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i
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE ODONTOLOGÍA
CARRERA DE ODONTOLOGÍA
EFECTO ANTIFUNGICO DEL CINAMALDEHIDO SOBRE CEPAS DE
CANDIDA ALBICANS. ESTUDIO IN VITRO.
Proyecto de investigación presentado como requisito previo a la obtención del título de
Odontólogo
Autor: Johanna Carolina Bonilla Bravo
Tutor: PhD. Ana del Carmen Armas Vega
Quito, Septiembre 2017
ii
DERECHO DE AUTOR
Yo, Johanna Carolina Bonilla Bravo, en calidad de autor del trabajo de Investigación:
EFECTO ANTIFUNGICO DEL CINAMALDEHIDO SOBRE CEPAS DE CANDIDA
ALBICANS. ESTUDIO IN VITRO, por la presente autorizo a la UNIVERSIDAD
CENTRAL DEL ECUADOR, hacer uso del contenido total o parcial que me pertenecen,
con fines estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente autorización,
seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5, 6, 8; 19
y demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento.
También, autorizo a la Universidad Central del Ecuador a realizar la digitalización y
publicación de este trabajo de investigación en el repositorio virtual, de conformidad a lo
dispuesto en el Art. 144 de la Ley Orgánica de Educación Superior.
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Johanna Carolina Bonilla Bravo
C.C: 0503245631
iii
APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN
Yo, ARMAS VEGA ANA DEL CARMEN en mi calidad de tutor del trabajo de titulación,
modalidad Proyecto de Investigación, elaborado por JOHANNA CAROLINA BONILLA
BRAVO, cuyo título es: EFECTO ANTIFUNGICO DEL CINAMALDEHIDO SOBRE
CEPAS DE CÁNDIDA ALBICANS; ESTUDIO IN VITRO, previo a la obtención del
Grado de Odontólogo: considero que el mismo reúne los requisitos y méritos necesarios en
el campo metodológico y epistemológico, para ser sometido a la evaluación por parte del
tribunal examinador que se designe, por lo que lo APRUEBO, a fin de que el trabajo sea
habilitado para continuar con el proceso de titulación determinado por la Universidad
Central del Ecuador.
En la ciudad de Quito 20 Julio del 2017
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PhD. Armas Vega Ana Del Carmen
DOCENTE-TUTOR
C.C:1710508571
iv
APROBACIÓN DE LA PRESENTACIÓN ORAL/TRIBUNAL
El Tribunal constituido por: Dr. Juan Andrés Benenaula Bojorque, Dra. Sonia del Rocío
Vaca Castañeda
Luego de receptar la presentación oral del trabajo de titulación previo a la obtención del
título de Odontóloga presentado por la señorita, Johanna Carolina Bonilla Bravo.
Con el título:
“EFECTO ANTIFÚNGICO DEL CINAMALDEHIDO SOBRE CEPAS DE
CÁNDIDA ÁLBICANS. ESTUDIO IN VITRO”
Emite el siguiente veredicto: …………………
Fecha: 26-SEP-2017
Para constancia de lo actuado firman:
Nombre/Apellido Calificación Firma
Presidente Dr. Juan Andrés Benenaula Bojorque
Vocal 1 Dra. Sonia del Rocío Vaca Castañeda
v
DEDICATORIA
Dios Padre Celestial y a la Virgen María quienes con su bendición me guiaron y
fortalecieron mi espíritu llenándolo de sabiduría, y me permitieron ser instrumento de su
amor.
Martin mi hijo amado, fuiste eres y serás siempre mi motivo de inspiración para
superarme, cada sonrisa tuya me ha enseñado el verdadero sentido de la vida y el
significado de felicidad.
A ti amor de mi vida Jaime Wandemberg quien en todo momento me brindaste tu apoyo,
tiempo, comprensión e incentivo para culminar con la meta que me propuse como
profesional y lograr una mejor vida juntos.
Johanna Carolina Bonilla Bravo
vi
AGRADECIMIENTO
El presente trabajo de Tesis, primeramente me gustaría agradecer a Dios por bendecirme
para llegar hasta donde he llegado, porque hiciste realidad este sueño anhelado.
A mis padres Hernán Bonilla y Celia Bravo por haberme inculcado todos los valores con
amor y paciencia, para lograr formarme como una persona de bien, por enseñarme a ser
constante y a entender que con trabajo y esfuerzo se logran realizar todos los sueños y lo
que uno más desea. Infinitas son mis gracias hacia ustedes por su apoyo incondicional.
A mis hermanas María de los Ángeles y Maritza Andrea, por compartir los gratos y duros
momentos en mi formación como estudiante y persona, gracias por sus consejos, amor
incondicional y ánimo para seguir adelante.
A mi directora de tesis, PhD. Ana Armas quien, con sus conocimientos, su experiencia, su
paciencia y su motivación ha logrado en mí que pueda terminar mi trabajo de
investigación con éxito. Agradezco también, a mis profesores, que durante mi vida
estudiantil, inculcaron disciplina, conocimiento, honradez y mística de trabajo.
A mis amigas y amigos por compartir conmigo momentos inolvidables y brindarme sus
consejos, lealtad y cariño en cada instante, sin olvidar a mi segunda familia que me ha
dado tanto apoyo en cada momento y en todas las adversidades de mi vida unas infinitas
gracias.
Johanna Carolina Bonilla Bravo
vii
TABLA DE CONTENIDO
DERECHO DE AUTOR ....................................................................................................... ii
APROBACIÓN DEL TUTOR DEL TRABAJO DE TITULACIÓN .................................. iii
DEDICATORIA .................................................................................................................... v
AGRADECIMIENTO .......................................................................................................... vi
TABLA DE CONTENIDO ................................................................................................. vii
LISTA DE TABLAS ............................................................................................................ ix
LISTA DE GRÁFICOS ......................................................................................................... x
LISTA DE FIGURAS .......................................................................................................... xi
LISTA DE ANEXOS .......................................................................................................... xii
RESUMEN ......................................................................................................................... xiii
ABSTRACT ....................................................................................................................... xiv
INTRODUCCIÓN ................................................................................................................. 1
CAPITULO I ......................................................................................................................... 2
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ...................................................................... 2
1.1. Formulación del problema .......................................................................................... 2
1.2. OBJETIVOS DE INVESTIGACIÓN ........................................................................ 3
1.2.1. Objetivo general .................................................................................................. 3
1.2.2. Objetivos específicos........................................................................................... 3
1.3. JUSTIFICACIÓN ....................................................................................................... 4
1.4. HIPÓTESIS ................................................................................................................ 6
1.4.1. Hipótesis de investigación [H1] .......................................................................... 6
1.4.2. Hipótesis Nula [H01] .......................................................................................... 6
CAPÍTULO II ........................................................................................................................ 7
2. MARCO TEORICO ...................................................................................................... 7
2.1. Cándida albicans .................................................................................................... 7
viii
2.2. Candidiasis Oral ...................................................................................................... 8
2.3. Fitoterapia ............................................................................................................... 9
2.4. Aceites Esenciales ................................................................................................... 9
2.5. Cinamaldehido ...................................................................................................... 10
CAPÍTULO III .................................................................................................................... 11
3. METODOLOGÍA ........................................................................................................ 11
3.1. Tipo y diseño de investigación ............................................................................. 11
3.2. Población del estudio y muestra ........................................................................... 11
3.2.1. Universo y muestra ........................................................................................ 11
3.3. Criterio de inclusión y exclusión .......................................................................... 12
3.4. Operacionalización de las variables ..................................................................... 13
3.5. Procedimientos microbiológicos ........................................................................... 13
3.6.1. Autonomía ......................................................................................................... 19
3.6.2. Beneficencia ...................................................................................................... 19
3.6.3. Confidencialidad ............................................................................................... 19
3.6.4. Riesgo potencial del estudio .............................................................................. 19
3.6.5. Idoneidad ética y experiencia del investigador ................................................. 19
3.6.6. Declaración de conflicto de intereses ................................................................ 19
3.6.7. Recolección de datos ......................................................................................... 20
CAPÍTULO IV .................................................................................................................... 21
4. RESULTADOS ........................................................................................................ 21
5. DISCUSIÓN ............................................................................................................. 28
CAPÍTULO V ..................................................................................................................... 31
6. CONCLUSIONES .................................................................................................... 31
7. RECOMENDACIONES .......................................................................................... 32
8. BIBLIOGRAFÍA ...................................................................................................... 33
9. ANEXOS .................................................................................................................. 38
ix
LISTA DE TABLAS
Tabla 1 Prueba de Normal de Kolmogorov-Smirnov para Cinamaldehido en 0.6%, 1% y
1.5% en 24 y 48 horas ......................................................................................................... 21
Tabla 2 Estadísticos obtenidos para las distribuciones de Cinamaldehido en diferente
concentraciones y tiempo de prueba. ................................................................................... 22
Tabla 3 Prueba estadística de Kolmogorov-Smirnov para Cinamaldehido en diferente
concentraciones y tiempo de prueba .................................................................................... 22
Tabla 4 Prueba estadística de Wilcoxon para contrastar el Cinamaldehido y Clorhexidina
............................................................................................................................................. 24
Tabla 5 Prueba de Wilcoxon para contrastar las variables Agua Destilada y Cinamaldehido
en sus tres concentraciones .................................................................................................. 25
Tabla 6 Contraste de todas las variables analizadas ............................................................ 26
Tabla 7 Prueba t de estudent para la variable Clorhexidina al 12% en dos tiempos 24 y 48
horas. ................................................................................................................................... 27
x
LISTA DE GRÁFICOS
Gráfico 1 Efecto anti fúngico del cinamaldehido al 0.6%, 1.0% y 1.5% ............................ 23
Gráfico 2 Contraste entre Cinamaldehido al 0.6%, 1.0% y 1.5% Vs Clorhexidina al 0.12%
en 24 y 48 horas ................................................................................................................... 23
Gráfico 3 Contraste entre Agua Destilada y Cinamaldehidos en sus tres concentraciones 25
xi
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Preparación del agar Sauboraud, peso de agar en polvo .................................. 14
Figura 2 Colocación de agar en frasco de 500ml diluido en agua destilada ................... 14
Figura 3 Presentación del cinamaldehido .................................................................. 17
Figura 4 Procedimiento para obtener las concentraciones del cinamaldehido requerido . 17
Figura 5 Colocación de discos equidistantes con cinamaldehido en agar con Cándida
albicans ................................................................................................................. 18
Figura 6 Incubación para crecimiento de Cándida albicans. ......................................... 18
xii
LISTA DE ANEXOS
Anexo 1 Certificados de autenticidad de la cepa Cándida albicans (ATCC 10231). 38
Anexo 2 Instrucciones de la empresa MEDIBAC para la activación de las cepas Cándida
albicans (ATCC 10231). ........................................................................................ 39
Anexo 3 Certificado del Laboratorio de Ciencia de Alimentos de la Universidad Laica
Eloy Alfaro de Manabí ............................................................................................ 40
Anexo 4 Certificado de renuncia estadística. .............................................................. 41
Anexo 5 Carta de Experiencia del Investigador ......................................................... 42
Anexo 6 Carta de Experiencia del tutor de tesis ......................................................... 43
Anexo 7 Carta de declaración de conflictos ................................................................ 44
xiii
Tema: “Efecto antifúngico del Cinamaldehido sobre cepas de Cándida albicans. Estudio in
vitro”
Autora: Johana Carolina Bonilla Bravo
Tutor: PhD. Ana del Carmen Armas Vega
RESUMEN
Objetivo: Evaluar la eficacia del cinamaldehido siendo un compuesto natural proveniente
de la canela, se prepararon diferentes diluciones 0.6%, 1%, 1.5%, con la técnica de difusión
en disco se lo aplicó sobre cepas de Cándida albicans ATCC 10213 sembradas en agar
Sabouraud en aerobiosis durante las 24 y 48 horas, comparado con agua destilada como
control negativo y gluconato de clorhexidina como control positivo. Materiales y métodos
En 25 cajas Petri fue sembrado 20ml de cultivo de cepas de Cándida albicans y
posteriormente colocados en discos de papel filtro de 5mm de diámetro impregnados con
cinamaldehido al 0.6%, 1% y 1.5% respectivamente que fueron considerados los grupos
experimentales y gluconato de clorhexidina al 0.12% que fue empleada como control
positivo y agua destilada considerada de control negativo. En cada caja Petri fueron
distribuidos 3 discos equidistantes, sometidos a incubación por 24 y 48 horas, tras lo cual
fue evaluado mediante medición de halos de inhibición el efecto inhibidor en cada caja Petri,
los datos obtenidos analizados estadísticamente mediante pruebas de Kruskal Wallis.
Resultados: El análisis revelo ausencia de diferencia entre las tres concentraciones del
cinamaldehido usadas con un p=1,00; sin embargo, existió diferencia entre los
cinamaldehidos y los dos controles, tanto con clorhexidina como con agua destilada, quienes
mostraron valores de inhibición menores. Conclusiones: el efecto inhibidor del crecimiento
de la Cándida albicans en las tres concentraciones del cinamaldehido empleados sin
diferencia en los dos periodos de tiempo evaluados.
PALABRAS CLAVES: cándida albicans, Cinnamomum zeylanicum, Candidiasis Bucal
xiv
Topic: “Antifungal effect of Cinnamaldehyde on strains of Candida Albicans. In vitro
study”.
Author: Johana Carolina Bonilla Bravo
Tutor: PhD. Ana del Carmen Armas Vega
ABSTRACT
Objective: to assess the effectiveness of the cinnamaldehyde, being this a natural compound
derived from the cinnamon. There were prepared different solutions at 0.6%, 1% and 1.5%
with the diffusion technique, which were applied on the strains of Candida Albicans ATCC
10213, placed in agar Sabouraud, in aerobiosis, during 24 and 48 hours, compared to distilled
water as negative control and chlorhexidine gluconate as positive control. Materials and
methods: in 25 petri dishes there were put 20ml of the culture of the strains of Candida
albicans, and these were later put in discs of filter paper of 5mm diameter impregnated with
cinnamaldehyde at 0.6%, 1% and 1.5%, respectively, which were considered the
experimental groups, and the chlorhexidine gluconate and distilled water were the positive
and negative controls, respectively. In each Petri dish were put three equidistant disks,
subjected to incubation for 24 and 48 hours. Then these were evaluated through the
measurement of the inhibition halos produced in each petri dish. The data obtained was
analyzed statistically through the Kruskal Wallis test. Results: the analyziz showed that
there is no difference between the three concentrations of the cinnamaldehyde used p=1.00;
however, there is a difference between these and the controls, both with the chlorhexidine
and the distilled water, which showed lesser inhibition halos. Conclusions: the inhibition
effect on the growth of Candida Albicans in the three concentrations of cinnamaldehyde used
is no different in the two periods of time evaluated.
KEY WORDS: candida albicans, Cinnamomum zeylanicum, oral candidiasis
1
INTRODUCCIÓN
La candidiasis oral es una de las afecciones más comunes de la cavidad bucal afectando
mucosas y lengua, manifestándose como un hongo oportunista responsable de la patología,
su presencia estrechamente relacionada con la antibioticoterapia, enfermedades sistémicas e
inmunosupresoras, afecciones hemáticas, radio y quimioterapia, se suman generalmente a
la presencia en boca de prótesis dentales mal adaptadas o mal higienizadas lo que
desencadena alteraciones en la flora habitual normal del organismo. (1)
La afección se manifiesta en boca con la presencia de una mucosa roja y brillante si se trata
de una candidiasis eritematosa, o lesiones como placas cubriendo las mucosas a manera de
una membrana fuertemente adherida al epitelio, en el caso de candidiasis
pseudomembranosa aguda o crónica. (2)
La medicina alternativa en el área odontológica busca brindar tratamiento a distintas
afecciones orales, la canela por sus propiedades antifúngicas, antimicrobianas antioxidantes,
atribuidas al cinamaldehido componente principal de esta planta, muestra excelentes
propiedades y un costo beneficio relativamente bajo, presentándose como alternativa
adecuada desde el punto de vista de la fitoterapia odontológica, sin embargo existe poca
información sobre el cinamaldehido reportado en la literatura (3) pero que si han comprobado
su efectividad en pruebas de inhibición sobre cepas de Cándida albicans. (4)
Considerando que la candidiasis como afección oral necesita administración de fármacos
antifúngicos como tratamiento de elección y que estos en determinado momento
desencadenan cierta resistencia y recidiva en el individuo que padece la enfermedad (3), se
hace necesario buscar entre elementos naturales del tipo aceites esenciales como la canela
sea una alternativa para el control de la Cándida albicans.
2
CAPITULO I
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La Cándida álbicans es un hongo presente en la flora de la mucosa oral de forma natural, sin
embargo, frente a la baja de defensas en el organismo o presencia de diferentes estímulos como
prótesis mal adaptadas, radioterapia desencadenan su proliferación y con ello la candidiasis oral
considerada como uno de los problemas más frecuentes en la consulta odontológica, luego de la
caries y enfermedad periodontal. (5)
El tratamiento de la candidiasis oral, se basa en el uso de fármacos a base de gluconato de
clorhexidina o antifúngicos como el fluconazol en enjuagues bucales, tabletas o pomadas que con
su uso prolongado desencadena pigmentaciones y recidiva inmediata al suspender el tratamiento
creando una resistencia alta en el microorganismo. (6)
La medicina natural o ancestral a través de componentes naturales como el Cinamaldehido
compuesto activo de la canela sobre la cándida ha sido por sus múltiples propiedades poco
investigado, de ahí que esta investigación pretende determinar mediante pruebas de inhibición su
capacidad sobre Cándida albicans. (7)
1.1.Formulación del problema
De esta manera nos planteamos como problema, el saber, si existe efecto antifúngico del
cinamaldehido al 0.6%, 1%, 1.5% de concentraciones sobre cepas de Cándida albicans.
3
1.2.OBJETIVOS DE INVESTIGACIÓN
1.2.1. Objetivo general
Evaluar mediante la medición de halos de inhibición el efecto del cinamaldehido en
diferentes concentraciones sobre cepas de Cándida albicans, comparando con agua
destilada como control negativo y Gluconato de clorhexidina al 0.12% como control
positivo.
1.2.2. Objetivos específicos
Evaluar mediante halos de inhibición el efecto del cinamaldehido al 0.6%, 1%, y 1.5% de
concentración sobre cepas de Cándida albicans ATCC 10 231 a las 24 y 48 horas.
Comparar el efecto inhibitorio del cinamaldehido al 0.6%, 1% y 1.5% de concentración
con el Gluconato de clorhexidina al 0.12 % empleada como control positivo a las 24 y 48
horas sobre cepas de Cándida albicans ATCC 10 231.
Comparar el efecto inhibitorio del cinamaldehido al 0.6%, 1% y 1.5% de concentración
con agua destilada como control negativo sobre cepas de Cándida albicans ATCC 10 231
a las 24 y 48 horas.
4
1.3.JUSTIFICACIÓN
La pérdida prematura de dientes o la ausencia de control de las enfermedades orales
frecuentemente asociadas a alteraciones sistémicas han desencadenado una elevada cantidad de
personas edéntulas a nivel el país y el mundo, que debido a la ausencia de condiciones económicas
generalmente optan como tratamiento la colocación de prótesis total o removible, en cuyas
superficies por el tiempo de empleo y en ocasiones por el uso mismo de este elemento asociado
a la comp1osición misma del material con el que se fabrica, la estructura salival e incluso
enfermedades sistémicas, se evidencia cada vez con más frecuencia gran cantidad de personas
con candidiasis oral (8), de ahí la necesidad de buscar el tratamiento adecuado para controlar esta
patología.
Según el ámbito internacional existe una prevalencia de candidiasis oral en el 65% de pacientes
adultos mayores alrededor del mundo, con una notoria asociación de la enfermedad a la presencia
de hiposalivación, la existencia de prótesis mucosoportadas y dentosoportadas muchas de ellas
con problemas de desadaptación o mal higienizadas, alteraciones en el sistema inmunitario y/o
endocrino y tratamientos farmacológicos extensos, convirtiéndose los ancianos en frecuentes
portadores de Cándida albicans. (9)
Sin embargo otros factores se ha observado influyen en la presencia de Cándida albicans como
edad el sexo y causas externas. (8)
La cavidad oral es un sistema capaz de colonizar bacterias a los tejidos propios, ya que cuenta
con factores oportunos que se clasifican en físicos, nutricionales, inhibitorios y la adherencia
bacteriana. Mediante el cual los microorganismos se pueden adherir a la cavidad y ocasionar
proliferación de las mismas y aún más si son personas con presencias de prótesis, ya que estos
aditamentos son fabricados habitualmente a base de resinas acrílicas y más comúnmente de
polimetilmetacrilato (PMMA), ya que estas por su estructura porosa y de asperezas inherentes
hacen que el material pueda contribuir a la adherencia y proliferación de microrganismos dentro
de los cuales el más frecuente es la Cándida albicans. (9)
De ahí que el presente estudio, busca evaluar al cinamaldehido en diferentes concentraciones
considerándolo un potente aceite que presenta propiedades antifúngicas, que representaría una
5
excelente opción para el tratamiento de la Cándida albicans ya que los pacientes crean resistencia
a la continuidad de los fármacos y también resulta un alto costo de los mismos. (8)
El cinamaldehido constituye el 80% del aceite esencial de la canela, responsable por el sabor y
olor característico, de la planta, empleada en diferentes circunstancias y con un probado efecto
sobre diferentes bacterias de ahí el deseo de analizar sus propiedades antifúngicas sobre cepas de
Cándida albicans a través de este estudio. (10)
En la actualidad la candidiasis oral se presenta como una de las enfermedades más comunes en
la consulta odontológica, la medicina moderna presenta como opción terapéutica fármacos
antimicóticos que desencadenan luego de largos periodos de tiempo consecuencias sobre el
paciente, sin embargo de ello, la medicina natural, se muestra como una alternativa terapéutica
en salud pública con costo beneficio adecuado que le hacen ser considerada una buena opción
interesante en el tratamiento de la candidiasis oral. (11)
El Gluconato de clorhexidina al 0.12% ha sido considerado como una opción interesante por su
acción sobre diferentes microorganismos (12), sin embargo su empleo continuo a largo plazo
desencadena daños en la mucosa y pigmentación dental, de ahí la importancia de encontrar en
los aceites esenciales, un agente antifúngico adecuado. (13)
6
1.4.HIPÓTESIS
1.4.1. Hipótesis de investigación [H1]
El Cinamaldehido independiente de su concentración empleada, al 0.6%, 1% o 1.5% tiene
efecto inhibitorio sobre cepas de Cándida albicans a las 24 y 48 horas similar al del
gluconato de clorhexidina.
1.4.2. Hipótesis Nula [H01]
El Cinamaldehido en ninguna de sus concentraciones evaluado, al 0.6%, 1% o 1.5% tiene
efecto inhibitorio sobre cepas de Cándida albicans a las 24 y 48 horas cuando compararon
con el gluconato de clorhexidina.
7
CAPÍTULO II
2. MARCO TEORICO
2.1. Cándida albicans
Considerado un Hongo dimórfico por su capacidad a desarrollarse de forma distinta en relación
a la temperatura, como levadura, requiere una temperatura de 37ºC en el huésped, y como hongo
de aspecto filamentoso, precisa de 25ºC ; perteneciente a la familia Ascomycota, se reproduce de
forma asexual por gemación, midiendo de 3 a 8 micras y presentando un aspecto de forma ovalada
permanece en agrupaciones, para pasar posteriormente a una forma denominada pseudo-hifas o
pseudo-micelio, presenta como el hecho de que cuando se encuentra particularidad en forma de
levadura es saprofita viviendo en simbiosis con el huésped, pero en forma de hongo filamentoso,
se comporta como patógeno desencadenando síntomas de enfermedad en el huésped. (14)
El tracto digestivo, el respiratorio, junto con la mucosa genital en especial la vagina, constituyen
los reservorios más importantes en los seres humanos y al ser origen de candidiasis endógenas,
asociada a su dificultad con sobrevivir durante mucho tiempo en superficies secas requiriendo
de áreas con mucha humedad, para que su crecimiento se realice en colonias circulares, lisas,
blancas o cremosas, pastosas y blandas, de bordes definidos, con un centro ligeramente
prominente, y con un olor característico a levadura. (15)
Infección, causada por el género cándida en su forma filamentosa, se presenta de forma
localizada, benigna con una evolución variable pudiendo ser aguda, subaguda, crónica o
episódica, caracterizada por la presencia de lesiones cutáneas, mucocutáneas, profundas o
diseminadas que pueden desencadenar en su la diseminación sistémica causando graves daños a
nivel de la circulación sanguínea y diferentes órganos como el ojo a nivel de la retina, cerebro,
riñones, hígado, bazo y corazón. (16)
El desarrollo de la candidiasis está asociado al empleo extendido de antibióticos y la eliminación
subsecuente de bacterias beneficiosas, que desencadena proliferación rápida de la cándida,
asociada generalmente a una dieta basada en carbohidratos simples del tipo almidón elevada
cantidad de azúcar, consumo elevado de condimentos del tipo salsas de tomate, mostaza, vinagre,
productos ahumados, fermentados, generalmente enriquecidos por levaduras y mohos que al ser
8
fácilmente metabolizada por el hongo , desencadenan una evidente asociación al estrés y
agotamiento como factores que mantienen débil al organismo del huésped, asociado al abuso en
el consumo de café, alcohol y nicotina, la exposición prolongada a radiación ionizante,
electromagnética de rayos X o de metales tóxicos del tipo plomo, mercurio, cadmio y amalgama
así como de ciertos elementos químicos presentes en colorantes artificiales, perfumes y
pesticidas. (17)
2.2. Candidiasis Oral
El epitelio oral constituye una barrera primaria para evitar la invasión de cualquier
microorganismo sin embargo una vez esta barrera traspasada los mecanismos inmunes
fisiológicos son vencidos y entran en actividad, este hongo que al ser oportunista hace del sitio
en donde se encuentre un medio favorable para su crecimiento y proliferación, causando lesiones
específicas de la misma. (18)
Para el aparecimiento de la enfermedad a nivel oral requiere un periodo de incubación de 4 a 14
días, considerándose esta la fase prodrómica, caracterizada por cefalea, fiebre, escalofríos ,
linfadenopatía y odinofagia, síntomas que por lo general se muestran leves en niños e intensos
en adultos jóvenes, con una localización inicial por lo general en lengua y carillos, que pueden
diseminarse al paladar, encías y orofaringe y en casos severos, a la laringe, tracto digestivo,
sistema respiratorio o piel (19), manifestada con lesiones blancas a manera de placa de fácil retiro
con un raspado simple, que dependiendo del tipo de candidiasis oral puede variar hasta adquirir
un aspecto rojo brillante por erosión epitelial (20) asociado a dolor, ardor o disfagia. (21)
La Candidiasis Eritematosa, constituye un tipo de candidiasis, llamada también atrófica, se
manifiesta como un área rojiza de bordes indefinidos sin presencia de placas blancas localizada
más en el dorso de la lengua y el paladar que generan algo de picor, donde con más frecuencia se
presenta generalmente en pacientes inmunodeprimidos; la candidiasis hiperplásica, conocida por
su manifestación a manera de placas blancas difíciles de desprender mediante raspado, se presenta
con frecuencia en carrillos, lengua y áreas retrocomisurales; la candidiasis Seudomembranosa
constituye la más común caracterizada por la presencia de placas blanco-amarillentas con una
consistencia blanda o gelatinosa de desprendimiento inmediato al realizar un raspado dejando
una zona eritematosa, erosionada y ulcerada (22) presente en la mucosa de carrillos, bordes
laterales de lengua y orofaringe y la Queilitis angular llamada también estomatitis comisural que
9
afecta a las comisuras labiales causando un agrietamiento bilateral, con presencia de una costra.
(12)
El tratamiento de la candidiasis, se basa en evitar cualquier sustancia que destruye la flora
bacteriana, mantener una buena higiene y controlar los factores locales y sistémicos
desencadenantes de la enfermedad, en el caso de empleo prótesis dentales se debe colocar en una
solución de hipoclorito sódico diluido al 5 o 10 % durante toda la noche tras cepillado de manera
minuciosa con jabón, evitando ciertos alimentos irritantes, demasiado calientes, ácidos y
picantes; el tabaco y el alcohol, conjugado con el uso de medicamentos específicos derivados
poliénicos del tipo Nistatina, Anfotericina B; derivados imidazólicos del tipo Miconazol,
Ketoconazol, Clotrimazol, Econazol o derivados triazólicos: Fluconazol, Itraconazol, sin
embargo de esto el uso de colutorios mejoran los cuadros leves, así como el hidróxido de
magnesio, el gluconato de clorhexidina al 0.2 %, y la aplicación de violeta de genciana en una
solución acuosa al 0.5 o al 1 %. (12)
2.3. Fitoterapia
Estudios demuestran que los extractos acuosos extraídos de las plantas medicinales como la
canela se ha utilizado para la producción de fungicidas, considerando que el 1 % de las plantas es
utilizado para el tratamiento de algún tipo de enfermedad la fitoterapia constituye la disciplina
que se encarga de opciones terapéuticas naturales (23). En relación directa a una disminución
evidente de efectos secundarios y toxicidad, observándose que las plantas del género
Cinnamomum cuyo aceite es extraído de la corteza y hojas de la canela presenta propiedades
antimicrobianas y anticarcinogénicas (24) a nivel oral empleadas en colutorios, soluciones, tintes,
dentífricos, (25) asociando este aceite esencial con sus propiedades anti-inflamatorias, anti-
hemorrágicas, antibacterianas y antifúngicas. (23)
2.4. Aceites Esenciales
Los aceites esenciales, son líquidos que contienen propiedades aromáticas, oleosas y volátiles
extraídas de plantas, arbustos y semillas, estos aceites se encuentran presentes en diferente
potencial terapéutico, estimulante, protección y aislante, por lo tanto pueden proteger a la planta
de plagas gracias a su aroma,constituyéndose los elementos que atraen insectos y aves hacia la
planta, convirtiéndose en elementos beneficiosos para la planta. (26)
10
Estos aceites esenciales se encuentran en casi todas las plantas y están ampliamente distribuidas
en las distintas partes de la planta, hojas, flores, frutos, tallos y raíces (27), constituidos por una
mezcla compleja de compuestos químicos y orgánicos, principalmente formada por terpenos,
alcoholes fenólicos los cuales en la actualidad han sido reportados como inhibidores de hongos.
(28)
El uso de los aceites vegetales ha sido una tradición terapéutica muy antigua, incluso empleada
por los egipcios, griegos, romanos y chinos en el cuerpo humano como elementos curativos y
cicatrizantes los cuales han tenido una gran incidencia en el desarrollo de la aromaterapia en el
mundo. (29) . Sin embargo uno de los principales problemas es que estos aceites esenciales se
encuentran en muy pequeñas cantidades, necesitándose cerca de 300kg a 500kg de materia
vegetal para obtener un kilo de aceite esencial. (25)
2.5. Cinamaldehido
Compuesto orgánico responsable del sabor y del olor característico de la canela, es un elemento
importante ya que posee la mayor parte de las propiedades y es el responsable de ayudar en todas
las funciones de la misma, su presencia a manera de un líquido amarillo, pálido, viscoso y su
composición donde prevalece un aldehído insaturado unido a un grupo fenilo; al que está asociado
su aroma y baja solubilidad en agua y aromaticidad, le hacen un elemento esencial en la cultura
tradicional con propiedades benéficas relacionadas a evitar la proliferación de microorganismos
(30), propiedades antimicrobianas, antinflamatorias antifúngicas y antioxidantes. (31)
La actividad biológica del aceite esencial de canela está relacionada con sus principales
componentes, denominados cinamaldehído y eugenol. El cinamaldehído se cree tiene la más alta
actividad antimicótica entre los aldehídos alifáticos; mientras que al eugenol se le atribuyen
propiedades antisépticas y anestésicas. (32)
Una de las plantas investigadas es del género Cinnamomum que comprende una variedad de
especies llegando a 250 distribuidas en Asia y Australia, de las cuales las más representativas,
por su aceite, son: Cinnamomum zeylanicum. El Cinnamomum zeylanicum observando que el
aceite extraído de la corteza y de las hojas tiene diversas aplicaciones; sea en cocina, en bebidas,
en la industria farmacéutica, e incluso en perfumería;presentando el aceite esencial de la canela,
entre sus componentes al E-cinnamaldehyde en un 68,95% ,el benzaldehyde en un 9,94% y E-
cinnamylacetate en un 7,44%, los cuales demostraron proporcionar propiedades antimicrobianas
y anticarcinogénicas, sugiriendo ser empleadas contra infecciones y neoplasias. (33)
11
CAPÍTULO III
3. METODOLOGÍA
3.1. Tipo y diseño de investigación
Se plantea un estudio experimental evaluando mediante conteo de halos de inhibición el aceite
esencial del cinamaldehido a concentraciones de 0.6%, 1% y 1.5% sobre cepas puras de Cándida
albicans ATCC 10231, a las 24 y 48 horas de incubación, realizando condiciones bajo
condiciones controladas en un laboratorio microbiológico reconocido.
3.2. Población del estudio y muestra
3.2.1. Universo y muestra
La muestra fue establecida por conveniencia calculada en función a la siguiente fórmula:
n =2(Zα+Zβ)2S2
d2
n =2(1,96+1,645)2 0,152
0,252
n= 2(12.996025)0,02252
0,252
n= 9,36
Dónde:
n = son los individuos necesarios en cada una de las muestras;
Z = es el valor z correspondiente al riesgo deseado;
S2 = es la varianza de la variable cuantitativa que tiene el grupo control o de referencia
d = es el valor mínimo de la diferencia que se desea detectar (datos cuantitativos).
12
Considerando que la fórmula muestral nos determinó 9,36 muestras por grupo, y considerando
que las cajas Petri pueden ser manejadas hasta con 3 muestras en cada una se decidió emplear 15
repeticiones para cada sustancia distribuidas dentro de cada caja Petri donde se colocó tres discos
de papel embebidos de las respectivas sustancias utilizando así 5 cajas Petri para cada sustancia.
Así la muestra estuvo constituida por 25 cajas Petri con cepas de Cándida albicans ATCC 10231
Estos microorganismos fueron importados desde Minnesota, USA, Laboratorio Microbiologics.
3.3. Criterio de inclusión y exclusión
3.3.1. Criterios de inclusión:
Las cepas puras de Cándida albicans ATCC 10231, sin ningún tipo de contaminación.
cinamaldehido en concentraciones de 0.6%, 1%, 1.5% almacenado en condiciones
controladas en ambientes específicos. Diluciones que fueron realizadas al incorporar en
el aceite esencial de cinamaldehido agua destilada hasta obtener las diluciones
mencionadas anteriormente
3.3.2. Criterios de exclusión.
Cepas de Cándida albicans que presenten contaminación con otros hongos presentes en el medio.
Cepas que no se lograron activarse en el medio de cultivo empleado.
Cinamaldehido en concentraciones diferentes a las especificadas para ser usadas en el
estudio.
13
3.4. Operacionalización de las variables
3.5. Procedimientos microbiológicos
En primer momento las cepas liofilizadas de Cándida albicans ATCC®10231 (Minnesota, USA
laboratorio Microbiologics) fueron rehidratadas en caldo SDS (Sabouraud Dextrose Broth S3306
SIGMA-ALDRICH®, USA), empleando un proceso de incubación en estufa a 25 °C por 72
horas mediante aerobiosis para su reproducción. Una vez activados los microorganismos en
estudio, se prepararon suspensiones con las alícuotas correspondientes. (fig. 1,2)
La réplica de las cepas fue realizada en cada caja Petri conteniendo el Sabouraud Dextrosa Agar,
realizándose la preparación de la suspensión bacteriana al 0.5 Mc Farland.
VARIABLE DEFINICION
OPERACIONAL TIPO CLASIFICACION
INDICADOR
CATEGORICO
ESCALA DE
MEDICION
CINAMALDEHIDO
Componente del
aceite esencial de la
canela
Independiente Cuantitativa
Cantidad en mililitros Mililitros
TIEMPO
Tiempo de
crecimiento
bacteriano.
Independiente Cuantitativa
Número de horas Cronometro
INHIBICIÓN
BACTERIANA
Capacidad de
alcanzar
el efecto que espera
o se desea tras la
realización de
una acción.
Dependiente Cuantitativa continua
cantidad de
cinamaldehido Milímetros
CÁNDIDA ALB
ICANS
Microorganismo
causante de
candidiasis oral. (5)
Interviniente Cuantitativa nominal
Según Duraffourd
Nula (-) ≤ 8 mm.
Sensible (sensible
=+): 9 - 14 mm
Muy sensible (muy
sensible = ++): 15-19
mm.
Sumamente sensible
(S.S.= +++): ≥ 20 mm.
Halos
Gluconato de
Clorhexidina
Potente y
comprobado
sustancia
antiséptica de
acción
antibacteriana y
antifungicida. (34)
Interviniente Cuantitativa
Concentración 0.12% nominal
14
Figura 1 Preparación del agar Sauboraud, peso de agar en polvo
.
Figura 2 Colocación de agar en frasco de 500ml diluido en agua destilada
Autor: Johanna Bonilla B.
Fuente: Laboratorio de Investigación de Ciencias de Alimentos de la Facultad de Ciencias
Agropecuarias de la Universidad Laica de Eloy Alfaro de Manabí.
15
La muestra se estandarizó en un caldo de SDS bajo la normativa de turbidez al 0.5 de Mac Farland
que representa una concentración de 1.5 x 108 UFC; donde se observó bajo la ayuda de un fondo
patrón a blanco y negro que dicho caldo si presentaba turbidez.
El 1 mL de inóculo de Cándida albicans fue colocada en cada caja Petri conteniendo Sabouraud
Dextrosa Agar, donde a seguir fue colocado los discos de papel filtro (Fisher Scientific Q2) de 5
mm de diámetro embebidos en las soluciones de cinamaldehído en concentraciones de 0.6%, 1%
y 1.5% que fueron obtenidas mediante la siguiente fórmula:
Dónde:
V1 = Volumen de extracto concentrado
C1= Concentración del extracto = 0.6%, 1% y 1.5%
V2 = Volumen de extracto diluido a preparar
C2 = Concentración del extracto diluido.
C1V1=C2V2
V1=0,3 ml del extracto de cinamaldehido
VH2O= 49,7ml de aceite neutro
V1+VH2O= 0.3ml +49,7 ml
VT= 50 ml del aceite esencial al 0.6%
C1V1=C2V2
V1C1 = V2 C2
V1 = C2V2 = (0.6%) (50ml)
C1 (100%)
V1 = C2V2 = (1%) (50ml)
C1 (100%)
16
V1=0,5 ml del extracto de cinamaldehido
VH2O= 49,5ml de aceite neutro
V1+VH2O= 0.5ml +49,5 ml
VT= 50 ml del aceite esencial al 1%
C1V1=C2V2
V1= 0,75ml del extracto de cinamaldehido
VH2O= 49,25ml de aceite neutro
V1+VH2O= 0.75ml +49,25 ml
VT= 50 ml del aceite esencial al 1.5%
De esta manera el cinamaldehido en concentración al 100% en las diferentes cantidades
establecidas en ml según la fórmula antes descrita, fueron mezclados con el aceite neutro en las
concentraciones de 49,7; 49,5 y 49,25 ml. Esta mezcla fue homogenizada en balanza agitadora.
Una vez obtenidas las concentraciones de cinamaldehido, fue incorporado 20 μL en cada uno de
los discos, existiendo 15 por concentración, que fueron colocados 3 discos en cada caja Petri con
C. albicans a una distancia equidistante entre ellos. (Fig.: 3 ,4)
El Gluconato de clorhexidina al 0.12% fue empleada como control positivo y agua destilada como
control negativo, las sustancias tal cual, obtenidas del fabricante, fueron embebidas también en
discos y estos colocados según antes mencionado en cajas Petri preparadas con el inóculo de la
bacteria.
V1 = C2V2 = (1.5%) (50ml)
C1 (100%)
17
De esta manera las 25 cajas Petri conteniendo tres discos por caja, todas las placas inoculadas
fueron incubadas a una temperatura de 37 °C durante 24 y 48 horas. (Fig.: 5,6)
Tras los tiempos de incubación fueron sometidos a la medición de los halos de inhibición del
crecimiento fúngico presentado en cada caja, procedimiento que fue ejecutado mediante regla
milimetrada a las 24 y 48 horas, los datos obtenidos fueron colocados en tablas específicamente
elaboradas para el estudio en Excel.
Los residuos del material empleado, tanto cepas, cajas Petri y demás material se desechó
siguiendo los protocolos de manejo de sustancias infecciosas establecido por el laboratorio de
investigación donde el estudio fue ejecutado. (Anexo 8)
Figura 3 Presentación del cinamaldehido
Figura 4 Procedimiento para obtener las concentraciones del cinamaldehido requerido
Autor: Johanna Bonilla B.
Fuente: Laboratorio de Investigación de Ciencias de Alimentos de la Facultad de Ciencias
Agropecuarias de la Universidad Laica de Eloy Alfaro de Manabí.
18
Figura 5 Colocación de discos equidistantes con cinamaldehido en agar con Cándida albicans
Autor: Johanna Bonilla B.
Fuente: Laboratorio de Investigación de Ciencias de Alimentos de la Facultad de Ciencias
Agropecuarias de la Universidad Laica de Eloy Alfaro de Manabí.
Figura 6 Incubación para crecimiento de Cándida albicans.
Autor: Johanna Bonilla B.
Fuente: Laboratorio de Investigación de Ciencias de Alimentos de la Facultad de Ciencias
Agropecuarias de la Universidad Laica de Eloy Alfaro de Manabí.
19
3.6. Aspectos bioéticos.
3.6.1. Autonomía
Todos los equipos fueron empleados en el Laboratorio de investigación de ciencias de alimentos
de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Laica de Eloy Alfaro de Manabí
dirigido por tal por el PhD. Stalin Santacruz Terán y el Ing. Marlon Castro García quienes
manifestaron su participación en la guía del mismo.
3.6.2. Beneficencia
Al comprobar del efecto antifúngico del Cinamaldehído permitirá contar con un elemento
alternativo en el tratamiento de la candidiasis oral que pueda ser empleada como base de
enjuagues y pastas dentales a ser desarrollados a futuro.
3.6.3. Confidencialidad
Los datos obtenidos fueron empleados con fines de investigación, únicamente y manejados por
el investigador y posteriormente destruidos.
3.6.4. Riesgo potencial del estudio
No existe riesgo alguno ya que se siguió el protocolo de manejo de desechos del Laboratorio de
investigación de Ciencias de Alimentos de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la
Universidad Laica de Eloy Alfaro de Manabí, que cumple con el reglamento de manejo de
desechos infecciosos establecido en las normas de Ministerio de Salud Pública, para cepas
inoculadas y residuos peligrosos. (ANEXO 8)
3.6.5. Idoneidad ética y experiencia del investigador
El estudio fue realizado por el investigador principal y su tutora la PhD Ana Armas bajo tutoría
de un microbiólogo e ingeniero de alimentos PhD. Stalin Santacruz Terán y el Ing. Marlon Castro
García.
3.6.6. Declaración de conflicto de intereses
Al realizar este trabajo no se obtendrá ningún beneficio personal ni económico, los cuales
declararon no tener conflicto de interese con el fabricante o distribuidor de producto.
20
3.6.7. Recolección de datos
Los datos obtenidos de la medición de los halos de inhibición, obtenida mediante regla
milimetrada fueron colocados en tablas en Excel 2016 depurados, y sometidos a evaluación
mediante el software estadístico SPSS V23, a través de prueba estadística de Kruskal Wallis.
21
CAPÍTULO IV
4. RESULTADOS
Los datos obtenidos de la medición de los halos de inhibición fueron colocados en tablas en Excel
2016 depurados, y sometidos a evaluación mediante el software estadístico SPSS V23, a través
de prueba estadística ANOVA o su equivalente.
Antes de realizar la prueba estadística es necesario estables si las distribuciones son paramétricas
o no paramétrica, para ello es necesario realizar la prueba de normalidad de Kolmogorov-Smirnov
cuyo resultado se presenta en la tabla 1.
Tabla 1 Prueba de Normalidad de Kolmogorov-Smirnov para Cinamaldehido en 0.6%, 1% y
1.5% en 24 y 48 horas
al 0.6% 24
horas
al 0.6% 48
horas
al 1.0% 24
horas
al 1.0% 48
horas
al 1.5% 24
horas
al 1.5% 48
horas
N 15 15 15 15 15 15
Parámetros
normalesa,b
Media 30.00 30.00 30.00 30.00 30.00 30.00
Desviación
estándar .000c .000c .000c .000c .000c .000c
Fuente: Investigación de Campo
a. La distribución de prueba es normal.
b. Se calcula a partir de datos.
c. La distribución no tiene varianza para esta variable. La prueba de Kolmogorov-Smirnov de una muestra no se
puede realizar.
Observando que el resultado de la prueba es atípico debido a que no existe variedad en los valores
obtenidos en ninguna de las muestras, es decir todas tiene un valor de 30, lo cual nos da un p-
valor = 0, 00 esto se interpreta que las distribuciones no son normales y por lo tanto también son
No paramétricas.
La prueba de Kruskal Wallis es la que corresponde aplicar como alternativa a la ANOVA ya que
las distribuciones son No paramétricas, presentando las tablas 2 y 3, los resultados,
determinándose ausencia de diferencia entre las 3 concentraciones de cinamaldehido.
22
Tabla 2 Estadísticos obtenidos para las distribuciones de Cinamaldehido en diferente
concentraciones y tiempo de prueba.
Tiempo en Horas N Rango promedio
cinamaldehido al 0.6% 24 horas 15 15.50
48 horas 15 15.50
Total 30
cinamaldehido al 1.0% 24 horas 15 15.50
48 horas 15 15.50
Total 30
cinamaldehido al 1.5% 24 horas 15 15.50
48 horas 15 15.50
Total 30
Fuente: Investigación de Campo
Tabla 3 Prueba estadística de Kruskal Wallis para Cinamaldehido en diferente concentraciones y
tiempo de prueba
cinamaldehido al
0.6%
cinamaldehido al
1.0%
cinamaldehido al
1.5%
Chi-cuadrado .000 .000 .000
gl 1 1 1
p-valor (Sig.) 1.000 1.000 1.000
a. Prueba de Kruskal Wallis
b. Variable de agrupación: Tiempo en Horas
Fuente: Investigación de Campo
Determinando para la evaluación del efecto antifúngico del cinamaldehido sobre cepas de
Cándida albicans mediante la medida de halos de inhibición, similitud en el poder inhibitorio del
cinamaldehido al 0.6%, 1.0% y 1.5%, respecto al crecimiento de las cepas de Cándidas albicans,
tanto en 24 como en 48 horas, se aplicó la prueba estadística de Kruskal Wallis pudiendo
encontrarse un p-valor (Sig.)= 1,00 entre las tres concentraciones de cinamaldehido empleadas,
cuyo resultado permite aseverar que el compuesto analizado es efectivo en cualquiera de las tres
presentaciones independiente del tiempo de evaluación (gráfico 1).
23
Gráfico 1 Efecto antifúngico del cinamaldehido al 0.6%, 1.0% y 1.5%
Sin embargo, al comparar el efecto inhibitorio del cinamaldehido al 0.6%, 1%, 1.5%, de
concentración y el efecto inhibitorio del gluconato de clorhexidina al 0.12 % empleada como
control positivo a las 24 y 48 horas se observa diferencia entre las medias del gluconato de
clorhexidina y las diferentes concentraciones de cinamaldehido, diferencia que se mantiene en
los dos periodos de tiempo empleados (gráfico 2).
Gráfico 2 Contraste entre Cinamaldehido al 0.6%, 1.0% y 1.5% Vs Clorhexidina al 0.12% en 24 y
48 horas
al 0.6%
al 1.0% al 1.5%0
5
10
24 25 17 18 19 2021
2224 horas
48 horas
Cin
amal
deh
ido
Frec
uen
cia
Clorhexidina al 0.12%
Contraste entre Cinamaldehido Vs Clorhexidina
24 horas
48 horas0
10
20
30
al 0.6%al 1.0%
al 1.5%cinamaldehido
Tie
mp
o d
e la
pru
eb
a
Val
or
de
la p
rue
ba
Efecto antifúngico del Cinamaldehido
24 horas
48 horas
24
Al realizar la prueba estadística de Wilcoxon, para establecer la relación existente entre las
variables Cinamaldehido en sus diferentes concentraciones y la Clorhexidina al 0.12%, en los 2
horarios expuestos (24 y 48 horas), se ha obtenido un p-valor < 0.05, (5% de error permitido) que
demuestra la existencia de diferencia entre las medias de los Cinamaldehidos en las diferentes
concentraciones y el gluconato de clorhexidina, esto es existe una diferencia estadísticamente
significativa entre las variables contrastadas. (Tabla 4)
Tabla 4 Prueba estadística de Wilcoxon para contrastar el Cinamaldehido y Clorhexidina
Cinamaldehido
al 0.6% 24 -
Clorhexidina
al 0.12% 24
horas
Cinamaldehido
al 0.6% 48 -
Clorhexidina
al 0.12% 48
horas
Cinamaldehido
al 1.0% 24 -
Clorhexidina
al 0.12% 24
horas
Cinamaldehido
al 1.0% 48 -
Clorhexidina
al 0.12% 48
horas
Cinamaldehido
al 1.5% 24 -
Clorhexidina
al 0.12% 24
horas
Cinamaldehido
al 1.5% 48 -
Clorhexidina
al 0.12% 48
horas
Z -3.542b -3.430b -3.542b -3.430b -3.542b -3.430b
Sig.
asintótica
(bilateral) .000 .001 .000 .001 .000 .001
a. Prueba de rangos con signo de Wilcoxon
b. Se basa en rangos negativos.
Fuente: Investigación de Campo
Un efecto similar ocurrió al analizar la media del agua destilada empleada como control negativo
en los dos periodos de estudio, 24 y 48 horas donde no fue evidenciado diferencia entre las
medias; sin embargo, si existe diferencia entre estas medias del agua destilada y las diferentes
concentraciones de cinamaldehido en los dos tiempos de evaluación, notándose que existen dos
grupos estadísticamente marcados (Gráfico 3), el grupo de los Cinamaldehidos en las diferentes
concentraciones con un desempeño estadístico similar y el grupo de los controles tanto negativo
como positivo que no alcanzaron similitud estadística ni numérica con los Cinamaldehidos,
encontrando un valor p= 0 entre los cinamaldehidos y el agua destilada en los 2 tiempos. (Tabla
5).
25
Gráfico 3 Contraste entre Agua Destilada y Cinamaldehidos en sus tres concentraciones
En base a la prueba estadística de Wilcoxon se pudo establecer la diferencia existente entre los
compuestos de Agua destilada y los Cinamaldehidos en sus diferentes concentraciones en donde
se encontró un p-valor < 0.05 (5% de error permitido), lo cual se interpreta como una diferencia
estadísticamente significativa.
Tabla 5 Prueba de Wilcoxon para contrastar las variables Agua Destilada y Cinamaldehido en sus
tres concentraciones
Cinamaldehido
al 0.6% 24 -
Agua Destilada
24
Cinamaldehido
al 0.6% 48 -
Agua Destilada
48
Cinamaldehido
al 1.0% 24 -
Agua Destilada
24
Cinamaldehido
al 1.0% 48 -
Agua Destilada
48
Cinamaldehido
al 1.5% 24 -
Agua Destilada
24
Cinamaldehido
al 1.5% 48 -
Agua Destilada
48
Z -3.873b -3.873b -3.873b -3.873b -3.873b -3.873b
Sig.
asintótica
(bilateral) .000 .000 .000 .000 .000 .000
a. Prueba de rangos con signo de Wilcoxon
b. Se basa en rangos negativos.
Fuente: Investigación de Campo
0
10
20
30
5
5
30 30 30 30 3030
Fre
cue
nci
a
Agua Destilada Vs. Cinnamaldehido
Contraste entre Agua destilada y Cinamaldehido
26
Para complementar el estudio los datos fueron sometidos a un análisis de t de estudent
considerando las medias de clorhexidina al 0.12% en 24 y 48 horas, el agua destilada y las
diferentes concentraciones de cinamaldehido, encontrándose que solamente los datos de
Clorhexidina pueden ser calculados en la prueba t de estudent ya que, en las otras, los valores son
constantes y no existe variabilidad (tabla 6). Sin embargo, se ratifica que existen dos grupos bien
definidos, el grupo de Cinamaldehido y el de los controles, sin diferencia entre los tiempos.
Evidenciándose que el Cinamaldehido, cuenta con un efecto antifúngico en cualquiera de sus
tres concentraciones y en los dos tiempos evaluados sobre cepas de Cándida albicans.
Tabla 6 Contraste de todas las variables analizadas
Tiempo en Horas N Media
Desviación
estándar
Media de error
estándar
Clorhexidina al 0.12% 24 horas 15 24.67 .488 .126
48 horas 15 19.40 1.404 .363
Agua Destilada 24 horas 15 5.00 .000a .000
48 horas 15 5.00 .000a .000
Cinamaldehido al 0.6% 24 horas 15 30.00 .000a .000
48 horas 15 30.00 .000a .000
Cinamaldehido al 1.0% 24 horas 15 30.00 .000a .000
48 horas 15 30.00 .000a .000
Cinamaldehido al 1.5% 24 horas 15 30.00 .000a .000
48 horas 15 30.00 .000a .000
a. t no se puede calcular porque las desviaciones estándar de ambos grupos son 0.
Fuente: Investigación de Campo
Así la prueba estadística t de estudent, permite establecer que existe diferencia significativa en
las variables de clorhexidina relacionada con el tiempo esto es entre 24 y 48.
27
Tabla 7 Prueba t de estudent para la variable Clorhexidina al 12% en dos tiempos 24 y 48 horas.
Prueba de Levene
de igualdad de
varianzas prueba t para la igualdad de medias
F Sig. t gl
Sig.
(bilateral)
Diferencia
de medias
Diferencia
de error
estándar
95% de intervalo
de confianza de la
diferencia
Inferior Superior
Clorhexidina
al 0.12%
Se asumen
varianzas
iguales 15.242 .001 13.722 28 .000 5.267 .384 4.480 6.053
No se asumen
varianzas
iguales 13.722 17.333 .000 5.267 .384 4.458 6.075
Fuente: Investigación de Campo
Para corroborar los resultados de la prueba t de estudent se realiza la prueba de Levene, que
demuestre que no existe homogeneidad de varianzas pudiendo decirse que existe diferencia
estadísticamente significativa entre las variables analizadas formándose dos grupos por un lado
los cinamaldehidos en las diferentes concentraciones, y por otro el gluconato de clorhexidina al
0.12% y el agua destilada.
28
5. DISCUSIÓN
La Candidiasis oral es una de las infecciones más frecuentes a tratar en el área odontológica, el
elevado número de pacientes edéntulos portadores de prótesis a nivel mundial sumado al hecho
de la presencia de problemas sistémicos (5), aumenta la posibilidad de encontrar en esta población
la presencia de patologías a nivel de las mucosas orales relacionadas a la Cándida albicans. (9)
En los últimos años se ha incrementado el deseo de experimentar con cosas naturales como las
plantas, para obtener sus propiedades y beneficios para las diferentes alteraciones bucales y que
son muy comunes en el ámbito odontológico como la Cándida albicans que se presenta sobre
todo en pacientes con presencia de prótesis. (34)
En este contexto muchos compuestos químicos han sido empleados para el control de estas
patologías, muchos de ellos con consecuencias asociadas a su uso (13), uno de ellos el gluconato
de clorhexidina con efectos positivos antifúngicos (35) de ahí el por qué la decisión de escoger esta
sustancia como control positivo. Los resultados encontrados sin embargo mostraron que el
empleo de extractos obtenidos de plantas se muestra como una alternativa adecuada por lo que su
empleo resultaría de interés, sin embargo hacen falta más estudios químicos e incluso in vivo de
la sustancia que permitan determinar su eficacia. (36)
Entendiéndose que el cinamaldehido es un compuesto natural con poder antifúngico (37) y que al
analizar los resultados en este estudio evidencian y comprueban, puede decirse que nos
encontramos frente a un producto que puede ser empleado con mucho éxito. Este antecedente ha
sido parte fundamental para muchos estudios como los mencionados (38) que consideraron los
beneficios que pueden tener estos aceites en el ámbito terapéutico.
En este estudio evaluaron el cinamaldehido compuesto natural proveniente de la canela preparado
en diferentes diluciones 0.6%, 1% y 1.5%, fue donado por el Departamento de Tecnología de
Alimentos de la Universidad Pública de Navarra (Pamplona, España), en cooperación con la
Universidad Laica Eloy Alfaro de Manabí (Manta, Ecuador) para el estudio sobre cepas de Cándida
albicans ATCC 10231, sembradas en aerobiosis durante las 24 y 48 horas los resultados no
revelaron diferencias entre las tres concentraciones y los dos tiempos, de los datos obtenidos se
evidenció a las 24 horas y 48 horas que si existe una efectividad, sin embargo esta donación fue
puntual por lo que constituye una limitante para futuras investigaciones la obtención del
cinamaldehido entendiéndose que este es un compuesto obtenidos por procesos determinados
que encarecería el costo.
29
Sin embargo con el interés de demostrar que el cinamaldehido es un elemento natural con poder
antifúngico (36) y que al analizar los resultados en este estudio evidencian y comprueban, puede
decirse que nos encontramos frente a un producto que puede ser empleado con mucho éxito en
colutorios, cremas, o dentífricos controlando patologías frecuentes de la salud oral, y sin efectos
secundarios, si bien la literatura muestra fármacos con actividad antifúngicas, como el fluconazol
(6) de probado efecto antifúngico estos según revisado desencadenan trastornos en el organismos
relacionados con resistencia (39) de ahí la necesidad de encontrar en la fitoterapia una alternativa
adecuada.
Existen escasos estudios referentes al uso de aceite esencial de canela tomando en cuenta el
principal compuesto que es el cinamaldehido sobre cepas de Cándida albicans, lo que constituye
una gran limitante en el estudio, por lo que las investigaciones acerca de las características y
propiedades medicinales que posee esta sustancia deben ser tomadas muy en cuenta para el uso
de este producto como una opción terapéutica de origen natural frente al hecho de resistencia
antifúngica en tratamientos médicos u odontológicos. Considerando las propiedades que posee el
cinamaldehido, en especial su efectividad antimicrobiana contra varios microorganismos Gram
positivos, Gram negativos, hongos, se hace necesario realizar el presente estudio analizando el
efecto antifúngico del cinamaldehido al 0.6%, 1%, 1.5% sobre cepas de Cándida albicans,
tomando en cuenta como control positivo el gluconato de clorhexidina al 0.12% y el control
negativo al agua destilada. (40)
Sánchez & Luján 2014, determinaron su eficaz efecto inhibitorio sobre cepas de Cándida albicans
(24), donde las diferentes concentraciones expuestas en el estudio (0,2mg/ml; 0,4mg/ml;
0,6mg/ml; 0,8mg/ml y 1,0mg/ml), del extracto acuoso de canela empleadas tanto como para la
Cándida albicans como para el Estreptococo mutans, y obtuvieron un efecto eficaz
antimicrobiano sobre todo en las cepas de Cándida albicans que fue de 1mg/ml y el de
Estreptococo mutans fue de 0,8mg/ml donde demostraron que el efecto del aceite esencial de la
canela tuvo un efecto inhibitorio más en la cándida que sobre el Estreptococo mutans. (24) Lo que
coincide con el presente estudio donde se realizaron pruebas de las diferentes concentraciones ya
mencionadas donde se analizó el efecto antifúngico del cinamaldehido sobre cepas de Cándida
albicans, pudiendo corroborar con el anterior estudio donde nos indica que hay una alta
efectividad del compuesto químico de la canela sobre la Cándida albicans, y demostrándonos
que es efectivo igual en diferentes concentraciones.
30
Si bien en el presente estudio se comprobó, que el efecto del cinamaldehido sobre las cepas de
Cándida albicans, en los tiempos evaluados entre, 24 y 48 horas de incubación del compuesto
estudiado, no hubo una variable significativa, los resultados coinciden con lo reportado en
estudios previos (24), quienes probaron su poder inhibitorio a 24 - 48 horas de tiempos, los autores
del mencionado estudio señalan que la Cándida albicans presenta alta sensibilidad al aceite
esencial del cinamaldehido, sin embargo merece la pena pensarse en estudiar su potencial a
diferentes tiempos incluso menores
La fitoterapia se muestra como una alternativa adecuada cuando se consideran que de los
extractos de ciertas plantas se puede obtener solución a diferentes dolencias no solo bucales,
pensando en el futuro en desarrollar pastas dentífricas, enjuagues o cremas que permitan evitar y
control las enfermedades desarrolladas por cepas de Cándida albicans una solución adecuada sin
complicaciones posteriores de su uso.
Una de las limitantes del estudio fue el contar con poca literatura sobre el cinamaldehido y su
acción sobre la Cándida reportada en bases de datos, entendiendo q los resultados obtenidos en
mi estudio son interesantes, nuevas líneas de investigación requieren ser abiertas y considerar al
cinamaldehido en ellas para aporte a futuros estudios.
31
CAPÍTULO V
6. CONCLUSIONES
El cinamaldehido con los resultados obtenidos podemos asegurar que tiene efecto
antifúngico sobre las cepas de Cándida Albicans.
El cinamaldehido al 0.6% de concentración después de ser estudiado se puede decir que
tiene efecto antifúngico contra la Cándida Albicans en el periodo de tiempo de 24 y 48
horas.
El cinamaldehido a 1% demostró en su análisis que tiene efecto antifúngico contra la
Cándida Albicans en los dos tiempos mencionados.
El cinamaldehido al 1.5% de concentración después que se lo analizó tiene efecto
antifúngico contra cepas de Cándida albicans tanto a las 24 horas como a las 48 horas
La clorhexidina 0.12% tuvo una diferencia de inhibición menos marcada que el
cinamaldehido y el agua destilada fue nula el efecto antifúngico que se quiso demostrar
en el estudio demostrando que el cinamaldehido en sus tres concentraciones y en los dos
períodos de tiempo demostró ser eficaz mucho más evidente que la clorhexidina al 0,12%.
32
7. RECOMENDACIONES
Se recomienda continuar con este estudio evaluado concentraciones menores del
cinamaldehido sobre cepas de Cándida albicans tomando como referencia la
clorhexidina.
Desarrollar una investigación del cinamaldehido con otras sustancias provenientes de
aceites esenciales para verificar si hay mejoras en su efecto antifúngico.
Continuar con la investigación del cinamaldehido y su efecto sobre cepas que estén
involucradas en enfermedades que se encuentren en la cavidad bucal.
33
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48. actividad antimicótica “in vitro” del aceite esencial cinnamomum zeylanicum breyn
“canela” frente a cándida albicans ATCC 6538,TACNA, 2012. 2012.
38
9. ANEXOS
Anexo 1 Certificados de autenticidad de la cepa Cándida albicans (ATCC 10231).
39
Anexo 2 Instrucciones de la empresa MEDIBAC para la activación de las cepas Cándida
albicans (ATCC 10231).
40
Anexo 3 Certificado del Laboratorio de Ciencia de Alimentos de la Universidad Laica Eloy
Alfaro de Manabí
Manta, 03 de Julio del 2017
A quien corresponda:
Por medio de la presente certifico que la Srta. Johanna Carolina Bonilla Bravo estudiante de la
Universidad Central Del Ecuador realizó análisis en las instalaciones del Laboratorio de
Ciencia de Alimentos de la universidad Laica Eloy Alfaro de Manabí, como parte de su
trabajo titulado “Efecto antifúngico del cinamaldehido sobre cepas de Cándida albicans.
Estudio in vitro”. El cinamaldehido utilizado fue donado a la Universidad Laica Eloy Alfaro de
Manabí por la Universidad Pública de Navarra, España.
Atentamente
Stalin Santacruz Ph.D.
Docente investigador
Universidad Laica Eloy Alfaro de Manabí
41
Anexo 4 Certificado de renuncia estadística.
42
Anexo 5 Carta de Experiencia del Investigador
43
Anexo 6 Carta de Experiencia del tutor de tesis
Quito, DM 20 de Julio del 2017
A quien corresponda:
Yo Ana Del Carmen Armas con C.I. 1710508571 por medio de la presente carta declaro tener
amplia experiencia como tutora en proyectos de investigación, y a la vez me he desempeñado
como docente desde el 2012 hasta la actualidad en la Facultad De Odontología además de haber
formado parte de algunos departamentos de investigación en diversas universidades del país.
Atentamente,
Ana Del Carmen Armas
Docente de la
Facultad de Odontología
44
Anexo 7 Carta de declaración de conflictos
Quito, 20 de Julio del 2017
A quien corresponda:
Yo Johanna Carolina Bonilla Bravo con C.I. 0503245631 declaro que en la investigación
titulada: “Efecto antifúngico del cinamaldehido sobre cepas de Cándida albicans. Estudio
in vitro”, no tengo ningún tipo de relación con la empresa Medibac, y certifico que no
existe ningún tipo de beneficio económico ni personal en el desarrollo de esta
investigación.
Atentamente
Johanna Carolina Bonilla
Bravo
Estudiante de la
Facultad de Odontología
45
Anexo 8 Protocolo para eliminación del material de desechos.
Metodología para tratar desechos en laboratorio
Fundamento:
Para trabajar en el laboratorio se requiere del seguimiento de una serie de normas de
bioseguridad que eviten posibles accidentes debido al desconocimiento, o una posible
negligencia de parte de los usuarios que estén en un momento dado en el laboratorio.
El laboratorio debe ser un lugar seguro para trabajar, siempre y cuando no se permitan
descuidos por parte del personal técnico o de limpieza. Por ello siempre se tendrán en cuenta
los posibles riesgos asociados al trabajo con materiales peligrosos.
Es muy importante llevar a cabo un correcto procedimiento para el manejo de los desechos
creados en el laboratorio ya que una inadecuada recolección, transporte, almacenamiento y
disposición final de los desechos producidos puede provocar daños físicos serios e
infecciones graves al personal que labora en los laboratorios y a la comunidad en general.
La manipulación de estos desechos incrementa el riesgo para el trabajador que puede
contaminarse la piel o las conjuntivas oculares, herirse con objetos cortopunzantes, inhalar
aerosoles infectados o irritantes, o ingerir en forma directa o indirecta, el material
contaminado.
A continuación se expone la metodología que se debe conocer y seguir en el laboratorio para
el correcto manejo de los desechos.
Metodología:
Los desechos producidos en el laboratorio se clasifican en desechos comunes, desechos
biológicos, desechos corto-punzantes y desechos líquidos. A continuación se describe
detalladamente cada uno de estos desechos y el manejo adecuado para cada uno de ellos.
1. Desechos Comunes.
Constituye basura común desechos tal como: toallas de papel utilizadas para el secado
de manos, envoltura de papel plastificado, papel carbón, plástico PBC, espuma flex,
tubos falcon no contaminados, cajas Petri de plástico si contaminación biológica, fundas
plásticas que no contengan material contaminado. Los desechos comunes serán
descartados en el basurero de
FUNDA NEGRA.
TRATAMIENTO EN EL LABORATORIO PREVIO AL DESECHO: Ninguno
2. Desechos Biológicos
Para el tratamiento de los desechos biológicos, se colocara hipoclorito de sodio al 10%
a los contenedores que contienen palillos, etc. los cuales deben colocarse en cada área
del proceso, los desechos sólidos potencialmente contaminantes se incineran al igual que
46
los desechos orgánicos, los desechos líquidos son sometidos a un tratamiento de
neutralización y posteriormente incinerados para lo cual existe una compañía contratada
para este fin.
3. Desechos Corto-Punzantes
Se considera material corto-punzante: agujas, tubos de muestra rotos o cualquier material
de vidrio roto. Los desechos corto-punzantes deberán ser depositados en
RECIPIENTES RESISTENTES A PERFORACION para evitar que exista daño de
corte al operador en el momento de transporte.
Todos los recipientes que contengan residuos corto-punzantes deben rotularse de la
siguiente forma:
TRATAMIENTO EN EL LABORATORIO PREVIO AL DESECHO: Autoclavar por
1 hora a 121°C
4. Desechos Líquidos
Componentes de extracción como etanol deben ser conservados el tiempo suficiente para
que su contenido se evapore por completo. Los desechos líquidos de estas fases de
extracción no deben ser vertidos por ningún motivo en el lavabo o en el contenedor
directamente.
5. Desechos que requieren de un protocolo distinto para ser desechados
Cajas Petri de Vidrio: Son autoclavadas, luego de lo cual el agar es desechado
en la basura de desechos comunes. Las
cajas deberán ser lavadas para ser utilizadas nuevamente luego de ser
autoclavadas.
Cajas Petri plásticas: Son desechadas inmediatamente después de ser usadas.