los grupos carbonilo pcrnlitiria quc el plastico fucra biodcgradado por algún nlicroorganismo cn cl ciclo dc los icidos grasos.

Se anali~b quitina producida por sigma. x a.naharon 12 rnucstras a las cualcs x ICS variaron los parámctros dc opcración dcl aparato para así oplimil.ar la oblcnción d e l cspcclro.

METODOLOGIA

S. Metodología

S. 1 . Arranque del aparato

El arranquc dcl aparato así como cl uso d e l mismo sc rcalizo como sc cspccifica cn el manu1 dc uso simplificado d c l microscopio cn las siguicntcs pairtcs:

0 Enfriado d c l dctcctor.

o kcparando cl nucroscopio.

o Enfocando cl microscopio.

o Prcparando cl cspcctrofotómctro.

0 Posicionando h mucstra.

0 Obtcnicndo un Background.

o Obtcnción dcl cspcctro dc la mucstra.

5.2. Condiciones de mniilisiu de l a u muestras eo el microscopio:

Las con&cioncs bajo l a s cualcs sc saco cl cspcctro dc todas las mucstras fucron l a s siguicntcs:

0 Resolution: 4 cm"

J-Stop: J cm "

0 Apoduation: Strong

0 Gain: 8

0 OPD Velocity: 0.20 cm I s

Phasc Corrcction: Sclf

0 Intcrfcrogranl Typc: Bi-Dircctional Doublc Sided

5.3. Tratamiento de la muestra:

Los trcs principalcs tipos dc nlucstras quc sc analkaron fucron:

Policstircno

E1 poliestireno no rccibió ningún tratanficrlto ya quc cstc bcnia \a listo para scr allalimJo. Sc cncontraba cn cstado puro sin ningún plastifiuntc.

El polictilcno quc sc anal id consistia dc pcquciios gnunos dc 2 nmm de d t á ~ ~ ~ c t r o apro.\inxidamcnlc. Eslas partículas S(: aplanaron con cl roddo dc la cuchilla. Una LCL quc formaron una pclicula muy d c l g a d a > transparcntc 5c colwaron cn cl cristal dc Sclc~~uro dc Zinc > C S ~ C a su ~ C L sc acomodó cn cl portaobjctos sc lcs sacó un espcclro.

La quitina sc encontraba cn forma dc hojuclas, cstas hojuclas sc aplanaron Larnbidn con cl rodillo dc rornu u1 quc forntaron una lanlina d c l g a d a . csla lámina sc c o l o c d nucvamcntc sobrc cl cristal dc Sclcnuro dc Zinc y cstc sc acomodó cn cl portaobjctos para postcriormcntc obtcncr cl cspcctro.

RESULTADOS

6. Resultados

1,as mucstras quc x anallaron fucron bisicalucntc dc trcs tipos. policstircno. polictilcno y quitina. El policstircno sc uso para cmpuar a trabajar )a quc cs un matcrial muy cstudiado > bicn caractcrixado. csto nos pcrmitc dctcctar fallas dcbidas al nlancjo d c l aparato. La prinlcra partc dcl trabajo con polictilcno consistió cn optinuiar las condicioncs dc opcracicin dcl aparato. una vez. definidas las condcioncs dc opcración d c l aparato x p r d ó a dctcrnlinar los principalcs picos dc intcrcs cn los quc sc podian prcscnlar cambios. así como la cstructura química a la quc corrcspondían los picos. Postcriormcntc sc compararon los cspcctros dc l a s mucstras quc habían tcnido dfcrcntcs tralamicntos así como cl cfccto dc cslos tratamicntos cn la cstructura química. Con la quitina sc optimkaron las condcioncs dc ad is i s . una VCL dctcrminadas csus sc p r d ó a la idcnuf~cación dc los principales picos dc intcrds así como dc sus corrcspondcntcs cstructuras químicas.

6.1. Poliestireno

Para cl policstircno tambidn sc optimitaron las concircioncs dc análisis d c l mismo. Las condicioncs dc alllilisis dc policstircno cn cl microxopio quc sc considcraron óptimas fucron nucbamcntc las nusmas:

0 Resolution:

J-Stop:

0 Apodwation:

0 Gain:

0 OPD Velocity:

0 Phasc Corrcction:

0 Intcrfcrogram T>p:

4 cm-'

I cm .' Strong

8

0.20 cm /S

Sclf

Bi-Directional Doublc Sidcd

Para cl policstircno x calcularon los númcros dc onda dc los principalcs picos dcl cspcctro. cstos picos sc conclacionaron con cl grupo funcional al cual corrcspondcn (Tabla S > figura IO).

Tabla S. Númcro dc onda dc los principalcs picos dc policstircno y grupo funcional corrcspondcntc.

No. dc onda (cm-1)

Estiramiento simi-trim de los hidrógcnos dct CHI \

1601 Estiramiento sincrónico del anillo 1500 Estiramiento simétrico del nntllo

Estiramiento lateral d c l arullo I450 - 770 Doblamiento simétrico fuera del plano de los

I hidrógenos del anillo. 6 % ) I Doblamiento del anillo fuera del plano.

17

6.2. Polietileno.

Las condiciones dc andisis dc polictilcno cn cl nucroscopio quc S(' considcraron optimas fucron las siguicntcs:

o Rcsolution:

J-Stop:

o Apodmtion:

Gain:

0 OPD Vclocity:

o Phasc Corrcction:

e Intcrfcrogram Typc:

J cm"

.I cm "

Strong

8

0.20 cm Is

SClf

Bi-Dircctional Doublc Sidcd

Bajo cstas condcioncs sc obtmo cl cspcctro d c l polictilcno sin ningún tratamicnto fisico (figura 1 1)

Estc cspcctro corrcspondc a polictilcno cl cual no conlicnc ningún tipo dc plastificantc. A nosotros nos intcrcsa &mar los cambios de los plásticos cn su cstructrura química con difcrcntcs tratamicntos físicos. concrcwcntc nos intcrcsa la aparición dc grupos carbonilo. ya quc csistc la posibilidad dc quc con cstc grupo químico los organismos pucdan mctabolizar cl polictilcno incorporándolo al ciclo dc los ácidos grasos. Consultando cn la bibliografa sc busco cl núrncro dc onda cn cl cual aparccc cl grupo carbonilo. Una C'CL obtcnida csu información sc construyó UM tabla cn la cual sc rcsumian los principalcs picos y las estructuras químicas a las cualcs corrcspondían.

Los principalcs picos dc intcrds del polictilcno sin tratar y los picos quc nos intcrcsa cuantificar con el tratanlicnto fisico son los siguicntcs (Tabla 3).

Tabla 3. Números de onda de los principales picos de polietileno y grupos funcionales correspondientes

No. de onda (cm- 1 ) (cm-1)

Grupo funcional correspondiente Intervalo de medición de área -

I I 2962,2926

Grupo funcional Ester Carbonil o Cetona Carbonil 1768 - 1692 1740, 1715 Estiramiento simétrico del H del CH3 y del CH2 (1) 2874 - 2740 2872,2853 Estiramiento asimétrico del H del CH3 y del CH2 (1) 3120 - 2873

(2) '1 445 11498 - 1408 Doblamiento de tijera de los Hidrógenos del CH2 (1) 1375 Doblamiento de sombrilla de los Hidrógenos del CH3 1407 - 1329

(1) 1326 - 1281

Posible alqueno aldehido o cetona (4) 1210 - 1143 Posible grupo alqueno o aldehido (3)

720 Vibración concertada de 4 o mas grupos CH2 (2) 760 - 682 ~~

Cotno sc pucdc obscnar cn el cspcclro dcl polictilcno sin tratamiento. cstc no conticnc grupos cartanilo. solo grupos mctilo. mctilcno. y doblcs cnlaccs.

El primer tratamicnto fisico contra cl cual vamos a comparar cstc cspcclro cs cl tratamicnto cirnlico. En cl tratamicnto tcrnmico cl polictilcno sc calcntó a 150” C durantc 8 horas. 5 días. 1 0 días y 15 días. Todos los cspcctros con cstc tratanlicnto prcscnta.n los picos mismos picos quc cl polictilcno sin Lratar. Sin cnlbargo cs posiblc obscnar la aparición dc grupos carbonilo.

En cl intcmalo de I71 S a 1740 cm sc observa un pico que corresponde n un grupo a r b n i l . los cuatro cspcctros lo prcscntan y sin cmbargo la intcnsidad dc cstc pico es proporcional al ticmpo de tratamicnto. Sc obscna quc cs mayor cuando la mucstra tuvo un tralamicnto dc 15 días (clavc PETISA), disminu?c en cl tratamicnto dc 10 días (clavc PETIOA), a los 5 dias (clavc PETSB) es aún nlcnor k a las 8 horas (clavc PET8H2)ticnc cl mcnor tamafio (Figura 12).

En cl policlilcno quc fuc tratado con rayos gama no sc obscna la aparición dc picos tan pronunciados como cn cl caso d c l polictilcno tratado tdrmicamcnlc. En cstc caso los picos son mu! pcqucííos

cl quc prcscnla un pico mayor cs cl polictilcno quc fuc tratado con 15 Mrad (clavc PEG 15X). cl dc 20 Mrad (claw PEGZOU) si prcscnta un pico pcro no CL igual dc pronunciado. El dc 10 Mrad (clavc 1OX) no prcscnta cstc pico. Da& quc todos los duplicados presentaron cstc compoftanljcnto nos cs chlicil dctcrnlinar un comportamicnto gcncral cn este tratamicnto (Figura 13). c C?

Para cl polictilcno quc sc irradó con l l l z UV sc obwrva dc mancra bastantc difcrcnciada cl pico dc L cz . r:? %Q

17 I S a I740 cm ’ cl cual corresponde al grupo carbonilo que ya se señaló anteriormcnte. La intensidad dc c.: : f

cstc pico cs proporcional al tratamicnto. cl polictilcno quc sc trató durantc 76 dias (c lax PEUV76) prcscnta n1 ;r7 ”.. 2

cstc pico dc nuncra más pronunciada quc cl que solo recibió cl tratamicnto durantc 15 dias (clavc PEUVl5 .zp .- I 3, 2

)(Figura 11). 1- m c 2

En cl aso d c l polictilcno nos cs posiblc observar quc csistc UM marcada difcrcncia cn los cspcctros dc las nwcstras sonlctidas a difcrcntcs tratamientos. Para los casos dc los tratamientos tcnnicos y ultraviolcta g ;; podcnlos concluir quc si hubo canlbios, cn cl caso d c l tratamicnto gama los datos son muy confusos no tlJ podemos concluir dc una mancra contundcntc. Todo lo antcrior nos Ilcva a infcrir quc las radiaciones UV y los Lratamicntos Ldrmicos produccn grupos carbonilo cn el plástico.

m G c o

-,.

“x

9 5

w

6.3. Quitina

En la quitina tambicn sc oplimizaron l a s condicioncs para sus anillisis cn el microscopio. Las condicioncs dc andisis dc quitina cn cl microscopio quc sc consideraron oplinlas fucron igualcs a las dcl polictilcno:

Resolution: 4 cm“

0 Apodvation: Strong

Gain: 8

o Phase Corrcction: Sclf

En 13 quitina sc calcularon los númcros dc onda que w a n Gorrcspondcr a cada partc de la estructura dc la quitina. estos sc resunlen cn la siguicnlc tabia (Tabla 4).

Tabla J. Numcro dc onda dc los principalcs picos de quitina y corrcspondcntc grupo funcional.

Numcro dc onda (cm "1 3390 Estiranuento asimétrico dc los hidrógenos del NHz

~~

Tipo dc grupo funcional

3 2 0 0 Estiramiento simétrico dc loshjdrogcnos del NH- - 2962 2926 )Estiramiento&imCtrico& Ioshidr&nos CH- - 2872. 28 I

~- I Estiramiento asimetrico de los hidrógenos del CH3

53 I Estiramiento simétrico de los ludrógenos d e l CH, ! CH2

1613 Doblamiento de tijera de los hidrógenos d e l NH- I430

Doblamiento d e l H d e l aldehido 1390 Doblamiento &I H del grupo OH

1050-1 150 Estiramiento -C-O-

Estos datos se pueden correlacionar con el espectro que se presenta y a su vez analizar conjuntamente la estructura química de la n1ol&ula (Figura 15).

2 2 2 4 2 2

EO.

66.

I y4.04

/

Figura 10. Espcctro dc Infrarrojo dc una mucstra dc policstircno

1- - - - -- -

AT

22

Figura 12. Espcctro de Infrarrojo dc polictileno con tralamicnto tcrmico.

77 9

76.0

70.0

66.0

00.0

66.0

60.0

46.0

40.0

36.0

30 O

26.0

20.0

%T

iza

115

l l C 0

105 O

1W O

9s o 900

85 O

a00

7 5 O

73 O

65 O

600

55 0

500

45 O

40 O

3s o 300

25 o Z O G

16 O 4000 3200 2800 7600 m 1&30 rm '400 1m 1000 @m I-

Ch4-1

Figura 14. Espcctro dc policlilcno tratado con ra!os ullraviolcta

,;. 31 iO.X5

I &?'.47

I

Figura 15. Espcctro dc Infrarrojo dc una mucslra dc quitina.

CONCLUSIONES

7. CONCLUSIONES

Con el anllisis de la nlucstra dc policstircno sc aprcndió cl uso d c l cspcctofotómctro y se lli/.o una intcrprctación dc cstc cspcctro. Sc kcrificó tanbicn el aciccuado funcionamicnto dcl mismo.

En cl andisis dcl polictilcno puro sc lograron idcntilicar pcrficctanlcntc todos los picos dc intcrcs. Al comparar cstc c s p t r o con los cspcctros d c l polictilcno quc habían rccibido tralanlicntos tcrmicos y dc IJV sc obscna la aparición dc grupos carbonilo. la intcnsidad d c l pico cs proporcional al ticnipo dc csposición y a la intcnsidad dcl tratamicnto. En cl polictilcno tratado con rayos gama no fuc posiblc sacar conclusioncs dc mancra contundcntc. Sc pucdc proponcr cn basc a lo antcrior quc cl tratamicnto con rayos UV y t6rmico pucdc facilitar una biodcgradación dc los plásticos.

En cl caso dc la quitina. sc logró un bucn tratamicnto dc las mucstras y una bucna intcrprctación dc los cspcctros. csto nos permitirá postcriormcntc haccr un anilisis químico cuantilalivo dc las nwcstras para mcdrr grados dc dcsacctilación.

La claboración dc los dos manualcs cs la síntcsis d c l corrccto aprcnduajc dc uso d c l cspcctrofotómctro. así como un rcsunlcn dc los nlanualcs y cursos suministrados p o r la compañia.

27

8. Bibliografía

Schicring D.W.. Young E.F.. Byron T.P. 1990. An F T J R microscope. Amcrican Laboraton

Espcctroscopía dc Infrarrojo p o r transformada dc Fouricx. Curso básico. Pcrkin-Elnw

"Farmacopca dc los Estados Unidos Mcsicanos". 199.1. Sexta cdicion. Sccrctaria de salud. México

Christian, Gaty D. 1990. Química Analítica. Scgunda Edción, cditorial Limusa. impreso cn México.

Abrahams, Charles B. I990 IR Tutor Columbia Univcrsity, Pcrkin Elmcr

Alberlson, Christinc Ann, Andcrson Sven o b c . 198S.Thc mcchanism of Biodegradation ofpolicthylcnc

Spcctra-Structure Corrclations. Stanford Rescarch Labs. American Cynamid Co.

Skoog. Douglas A. West Donald M. 1989. Química Analítica. Cuarta mcion. &torial Mc Craw Hill. impreso cn Espaiia.

APÉNDICES

APENDICE A

MANUAL, DE USO SIMPLIFICADO

Manual de uso simplificado para el uso del espectrofotómetro de Infrarrojo por transformada

de Fourier

Serie 2000

Elaborado por Yuri Castro Riquelme

Planta Piloto 4

Departamento de Biotecnología

UAM Iztapalapa

Rucamenducionrs Grnerules:

O El aparato debe estar en un lugar libre de polvo. humedad y vibraciones

O Solo debe ser movido por personal calificado ya que puede sufrir daños

O Dcbc estar conectado y encenldo pernunentementt: para evitar el humedecimiento de su sistema optico.

O No debe linlpiarse con paiios humedecidos en agua ya que puede absorber humedad

O Sicnlpre debe tener un frasco con silica-Gel para evitar que se humedezca.

o Pcriódmmente deben activarse los cartuchos que hay dentro de el (cada seis meses) así conlo la silica dentro de los frascos (cada vez que cambie de color) para que estos puedan seguir absorbiendo la llunledad (ver manual de uso).

Precauci6n

Por ningún motivo se debe activar el microscopio sin estar este cargado con nitr6geno líquido.

uso DEL ESPECTROFOT~METRO

5 . Verificar que nada obstruya el conlportamiento de la muestra.

6. Dar click Con el ratón en el menú principal d e l I R D M 2000 en la opción INSTRUMENT

7. Posteriormente hacer click en la opción SETUP INSTRUMENT

2.Seleccionar SETUP INSTRUMENT k t select /Shta...

8. tu aparcccr la siguicntc opción dar click con c1 ratón en cl d~bujo de un fxo para activar la fucntc IR (Nota. dos focos. al d a r click cn cl foco que dicc N I R sc actiha la fuentc d c i ccrcano IR cn cl foco que dicc MIR sc acti\.a la fucntc d c l M d o IR!.

SETUP INSTRUMENT

2 2 2 4 2 2

Este primer csquema nos ilustra la activación dc la fucntc d e l Mcdio Infrarrojo. también se puede activar el cercano Infrarrojo colno muestra el siguiente esquema. Es importante hacer notar que solo se puede activar '. una sola fucntc a la VCL. El cuadrado quc conticnc la lctra D cs cl dctcctor d c l aparato (vcr dhujo). POR , .

NINGúN MOTIVO ACTIVAR EL OTRO DETECTOR (EL QUE CORRESPONDE AL MICROSCOPIO) YA QUE ESTE NECESITA NITRóGENO LíQUIDO PARA FUNCIONAR, DE OTRA FORMA PUEDE SUFRIR GRAVES DAÑOS.

r SETUP INSTRUMEN1

. r

9. Dcspucs sc da click en el cuadrado infcrior dcrccho donde dicc OK

SETUP INSTRUMENT

Seleccionar esta caja de diálogo para activar la fuente.

10. Una vel. aclivadas la fuente y- el detector se dek checar todo el sistema esto se hace inicialirando el aparalo. Después que se rcgrese al nlenú principal dar click en INSTRUMENT. luego cn INSTRUMENT CONFIGURE y luego en INITIALIZE INSTRUMENT.

Fb V i

I .Seleccionar NSTRUMENT

2 Entrar al menú INST. CONFIGURE

32

1 I . Una tcl, que sc ha verificado cl funcionamicnto d e l aparato se dcbc alinear cl sistcma ópiico cn forma tal quc suministre cl misinlo dc cncrgia al dctcctor. Dar click nucv;In;cntc cn INSTRUMENT. luego cn INSTRUMENT COhTIGURE y p o r últilno cn AUTOALIGN.

12. Para mochficar las condiciones de Tuncionatnicnro del aparato d a r click cn INSTRUMENT > después en SCAN MODE . Esto nos ayuda a oblcncr cspcctros con mejor resolución.

I INSTRUMENT pan 1 .Seleccionar I entnr a este menu.

I 2 Seleccionar SCAN MODE para entnr al uguienta menu.

\ Aaul se Duede modificar la \ \

veiocldad del 1nterfer6metro

Seleccionar OK para rnodlftcar la veloudad del interferdrnetro

3 3

La función dc apodmción cs una función n,latcmatica quc nos pcrnlitc obtcncr cl cspcctro. La ganancia cs proporcional al aumento dc cncrgia cn c l aparato. a mcnor ganancia nlcnor cncrgia. para mucstras delgadas \. claras x dcbc usar nlcnor ganancia. para rnucstras grucsas y opacas dcbc u a r g mayor ganancia. Sus valorcs v3n dc 1 a 8.

La a j a dc diálogo don& dcc "OPD" vclocity x rcficrc a la vclocidad d e l intcrfcromctro. a menor balar lllcnor vclocidad y mas lcnto \ a a x r cl ticnlpo cn quc va a sacar un cspcctro pcro lllayor va a scr la resolución y nlenor el ruido.

Sc rccomicndan los siguicntcs valorcs para a& aditamento & I cspcctrofotómctro:

Para el esptrofotómetro:

o Rcsolution:

J-Stop:

o Apoduation:

o Gain:

0 OPD Vclocity:

0 Phase Correction:

0 lntcrfcrogram Type:

Para la fibra optica:

Resolution:

J-Stop:

0 Apoduation:

Gain:

OPD Velocity:

P l u s Corrcction:

Inlcrfcrogram Typc:

Para el microscopio:

Rcsolution~

4 cm "

')..y64 cm "

Strong

1

2.0 c d s

S c l f

Bi-Directional Doublc Sidcd

4 cm

4 cm "

Strong

8

0.20 Cl l JS

S c l f

Bi-Dircctional Doublc Sidcd

4 cm

o A@/;ltion:

o Gain:

o OPD Vcla-ity:

O Phasc Correction:

o Interferogram Typc:

Kaisscr- Bcsscl

1

0.20 cnds

Sclf

Bi-Dircctional Doublc Sidcd

14. Para sacar cl cspcctro dc una nwestra primcro hay quc sacar un espectro dcl m d o ambicnk a csto sc IC llama Backgorund. Para haccr csto dar click en INSTRINNT y dCspuC~ en SCAN.

IS. En la siguiente ventana de diálogo se indica que s e : va a sacar un Background. el nombrc que sc IC \a a dar. el numero de barridos (SCANS) >- el rango de número de onda en cl cual x \.a a sacar el barrido.

Selecdonar la opcion Background

SCAN 4 Select Mcmony: I]

1 ”

Para lnlctar el espeetro En esta parte se le da sdeec,onPr OK nombre al s r p e c t m .

En el mcdio Infrarrojo se rccomiendq un rango de número de onda dc 400 n 4(M)O cm" aunque x pucdc usar un rango mcnor p r o no ma!or. El númcro dc barridos ('SCANS') cs el númcro dc tcccs quc el Infrarrojo va a rccorrcr la mucstra. A ma)or núnlcro dc barridos sc va a obtcncr major dcfinición viceversa. sc rccomicnda un mínimo dc 12 barridos aunquc x pucdc haccr sólo uno. El nombrc quc sc IC cic pucdc dar no importa, aunquc se rccomicnda nombrarlo como Back.

16. DcspuCs dc sacar el background sc saca cl cspoctro dc la mucstra, para hacer csto sc dcbc prinlcro colocar la mucstra cn cl compartimicnto cspocial para csta, &spuds sc rcpitcn los pasos antcriorcs. sc da click en It6lXUMENT , lucgo cn SCAN y ya en cstc menú sc da click cn SAMPLE y se m a f i c a cl nombrc d c l archivo para cl cspcctro. Es necesario quc cl cspcclro sc saquc cn cl mismo rango dc númcro dc onda y quc sc IC dc cl mismo niuncro dc barridos. Por úlitimo para iniciar el barrido sc da click cn OK.

/ Sehalar que se trata de una muestra

I 1 SCAN

Indicar a1 rango en que se va

DertLaaUon: Data Range: scans: Data Interval:

Anotar el número de barridos en

r z z q p r ~ c l p - j FJ esta parte

A

I E n esta parte se le da Para iniciar el espectro nombre al espectro sehalar OK

Cada VCL que se mdfique el nimero de barridos. el número de onda o un parámetro d e l SCANMODE es necesario volver a sacar un Background con las nuevas condiciones.

17. Por omisión el aparato guarda los espectros en una regón de memoria llanlada DATA. Si por alguna ruón se sale d e l programa en este momento los espectros se pierden. para evitar esto los espectros deben ser guardados periódJcamente y al finalkar el trabajo se guardan en disco duro. Para ham esto dar click en el icono donde dice DATA a continuación aparecc una ventana con los nombres de los espectros que se han hecho. Se debe dar click y arrastrar el ratón formado un rectangulo que abarque los iconos de estos cspectros. Después se debe dar click dentro del área formada por este rectángulo y arrastrar el ratón sin s o l t a r el botón hasta el icono del dri\.e C:. Después de realizada esta operación los archivos quedan guardados en el disco duro.

18. una terminado el trabajo se debe apga r lodo el sistema. Primero srs da c k k en INSTRUMENT . lucgo cn S E T W INSTRUMENT . Una \CL dentro de esta caja dc diálogo se da click en el foco que corresponde a la fuente que se act¡\.ó en el paso 8 e inmdatamente despuis se da click en la caja de d~alogo donde &ce OK.

SETUP INSTRUMENT

fuente con el rat6n para apagarla

B t a u n 2. Para apagar la fuente seleccionar OK con el atdn

19. Una vu . cn cl mcnú principal y habicndo salvado los cspcctros S(: da click cn FILE. lucgo cn QUiT TO Dos. 20. Una vcz cn cl sistema Windows sc da click cn ARCHIVO y lucgo cn SALIR DE WINDOWS.

2 l . Ya cn cl MS-DOS sc proccde a apagar la cornputatbra y cl monitor.

37

uso DE LA FIBRA ÓPTICA

0 No dcbc x r golpeada nl x le d d ~ &jar caer !a que se puede daiiar.

No x debe doblar a un rad0 menor de 150 mm. ni clebe ser doblada de Inanera brusca

o No x &bc estirar mas allá de su longitud normal.

o No debe ser almacenada en un ambiente húmedo.

o Los estremos deben ser manejados con cuidado sin s e r golpeados o dejárseles caer.

o No debe ser sonletida a la acción de Qcidos o Alcalis fuertes.

o Ver también las reconiendaciones para u50 d e l especlrofodmetro.

MI

u-16 n

5-

Partes de la unidad Cle transferenciu dpricu

1. Cubierta de purga.

2. Tornillos abrazadera ck la cubierta dc purga.

3 . Tornillos de la hase dc la interfasc.

4. Tornillos abrazadera del cable de la fibra.

5 . . Bloque de soporle dc la fibra.

6. Concsioncs hcmbra d e l SMA.

7. Bloque de montura d e l sistcnla de lentes.

8. Adaptador a.xiurado rtlacho del ShfA.

!l. Collar cerradura abruadcra.

13

2 I , --

1 0 . Vcrticc cuadrado de la nlontura d c l espejo.

1 1. Orificio lateral en cl \érticc cuadrado & la montura ckl espejo.

12. Tornillo adclguado dentro d c l b c r t i c c cuadrado de l a montura del espejo.

13. Monlura d e l espejo.

I J . Montura de los Icnlcs en el tubo reteniendo cl tomillo adelgarado.

1 S. Tubo dc nlonlura dc los Icnlcs.

16. Bordes finales dc la cubierta dc purga.

17. Tubo de concsión de p u r g a .

Purtes de Iufibru ópticu

1. Disco de división de la fibra óptica

2 . Concsión SMA.

3. A&pt;ldor de concsión SS.I.4

4. Collarin abruadcra.

2 2 2 4 2 2

Partes de la fibra 6plica y el ATR

1 . Cubierta protectora de PTFE para el cristal de ATR.

2. Sección inferior de asiurado de la a k a de prucba.

3. Anillo aiurado superior.

P U . ~ . ~ puru usur lu fihru bpticu:

1. Rcmo\cr primcro la montura dcl compartimento dc la mucstra dcl cspcctrofotómctro. Lo cual sc hacc dcsatornillando las tucrcas quc la nlanticncn fija.

2. Instalar la plataforma. sin la intcrfacc óptica cn cl cspcctroiotómctro, para lo cual solo hay quc fijarla cn cl lugar dondc sc cncontraba la montura y atornillarlo.

3. Rcmo\cr la cubicrla dc purga dc la unidad dc transfcrcncia ópica. Al rcaliLar csta opcración ha, quc aflojar los dos tornillos quc sc cncucntran cn la parte frontal y lcvantar la cubicrta.

5 . Una VCL montada la unidad dc transfcrcncia óptica atornillar la cubicrta dc purga .

PRECAUCIóN: AI realizar esta operación se debe tener mucho cuidado de no mover los espejos y de no poncr los dedos encima dc cllos ya que se p u a n ensuciar con grasa.

6 . Mícntras sc dcticnc la fibra en UM mano i n s e r t a r cuidadosamente cl disco de la fibra cn cl bloque dc soportc dc la intcrfacc.

7. Inscrtar cuidadosanlcntc y dc mancra simultánea los dos machos dc la fibra dc prucba cn las dos concsioncs hcnlbras dc la unidad dc transfcrcncia óptica. Las concxioncs cstán localizadas cn cl frcnlc dc los bloqucs ck la montura dc los dos sistcnlas dc Icnlcs.

8. Atornillar con los dcdos los collarincs dc las twrw quc sc cncucntran atrás dc los machos dc la fibra óptica cn la unidad dc transfcrcncia ópica.

I Al realizar esta operaci6n checar que la fibra no se doble mfis I allh del fineulo indicado

l . Asegurarse quc los tomillos quc cubren la cubicrta dc purga cstán bien atornillados.

2. Purgar cl instrumento con niuógcno o hclio a través dc la concsión dcl t u b dc purga en la cubicrta

Reulizacicin del a p e d r o

Para obtener cl espectro se deben seguir los mismos pasos que para usar el espectrofotómetro (pasos 1 a 21)

Para desmontar la fibra xguir los mismos pasos quc para montarla pcro cn orden inccrso

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USO DEL MICROSCOPIO

Precauciones drtrunte el uso del microscopw

1. Nunca activar el detector del microscopio sin haberlo enfriado antes con nitrógeno líquido.

2. Si cl botón dc la basc d e l microscopio sc c o l o c a cn IR y cl supcrior en VIEW, los rayos Infrarrojos y cl lriser van a salir a través de los oculares de l microscoDio dnllando los ojos de la wrsona aue vea a traves de ellos. Por lo consiguientc para vcr a travb d c l microscopio ambos botones dcbcn cstar cn VIEW.

3. Mantencr el nucroscopio lejos de polvo y vibraciones.

J. Para mancjar el nitrógcno líquido usar lentes de seguridad o carcta, hata y guantcs.

PRECAUCIbN Para usar el microscopio es necesario enfriar el detector con

nitr6geno líquido. El nitr6geno líquido puede causar quemaduras en piel y ojos. Siempre que se maneje el nitr6geno

se deben usar guantes, bata y lentes de seguridad o careta.

EnJriandO el detector del microscopio

IMPORTANTE: Para realizar esta operacicin tie deben usar guantes, bata y lentes de seguridad o careta de proteccida Al vaciar el oitrdgeoo liquido se debe hacer suavemente y cuidando no derramarlo ya que puede dnilar la 6ptica del microscopio.

1 . Quitar cl capuchón de la apertura cn la parlc alia dc la cubicrta del microscopio.

2. &tirar cl tapón que x encuentra tapando la entrada d e l tcrmo quc csta dcntro dc la cubierta d e l microscopio.

2. Colocar el embudo pqwfio suministrado a n cl juego &I microscopio cn la apertura. Conformc sc inserta el ascguram de que cstc entre en cl oriíício del termo.

3. Cuida&samcnte y lentamente llenar cl embudo con nitrógeno l í q u i d o . L l c w el cmbudo completamente y csperar a que se vacie dentro del termo. el nitrógeno debe bwbujear y vaporizars.

Al realizar esta operacibn se &bc ir viendo a traviv dcl orifício dc entrada con ayuda del iluminador cl nivcl del Nitr6geno líquido para quc cste no se d e r r a m e .

4. Adicionar poslcriormenb uno y mcdio embudos de nitr6gcno l í q u i d o . Esperar por dos minutos.

5 . Continuar vaciando nitrógeno liquido dentro dcl tcnno adicionando un poco más cada vez quc c1 cnlbudo x vacía. Hacer esto 1- que x logrc ver el l i q u i d o llegando hasta la partc superior d e l termo.

6. Rcwcr el embudo y esperar dos minutos.

7. Cuando el nitrógeno deje de burbujear r e c o l o c a r cl tapón en el termo y el capuchón en la cubierta dcl microscopio.

Los siguientes tres pasos (prcparando cl microscopio, ajustando !as piczas de los ojos y enfocando el microscopio) se paeden evitar si cl aparato esta ajustado. es Qocir si s hicieron con anterioridad y los controlcs no se han movido.

Preparando el microscopio

1. Colocar el botón superior VIEWAR todo hacia la izquierda (se encuentra en la parte superior del microscopio).

2. Insertar el ilurninador en el soporte superior que para tal efecto existe

3. Girar el botón de encenQdo de la henk.

Espep del detector

lluminador

Boton I &en or VIEWflU

Boton inferior 'Trar~Ret l

Ajusiutdo lrrs piezas de los ojos

1. Mirar a tra\%s de los oculares con ambos o&

2. M o w los oculares hacia la derecha e izqucrda de manera que se pueda cubrir todo el campo visual con ambos ojos.

Enfocando el microscopio.

l. Mirar a través d e l ocular derecho con su ojo derecho. Girar la perilla de enfoque d e l microscopio O p t i c 0 hasta que la imagtn estc clara.

2. Mirar a travcs & I ocular izquierdo con cl ojo kquicrdo. Rotar el anillo de ajuste d c l ocular izquierdo hasla que la inlagen cstc clara.

3. Enfocar el sistema dc IR y alinearlo con el sistcnu d c l microscopio óptico como sigue:

a. Rcmovcr la nlucstra y la plalafonna dc prcparaci6n dc la muestra.

b. Colocar la apertura variable dc hojas dc navaja.

o Las cuatro perillas en la apertura dcbcn cstar hacia adclantc ckl resorte.

o La apertura &be descansar &bajo ckl rcsone ondulado y enfrente d c l rcsortc plano.

c. Mirar a u a v b ckl microscopio y cdaw los l a d o s ck l a s navajas con la misma perilla quc en el paso 2.

d. Rcmovcr la apcrtura variablc dc hojas dc navaja.

Seguir l o s pasos 1 a 8 d e l manual de uso d e l espectrofotónmro.

9. Ahora es necesario activar el detector d e l microscopio. Para Iucer esto se da click con el ratón en el cuadro superior derecho donde dice MIC.

r

SETUP INSTRUMENT

IO. Dcspués sc da click cn cl cuadrado infcrior dcrccho Qn& dicc OK.

SETUP INSTRUMENT

Para activar la fuente y el detector seleccionar esta caja de dialogo

Continuar con los pasos 1 1 a 13 dc uso & I espcctrofotómctro.

47

2. Colocar el iiuminador en el soporte adecuado.

0 Soportc superior, sobre la mucstra. para vcr cn reflactancia

Soporte inferior, bajo la muestra, para ver en transnutancia.

Nota: En la mayoría ck los sistemas un tcrccr soportc csta disponible sobrc la plataforma para preparación de muestras. Estc sólo sc usa para prcparar mwslras.

3. Colocar cl microscopio para vcr una muestra:

a. Presionar el botón VIEWAR supcrior hasta VIEW.

b. Jalar el b o t h VIEWAR inferior a VIEW.

c. Presionar cl b o t h TRANSREFL supcrior hasta TRANS para ver por transmitancia.

d. Girar la pcrilla de la fuente de alimentación d e l iluminador hasta 3.

4. Posicionar la muestra en la platina de muestras y enfocarla.

o Mirando desdc cl frente, ajustar la pcrilla & foco qw se encuentra en la bast: del microscopio del l a d o izquierdo.

o Aun mirando de& el frentc ajustar la platina en las direcciones x y y con los controles ck la platina hasta ver la l u z atravesando la mucstra.

5 . Mirar dentro del microscopio conforme ustcd usa los csntrolcs de la platina para c o l o c a r la mucstra en el a n u o d c l c a m p o .

o Mover la mucstra cn la dircccion S (izquicrda y dcrccha en el campo) con la pcrilla interior poqueiia.

Mover la mucstra cn la drrección y ( arriba y abajo en el campo) con la perilla larga cstcrior.

6. Ajustar la pcrilla de foco en la bax kquicrda d e l microscopio hasta quc la muesua sc cncucntre en foco.

Obteniendo un Background

2. Colocar el microscopio para obtener un espectro Q IR como sigue:

a. Apagar la hen& de poder del iluminador.

b. Jalar el botón VIEW/IR superior hasta IR.

c. Presionar el botón inferior MEW/IR hasta IR.

d. Para seleccionar el tipo de espectro que debe ser obtenido (Transnutancia o Reflactancia) colocar ambos botones (tanto el superior como el inferior) en TRANS o ambos en REFL.

3. Ajustar la ganancia:

a. Dar click en INSTRUMENT

b. Dar click en MONITOR

c. Dar click en ENERGY

La energía dcbc s c r lo mas cercana a 5000 pero no mayor.

d Si es menor aumentar la ganancia con la p e r i l l a quc sc encuentra en la basc &I microscopio d c l lado &mho.

7. Para sacar el Background scguir l o s pasos I4 a 15 para el uso &I Cspecuofo~mcuo

Obtencidn del espectro de la muestra

I . Después de sacar el background sc saca el espectro de la muestra, prender la fuente de alimentaci6n d e l iluminador.

2. Prcsionar el botón superior VIEW/IR hasta VIEW.

3. Jalar el botón inferior VIEW/IR hasta VIEW.

4. Regresar la muestra al centro d e l mnpo moviendo la misma perilla que se uso para retirar la muestra al sacar el background

5 . Apagar el iluminador.

6. Jalar el botón inferior VIEWAR hasta IR.

7 . Presionar el botón inferior VIEWAR hasta IR.

8. Sacar el espectro siguiendo los pasos 16 a 17 de la guía de uso del espemofodmetro.

Y. Una vez terminado el trabajo se debe apagar todo el sistema. Pnmcro se da click en INSTRUMENT . luego en SETUP INSTRUMENT . UM vez dentro de esta caja de &álogo se da click en el foco que corresponde a la hente que se activo en el pasa 8 e inmediatamente después se da click en el otro detector.

SETUP r n W E W T

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10. Continuar con los pasos 19 a 21 para tcrminar el USO.

Uso del espe&ofot&metro

1. Dcspucs de haber encendido la computadora y ya dentro del ambiente Windows hacer click con el ratón en el icono de IRDM 2000 que se encuentra en la ventana de PE aplicaciones (Perkin Elmer aplicaciones).

2. Verificar que nada obstruya el conmmiento de la muestra.

3. Dar click con el rat6n en el menú principal del IRDM 2000 en la opción INSTRUMENT y posteriormente hacer click en la opción SETUP INSTRUMENT

4. Dar click con el rat6n en el dibujo de un foco para activar la fuente IR (Nota: Aparecen dos focos, al dar click en el foco que dice NIR se activa la fuente del cercano IR, en el foco que dice MIR se &va la f w n k del Medio IR) terminar dando click en el cuadro inferior derecho Qnde dice OK.

5. Dar click en INSTRUMENT, luego en INSTRUMENT CONFIGURE y luego en INITIALIZE INSTRUMENT.

6. Alinear el sistema óplico dando click nuevamente en M S T R W N T , luego en INSTRUMENT CONFIGURE y por último en AUTOALIGN.

7. Modificar las condiciones de funcionamiento del aparato dando click en INSTRUMENT y dtxpuds en SCAN MODE.

8. Sacar un espectro del medio ambiente .(Backgorund) para hacer esto dar click en INSTRUMENT y despues en SCAN.

9. Indicar que se va a sacar un J3ackgroun4 el nombre que se le va a dar, el número de barrich y el rango deniunerodeondaenelcualsevaasacarelbarrido.

10. Sacar el espectro de la muestra, dar click en INSTRUMENT , luego en SCAN y ya en este menú se da click en SAMPLE y se modifica el nombre del archivo para el espectro. Para iniciar el bani& se da click en OK.

11. Para apagar todo el sistema. dar click en INSTRUMENT , y luego en S E W MSTRWNT . UM vez dentro de esta caja de &logo se da click en el foco que corresponde a la fuente que se activo en el paso 8 y al detector que corresponde al microscopio. Inmediatamente despub se da click en la caja de diálogo donde dice OK.

12. Una vez en el menú principal y habiendo salvado los espectros en el drive C, se da click en FILE, luego en QUIT TO DOS.

APÉNDICE B

MANUAL DE REFERENCIA &IDA

MANUAL DE REFERENCIA RÁPIDA PARA EL uso DEL ESPECTROFOT~METRO

Pasos paru usar Ir f i r u dptica: 222422 1. kmovcr primero la montura &l compartimento de la muestra &I cspectrofotómctro. Lo cual sc hace desatornillando las tuercas que la mantienen fija.

2. Instalar la plataforma, sin la intcrfacc óptica en el espcctrofotómetro, para lo cual solo hay que fijarla en el lugar don& se encontraba la montura y atornillarlo.

3. Rcmovcr la cubierta dc purga de la unidad dc transferencia óptica. Al realizar esta opcración hay que aflojar los dos tornillos quc se encuentran en la partc frontal y levantar la cubierta.

J. Montar la unidad de transfcrcncia 6pttca en la plataforma instalaQ en el espcclrofotbmetro y atornillar los dos tornillos que se encuentran cn la baw de la unidad de transferencia Wca en l o s p i v w de la plataf0ITEl.

5 . UM vcz montada la unidad de trmfercncia 6ptica atornillar la cubierta de purga.

L Al realizar esta operaci6n se debe tener mucho cuidado de no mover los espejos y de no poner los dedos encima de ellos ya que se pueden ensuciar con grasa.

6. Mientras x hticne Pa fibra en una mano inscrlar cuidadosamente el disco dc la fibra en el Moquc de sopork dc la interface.

7. Insertar cuida&smcntc y de mancra s i m u l h los dos machos de la fibra de prueba en las dos conexiones hembras de la unidad & transfcrcncia 6pt ica . Las conexiones esth localizadas cn cl frerllc & l o s bloques de la montura dc los dos sistcnaas dc lentes.

8. Atornillar con los dcdos los collarincs & las tuercas que se encuentran al& & los machos dc la fibra óplica en la unidad de transferencia óptica.

P R E C A U C I ~ N Al realizar esta operaci6n checar que la fibra no se doble mas

all& del hneulo indicado

1. Asegurarse que los tornillos que cubrcn la cubierta dc purga están bien atornillados.

2. Purgar el instrunlcnto con nitrógeno o helio a través de la conexión d e l tubo dc purga en la cubierta.

5 1

Desmontaje de lajibru

Para desnlontar la fibra seguir los mismos pasos que para montarla pero en orden inverso.

Uso Cirl microxopio.

Enfriundo el detector deí microscopio

~ ~~

IMPORTANTE Para realizar esta operaci6n se deben usar guantes, bata y

lentes de seguridad o careta de protecci6n. AI vaciar el nitrbgeno liquido se debe hacer suavemente y cuidando no derramarlo ya que puede dallar la hptica del microscopio.

1 . QLUtar el capuchón de la apertura en la parte alta de la cubierta del microscopio.

2. Retirar el tapón que se encuentra tapando la entrada del tenno que esta dentro de la cubierta del microscopio.

2. Colocar el pequedo embudo suministrado con el juego del microscopio en la apertura. Conforme se inserta el embudo asegurarse de que este entre en el orificio del termo.

3. Cuidadosamente llenar el embudo con nitrógeno líquido. Llenar el embudo completamente y esperar a que se vacíe dentro del krmo. el nitrbgeno debe burbupar y vaporizatse.

Al realizar esta operacih se debe ir viendo a travk del orificio de envada con ayuda del iluminadot el nivel del nitrbgeno líquido para que este no se derrame.

4. Adicionar posteriormente uno y medio embudos de nitrógeno líquido. Esperar p r dos nlinutos.

5 . Continuar vaciando nitrógeno líquido dentro del tenno adicionando un poco más cada vez que el embudo se vacía. Hacer esto hasta que se logre ver el líquido llegando hasta la parte superior del termo.

6. Remover el embudo y esperar dos minulos.

7. Cuando el nitrógeno deje de burbujear c o l o c a r el tapón en el termo y el capuchón en la cubierta del microscopio.

I Iluminador I VIEWAR I VIEWAR I TRANS/REFL, ITRANS/REFL 1 B o t h superior Botón inferior Botón superior Botón inferior

Visión cn Trans

Cualquier TRANS VIEW VIEW Prendido, Visión en Refl.

Cualquier TRANS VIEW VIEW Prendido, Soporte inferior posición

soporte superior P-RANS IR IR lTRANS Apagado Espectro en posición I I (Mas l u z )

Trans. I I I 1 1 Espectro en I Apagado !IR IR REFL I REFL

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Scguir los pasos 1 a 7 para el USO &I cspcctrofodmctro antcs ck r ca l i a r estos pasos.

Pasicionundo una muestra

1, Colocar la muestra en la platina d e l microscopio.

2. Colocar el microscopio para vista en transmitancia o reflactancia.

4. Mirando & d e el frente, ajustar los controles de movimiento de la muestra en la platina en el sentido X y Y hasta ver la muestra iluminada.

5. Centrar la muestra en el campo de visibn con los controles de la platina en el eje X y Y.

6 . Llevar la muestra a foco con la perilla de foco que se encuentra en la base izquierda d e l microscopio.

Obtencidn & un Background

1. Mover la muestra fucra d e l campo de visi6n.

2. Colocar el microscopio para obtener un cspcctro de IR cn transnutancia o rcflactancia.

3. Ajustar la ganancia.

J. Mcdir el espectro (pasos 8 a 9 & uso d e l ~ o f o t b m e t r o ) .

Obtencidn &l espectro de una mvestta

1. Colocar el microscopio para ver la muestra (mover los botones a VIEW).

2. Regresar la muestra al lugar que ocupaba antes de obtener el Background

3. Colocar el microscopio para medm un espectro de IR.

J. Obtener el espectro (paso 10 de uso d e l espectrofotómetro).

5. Salvar el espectro en el drive C.

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